黃良江,麥麗萍

(1.來賓市檢驗(yàn)檢測中心,廣西 來賓 546100;2.武宣縣衛(wèi)生計(jì)生監(jiān)督所,廣西 武宣 545900)

維生素E軟膠囊分為合成型和天然型[1-2],是臨床常用的一種藥物,其主要成分為維生素E,輔料為甘油、明膠等。維生素E軟膠囊現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于2020年版《中華人民共和國藥典》。相關(guān)文獻(xiàn)顯示,雜質(zhì)(+)-α-生育酚為合成型的維生素E已知雜質(zhì),現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)中僅規(guī)定原料藥為維生素E(合成型)的維生素E軟膠囊進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查,未控制原料藥為維生素E(天然型)的維生素E軟膠囊制劑的有關(guān)物質(zhì)[3]。研究表明,天然型維生素E有著比合成型維生素E更好的生物活性和生物利用率[4-6],成品制劑的價(jià)格也比合成型成品的價(jià)格高。因此,在利益的驅(qū)動(dòng)下,不法分子有可能會(huì)利用現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的缺陷以合成型維生素E冒充天然型維生素E用于維生素E軟膠囊產(chǎn)品生產(chǎn),而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)未對標(biāo)示為天然型維生素E軟膠囊進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查,存在一定的藥品安全隱患。筆者查閱有關(guān)文獻(xiàn),對天然型維生素E軟膠囊進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)研究的報(bào)道較少[7-9]。為提高天然型維生素E軟膠囊的藥品安全性和質(zhì)量,本研究參考相關(guān)文獻(xiàn),對天然型維生素E軟膠囊開展有關(guān)物質(zhì)研究,建立氣相色譜法測定天然型維生素E軟膠囊的有關(guān)物質(zhì),并對檢出的已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)進(jìn)行分析,以期為天然型維生素E軟膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津GC-2030氣相色譜儀,FID檢測器(日本島津),LabSolutions色譜工作站,電子天平(瑞士梅特勒-托利多)。

1.2 試藥

天然型維生素E軟膠囊(批號(hào):210719、210726、210803、210815、210913,青島某藥業(yè)公司),維生素E對照品(批號(hào):100062-201811,中國食品藥品檢定研究院),(+)-α-生育酚(批號(hào)FS1614161,天津阿爾塔科技有限公司),正己烷(色譜純)

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:CD-1毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);柱溫:265 ℃,恒溫分離;進(jìn)樣口溫度:290 ℃;檢測器溫度:300 ℃;載氣為高純氮?dú)?流速為1.5 mL/min;V(H2)∶V(O2)∶V(N2)=32∶200∶24;進(jìn)樣量1 μL,分流比20∶1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 雜質(zhì)對照品溶液的制備

精密稱取雜質(zhì)(+)-α-生育酚對照品適量,用正己烷稀釋,制成濃度為10.00,20.00,30.00,40.00,50.00 μg/mL的對照品溶液,用0.45 μm微孔濾膜過濾,即得。

2.2.2 供試品溶液和對照溶液的制備

供試品溶液:取天然型維生素E軟膠囊內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于維生素E 25 mg),精密稱定,加入正己烷10 mL,密塞,振搖使維生素E溶解,靜置,濾過,取續(xù)濾液。對照溶液:精密量取供試品溶液續(xù)濾液1 mL,置100 mL棕色容量瓶中,加正己烷定容至刻度,搖勻,使用時(shí)用0.45 μm微孔濾膜過濾,即得。

2.2.3 空白溶液的制備

以說明書載明的輔料用正己烷溶解作為空白溶液,使用時(shí)用0.45 μm微孔濾膜過濾,即得。

2.2.4 系統(tǒng)適用性溶液的制備

取維生素E對照品和雜質(zhì)(+)-α-生育酚對照品各適量,精密稱定,加正己烷溶解,并稀釋制成每1 mL中含維生素E 250 μg與雜質(zhì)(+)-α-生育酚100 μg的混合溶液,用0.45 μm微孔濾膜過濾,即得。

2.3 系統(tǒng)適用性考察

取“2.2.4”項(xiàng)下的系統(tǒng)適用性溶液以1 μL進(jìn)樣量注入氣相色譜儀,按“2.1”中色譜條件測定,記錄色譜圖,結(jié)果見圖1。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)測得系統(tǒng)適用性溶液中主成分維生素E峰與雜質(zhì)(+)-α-生育酚峰之間的分離度R=3.256,理論塔板數(shù)以雜質(zhì)(+)-α-生育酚峰計(jì)算,理論塔板數(shù)為91 887;系統(tǒng)適用性溶液中主成分維生素E峰與雜質(zhì)(+)-α-生育酚峰之間的分離度大于1.5,理論塔板數(shù)大于5 000,表明該色譜系統(tǒng)條件下樣品中主成分能與其他雜質(zhì)成分良好分離,能夠準(zhǔn)確定量。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 空白輔料干擾實(shí)驗(yàn)

稱取處方中各輔料的最大取樣量制成混合空白輔料溶液,精密量取混合輔料溶液1 μL注入氣相色譜儀,依法測定,結(jié)果見圖2。結(jié)果表明:空白輔料在雜質(zhì)(+)-α-生育酚保留時(shí)間23.5 min附近不存在輔料峰,輔料峰不干擾有關(guān)物質(zhì)的檢測。

圖2 空白溶液

2.4.2 檢出限和定量限考察

將質(zhì)量濃度為10.00 μg/mL的雜質(zhì)(+)-α-生育酚對照品溶液逐級稀釋進(jìn)樣,以信噪比(S/N)分別為3和10計(jì)算檢出限和定量限。結(jié)果顯示,當(dāng)信噪比(S/N)約為3.0時(shí)測得方法檢出限為0.195 μg/mL,當(dāng)S/N約為10.0時(shí)測得方法定量限為0.644 μg/mL。

2.4.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下各系列濃度的雜質(zhì)(+)-α-生育酚對照品溶液1 μL注入氣相色譜儀,按“2.1”中色譜條件進(jìn)樣測定,以質(zhì)量濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo),以雜質(zhì)(+)-α-生育酚峰面積的作為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示,雜質(zhì)(+)-α-生育酚的回歸方程為Y=257.857X+0.249 063,線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 99。結(jié)果表明雜質(zhì)(+)-α-生育酚在10.00～50.00 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好。雜質(zhì)(+)-α-生育酚對照品溶液色譜圖見圖3。

圖3 雜質(zhì)對照品溶液

2.4.4 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品批號(hào)為210719的供試品1份,按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液,在供試品溶液于25 ℃下分別放置0,2,4,8,12,18,24 h,在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)取供試品溶液以“2.1”色譜條件分別進(jìn)行測定。結(jié)果顯示,不同時(shí)間段供試品溶液中均未檢出雜質(zhì)(+)-α-生育酚,未知最大單個(gè)雜質(zhì)的平均含量為1.18%,RSD為0.53%,總雜質(zhì)的平均含量為2.32%,RSD為0.76%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取樣品(批號(hào):210719)6份,按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液,分別取供試品溶液以“2.1”色譜條件測定,結(jié)果6份供試品溶液中均未檢出雜質(zhì)(+)-α-生育酚,未知最大單個(gè)雜質(zhì)的平均含量為1.15%,RSD為0.43%(n=6),總雜質(zhì)的平均含量為2.23%,RSD為0.58%(n=6),相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD<5%,表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.6 加標(biāo)回收率考察

取同一批次(批號(hào):210719)天然型維生素E軟膠囊樣品9份,精密稱定。將9份樣品分成3組,每組3份。按表1添加量添加雜質(zhì)(+)-α-生育酚,制成低、中、高濃度添加水平的加標(biāo)回收率試驗(yàn)溶液。上述9份溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入氣相色譜儀測定,檢測雜質(zhì)(+)-α-生育酚含量,計(jì)算每份樣品的加標(biāo)回收率。結(jié)果測得低、中、高三種添加水平的樣品中雜質(zhì)(+)-α-生育酚的平均加標(biāo)回收率為100.36%,RSD=2.89%(n=9),表明該方法的準(zhǔn)確度良好。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.5 樣品雜質(zhì)測定

取批號(hào)為210719、210726、210803、210815、210913的天然型維生素E軟膠囊(標(biāo)示量100 mg)進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測定。供試品溶液中如檢測出雜質(zhì)峰,雜質(zhì)(+)-α-生育酚峰面積不得大于1.0%,其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于1.5%,總雜質(zhì)不得大于2.5%。測定結(jié)果見表2,供試品色譜圖見圖4～5。

圖4 供試品溶液

圖5 對照溶液

表2 天然維生素E軟膠囊有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3 討論

3.1 雜質(zhì)控制的意義

雜質(zhì)(+)-α-生育酚為合成型的維生素E已知雜質(zhì),為生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的工藝雜質(zhì),使用合成型維生素E作為原料生產(chǎn)制劑,制劑中可能引入(+)-α-生育酚,因此對標(biāo)示為天然型的維生素E制劑,檢查雜質(zhì)(+)-α-生育酚,能有效辨別制劑是否摻雜合成型原料,對制劑的質(zhì)量控制意義重大?！吨腥A人民共和國藥典》2020年版二部收載的“維生素E軟膠囊”中有關(guān)物質(zhì)僅對原料藥和原料藥為合成型的維生素E軟膠囊制劑的有關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行控制,未對原料藥為天然型的維生素E軟膠囊制劑進(jìn)行有關(guān)雜質(zhì)控制。因此,對原料藥為天然型的維生素E軟膠囊制劑進(jìn)行有關(guān)雜質(zhì)控制有利于提高天然型維生素E軟膠囊的藥品安全性和制劑質(zhì)量。本研究建立的方法可有效測定天然型維生素E軟膠囊中的雜質(zhì)(+)-α-生育酚及總雜質(zhì)含量,對天然型維生素E軟膠囊質(zhì)量控制和提高藥品質(zhì)量安全性以及對打擊原料藥摻雜合成型成分以次充好的違法行為具有重要意義。

3.2 色譜條件選擇

本試驗(yàn)對色譜柱、進(jìn)樣口溫度、柱溫、檢測器溫度、分流比進(jìn)行考察[10],因系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中要滿足主成分與雜質(zhì)成分分離度要求,通過試驗(yàn)最終確定色譜柱為CD-1毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)、柱溫為265 ℃、進(jìn)樣口溫度為290 ℃、檢測器溫度為300 ℃、V(H2)∶V(O2)∶V(N2)=32∶200∶24、分流比20∶1時(shí),主成分維生素E與雜質(zhì)(+)-α-生育酚能實(shí)現(xiàn)良好分離,分離度為3.256,符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的分離度要求。

3.3 測定結(jié)果分析

根據(jù)維生素E軟膠囊質(zhì)量控制要求,維生素E軟膠囊中如檢測出雜質(zhì)峰,雜質(zhì)(+)-α-生育酚峰面積不得大于1.0%,其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于1.5%,總雜質(zhì)不得大于2.5%。試驗(yàn)中測定5批次天然維生素E軟膠囊樣品,均未檢出雜質(zhì)(+)-α-生育酚(或小于檢測限),未知最大單個(gè)雜質(zhì)的含量均小于1.5%,總雜質(zhì)的含量也均小于2.5%,測定的5批次樣品有關(guān)物質(zhì)均達(dá)到藥典規(guī)定要求,表明用于試驗(yàn)的5批次天然維生素E軟膠囊樣品中使用的原料藥為天然型維生素E,不存在摻雜合成型原料藥或使用合成型代替天然型制成制劑的現(xiàn)象,產(chǎn)品質(zhì)量得到較好保證。

3.4 小結(jié)

本試驗(yàn)對5個(gè)批次的天然型維生素E軟膠囊有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測定,測得5個(gè)批次樣品中有關(guān)物質(zhì)均達(dá)到藥典規(guī)定要求。本研究在參考總結(jié)相關(guān)文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上,優(yōu)化了毛細(xì)管氣相色譜條件,該方法線性關(guān)系好,專屬性、精密度、重復(fù)性良好。通過考察加標(biāo)回收對方法進(jìn)行了驗(yàn)證,得到了較好的準(zhǔn)確度。該方法樣品處理操作簡便、快捷,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可用于天然型維生素E軟膠囊中有關(guān)物質(zhì)的測定和質(zhì)量控制。