王一平，趙宗閣，吳星，2，梁爭論，2，毛群穎，2

1.中國食品藥品檢定研究院，北京 102629；2.國家衛(wèi)生健康委員會生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法及其標(biāo)準(zhǔn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102629

疫苗企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)涉及疫苗研發(fā)、生產(chǎn)和評價(jià)，是保證疫苗產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵，其類別包括生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（標(biāo)準(zhǔn)品、參考品）、對照品和滴定標(biāo)準(zhǔn)液等。本文所述的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是指疫苗企業(yè)用于生物效價(jià)／活性、含量測定或其特性檢查的工作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，依據(jù)《中國藥典》三部（2020版）規(guī)定，如有國家標(biāo)準(zhǔn)品，則必須經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定后方可使用［1］。其中，標(biāo)準(zhǔn)品含量以質(zhì)量單位（g、mg、μg）表示，生物學(xué)活性或效價(jià)以國際單位（IU）、特定活性單位（AU）及活性單位（U）表示，參考品以特定活性單位（AU）及活性單位（U）表示，而對照品和滴定標(biāo)準(zhǔn)液用于理化項(xiàng)目檢測，前者為用于生物制品理化等方面測定的特定物質(zhì)，多按干燥品（或無水物）進(jìn)行計(jì)算后使用。

在疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)法規(guī)和指南等文件中，世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）指導(dǎo)原則和《中國藥典》主要關(guān)注WHO 國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制和應(yīng)用［2-6］；國家藥品監(jiān)督管理局（National Medical Products Administration，NMPA）頒布的預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則、人用藥品技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)理事會（International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use，ICH）發(fā)布的Q6B 指導(dǎo)原則均為對新藥研發(fā)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的概括性技術(shù)要求；NMPA 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（Good Manufacturing Practice，GMP）、WHO GMP、歐盟（European Union，EU）GMP和美國食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）GMP 等均為對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在疫苗生產(chǎn)階段的管理要求。國內(nèi)和國外GMP關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用要求均未對疫苗等生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行特別細(xì)化規(guī)定，但近年來WHO 制訂的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制手冊對三級（企業(yè)）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提出了包括原材料、標(biāo)定設(shè)計(jì)、統(tǒng)計(jì)學(xué)和穩(wěn)定性等明確技術(shù)要求［4，7］，2023年我國還提出了生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評估進(jìn)行生命周期管理的理念［8］，這些文件均對我國企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理具有較強(qiáng)的指導(dǎo)意義。

COVID-19 疫情加速了我國疫苗行業(yè)的發(fā)展，涌現(xiàn)多個(gè)應(yīng)用mRNA、新佐劑重組蛋白及腺病毒、流感病毒載體等新型技術(shù)平臺和新興疫苗企業(yè)，這對企業(yè)及國家疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制和應(yīng)用提出了挑戰(zhàn)，如針對以理化和儀器檢定為主，結(jié)合生物活性和效價(jià)檢測的mRNA 疫苗，如何建立基于風(fēng)險(xiǎn)控制全生命周期管理的企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，有效質(zhì)控疫苗的純度、雜質(zhì)、活性以及評價(jià)疫苗免疫原性等問題［9-11］。本文在調(diào)研部分疫苗企業(yè)生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，結(jié)合WHO、ICH指導(dǎo)原則和生命周期等新理念，提出企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)關(guān)注的要點(diǎn)，建議制定我國預(yù)防性人用疫苗企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指導(dǎo)原則，為整體提升我國企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)水平提供思路。

1 企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

目前WHO 公布的生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中疫苗類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)共111 個(gè)［12］，我國批準(zhǔn)使用的疫苗類國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)共114 個(gè)［13］，《中國藥典》三部（2020 版）收錄的疫苗類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為42個(gè)［14］。在存在WHO及國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)情況下，疫苗企業(yè)應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或使用國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)化企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；在WHO 及國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不可及時(shí)，企業(yè)應(yīng)依據(jù)《中國藥典》三部（2020版）要求，自行建立工作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以控制和評價(jià)疫苗質(zhì)量，并按國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心（Center for Drug Evaluation，CDE）要求，在新藥申請（New Drug Application，NDA）時(shí)提供國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選原料。

企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)又可分為外購標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及自建標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)兩類。外購標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中，一類為活性／效價(jià)以及生物殘留檢測的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，購自中國食品藥品檢定研究院（National Institutes for Food and Drug Control，NIFDC），該類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量監(jiān)測由NIFDC負(fù)責(zé)，企業(yè)需按說明書保存和使用；另一類為外購的商業(yè)化試劑盒中自帶的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，如牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）殘留量檢驗(yàn)試劑盒中自帶BSA 標(biāo)準(zhǔn)品，宿主Vero 蛋白殘留量檢測試劑盒自帶Vero 蛋白殘留量標(biāo)準(zhǔn)品，該類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量監(jiān)測由商業(yè)化公司負(fù)責(zé)。疫苗企業(yè)自建標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)也可分為兩類，一類溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，另一類為企業(yè)自行賦值或定值，后者多用于企業(yè)特有產(chǎn)品的質(zhì)量控制，如企業(yè)產(chǎn)品活性或效價(jià)以及特有成分、純度或雜質(zhì)檢測等。依據(jù)《中國藥典》三部（2020版）人用疫苗總論，疫苗企業(yè)自建標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備、標(biāo)定和保存應(yīng)符合“生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備和標(biāo)定”的相關(guān)要求［6］。

2 企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)遵守的相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則

疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則包括WHO技術(shù)文件、現(xiàn)行版《中國藥典》三部、四部，NMPA 及其直屬單位的相關(guān)指導(dǎo)原則，以及ICHQ6B 及GMP等文件。

2.1 WHO 規(guī)程對企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（三級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）的相關(guān)要求 WHO在2017和2022年分別發(fā)布了“核酸和抗原類診斷試劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制手冊”和“抗體二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制手冊”，均列表進(jìn)行了一級（國際）、二級（國家）和三級（工作及其他）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)各自的特性比較［4-5，7］，提出候選原材料應(yīng)與待測分析物性質(zhì)盡可能一致，可使用與待測樣品相似的原材料制備；劑型可為液體、凍干或干燥樣品；標(biāo)定為由有限數(shù)量實(shí)驗(yàn)室使用單個(gè)檢測方法或有限數(shù)量的不同方法／平臺進(jìn)行的小型研究，通過協(xié)作標(biāo)定研究與國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溯源，要求標(biāo)定結(jié)果包括不確定度（measurement uncertainty，MU）等要求。

2.2 《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)通則及疫苗總論《中國藥典》三部（2020版）通則“生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備和標(biāo)定”，對生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提出了明確的技術(shù)要求，包括原材料、制備、檢測、標(biāo)定以及穩(wěn)定性、保存分發(fā)和換批等?！吨袊幍洹啡浚?020 版）人用疫苗總論對企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)指出，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備、標(biāo)定和保存應(yīng)符合“生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備和標(biāo)定”的相關(guān)要求。

2.3 對上市階段疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理要求

2.3.1 我國GMP 文件 GMP（2010 年修訂）規(guī)定，藥品企業(yè)應(yīng)當(dāng)建立工作標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌返馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及制備、鑒別、檢驗(yàn)、批準(zhǔn)和貯存的操作規(guī)程，每批工作標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌窇?yīng)用法定標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌愤M(jìn)行標(biāo)化，并確定有效期，應(yīng)通過定期標(biāo)化證明工作標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌返男r(jià)或含量在有效期內(nèi)保持穩(wěn)定，未提出對疫苗類等生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特殊細(xì)化要求［15］。2020 年增加的生物制品附件中，未對生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行修訂［16］。2023 年發(fā)布的GMP 指南未明確對工作標(biāo)準(zhǔn)品的細(xì)化管理要求［17］。

2.3.2 國外GMP 文件 WHO GMP 技術(shù)指南附錄2（Technical Report Series 986）和EU GMP指南第4卷中，關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理要求基本一致，規(guī)定當(dāng)存在官方標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)優(yōu)先考慮使用官方標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，且依據(jù)其目的進(jìn)行使用。當(dāng)需要制備三級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)，需要采用合適的方法對三級（工作及其他）標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行充分驗(yàn)證并保證可追溯性，同時(shí)進(jìn)行定期監(jiān)測。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲存時(shí)應(yīng)對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的重要信息進(jìn)行標(biāo)注，以確保標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)有效［18-19］。美國FDA 要求保存關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備及驗(yàn)證完整記錄［20］。與我國GMP要求類似，國外GMP 關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用要求也未針對疫苗等生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制定細(xì)化要求。

2.4 對研發(fā)階段疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的技術(shù)要求

2.4.1 我國預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則要求企業(yè)應(yīng)在疫苗研發(fā)階段考慮研究、建立穩(wěn)定工藝后的疫苗抗原參考品，以及疫苗效力、免疫原性檢測用標(biāo)準(zhǔn)品或參考品［21］。疫苗抗原參考品與其后生產(chǎn)多批次疫苗的質(zhì)量控制指標(biāo)的比對，可了解在上市后生產(chǎn)的疫苗抗原較研發(fā)階段的抗原在質(zhì)量上有無改變。疫苗效力、免疫原性檢測的標(biāo)準(zhǔn)品或參考品可用于疫苗效力指標(biāo)的質(zhì)量控制。

2.4.2 CDE相關(guān)指導(dǎo)原則

2.4.2.1 SARS-CoV-2 預(yù)防用疫苗研發(fā)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行） 要求應(yīng)提供建立的參考品或?qū)φ掌穪碓?、制備、檢定結(jié)果、標(biāo)定過程及穩(wěn)定性研究（定期復(fù)檢）等方面的初步研究資料［22］。

2.4.2.2 SARS-CoV-2 預(yù)防用疫苗非臨床有效性研究與評價(jià)技術(shù)要點(diǎn) 應(yīng)提供建立的參考品或?qū)φ掌罚òㄓ糜诤怂岷?、純度和生物活性，包括全序列測定）來源、制備、檢定結(jié)果、標(biāo)定過程及穩(wěn)定性研究（定期復(fù)檢）等方面的初步研究資料［23］。

2.4.2.3 多肽疫苗生產(chǎn)及質(zhì)控技術(shù)指導(dǎo)原則 提出選取合適的1 批中間產(chǎn)品及終產(chǎn)品（最好是選擇經(jīng)過臨床評價(jià)的制品），就其化學(xué)成分、純度及生物學(xué)活性進(jìn)行全面檢定，而后保存下來作為化學(xué)或生物參考品，可依此制定每批產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)要求［24］。

2.4.3 ICH Q6B 提出企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)分級管理，主要參考物質(zhì)為企業(yè)用代表批次制備的經(jīng)質(zhì)量特性分析的物質(zhì)，用于各批產(chǎn)品的生物學(xué)檢測和物理化學(xué)試驗(yàn)，并用于內(nèi)部工作參考物質(zhì)的標(biāo)定，創(chuàng)新藥注冊申請的生產(chǎn)商應(yīng)建立由采用生產(chǎn)和臨床研究用樣品的代表性批次制備的主要參考品。對產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)也應(yīng)考慮分別建立參考品［25］。

3 企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制、使用和管理

3.1 企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制和管理方面存在的問題

本次調(diào)研的疫苗企業(yè)包括mRNA 疫苗、重組蛋白疫苗、滅活疫苗和減毒活疫苗等生產(chǎn)單位。企業(yè)均依據(jù)GMP 要求建立了企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理規(guī)程，對外購和自建標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行管理。

3.1.1 應(yīng)加強(qiáng)對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)法規(guī)指南的學(xué)習(xí)和理解 本次調(diào)研發(fā)現(xiàn)企業(yè)制定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理規(guī)程主要依據(jù)《中國藥典》三部（2020 版）、四部（2020 版）和我國GMP 2010 修訂版，其中對《中國藥典》三部（2020版）人用疫苗總論中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備、標(biāo)定和保存應(yīng)符合“生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備和標(biāo)定”的相關(guān)要求，企業(yè)應(yīng)做到將藥典標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要求的精神與企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)實(shí)際結(jié)合，學(xué)習(xí)理解近年WHO 提出的生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的新理念，并提升對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定概念的理解。在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定方面，目前較多的企業(yè)表現(xiàn)為將標(biāo)定與檢定混為一談，認(rèn)為標(biāo)定是多人多次檢測，結(jié)果應(yīng)符合規(guī)程規(guī)定，不符合規(guī)定的按偏差處理。

3.1.2 我國GMP 相關(guān)文件對疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的適用性 國外GMP 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的規(guī)定均對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的概括性管理提出要求，強(qiáng)調(diào)當(dāng)需要制備企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)，需要采用合適的方法對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行充分驗(yàn)證保證可追溯性，并進(jìn)行定期質(zhì)量監(jiān)測。

我國GMP 2010 修訂版中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相關(guān)規(guī)定，要求通過定期標(biāo)化來證明標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的效價(jià)或含量在效期內(nèi)保持穩(wěn)定。這一條款對于生物制品特別是疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的適用性值得商榷。在2023 年發(fā)布的藥品GMP指南文件中，未再提及對標(biāo)準(zhǔn)品的要求。因此疫苗企業(yè)應(yīng)思考如何合規(guī)并科學(xué)建立和使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

3.2 提升疫苗企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理水平的思考

3.2.1 原料選用 對于研發(fā)中的制品（WHO 國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不可及時(shí)），疫苗企業(yè)應(yīng)自行建立2 個(gè)不同級別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，特別是抗原標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。ICH 提出在申報(bào)時(shí)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)建議采用生產(chǎn)和臨床研究用樣品的代表性批次，制備經(jīng)過質(zhì)量特性分析的高級別工作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和用于產(chǎn)品批檢驗(yàn)的低級別工作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，后者應(yīng)使用高級別標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定?？墒紫瓤紤]應(yīng)用毒理批建立初步的質(zhì)控品，其后應(yīng)用臨床經(jīng)過有效性和安全性研制的批次建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用于后續(xù)批次疫苗的質(zhì)控。

3.2.2 劑型 企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一般不采用凍干劑型，但非凍干的疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可能換代或換批頻繁，不利于保證量值持續(xù)準(zhǔn)確的傳遞，因此較為適宜的方法為在工藝優(yōu)化完成后，選擇工藝穩(wěn)定，具有典型代表性批次制備標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，作為企業(yè)高級別標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)低溫長期保存（通常-70 ℃以下），作為后續(xù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)換代或換批時(shí)的基線。

3.2.3 分裝精度和均勻性 WHO國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的分裝精度要求小于±1.0%，生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分裝精度同樣要求小于±1.0%。分裝精度對凍干的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)尤為重要，同時(shí)也對分裝設(shè)備要求較高，多數(shù)企業(yè)高分裝精度設(shè)備不可及，在實(shí)際中企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按產(chǎn)品分裝的精度也可接受。均勻性是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基本屬性，雖然對于液體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性一般較理想，但對于含鋁佐劑等混懸制品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，建議采用精密度高的方法進(jìn)行均勻性檢測，以滿足標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制要求。

3.2.4 標(biāo)定 企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定目的是為給標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)準(zhǔn)確賦值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制原則，企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或WHO 國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。需由有資質(zhì)的人員通過不同次數(shù)或不同人員與國家或WHO 國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)同時(shí)進(jìn)行標(biāo)定試驗(yàn)，由統(tǒng)計(jì)學(xué)專家通過有效的統(tǒng)計(jì)模型獲得標(biāo)定結(jié)果及MU，生物制品類標(biāo)準(zhǔn)品可采用95%可信限作為MU。

對標(biāo)定次數(shù)，《中國藥典》規(guī)定生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的協(xié)作標(biāo)定至少3 家實(shí)驗(yàn)室，每家提供具有5次以上獨(dú)立有效結(jié)果，WHO 則指出要保證足夠的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)次數(shù)。對于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可采用單一實(shí)驗(yàn)室或少數(shù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行足夠次數(shù)檢測，以保證標(biāo)定符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。目前企業(yè)在標(biāo)定實(shí)驗(yàn)次數(shù)規(guī)定上相差較大，建議企業(yè)在標(biāo)定時(shí)應(yīng)依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性以及檢測方法的變異度確定人員和檢測次數(shù)，應(yīng)用適合的統(tǒng)計(jì)學(xué)模型對每次檢測結(jié)果采用線性或非線性平行性分析進(jìn)行計(jì)算，并證明統(tǒng)計(jì)模型的有效性，全部結(jié)果再通過統(tǒng)計(jì)分析，以獲得標(biāo)定物質(zhì)的最終標(biāo)定均值和MU。

3.2.5 穩(wěn)定性研究和監(jiān)測 穩(wěn)定性為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的另一關(guān)鍵質(zhì)量屬性。疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性可基于疫苗產(chǎn)品的穩(wěn)定性進(jìn)行評估，在有國家或國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)，以國家或國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為依據(jù)，當(dāng)沒有國家或國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)，企業(yè)應(yīng)以內(nèi)部高級別工作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為依據(jù)進(jìn)行穩(wěn)定性研究，包括加速穩(wěn)定性考核和實(shí)時(shí)長期穩(wěn)定性監(jiān)測。

需關(guān)注的是，采用單抗等免疫學(xué)方法檢測疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性，可能出現(xiàn)加速后穩(wěn)定性升高的現(xiàn)象，分析可能為抗原結(jié)構(gòu)改變，充分暴露出單抗的結(jié)合位點(diǎn)。因此研制特異、準(zhǔn)確及敏感的穩(wěn)定性檢測方法是疫苗及疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)穩(wěn)定性研究的前提。

3.2.6 效期 WHO國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不設(shè)效期，企業(yè)可依據(jù)生物制品特性和穩(wěn)定性考核數(shù)據(jù)預(yù)設(shè)效期，但應(yīng)在預(yù)計(jì)效期內(nèi)持續(xù)進(jìn)行穩(wěn)定性監(jiān)測，設(shè)立穩(wěn)定性下降預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)。

3.2.7 表征 WHO指南建議對疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行表征研究［2］。如對新研制的SARS-CoV-2 mRNA 疫苗，WHO 要求在申請上市許可時(shí)提供標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息，選擇充分表征結(jié)構(gòu)、純度和生物活性，經(jīng)過臨床試驗(yàn)評估的批次作為候選標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)原料。《中國藥典》三部（2020版）人用疫苗總論未對疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提出表征要求，而人用重組單克隆抗體制品總論提出選擇適當(dāng)或代表性批次用于各種分析，并應(yīng)進(jìn)行全面分析鑒定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。近期CDE頒布的溶瘤病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則提出［26］，標(biāo)準(zhǔn)品／對照品應(yīng)開展全面的質(zhì)量研究、標(biāo)定和穩(wěn)定性研究。建議對用于疫苗效價(jià)或抗原檢測的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行全面表征，了解標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的降解模式，在此基礎(chǔ)上研究穩(wěn)定性敏感的檢測方法，用于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)穩(wěn)定性監(jiān)測，以及建立模型預(yù)測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有效期。

3.2.8 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的生命周期 企業(yè)應(yīng)結(jié)合基于風(fēng)險(xiǎn)評估的全生命周期標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理理念［8］，對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)原材料、制備、標(biāo)定、保存、使用、換代換批及停用的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估，分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生命周期不同階段存在的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，提出相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制措施，以保證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的準(zhǔn)確性。重點(diǎn)關(guān)注均一性、穩(wěn)定性、協(xié)作標(biāo)定以及賦值準(zhǔn)確性，保證企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值準(zhǔn)確傳遞，建議開發(fā)穩(wěn)定性敏感的檢測方法用于穩(wěn)定性評估和監(jiān)測，為疫苗質(zhì)控和評價(jià)提供可靠的標(biāo)尺。

4 小結(jié)

企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對保證疫苗制品的質(zhì)量發(fā)揮重要作用。近年，我國多個(gè)mRNA、新佐劑重組蛋白及腺病毒、流感病毒載體等新型疫苗品種的出現(xiàn)，對疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制和應(yīng)用提出了挑戰(zhàn)。為適應(yīng)生物制品發(fā)展需要，WHO 對企業(yè)（三級）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的關(guān)鍵質(zhì)量屬性提出了新的技術(shù)要求。本文在對疫苗企業(yè)調(diào)研基礎(chǔ)上，歸納總結(jié)了疫苗類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)的法規(guī)和指南性文件，分析了企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)存在的問題，建議企業(yè)應(yīng)理解并正確應(yīng)用生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相關(guān)法規(guī)和指南文件，并制定企業(yè)疫苗標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備和應(yīng)用的指導(dǎo)原則。