刁春華，楊秀芳，左小博，涂云飛，蘇小琴，宋鵬鵬，孔俊豪*

（1.中華全國供銷合作總社杭州茶葉研究所，浙江 杭州 310016；2.浙江省茶資源跨界應(yīng)用技術(shù)重點實驗室，浙江 杭州 310016）

藤茶（Ampelopsis grossedentata），又稱莓茶、山甜茶、田婆茶、端午茶等，是由葡萄科（Vitaceae）蛇葡萄屬（AmpelopsisMichx.）木質(zhì)藤本植物顯齒蛇葡萄［Ampelopsis grossedentata（Hand.-Mazz.） W. T.Wang］莖葉制成的代用茶，味甘淡，性涼，在民間流傳已有數(shù)百年的應(yīng)用歷史［1-2］。顯齒蛇葡萄主要分布于我國長江流域以南的湖南、湖北、廣西、廣東、江西、福建、云南、貴州等地［3］，通常采摘其莖葉經(jīng)揉捻、渥堆、干燥加工成藤茶，產(chǎn)品口感獨特，回甘快而持久?，F(xiàn)代藥理研究表明，藤茶具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗癌、降血糖、降血脂、清熱解毒、祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨、消炎、消腫、利尿、止血、治療慢性肝炎及腎炎等功效［4-5］。2013年國家衛(wèi)生計生委發(fā)布《關(guān)于批準(zhǔn)顯齒蛇葡萄葉等3種新食品原料的公告》，目前已作為新資源食品使用。迄今為止，國內(nèi)外學(xué)者對藤茶做了較為系統(tǒng)的研究，本文概述了藤茶在物質(zhì)基礎(chǔ)、生物活性及其開發(fā)利用等方面的研究進(jìn)展，以期拓展藤茶在食品、醫(yī)藥等大健康領(lǐng)域的產(chǎn)業(yè)應(yīng)用。

1 藤茶的物質(zhì)基礎(chǔ)

藤茶富含多種化學(xué)成分，包括黃酮類、多酚類、多糖類、甾體類、萜類、揮發(fā)油類、氨基酸及微量元素等，其中黃酮類、多酚類為其主要的非揮發(fā)性有效成分［5-6］。藤茶中黃酮類成分包括二氫楊梅素（Dihydromyricetin，DMY）、楊梅素（Myricetin，MYR）、楊梅苷、槲皮素、山奈酚等；酚類成分包括沒食子酸、兒茶素、表兒茶素等；甾體類成分包括齊墩果酸、谷甾醇、豆甾醇等。目前研究已發(fā)現(xiàn)，藤茶內(nèi)含物質(zhì)構(gòu)成及含量受品種、土壤、氣候、栽培管理、加工等多種因素共同影響。

1.1 黃酮類

黃酮類化合物是藤茶的特征性成分，含量高達(dá)45%左右，為單體植物黃酮含量之最，堪稱“黃酮之王”［7］。其中DMY是藤茶中含量最高的黃酮物質(zhì)，被認(rèn)為是藤茶藥理作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)［8］。1996年，我國學(xué)者首次從藤茶的莖葉中分離得到結(jié)構(gòu)中含有六個羥基的二氫黃酮類化合物，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定定名為3，3′，4′，5，5′，7-六羥基-2，3 -雙氫黃酮醇（即DMY），比對發(fā)現(xiàn)該成分與兒茶素類組分中的表沒食子兒茶素 （Epigallocatechin，EGC） 結(jié)構(gòu)非常相似［9-10］。由于受產(chǎn)地、種質(zhì)資源及采摘季節(jié)影響，藤茶不同部位的總黃酮及DMY含量存在顯著的豐度差異，有研究發(fā)現(xiàn)藤茶根部總黃酮含量最高，而葉片中DMY含量為最高［11］。另據(jù)報道，不同季節(jié)的湘西藤茶葉片中DMY含量在11.21% ～ 25.43%之間，在5月底達(dá)到最高值［12］。

不同提取工藝得到的藤茶提取物，其功能性成分與生物活性存在差異，由于DMY的熱穩(wěn)定性差，所以在提取過程中不宜用加熱方式。因此，不少學(xué)者對藤茶總黃酮及DMY的提取方法進(jìn)行了優(yōu)化。目前藤茶黃酮類化合物提制的工藝包括：水浸提法、乙醇提取法、超聲波輔助提取法、回流提取法、酶提取法、微波萃取法、超聲波輔助萃取法、超臨界CO2萃取法、微波輔助半仿生法、微波動態(tài)循環(huán)階段連續(xù)逆流提取法等［13-15］。藤茶產(chǎn)量大、價格低，再加上其內(nèi)含物黃酮、DMY的提取方法現(xiàn)已發(fā)展成熟，可以進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。

1.2 多酚類

藤茶中多酚類含量僅次于黃酮類，達(dá)20%左右，也是藤茶發(fā)揮其藥理作用的重要成分。目前在藤茶中已經(jīng)分離鑒定的酚類化合物包括沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、沒食子酰-β-D-葡萄糖、兒茶素、表兒茶素、EGC等［16-17］。其中，兒茶素在藤茶茶多酚中占比高達(dá)60% ～ 80%，其抗氧化活性較強(qiáng)，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。

1.3 揮發(fā)油

經(jīng)對藤茶的揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行鑒定分析，葉綠醇、正十六酸、雪松醇為藤茶揮發(fā)油的主要成分［18］。張世先等［19］用氣相色譜質(zhì)譜法分離鑒定藤茶的揮發(fā)油成分，共分離出78種組分，鑒定出63種化合物，占揮發(fā)油組分的80.6%，其中藤茶主要揮發(fā)油占揮發(fā)性化合物總量的78%。王華夫和游小清［20］從藤茶中分離并鑒定出28種香氣成份，占香精油總量的64%。申東等［21］進(jìn)一步確定了藤茶的特征香氣為壬醛、癸醛、順-香葉基丙酮、6， 10， 14-三甲基-2-十五烷酮、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、2， 6-二 （1， 1-二甲基乙基） -4-甲基酚、2，4-二 （1， 1-二甲基乙基） 2， 4-二 （1， 1-二甲基乙基） -酚、β-紫羅蘭酮、1， 1， 3-三甲基-3-苯基茚、（R） -5， 6， 7， 7a-四氫-4， 4，7a-三甲基-2 （4H） -苯并呋喃酮等10種成分。

2 藤茶的生物活性

黃酮類化合物是藤茶最主要的活性成分，尤以DMY的生物活性作用最為明確。大量研究證明藤茶黃酮具有抗氧化、抗炎抑菌、降糖降脂、保肝護(hù)腎、抑制腫瘤、增強(qiáng)免疫等生物活性，也用于預(yù)防或輔助治療糖尿病的某些并發(fā)癥［22］。藤茶應(yīng)用歷史悠久，多年的臨床應(yīng)用經(jīng)驗已初步證實其具有較好的安全性。安全性研究表明，對大鼠按照22 g/kg劑量灌胃藤茶水提物90 d后，給藥組大鼠肝、腎、脾、胃腸等器官組織均未見實質(zhì)性病變，表明藤茶水提物較為安全［23］。DMY毒性作用很小，大鼠對DMY的最大耐受量達(dá)5.0 mg/kg，為實際無毒物質(zhì)，臨床應(yīng)用安全［24］。

2.1 抗氧化

藤茶中DMY、MYR以及楊梅苷均具有較強(qiáng)的清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl，DPPH）自由基的能力［25］。體外抗氧化活性研究表明，藤茶提取物對DPPH·和·OH的半數(shù)抑制濃度值分別為0.338 mg/mL、18.713 mg/mL，對O2-·抑制的最大活性值達(dá)263.1 U/L，總抗氧化能力達(dá)19.76 mM［26］。體內(nèi)抗氧化研究表明，藤茶提取物可以提高小鼠血清中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase， SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase， GSH-Px）和過氧化氫酶（Catalase， CAT）的活性，日糧中添加0.06 mg/g·bw藤茶提取物，其抗氧化作用與抗生素組接近等效。在等質(zhì)量濃度情況下，藤茶多酚對·OH和O2-·的半數(shù)抑制濃度值分別為159.09 μg/mL、30.97 μg/mL，優(yōu)于Vc，表明藤茶多酚是一種較好的天然抗氧化劑［27］。另有報道，DMY可通過激活細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶和絲氨酸/蘇氨酸激酶信號通路增加細(xì)胞抗氧化防御，誘導(dǎo)血紅素加氧酶表達(dá)，從而保護(hù)PC12細(xì)胞免受H2O2誘導(dǎo)的凋亡［29］。

2.2 抗炎

藤茶中的DMY、MYR和楊梅苷均可調(diào)控相關(guān)抗炎因子，發(fā)揮神經(jīng)性炎癥保護(hù)作用。藤茶黃酮提取物減弱脂多糖（Lipopolysacch arides， LPS）誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的機(jī)制可能在于通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞中的核因子-κB和蛋白酪氨酸激酶2/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子與激活子3信號通路，進(jìn)而抑制一氧化氮合酶和環(huán)氧合酶-2的表達(dá)［30］，研究表明藤茶黃酮提取物可減輕LPS誘導(dǎo)的仔豬肝臟炎癥［31］。藤茶黃酮提取物還可以顯著降低LPS誘導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-1β（Interleukin-1β）、白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6）和腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）的產(chǎn)生。小鼠抗炎實驗顯示，70%乙醇提取、乙酸乙酯萃取、水提取部位的抗炎作用相對于其他極性部位更顯著［32］。

2.3 抑菌

藤茶中的黃酮類、多酚類化合物是主要抗菌活性成分，以DMY為代表［30］。DMY對金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、糞腸球菌、陰溝腸桿菌、白色念珠菌、雞沙門氏桿菌、豬鏈球菌、根霉、黑曲霉、創(chuàng)傷弧菌、抗藥性金黃色葡萄球菌等多種致病菌具有明確的抑菌作用［6，33］，主要通過抑制菌體的呼吸代謝、破壞菌體的結(jié)構(gòu)形態(tài)、改變細(xì)胞膜的滲透性等發(fā)揮抗菌作用［34］。實驗表明，藤茶黃酮提取物可使細(xì)菌核酸的合成減少，導(dǎo)致細(xì)菌的生長、繁殖受到嚴(yán)重的抑制，從而發(fā)揮抗菌作用［35］。藤茶醇提物對創(chuàng)傷弧菌的抑殺作用更強(qiáng)，其抗菌作用機(jī)制與破壞菌體細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的完整性有關(guān)［36］。藤茶乙醇提取物經(jīng)大孔樹脂提純后對口腔變性鏈球菌的抑菌活性為3.13 mg/mL，顯著優(yōu)于乙醇粗提取物，表明藤茶提取物有望應(yīng)用于口腔護(hù)理以預(yù)防齲齒［37］。

藤茶中DMY還能夠與腸道微生物群發(fā)生相互作用。通過16S rRNA焦磷酸測序的方法考察了DMY對腸道菌群組成的影響，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著改善菌群的豐度和多樣性，雙向調(diào)節(jié)腸道菌群組成［38］。

2.4 降血糖/血脂

藤茶提取物具有輔助降血糖、降血脂的功能。以四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病大鼠為模型，藤茶粗多糖提取物干預(yù)治療可以清除大鼠體內(nèi)產(chǎn)生的過多自由基，減少丙二醛（Malondialdenyde， MDA）含量，提高SOD、GSH-PX活性，保護(hù)和恢復(fù)胰島細(xì)胞功能，增強(qiáng)肝葡萄糖激酶活性和提高胰島素水平，起到降血糖作用［39］。采用動脈粥樣硬化大鼠作為模型，以藤茶總黃酮灌胃可顯著降低動脈粥樣硬化大鼠血清總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平，提高高密度脂蛋白水平［40］。選擇100例單純血脂異常的患者進(jìn)行臨床試驗，受試組按推薦劑量9.0 g/d/人連續(xù)30 d服用恩施富硒藤茶水提取物，結(jié)果表明與對照組比較，受試組血清膽固醇、甘油三酯顯著下降［41］。

2.5 保肝護(hù)腎

大量實驗證明，藤茶黃酮對免疫性肝、腎損傷有很好的保護(hù)作用。采用卡介苗加LPS誘導(dǎo)免疫性肝損傷小鼠為模型，藤茶黃酮水提液干預(yù)治療可明顯降低肝損傷模型小鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanine aminotransferase， ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Aspartate aminotransferase， AST）、MDA含量，提高SOD活性［42］。通過尾靜脈注射LPS誘導(dǎo)雄性SD大鼠腎臟損傷，藤茶干預(yù)組能明顯降低腎組織中MDA含量，骨橋蛋白和腎組織CD44分子水平的表達(dá)顯著降低，陽性染色的細(xì)胞核水平顯著升高［43］。采用二苯基四氮唑溴鹽染色法觀察DMY對其細(xì)胞增殖的影響，研究發(fā)現(xiàn)DMY對人胚腎細(xì)胞293和肝細(xì)胞L-02具有相對低毒性［44］。

2.6 抗腫瘤

在抗腫瘤方面，藤茶活性物質(zhì)具有抗前列腺癌、抗乳腺癌的功效。DMY可以通過調(diào)節(jié)P13K/Alct凋亡信號通路，顯著下調(diào)前列腺癌LNCaP細(xì)胞磷酸化蛋白激酶和B淋巴細(xì)胞瘤-2基因的表達(dá)水平，促使LNCaP細(xì)胞凋亡［45］。DMY還能通過mTOR信號通路抑制乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲，研究發(fā)現(xiàn)用DMY處理24 h后，細(xì)胞內(nèi)p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K70和p-e IF4B表達(dá)水平均顯著降低［46］。構(gòu)建Balb/c雌性小鼠4T1乳腺癌移植模型，灌胃給藥，DMY能抑制4T1小鼠乳腺癌遠(yuǎn)端肺轉(zhuǎn)移，可能與DMY下調(diào)荷瘤小鼠血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9和基質(zhì)金屬蛋白酶-2水平有關(guān)［47］。另外，DMY可通過抑制去乙酰化酶表達(dá)，增強(qiáng)順鉑對乳腺癌細(xì)胞的殺傷活性［48］。

2.7 免疫增強(qiáng)

藤茶也具有較好的免疫增強(qiáng)作用。構(gòu)建背部皮下注射環(huán)磷酰胺復(fù)制小鼠免疫抑制模型， 灌胃給藥，藤茶總黃酮能夠顯著提高免疫抑制小鼠血清溶血素含量，促進(jìn)血清溶血素生成，提高體液免疫功能［49］。采用雌性昆明小鼠，連續(xù)給樣品30 d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)18.20 g/kg、54.60 g/kg劑量組小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力、NK細(xì)胞活性、半數(shù)溶血值顯著提高，且54.60 g/kg劑量能顯著提高小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)［50］。

3 藤茶的開發(fā)利用

隨著藤茶化學(xué)成分及藥理功能等研究的不斷深入，除了加工成代茶類產(chǎn)品外，其產(chǎn)品開發(fā)也不斷創(chuàng)新，廣泛應(yīng)用于飲料、乳制品、功能性食品、食品添加劑等方面。藤茶速溶茶、復(fù)合藤茶固體飲料、果凍、面條、藤茶保健茶酒、抗衰老面霜等產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)［51-52］。在酸奶等乳酸菌發(fā)酵食品中加入DMY，既能調(diào)節(jié)血脂、保肝護(hù)肝又可以解酒醒酒［53］。將DMY與葛根、紅景天、茯苓等共同煎煮，生產(chǎn)的抗醉制劑具有較好的解酒效果［54］。將青錢柳提取物和DMY復(fù)配，既可調(diào)節(jié)空腹血糖又可降低餐后血糖，兩者具有較好的協(xié)同增效作用［55］。用含有DMY的飼料飼喂瑤山雞，可提高瑤山雞抗氧化力和免疫力，改善其肉質(zhì)［56］。利用DMY復(fù)配多種天然生物活性物質(zhì)，經(jīng)納米球墨處理，可制備出納米級食品保鮮劑［57］。對豐富食品添加劑種類、滿足消費者對綠色天然產(chǎn)物的健康追求具有重要意義。

目前，市場對天然抗氧化劑仍有較大的需求，而藤茶黃酮提取成本低、毒性小，適合作為替代化學(xué)合成的抗氧化劑、抑菌防腐劑進(jìn)行開發(fā)。藤茶資源的開發(fā)整體尚處于起步階段，產(chǎn)品形態(tài)亟待進(jìn)一步豐富，尤其是基于精準(zhǔn)營養(yǎng)、健康功能的膳食干預(yù)、特醫(yī)產(chǎn)品等滕茶終端衍生產(chǎn)品市場也較為廣闊。

4 展望

我國藤茶資源豐富，藤茶化合物含有大量的保健功效成分，目前主要被加工為代用茶產(chǎn)品，其保健功效價值并沒有被進(jìn)一步挖掘。目前對藤茶的技術(shù)研究仍存在以下問題：（1）由于DMY穩(wěn)定性差、溶解度低、生物利用度低，嚴(yán)重影響其衍生制品開發(fā)，限制其潛在的藥用價值。利用現(xiàn)代制劑技術(shù)手段，如固體分散技術(shù)、微粉化、脂質(zhì)體和納米微乳以及親水性輔料或者表面活性劑助溶等改善DMY溶解性和生物可及性的研究具有十分重要的現(xiàn)實意義。（2）對于藤茶的化學(xué)成分研究比較系統(tǒng)，相關(guān)藥理作用研究較多，但多處于細(xì)胞層面，具體機(jī)制尚缺少轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)的研究支撐。因此，亟待對其分子機(jī)制進(jìn)行深入的探索，通過藥效組分篩選、體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化研究，完善藤茶的構(gòu)效關(guān)系及藥理學(xué)活性臨床驗證，為保健食品、藥物研發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ)。同時藤茶品種較多，來源廣泛，需要對藤茶種植管理、加工工藝進(jìn)行規(guī)范來實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化，建立匹配不同用途需要的藤茶質(zhì)量控制體系。