田振振，陳 喆，朱 平，宋銀宏△

［1腫瘤微環(huán)境與免疫治療湖北省重點實驗室（三峽大學(xué)），湖北 宜昌 443002；2三峽大學(xué)感染與炎癥損傷研究所，湖北 宜昌 443002；3三峽大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 宜昌 443002；4三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院腎病內(nèi)科，湖北 宜昌 443003］

發(fā)動蛋白（dynamin）超家族存在于所有細(xì)胞生命活動中，在胞膜構(gòu)成、肌動蛋白束和先天免疫等方面發(fā)揮重要作用。發(fā)動蛋白作為該家族的主要成員，是一種多結(jié)構(gòu)域的機(jī)械化學(xué)鳥苷三磷酸酶（guanosine triphosphatase，GTPase）蛋白，對鳥嘌呤核苷酸具有低親和力、高基礎(chǔ)水解率，能自組裝成高階螺旋結(jié)構(gòu)［1］，在包膜重塑、膜裂變和跨高爾基體出芽等作用中發(fā)揮著重要作用［2］。

在哺乳動物中，發(fā)動蛋白包含3 種經(jīng)典發(fā)動蛋白（dynamin 1、dynamin 2和dynamin 3）和幾種發(fā)動蛋白樣蛋白，同源性約為80%［3］。在經(jīng)典發(fā)動蛋白中，dynamin 1 有神經(jīng)元特異性，與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，例如肌萎縮側(cè)索硬化和阿爾茨海默病［4］。此外，在白血病、肺和結(jié)腸癌的腫瘤細(xì)胞中dynamin 1 表達(dá)上調(diào)［5］；dynamin 2 在細(xì)胞中表達(dá)廣泛，主要介導(dǎo)跨膜運輸。研究顯示，dynamin 2 可以促進(jìn)胞質(zhì)分裂、細(xì)胞增殖和遷移，在腫瘤細(xì)胞中過度表達(dá)［6］；dynamin 3主要在睪丸、大腦和肺部低水平表達(dá)，是腫瘤抑制因子，通過誘導(dǎo)p53 蛋白激活和表達(dá)來抑制腫瘤發(fā)生［7］。dynamin 1、dynamin 2 和dynamin 3 各自具有獨特的功能，但它們在內(nèi)吞作用中可以相互代償［3］。

發(fā)動蛋白樣蛋白中研究較為深入的主要是高度保守的發(fā)動蛋白相關(guān)蛋白1（dynamin-related protein 1，DRP1），與線粒體分裂、抗癌藥物介導(dǎo)的細(xì)胞毒性以及癌癥進(jìn)展有關(guān)。DRP1在阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓舞蹈癥、肌萎縮側(cè)索硬化癥、多發(fā)性硬化癥、糖尿病和肥胖癥等疾病中也發(fā)揮著重要作用［8］。

發(fā)動蛋白是研究細(xì)胞生命活動、微生物感染和神經(jīng)系統(tǒng)疾病等方面的一個重要靶點［9］。常用的發(fā)動蛋白抑制劑包括dynasore、肉豆蔻基三甲基溴化銨（MiTMAB）、十八烷基三甲基溴化銨（OcTMAB）及Dynole?化合物等［3］。長鏈銨鹽的MiTMAB 和OcTMAB 效果良好，能夠可逆地抑制神經(jīng)元和非神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)吞作用。Dynole 34-2 是一種新型抗有絲分裂化合物，專門作用于脫落階段并選擇性地靶向分裂細(xì)胞，對多種癌細(xì)胞具有致死作用。Dynago 是改進(jìn)后的dynasore類似物，它能夠極大減少在體外的非特異性結(jié)合，并同時提高抑制效率。dynasore 最早于2006 年被Macia 等［10］從16 000 個小分子中篩選出，在體內(nèi)、外干擾發(fā)動蛋白dynamin 1、dynamin 2 和DRP1 的GTPase 活性，抑制發(fā)動蛋白的內(nèi)吞作用，是目前研究較為深入的發(fā)動蛋白抑制劑之一，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域被大量應(yīng)用。本文以dynasore 參與疾病的分子機(jī)制和信號通路為基礎(chǔ)，對dynasore在微生物感染、神經(jīng)退行性疾病和腫瘤等疾病中發(fā)揮的作用進(jìn)行綜述。

1 dynasore的功能

內(nèi)吞作用是細(xì)胞普遍存在的生理過程，協(xié)助細(xì)胞進(jìn)行營養(yǎng)攝取、受體更新和細(xì)胞信號傳導(dǎo)等活動［11］，而發(fā)動蛋白介導(dǎo)是其中最重要的部分［10］。dynasore 通過抑制發(fā)動蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)多種信號通路，并且在不依賴發(fā)動蛋白的情況下，通過脫靶效應(yīng)參與多種細(xì)胞信號傳導(dǎo)［10，12］（圖1）。

Figure 1. Schematic diagram about the mechanism of dynasore participating in intracellular signaling pathways. Dynasore participates in intracellular signaling pathway mechanism. DNM： dynamin； FasL： Fas ligand； MAPK： mitogen-activated protein kinase； ROS： reactive oxygen species； Grb2： growth factor receptor-bound protein 2； TFEB/TFE3： transcription factors EB/E3； MTOR1： mammalian target of rapamycin 1； MT： mitochondrion.圖1 dynasore參與細(xì)胞內(nèi)信號通路機(jī)制示意圖

1.1 dynasore 抑制內(nèi)吞作用 dynasore 是發(fā)動蛋白GTPase 活性的非競爭性抑制劑，以劑量依賴的方式抑制dynamin 1 或dynamin 2 的GTPase 活性，減少網(wǎng)格蛋白包被的凹坑和囊泡的形成，抑制內(nèi)吞作用。研究證實，用dynasore 處理細(xì)胞可以在2 分鐘內(nèi)抑制網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，并且這種作用可以在20 min內(nèi)通過去除抑制劑消除，對多個物種的細(xì)胞均起效［10］。除了抑制發(fā)動蛋白GTPase 活性外，dynasore對細(xì)胞膽固醇、脂筏和肌動蛋白也發(fā)揮相應(yīng)效應(yīng)，這些效應(yīng)有些是依賴發(fā)動蛋白的，另外一部分則獨立于發(fā)動蛋白［13］。

1.2 dynasore 介導(dǎo)的抗癌機(jī)制 dynamin 2 在大部分腫瘤細(xì)胞中過度表達(dá)，通過多種途徑參與腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移以及細(xì)胞的增殖和存活［14］。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）是腫瘤細(xì)胞增殖、存活和凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，STAT3 的過度磷酸化表達(dá)與dynamin 2上調(diào)有關(guān)。研究顯示dynasore可以抑制STAT3 通路抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖［15］。生長因子受體結(jié)合蛋白2（growth factor receptor-bound protein 2，Grb2）、凋亡相關(guān)因子（factor-related apoptosis，F(xiàn)as）、人第10 號染色體缺失并與張力蛋白同源的磷酸酶（phosphatase and tensin homolog on chromosome ten，PTEN）和p53 蛋白等在細(xì)胞中的信號傳導(dǎo)同樣受dynamin 2 調(diào)控，dynasore 通過對dynamin 2 的抑制作用可以調(diào)控相關(guān)腫瘤信號傳導(dǎo)［12，16］，發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖的的作用。

1.3 dynasore抑制鐵死亡進(jìn)程 鐵死亡指一種基于脂質(zhì)的活性氧物質(zhì)的積累引起的鐵依賴性調(diào)節(jié)形式的細(xì)胞死亡，與多種病理進(jìn)程有關(guān)，包括發(fā)育、腫瘤和神經(jīng)變性［17-18］。研究顯示，在完整的細(xì)胞中，dynasore 減少脂質(zhì)活性氧（reactive oxygen species，ROS）積累，阻斷線粒體超氧化物形成，抑制線粒體呼吸，減少線粒體ROS 的產(chǎn)生，保護(hù)細(xì)胞免遭鐵死亡。在無細(xì)胞系統(tǒng)中，dynasore 具有自由基清除、抗氧化特性，可以作為ROS驅(qū)動型細(xì)胞死亡的高效抑制劑，通過阻斷ROS 產(chǎn)生和脂質(zhì)-ROS 驅(qū)動的細(xì)胞死亡兩條途徑，聯(lián)合調(diào)節(jié)鐵離子庫和抑制ROS的產(chǎn)生［19］。

1.4 dynasore抑制線粒體自噬 線粒體自噬深度參與哺乳動物的分化、發(fā)育和多種類型的組織損傷，在腫瘤、神經(jīng)變性、衰老和免疫反應(yīng)中的發(fā)揮的作用已得到廣泛認(rèn)識［20］。DRP1 蛋白是維持線粒體動力學(xué)平衡、調(diào)節(jié)裂變、融合、線粒體自噬甚至運動的重要組成部分。它主要用作線粒體分裂因子，誘導(dǎo)線粒體分裂，但DRP1 蛋白下調(diào)時，會間接促進(jìn)融合。DRP1 調(diào)節(jié)裂變可用于切除線粒體的受損部分以進(jìn)行線粒體自噬，而DRP1 的減少會招募parkin 蛋白進(jìn)行線粒體自噬。過度裂變或融合也會阻礙線粒體運輸，其轉(zhuǎn)錄的下調(diào)或上調(diào)可用于測量線粒體動力學(xué)的增量變化［8］。dynasore 通過抑制DRP1，促進(jìn)線粒體的分裂，并且在線粒體受損或老化時促進(jìn)其進(jìn)一步的降解。這種作用有助于維持線粒體的功能和質(zhì)量，并且在細(xì)胞應(yīng)激、代謝調(diào)節(jié)和疾病發(fā)生中具有重要的生理和病理意義。

1.5 dynasore 介導(dǎo)的血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）通路 VEGF 受體2（VEGF receptor 2，VEGFR2）是一種關(guān)鍵的血管生成受體，可以通過多種信號通路誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。在被VEGF 激活后，VEGFR2 通過dynamin 2 介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入胞質(zhì)內(nèi)［21］。但有研究顯示敲低或過表達(dá)發(fā)動蛋白不影響VEGF誘導(dǎo)的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2，ERK1/2）的磷酸化，而dynasore明顯降低ERK1/2的磷酸化，表明雖然dynasore 抑制VEGFR2 的內(nèi)吞，但它在ERK1/2磷酸化中的抑制作用與VEGFR2 內(nèi)吞作用的減弱無關(guān)，而是由于藥物的脫靶效應(yīng)——即dynasore可以抑制VEGF 誘導(dǎo)的鈣釋放，抑制ERK1/2 的磷酸化。由此可知，dynasore 通過抑制VEGF 通路參與細(xì)胞增殖、存活和凋亡相關(guān)生命過程［22］。

1.6 dynasore 介導(dǎo)的氧化應(yīng)激保護(hù)作用 dynasore對氧化應(yīng)激導(dǎo)致的眼表角膜細(xì)胞和細(xì)胞表面糖萼損傷具有顯著的保護(hù)作用，減輕壓力造成的損傷，防止屏障破壞和染料進(jìn)入。其機(jī)制有三方面：一是dynasore靶向發(fā)動蛋白家族成員dynamin 2或DRP1，減輕線粒體斷裂并阻斷炎性物質(zhì)的激活和炎性細(xì)胞因子的表達(dá)；二是dynasore 對質(zhì)膜膽固醇、脂筏和肌動蛋白具有獨立于發(fā)動蛋白的“脫靶”效應(yīng)［23］；第三是dynasore 通過維持未折疊蛋白反應(yīng)和鈣穩(wěn)態(tài)來保護(hù)受到氧化應(yīng)激的眼表黏膜上皮細(xì)胞，這也為dynasore作為新的眼表治療藥物提供了有力的支持［24-25］。

2 dynasore在疾病治療中的應(yīng)用

dynasore 能夠干擾細(xì)菌內(nèi)吞、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、保護(hù)心肌細(xì)胞免受損傷，在微生物感染、腫瘤治療和神經(jīng)系統(tǒng)疾病等領(lǐng)域中的治療作用正被研究開發(fā)。

2.1 dynasore在細(xì)菌性疾病中的抑制作用 細(xì)菌感染真核細(xì)胞需要內(nèi)吞作用侵入進(jìn)行，如福氏志賀菌在細(xì)胞間的傳播取決于細(xì)菌的外膜蛋白與神經(jīng)元Wiskott-Aldrich 綜合征蛋白相互作用，后者募集肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合物啟動F-肌動蛋白聚合，使細(xì)菌能夠在細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間傳播。dynamin 2 是福氏志賀菌細(xì)胞間擴(kuò)散的重要組成部分，dynasore 抑制dynamin 2 可以阻止福氏志賀菌的傳播［26］。這種抑制機(jī)制在金黃色葡萄球菌、傷寒沙門菌和化膿性球菌中也被證實［27-28］。

2.2 dynasore 對病毒性疾病的療效 dynamin 2 是巨細(xì)胞病毒感染早期病毒裝配中心生成和初級內(nèi)體/內(nèi)循環(huán)室/高爾基體膜重排機(jī)制的一部分。在鼠巨細(xì)胞病毒感染的早期階段，dynasore可以阻礙病毒裝配中心的形成，抑制后期蛋白質(zhì)的合成和病毒粒子的產(chǎn)生［29］。另有研究顯示dynasore 以新型RAS 相關(guān)C3 肉毒桿菌毒素底物1（RAS-related C3 botulinum toxin substrate 1，Rac-1）、ROS 和線粒體抗病毒信號（mitochondrial antiviral signaling，MAVS）介導(dǎo)的信號級聯(lián)反應(yīng)，增強(qiáng)線粒體抗病毒信號聚集體的形成，激活不依賴內(nèi)吞作用的核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）［30-31］。dynasore 通過模擬病毒誘導(dǎo)這一關(guān)鍵炎癥信號通路，顯示出作為抗病毒治療策略或疫苗佐劑的價值。

人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）根據(jù)遺傳特征和病毒抗原的差異分為1 型和2 型（HIV-1 和HIV-2）［32］，與HIV-2 相比，HIV-1 的潛伏期更短，發(fā)病率更高，傳播率更高，目前的研究主要是針對HIV-1 進(jìn)行的［33-34］。研究證實HIV-1 是通過發(fā)動蛋白依賴性內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞的，dynasore對幾種常用細(xì)胞系中HIV-1 的感染產(chǎn)生抑制作用，并且dynasore 對HIV-1 感染的抑制作用不是由于網(wǎng)格蛋白依賴性內(nèi)吞作用的阻礙，具體的分子靶標(biāo)仍未明確［35-36］。通過抑制dynamin 2 介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，dynasore還抑制皰疹病毒、塞內(nèi)卡病毒感染進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)［25，37］。此外，通過軟件模擬分析發(fā)現(xiàn)dynasore對冠狀病毒2019（COVID-19）也有很好的抑制作用［38］。

2.3 dynasore對神經(jīng)退行性疾病的緩解作用 自噬是一種重要的細(xì)胞蛋白調(diào)控過程，在神經(jīng)退行性疾病發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。神經(jīng)退行性疾病的共同特征是自噬活性降低和蛋白質(zhì)聚集異常。對自噬的藥理調(diào)節(jié)有助于治療神經(jīng)退行性疾?。?9］。研究顯示dynasore 可以抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的溶酶體定位，阻斷哺乳動物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1（mammalian target of rapamycin complex 1，mTORC1）的活性，增強(qiáng)自噬主要調(diào)節(jié)因子（包括TFE3 和TFEB）的核轉(zhuǎn)位，自噬通量在dynasore 處理后的細(xì)胞中上調(diào)。此外，dynasore的處理顯著促進(jìn)了由含有擴(kuò)展聚谷氨酰胺（polyglutamine，polyQ）的突變亨廷頓蛋白形成的蛋白質(zhì)聚集體的清除。相比之下，在自噬缺陷的細(xì)胞中，dynasore 對突變亨廷頓蛋白的polyQ聚集體的清除無明顯作用。因此dynasore可以通過調(diào)節(jié)mTORC1-TFEB 信號傳導(dǎo)影響神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白的自噬降解［40］。另外，DRP1 是介導(dǎo)線粒體裂變和影響神經(jīng)元線粒體自噬的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，抑制DRP1改善運動缺陷和帕金森模型小鼠體內(nèi)的酪氨酸羥化酶的表達(dá)，上調(diào)PTEN誘導(dǎo)推定激酶1（PTEN-induced putative kinase 1，PINK1）和parkin蛋白的線粒體表達(dá)，但不影響Nip 樣蛋白X（Nip-like protein X，NIX）和BCL2 相互作用蛋白3（BCL2 interacting protein 3，BNIP3）的表達(dá)，改善了線粒體超微結(jié)構(gòu)并恢復(fù)帕金森患者的線粒體穩(wěn)態(tài)［39］。脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）是一種常見且具有破壞性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，缺乏有效的治療方法。另有研究顯示，腹腔注射dynasore 處理SCI 大鼠后，顯著改善了運動功能，dynasore組凋亡神經(jīng)元和增殖星形膠質(zhì)細(xì)胞減少，存活神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量顯著增加，證實了dynasore 抑制 DRP1，在大鼠患有SCI 后發(fā)揮有效保護(hù)作用［41］。

2.4 dynasore 在腫瘤治療中的潛力 dynasore 是一種候選的有效抗癌藥物，通過抑制內(nèi)吞作用、破壞肌動蛋白穩(wěn)定性和靶向降低dynamin 2 干預(yù)腫瘤細(xì)胞中的信號傳導(dǎo)來降低腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲［42］。雖然dynasore尚未用于臨床治療，但其在基礎(chǔ)科學(xué)研究中已經(jīng)表現(xiàn)出良好作用［43］。

肺癌是全世界腫瘤疾病中發(fā)病率和死亡率最高的癌種之一，肺癌經(jīng)常檢測到表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）突變，導(dǎo)致該受體酪氨酸激酶持續(xù)活躍，已證明針對EGFR 的靶向治療對于肺癌治療有效［44］。dynasore 有效地抑制EGFR 外顯子19 缺失突變體，對外顯子19 缺失的EGFR 突變體驅(qū)動的肺癌細(xì)胞系的細(xì)胞增殖、集落形成、細(xì)胞遷移和細(xì)胞周期進(jìn)程有明顯抑制作用［45］。肺癌與線粒體融合和裂變失調(diào)有關(guān)，DRP1的抑制會減少肺癌細(xì)胞的增殖并增加其凋亡［46］。順鉑是肺癌臨床治療的一線化療藥物。然而，順鉑易引起耐藥，降低了臨床療效［47］。順鉑增加線粒體分裂和dynamin 2 表達(dá)，而dynasore 具有相反的效果。順鉑和dynasore均獨立誘導(dǎo)線粒體氧化應(yīng)激，導(dǎo)致線粒體功能障礙、細(xì)胞增殖減少和細(xì)胞凋亡增強(qiáng)。但是二者聯(lián)合使用時dynasore 增強(qiáng)了順鉑的抗癌作用［48］。dynasore 還可以通過STAT3 信號通路抑制細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并增強(qiáng)順鉑在骨肉瘤中的抗腫瘤能力［15］。

細(xì)胞間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)換因子（cellular mesenchymal epithelial transition factor，c-Met）是一種受體酪氨酸激酶，對肝細(xì)胞生長因子具有高親和力，在細(xì)胞中與磷脂酰肌醇3-激酶和黏附斑激酶發(fā)生級聯(lián)反應(yīng)，有助于腫瘤細(xì)胞形態(tài)發(fā)生、存活和增殖［49］。c-Met 受體在肝癌中表達(dá)增加，被用于小分子酪氨酸激酶抑制劑進(jìn)行藥理學(xué)干預(yù)的靶標(biāo)［50］。研究dynasore 與幾種c-Met 抑制劑的聯(lián)合作用顯示dynasore 增強(qiáng)這些抑制劑對肝癌細(xì)胞增殖和遷移的抑制作用［51］。研究證明阻斷急性髓系白血病中的發(fā)動蛋白依賴性內(nèi)吞作用（dynamin-dependent endocytosis，DDE）可以有效地阻止多種生長因子刺激的信號通路的激活，對阻止腫瘤進(jìn)展有重要意義，DDE 抑制劑對急性淋巴細(xì)胞白血病和急性髓系白血病的治療有效［52］。上述研究顯示dynasore不但本身具有抗癌作用，與其他抗癌藥物的聯(lián)合使用也具有良好效果。

2.5 dynasore 在其他疾病治療中的應(yīng)用 2 型糖尿病的特征是線粒體功能障礙、高水平的ROS 產(chǎn)生和低ATP 水平等。dynasore 可以防止氧化應(yīng)激和線粒體分裂，提高心肌細(xì)胞在缺血/再灌注條件下的存活率。dynasore 還可以在氧化應(yīng)激條件下維持線粒體功能和形態(tài)，提高ATP 水平，從而預(yù)防心臟衰竭并減少細(xì)胞損傷［53］。以上研究表明dynasore 在治療糖尿病患者以及心血管并發(fā)癥方面發(fā)揮重要作用［54-57］。

dynasore在疾病治療中作用的總結(jié)見表1。

表1 dynasore對不同疾病的作用Table 1. The effect of dynasore on different diseases

3 dynasore的不良反應(yīng)

與許多小分子抑制劑一樣，dynasore具有不良的非特異性結(jié)合，其與血清蛋白和常用的去垢劑Tween-80 會發(fā)生非特異性結(jié)合，失去動力抑制功能，限制了其在實驗中的使用［58-59］。dynasore 除了抑制發(fā)動蛋白外，還具有廣泛的脫靶效應(yīng)。在dynamin 1、2 和3 三重條件敲除小鼠成纖維細(xì)胞中，dynasore不僅能抑制網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，還能抑制液相內(nèi)吞作用，而其預(yù)期靶標(biāo)dynamin 已被消除，證明了脫靶效應(yīng)。dynasore 對膜波紋也有強(qiáng)大的阻斷作用，并且這種作用也不依賴于dynamin［60］。因此應(yīng)謹(jǐn)慎給出dynasore結(jié)論性評估。

4 結(jié)語與展望

綜上所述，dynasore 在細(xì)胞的生命活動、信號傳導(dǎo)和分化發(fā)育中，通過介導(dǎo)內(nèi)吞作用、鐵死亡和線粒體自噬等發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，并能夠積極治療多種疾病。然而，dynasore的靶點dynamin 1、dynamin 2和DRP1在細(xì)胞活動中也具有重要作用，對其相關(guān)不良反應(yīng)要重點關(guān)注。未來的研究方向應(yīng)著重于更具靶點特異性的dynasore 類似物研發(fā)，進(jìn)一步優(yōu)化dynasore 的結(jié)構(gòu)，提高其抑制效率和安全性，并進(jìn)一步探索dynasore和一線治療藥物的聯(lián)合使用效果，以實現(xiàn)最優(yōu)的治療效果。