王佳寧,張自強(qiáng),孔德婧,馮彩彩,張飛可,劉玉梅*

(1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,洛陽 471000;2.洛陽鑫泰農(nóng)牧科技股份有限公司,洛陽 471000)

肺炎克雷伯菌是一種常見的革蘭陰性條件致病菌,屬于腸桿菌科,常寄生在人和動(dòng)物的消化道、呼吸道和泌尿生殖道[1]。近年來,家兔感染肺炎克雷伯菌的報(bào)道屢見不鮮。當(dāng)家兔抵抗力低下時(shí),該致病菌在家兔體內(nèi)大量生長(zhǎng)繁殖,引起家兔大面積發(fā)病,從而產(chǎn)生較高的死亡率[2]。家兔感染后常表現(xiàn)為肺炎、腹瀉及其他器官化膿性炎癥,嚴(yán)重者甚至引發(fā)敗血癥。隨著兔規(guī)模化養(yǎng)殖的快速發(fā)展,由肺炎克雷伯菌引起兔大規(guī)模感染時(shí)常發(fā)生,嚴(yán)重危害養(yǎng)兔業(yè)的健康發(fā)展。

目前,關(guān)于兔肺炎克雷伯菌的相關(guān)文獻(xiàn)大多集中在病例報(bào)道[1,3-5],而家兔感染肺炎克雷伯菌的組織病理學(xué)變化及其相關(guān)毒力基因鮮有報(bào)道。因此,本研究分別從宏觀和微觀角度觀察家兔感染肺炎克雷伯菌后的病理學(xué)特征,通過PCR鑒定其毒力強(qiáng)弱,并采用藥敏試驗(yàn)確定肺炎克雷伯菌對(duì)常用抗生素的耐藥譜,以期為該致病菌感染的防治和科學(xué)用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 患病動(dòng)物臨床癥狀及病料采集 從河南地區(qū)某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)采集6份具有呼吸道和消化道癥狀的病兔樣品。病兔鼻腔有白色黏液、呼吸困難且腹瀉,病兔大量死亡。在無菌條件下,剖檢觀察病兔組織器官病變情況,分別采集病兔肺、肝、胸腺、脾、腎、腸組織,進(jìn)行病原菌的分離與純化。并取病兔肺、肝、胸腺、脾、腎、腸組織于4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定。此外,對(duì)家兔常感染的病原菌(兔肺炎鏈球菌、兔沙門菌等)進(jìn)行例檢均為陰性。

1.1.2 主要試劑與儀器 普通瓊脂培養(yǎng)基、藥敏紙片購(gòu)自溫州康泰生物科技有限公司、DL2000 DNA Marker購(gòu)自康為世紀(jì)生物科技有限公司、細(xì)菌基因組DNA小量提取試劑盒、溴化乙錠溶液購(gòu)自蘇州天可貿(mào)易有限公司。

主要儀器包括微波爐(P70D20TL-P4)、攤片機(jī)(KD-P)、烘片機(jī)(KD-H)、普通PCR儀(Applied Biosystems)、電泳儀(北京市六一儀器廠)、凝膠成像系統(tǒng)(BIORAD)等。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌的分離與純化 取“1.1.1”采集的病兔肺、肝、胸腺、脾、腎、腸組織樣品分別劃線接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基,置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,觀察菌落生長(zhǎng)情況。挑取單菌落進(jìn)行革蘭染色并鏡檢觀察。

1.2.2 分子生物學(xué)鑒定 取1 mL菌液,通過試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA,并進(jìn)行PCR擴(kuò)增。引物序列為:F:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′;R:5′-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′。預(yù)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度約為1 494 bp。引物由通用生物(安徽)股份有限公司合成。PCR反應(yīng)體系25 μL:上、下游引物各1 μL, DNA模板1 μL, Premix TaqTM12.5 μL, ddH2O 9.5 μL。PCR反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性4 min;94 ℃變性30 s,57 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,30個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min;4 ℃保存。PCR產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后,由通用生物(安徽)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序,將測(cè)序結(jié)果與GenBank中已收錄的菌株進(jìn)行同源性比對(duì)分析,并利用MEGA 7.0構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

1.2.3 毒力基因擴(kuò)增 以細(xì)菌基因組DNA為模板,參考相關(guān)文獻(xiàn)擴(kuò)增allS、fimH、kfu、magA、ureA、uge、rmpA和wabG8種毒力基因,鑒定菌株毒力基因情況。具體序列及目的片段信息見表1。引物由通用生物(安徽)股份有限公司合成。PCR反應(yīng)體系25 μL:上、下游引物各1 μL,DNA模板1 μL, Premix TaqTM12.5 μL, ddH2O 9.5 μL。PCR反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃ 變性1 min,48 ℃～57 ℃ 1 min,72 ℃延伸30～60 s,35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min;4 ℃保存。

表1 毒力基因引物信息Table 1 Primer information of virulence genes

1.2.4 病兔組織病理學(xué)觀察 取病死兔肝、脾、肺、胸腺、腎、腸等組織器官固定在4%多聚甲醛中。分別在70%、80%、90%、95%、100%無水乙醇中進(jìn)行逐級(jí)脫水,并進(jìn)行組織塊透明和石蠟包埋。再將包埋好的組織塊切成5 μm厚切片并烘干。于室溫下將切片進(jìn)行蘇木精-伊紅染色(HE染色),染色后的切片置于不同濃度無水乙醇中進(jìn)行脫水,切片透明并封片。最后,使用顯微鏡觀察并采集照片。

1.2.5 分離菌的家兔致病性試驗(yàn) 將該分離菌接種到普通固體培養(yǎng)基上37 ℃培養(yǎng)24 h后,通過平板法進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù),菌液調(diào)整到109CFU·mL-1。將6只60日齡的家兔隨機(jī)分為2組,每組3只,試驗(yàn)組家兔腹腔注射2 mL菌液,對(duì)照組注射等量的PBS。接種后觀察并對(duì)病死兔進(jìn)行剖檢。

1.2.6 藥敏試驗(yàn) 參考美國(guó)臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(CLSI)抗生素藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),利用K-B(瓊脂擴(kuò)散法)測(cè)定細(xì)菌的耐藥性?？股丶埰?氨芐西林、慶大霉素、新霉素、卡那霉素、丁胺卡那、多黏菌素B、桿菌肽、磺胺異惡唑、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、四環(huán)素、多西環(huán)素、頭孢哌酮、頭孢曲松、氟苯尼考、美羅培南。

2 結(jié) 果

2.1 臨床剖檢

臨床剖檢發(fā)現(xiàn)病死兔多數(shù)器官腫大、出血,但不同器官組織的病理?yè)p傷程度不同。剖檢結(jié)果顯示:病死兔肺淤血、嚴(yán)重出血,并出現(xiàn)化膿灶(圖1A);肝腫大且有灰黃色壞死小點(diǎn)(圖1B);胸腺腫大、出血(圖1C);脾腫大、呈暗紅色(圖1D);腎呈土黃色(圖1E);盲腸壁出血(圖1F)。剖檢病死兔各器官病變癥狀與兔肺炎克雷伯菌病器官病變相似度較高,且各組織器官均出現(xiàn)明顯剖檢病變,初步表明該致病菌對(duì)家兔有很強(qiáng)的致病性。

A. 肺;B.肝;C.胸腺;D.脾;E.腎;F.腸;A．Lung; B. Liver; C. Thymus; D. Spleen; E. Kidney; F. Intestines;圖1 病死兔剖檢Fig.1 Dissection of sick and dead rabbits

2.2 細(xì)菌分離與培養(yǎng)結(jié)果

在6只病死兔的內(nèi)臟組織分離得到致病菌后,將分離菌在37 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h,在普通瓊脂平板上均長(zhǎng)出乳白色、黏稠、濕潤(rùn)的菌落,在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上均長(zhǎng)出粉紅色、濕潤(rùn)、圓形的菌落。將菌落進(jìn)行革蘭染色鏡檢均為卵圓形的革蘭陰性桿菌。如圖2所示。

A.分離菌在普通瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài);B.分離菌在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài);C.分離菌革蘭染色(1 000×)A. Colony morphology of the isolated bacteria on ordinary agar medium; B. Colony morphology of the isolated bacteria on McKangkai agar culture medium; C. Gram staining of the isolated bacteria (1 000×)圖2 分離菌的形態(tài)和培養(yǎng)特性觀察Fig.2 Observation on the morphology and culture characteristics of the isolated bacteria

2.3 分離菌分子生物學(xué)鑒定

以分離菌為模板,進(jìn)行PCR反應(yīng)后,發(fā)現(xiàn)病兔分離純化得到的細(xì)菌均在1 494 bp處出現(xiàn)特異性條帶(圖3)。與預(yù)期結(jié)果的大小一致。將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,序列經(jīng)NCBI(Blast)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)分析,與肺炎克雷伯菌序列相似度較高。采用MEGA 7.0軟件構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(圖4),結(jié)果顯示從病兔各器官中分離得到的病原菌與登錄號(hào)為ON925022.1的肺炎克雷伯菌同源性為99.79%,表明病兔感染的是肺炎克雷伯菌。

M. DL2000 Marker;1～6. 6只病兔肺炎克雷伯菌16S rRNA PCR擴(kuò)增產(chǎn)物M. DL2000 Marker; 1-6. PCR products of 16S rRNA from 6 rabbits infected Klebsiella pneumoniae 圖3 肺炎克雷伯菌PCR擴(kuò)增電泳圖Fig.3 Electrophoretic diagram of PCR amplification of Klebsiella pneumoniae

圖4 肺炎克雷伯菌16S rRNA基因系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Phylogenetic tree of Klebsiella pneumoniae 16S rRNA gene

2.4 毒力基因PCR擴(kuò)增

通過PCR對(duì)分離株8種毒力基因進(jìn)行檢測(cè),其中allS基因、kfu基因和uge基因擴(kuò)增結(jié)果為陽性,擴(kuò)增條帶分別為508、797、535 bp,與預(yù)期值相符(圖5)。

M. DL2000 Marker;1～3. allS、kfu、uge基因擴(kuò)增產(chǎn)物M. DL2000 Marker; 1-3. Amplification products of allS、kfu、uge gene圖5 肺炎克雷伯菌毒力基因電泳圖Fig.5 Electrophoresis of virulence genes of Klebsiella pneumoniae

2.5 組織病理學(xué)變化觀察結(jié)果

制作病兔組織器官的石蠟病理切片,進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。結(jié)果顯示,病兔肺泡壁增厚且有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡腔內(nèi)有少量紅細(xì)胞(圖 6A、a);病兔肝細(xì)胞腫大,肝索排列紊亂,肝細(xì)胞胞漿內(nèi)存在部分空泡,中央靜脈內(nèi)淤血(圖 6B、b);病兔胸腺組織的皮質(zhì)區(qū)擴(kuò)大,大部分淋巴細(xì)胞濃染,髓質(zhì)縮小(圖 6C、c);病兔脾組織出現(xiàn)淤血、出血,白髓結(jié)構(gòu)不清且伴隨大量紅細(xì)胞散在分布,淋巴細(xì)胞壞死崩解(圖 6D、d);病兔腎小管管腔縮小,且不規(guī)則,腎球囊周圍散在紅細(xì)胞,腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性,細(xì)胞之間的界限不清,有些腎小管上皮細(xì)胞脫落至管腔(圖 6E、e);病兔空腸管腔內(nèi)出現(xiàn)少量紅細(xì)胞,腸絨毛黏膜上皮脫落,固有層內(nèi)有數(shù)量不等的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖 6F、f)。

A～F和a～f均為病兔組織病理學(xué)觀察圖,且a～f對(duì)應(yīng)為A～F中長(zhǎng)方形的放大版;A、a. 肺;B、b. 肝;C、c. 胸腺;D、d. 脾;E、e. 腎;F、f. 空腸A-F and a-f are histopathological observations of diseased rabbits , and a-f corresponds to an enlarged version of the rectangle in A-F; A, a. Lungs; B, b. Liver; C, c. Thymus; D, d. Spleen; E, e. Kidney; F, f. Jejunum圖6 肺炎克雷伯菌感染病兔各組織病理學(xué)觀察Fig.6 Histopathological observation of rabbits infected with Klebsiella pneumoniae

2.6 分離菌的家兔致病性試驗(yàn)

用該分離菌攻毒后,試驗(yàn)組家兔均精神沉郁、被毛臟亂、食欲下降,并且伴有腹瀉發(fā)生,發(fā)病率100%。而對(duì)照組家兔無異常。剖檢后發(fā)現(xiàn)病死兔肺有散在出血點(diǎn);盲腸壁化膿;盲腸內(nèi)有黃褐色稀樣內(nèi)容物。通過對(duì)病死兔進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定發(fā)現(xiàn)與原分離菌株一致,且通過16S rRNA的PCR鑒定其序列與原分離株相同(圖7)。

M. DL2000 Marker;1. 致病性試驗(yàn)分離菌 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物M. DL2000 Marker; 1. PCR products of strains isolated by pathogenicity test圖7 致病性試驗(yàn)分離菌PCR擴(kuò)增電泳圖Fig.7 Electrophoretic diagram of PCR amplification of strains isolated by pathogenicity test

2.7 分離菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

將分離菌接種到含抗生素的培養(yǎng)基上,37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后測(cè)量抑菌圈直徑。肺炎克雷伯菌對(duì)不同藥物的敏感性見表2。測(cè)量結(jié)果顯示,肺炎克雷伯菌對(duì)丁胺卡那、多黏菌素B、頭孢哌酮、頭孢曲松敏感,對(duì)氨芐西林、慶大霉素、多西環(huán)素、美羅培南不敏感,對(duì)新霉素、卡那霉素、桿菌肽、磺胺異惡唑、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、四環(huán)素、氟苯尼考8種藥物有較強(qiáng)耐藥性。

3 討 論

長(zhǎng)期以來,肺炎克雷伯菌作為一種條件性致病菌一直被認(rèn)為對(duì)畜禽危害不大。因此,肺炎克雷伯菌并未受到廣泛關(guān)注。然而,近年來,隨著我國(guó)養(yǎng)兔業(yè)不斷向規(guī)模化發(fā)展,大規(guī)模和高密度的飼養(yǎng)使家兔更易患呼吸道疾病,加之肺炎克雷伯菌耐藥性逐漸增強(qiáng)[13]及動(dòng)物機(jī)體抵抗力低下等因素,導(dǎo)致感染肺炎克雷伯菌的病例時(shí)常發(fā)生,嚴(yán)重阻礙兔養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。本試驗(yàn)從河南某規(guī)模化兔場(chǎng)病兔肺、肝、胸腺、脾、腎、腸組織器官分離到疑似病原菌,通過臨床剖檢,結(jié)合臨床癥狀及病理變化特點(diǎn),初步判定為肺炎克雷伯菌,再經(jīng)分子生物學(xué)鑒定與測(cè)序,確定引起該場(chǎng)兔死亡的病原菌為肺炎克雷伯菌。

研究表明,當(dāng)肺炎克雷伯菌感染兔后,常引發(fā)兔呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)疾病,臨床常表現(xiàn)為呼吸困難、打噴嚏和腹瀉等癥狀。此外,還會(huì)造成全身各器官系統(tǒng)的機(jī)能異常和結(jié)構(gòu)損傷[4,14-15]。郝中香等[16]發(fā)現(xiàn),扭角羚感染肺炎克雷伯菌后,出現(xiàn)肺嚴(yán)重實(shí)變且充血,肝淤血腫大且脾腫大。許皓等[17]研究發(fā)現(xiàn),感染肺炎克雷伯菌的貂出現(xiàn)呼吸困難等癥狀和突發(fā)性死亡。在本研究中,病兔臨床癥狀主要表現(xiàn)為打噴嚏、流水樣鼻涕、咳嗽和呼吸困難。病理變化主要表現(xiàn)為氣管出血;肺充血出血,有部分化膿;肝淤血腫大,有灰白色壞死灶;脾淤血腫大,邊緣鈍圓;腎呈土黃色;部分出現(xiàn)盲腸漿膜出血。剖檢結(jié)果與王孝友等[14]的報(bào)道一致,病兔全身各器官均出現(xiàn)不同程度的損傷。

家兔感染呼吸道病原菌的多樣性在一定程度上給病原的確定造成了困難,而缺乏組織病理學(xué)方面的研究也可能是其重要原因之一。目前關(guān)于家兔肺炎克雷伯菌感染的組織病理特征鮮見報(bào)道。郭定宗等[18]發(fā)現(xiàn),金絲猴感染肺炎克雷伯菌后,心肌纖維間隙明顯增寬,肌纖維粗細(xì)腫脹、斷裂,肝中央靜脈和肝竇嚴(yán)重?cái)U(kuò)張并充血,脾被膜和小梁水腫,肺泡壁和腎小球毛細(xì)血管嚴(yán)重充血擴(kuò)張,腸絨毛脫落。張?jiān)娪錥19]研究發(fā)現(xiàn),感染肺炎克雷伯菌的小鼠肺泡壁毛細(xì)血管充血擴(kuò)張,肝靜脈周圍、肝血竇內(nèi)有大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),脾內(nèi)淋巴小結(jié)增生,同時(shí)伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。這與本研究中的組織病理變化存在一定程度的相似性。本研究發(fā)現(xiàn)病兔肺、肝、胸腺、脾、腎和腸組織細(xì)胞間隙均出現(xiàn)少量紅細(xì)胞,肺泡壁大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝索排列紊亂,胸腺皮質(zhì)區(qū)擴(kuò)大、髓質(zhì)變小,脾白髓結(jié)構(gòu)不清,腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性和腸絨毛黏膜上皮脫落。

肺炎克雷伯菌毒力強(qiáng)弱與其毒力因子數(shù)量成正相關(guān)。毒力因子在宿主體內(nèi)通過一系列反應(yīng)或特點(diǎn),逃避免疫細(xì)胞識(shí)別,從而在宿主體內(nèi)大量繁殖[20]。例如,菌毛在細(xì)菌黏附和逃避宿主免疫起著非常重要的作用[21];鐵載體主要通過螯合宿主鐵,促進(jìn)細(xì)菌在宿主體內(nèi)大量繁殖,從而造成宿主嚴(yán)重感染[22];脂多糖通過補(bǔ)體介導(dǎo)所形成的連鎖反應(yīng),在菌體表面聚集成復(fù)合物,從而介導(dǎo)細(xì)菌逃避或抵抗宿主天然免疫的殺傷[7];莢膜在抑制宿主免疫反應(yīng)中發(fā)揮非常重要的作用[23-24]。本研究通過對(duì)肺炎克雷伯菌allS、fimH、kfu、magA、ureA、uge、rmpA和wabG這8種毒力基因進(jìn)行PCR檢測(cè),結(jié)果顯示,allS基因、kfu基因和uge基因擴(kuò)增結(jié)果為陽性,而其他5種毒力基因均未檢測(cè)出來。uge基因與莢膜多糖的合成有關(guān)[7]。Regué等[10]用uge突變株感染小鼠發(fā)現(xiàn),uge突變株不能引起尿路感染,然而將uge野生型基因再次引入突變株后,野生菌表型完全恢復(fù),且小鼠患尿路感染、肺炎和敗血病。此外,黏附素是細(xì)菌的傳播與定植的關(guān)鍵因素,而kfu與黏附素的形成有關(guān)。同時(shí),kfu還參與編碼磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)中的一些成分,幫助肺炎克雷伯菌攝取鐵離子,從而增強(qiáng)其毒力[25]。另外,有研究表明,allS與尿囊素代謝有關(guān)。尿囊素代謝產(chǎn)生的氨和二氧化碳可以為肺炎克雷伯菌提供氮源和碳源,從而促進(jìn)肺炎克雷伯菌的生長(zhǎng)和繁殖[26]。同時(shí),Yu等[27]通過對(duì)50個(gè)中國(guó)臺(tái)灣肝膿腫病人的肺炎克雷伯菌菌株調(diào)查發(fā)現(xiàn),該50株菌均含有尿囊素代謝相關(guān)基因,表明尿囊素代謝相關(guān)基因與肝膿腫具有相關(guān)性。該病理變化與本研究家兔感染后出現(xiàn)肝腫大的結(jié)果一致。根據(jù)毒力基因檢測(cè)結(jié)果,認(rèn)為本研究取樣的養(yǎng)殖場(chǎng)產(chǎn)生的糞便存在潛在危害,應(yīng)加強(qiáng)對(duì)糞便的處理,避免產(chǎn)生威脅公共安全的問題。

由于生產(chǎn)實(shí)踐中常通過抗生素來治療細(xì)菌性感染,從而導(dǎo)致多重耐藥性肺炎克雷伯菌的檢出率不斷升高。張志翔等[28]發(fā)現(xiàn)兔源肺炎克雷伯菌對(duì)氨基糖苷類、四環(huán)素類及頭孢類等抗菌藥物高度敏感,對(duì)米諾環(huán)素、恩諾沙星、復(fù)方新諾明和桿菌肽3種藥物有較強(qiáng)的耐藥性。張自強(qiáng)等[4]發(fā)現(xiàn),兔源肺炎克雷伯菌對(duì)慶大霉素、頭孢曲松、頭孢唑林和頭孢氨芐4種藥物敏感,對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類和頭孢類等抗菌藥物有較強(qiáng)耐藥性。本研究藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,肺炎克雷伯菌對(duì)丁胺卡那、多黏菌素B、頭孢哌酮、頭孢曲松敏感,對(duì)氨芐西林、慶大霉素、多西環(huán)素、美羅培南出現(xiàn)不同程度耐藥,對(duì)新霉素、卡那霉素、桿菌肽、磺胺異惡唑、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、四環(huán)素、氟苯尼考8種藥物有較強(qiáng)耐藥性,為臨床用藥提供理論依據(jù)。因此,當(dāng)兔場(chǎng)發(fā)病時(shí),及時(shí)對(duì)病原菌及其耐藥情況進(jìn)行檢測(cè)分析,并配合環(huán)境消毒等措施,可以為兔場(chǎng)的疾病防治提供合理有效的方案。

本研究通過細(xì)菌的分離培養(yǎng)等試驗(yàn)方法,對(duì)病原菌進(jìn)行鑒定、檢測(cè)并分析了該致病菌引發(fā)的組織病理學(xué)變化和毒力基因分析。結(jié)果顯示,該病原菌毒力基因攜帶情況復(fù)雜,可能對(duì)公共衛(wèi)生安全具有潛在危害性。此外,該菌還對(duì)8種藥物具有較強(qiáng)耐藥性,存在多重耐藥現(xiàn)象。因此,加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)糞便的處理和在養(yǎng)殖過程中規(guī)范使用抗菌藥物對(duì)家兔的健康養(yǎng)殖具有重要意義。

4 結(jié) 論

從病兔體內(nèi)分離出一種革蘭陰性菌,通過細(xì)菌的分離鑒定、序列分析和動(dòng)物回歸試驗(yàn)等方法確定分離株為肺炎克雷伯菌。同時(shí),本研究發(fā)現(xiàn)該菌株具有allS、kfu和uge基因,且對(duì)丁胺卡那、多黏菌素B、頭孢哌酮及頭孢曲松4種藥物敏感,對(duì)其他藥物均有不同程度的耐藥性。此外,還發(fā)現(xiàn)感染該菌株的病兔多器官均出現(xiàn)不同程度病變。