王武寶，高思國(guó)，劉水蓮，范榮榮，任耀輝，馬 雪，張 雨

(濟(jì)南尚博醫(yī)藥股份有限公司，山東 濟(jì)南 250204)

有機(jī)硼化合物的Suzuki反應(yīng)在有機(jī)合成和組合化學(xué)等領(lǐng)域應(yīng)用十分廣泛，這是因?yàn)槠洫?dú)特的結(jié)構(gòu)特征和良好的生物活性和藥理作用[1-3]。吡唑基團(tuán)存在于大量的天然和合成的小分子配體中，可與多種具有藥理重要性的酶和受體相互作用，被廣泛應(yīng)用于合成潛在的酶抑制劑、癌癥的硼中子俘獲治療法等，在抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)方面有著重要意義[4-5]。烷基吡唑硼酸是合成很多具有生物活性化合物的重要中間體。作為反應(yīng)原料與頻哪醇縮合成酯后，其穩(wěn)定性提高，可長(zhǎng)期儲(chǔ)存，更便于用作有機(jī)合成的重要試劑和進(jìn)一步的藥物相關(guān)活性的研究。吡唑硼酸頻那醇作為吡唑硼酸頻那醇酯類(lèi)的重要中間體之一，具有非?？捎^(guān)的發(fā)展前景，更能廣泛地應(yīng)用于生物醫(yī)藥行業(yè)。但是，目前未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道檢測(cè)吡唑硼酸頻哪酯的方法。本文建立一種氣相色譜法，操作簡(jiǎn)單，經(jīng)驗(yàn)證，該方法結(jié)果準(zhǔn)確，可用于檢測(cè)吡唑硼酸頻哪酯。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890B氣相色譜儀(安捷倫公司)；Agilent 7890B氣相色譜儀(安捷倫公司)；XS105型電子分析天平(梅特勒-托利多國(guó)際有限公司)；5%苯基-甲基聚硅氧烷(30 m×φ0.25 mm，0.25 μm)色譜柱(安捷倫公司)。

吡唑硼酸頻哪醇酯，濟(jì)南尚博醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)2105；二氯甲烷，山東金嶺化工股份有限公司，批號(hào)21024；四氫呋喃，濰坊振興日升化工有限公司，批號(hào)2010；吡唑，濟(jì)南安科諾新材料有限公司，批號(hào)3003；色譜純乙腈(TEDIA)。

1.2 檢測(cè)方法

色譜柱：5%苯基-甲基聚硅氧烷(30 m×φ0.25 mm，0.25 μm)；檢測(cè)器：氫離子火焰檢測(cè)器；載氣：氮?dú)?；流速?.0 mL/min；進(jìn)樣器溫度：215 ℃；檢測(cè)器溫度：295 ℃；分流比：3∶1；進(jìn)樣量：0.1 μL；柱箱溫度：初始 50 ℃，維持 2 min，按 10 ℃/min 升溫至 150 ℃，維持 0 min，按 30 ℃/min 升溫至 260 ℃，維持 5 min；氫氣流速：30 mL/min；空氣流速：300 mL/min；氮?dú)饬魉伲?5 mL/min。

對(duì)照品溶液制備：精密稱(chēng)定 1.0 g 吡唑硼酸頻哪醇酯樣品置于 10 mL 容量瓶中，加乙腈溶解后定容至刻度線(xiàn)，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

1.3 方法學(xué)驗(yàn)證

1.3.1 專(zhuān)屬性

二氯甲烷溶液制備：移取約 10 mL 稀釋劑，置于 25 mL 容量瓶中，再精密稱(chēng)定 2.5 g 二氯甲烷，置于容量瓶中，溶解后定容至刻度線(xiàn)，搖勻。

四氫呋喃溶液制備：移取約 10 mL 稀釋劑，置于 25 mL 容量瓶中，再精密稱(chēng)定 2.5 g 四氫呋喃，置于容量瓶中，溶解后定容至刻度線(xiàn)，搖勻。

吡唑溶液制備：移取約 10 mL 稀釋劑，置于 25 mL 容量瓶中，再精密稱(chēng)定 2.5 g 吡唑，置于容量瓶中，溶解后定容至刻度線(xiàn)，搖勻。

對(duì)照品溶液制備：精密稱(chēng)定 2.5 g 吡唑硼酸頻哪醇酯樣品，置于 25 mL 容量瓶中，用稀釋劑溶解后定容至刻度線(xiàn)，搖勻。

混合溶液制備：分別精密移取 1 mL 二氯甲烷溶液、四氫呋喃溶液和吡唑溶液，置于 10 mL 容量瓶中，加對(duì)照品溶液稀釋定容至刻度線(xiàn)，搖勻。

分別取空白溶液(乙腈溶液)、二氯甲烷溶液、四氫呋喃溶液、吡唑溶液、對(duì)照品溶液及混合溶液，各進(jìn)1針，記錄氣相色譜圖，獲得各成分主峰的保留時(shí)間。

1.3.2 重復(fù)性

重復(fù)性試驗(yàn)中供試品溶液制備：精密稱(chēng)定6份吡唑硼酸頻哪醇酯，分別置于 10 mL 容量瓶中，每份 1.0 g。加稀釋劑溶解后，定容至刻度線(xiàn)，搖勻。依次進(jìn)樣分析，記錄氣相色譜圖，獲得各份吡唑硼酸頻哪醇酯的峰面積，計(jì)算吡唑硼酸頻哪醇酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.3.3 線(xiàn)性

線(xiàn)性試驗(yàn)中供試品溶液制備：精密稱(chēng)定 10.0 g 吡唑硼酸頻哪醇酯，置于 50 mL 容量瓶中，加稀釋劑溶解后定容至刻度線(xiàn)，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為 200 mg/mL 的溶液。分別移取4.0、4.5、5.0、5.5、6.0 mL 的溶液至 10 mL 容量瓶中，用稀釋劑再次稀釋定容至刻度線(xiàn)，搖勻，作為線(xiàn)性系列試驗(yàn)溶液，標(biāo)記為A(80%)、B(90%)、C(100%)、D(110%)、E(120%)。各進(jìn)1針，記錄氣相色譜圖，獲得不同質(zhì)量濃度吡唑硼酸頻哪醇酯的峰面積。以峰面積與相應(yīng)質(zhì)量濃度比值進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得到回歸方程。

1.3.4 中間精密度

中間精密度試驗(yàn)中供試品溶液制備：分析員A和B于第一天分別精密稱(chēng)定3份吡唑硼酸頻哪醇酯，置于 10 mL 容量瓶中，每份1.0 g，加稀釋劑溶解后定容至刻度線(xiàn)，搖勻，依次進(jìn)樣分析；第二天分析員A按相同方法再配制3份供試品溶液，分別用兩臺(tái)儀器檢測(cè)，依次進(jìn)樣分析；記錄氣相色譜圖，獲得不同人員、不同時(shí)間、不同儀器下吡唑硼酸頻哪醇酯的峰面積，計(jì)算各條件下吡唑硼酸頻哪醇酯的純度及RSD值。

1.3.5 溶液穩(wěn)定性

溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)中供試品溶液制備：精密稱(chēng)定 1.0 g 吡唑硼酸頻哪醇酯，置于 10 mL 容量瓶中，加稀釋劑溶解后定容至刻度線(xiàn)，搖勻，于配制后0、1、2、3、6、12 h 依次進(jìn)樣分析，記錄氣相色譜圖，獲得不同進(jìn)樣時(shí)間下吡唑硼酸頻哪醇酯的峰面積，計(jì)算純度結(jié)果相對(duì)于 0 h 的變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 專(zhuān)屬性結(jié)果

空白溶液中的峰對(duì)樣品檢測(cè)無(wú)明顯干擾，混合溶液中吡唑硼酸頻哪醇酯和其他雜質(zhì)都能被有效分離，產(chǎn)物峰前后分離度大于1.5(如表1所示)，專(zhuān)屬性試驗(yàn)通過(guò)。

表1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)結(jié)果

2.2 重復(fù)性結(jié)果

通過(guò)計(jì)算供試品的純度，6針RSD值為0.002%(如表2所示)，小于2%，重復(fù)性試驗(yàn)通過(guò)。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.3 線(xiàn)性結(jié)果

線(xiàn)性回歸方程為Y=285X-1923.4，相關(guān)系數(shù)為0.9985，大于0.95(如表3所示)，線(xiàn)性試驗(yàn)通過(guò)。

表3 線(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 中間精密度結(jié)果

通過(guò)計(jì)算供試品的純度，不同分析員同一天測(cè)定結(jié)果RSD值為0.010%，同一分析員不同天測(cè)定結(jié)果RSD值為0.007%，同一分析員不同儀器測(cè)定結(jié)果RSD值為0.027%(如表4、表5、表6所示)，均小于2%，中間精密度試驗(yàn)通過(guò)。

表4 中間精密度試驗(yàn)結(jié)果1

表5 中間精密度試驗(yàn)結(jié)果2

表6 中間精密度試驗(yàn)結(jié)果3

2.5 溶液穩(wěn)定性結(jié)果

供試品溶液 0、1、2、3、6、12 h 純度結(jié)果相對(duì)于 0 h 的變化，均在0.5%以?xún)?nèi)，12 h 內(nèi)溶液穩(wěn)定(如表7所示)，穩(wěn)定性試驗(yàn)通過(guò)。

表7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

采用氣相色譜法測(cè)定吡唑硼酸頻哪酯，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，包括專(zhuān)屬性、重復(fù)性、線(xiàn)性、中間精密度和溶液穩(wěn)定性，結(jié)果表明，該方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定吡唑硼酸頻哪酯的有關(guān)物質(zhì)，且方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確。