廖薇薇, 傅祥煒, 溫必盛, 楊維忠△

海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 1消化內(nèi)鏡科 2普通外科,?？?570311

結(jié)腸癌是起源于結(jié)腸黏膜的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,好發(fā)于乙狀結(jié)腸,在我國(guó)發(fā)病率較高,患者的5年生存率約65%。結(jié)腸癌細(xì)胞易發(fā)生轉(zhuǎn)移,其中淋巴轉(zhuǎn)移常見(jiàn),血行轉(zhuǎn)移以經(jīng)門(mén)靜脈至肝最多見(jiàn),也可直接蔓延侵犯鄰近的組織和器官,造成患者生存率進(jìn)一步降低。因此抑制結(jié)腸癌生長(zhǎng)并抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移,是提高患者生存率的關(guān)鍵[1-2]。癌癥易感候選基因11(cancer susceptibility candidate 11,CASC11)作為一種新近發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA),在肝癌、胃癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌等多種癌癥中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。以往研究表明,下調(diào)CASC11表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞的糖代謝、增殖和遷移[3-4];CASC11的高表達(dá)與宮頸癌患者的遠(yuǎn)期生存率呈負(fù)相關(guān),對(duì)宮頸癌的進(jìn)展起促進(jìn)作用,沉默CASC11可以抑制宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲,并減慢其腫瘤生長(zhǎng)速度[5]。而microRNA-146a-3p(miR-146a-3p)是能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的一種抑癌因子,有研究顯示,過(guò)表達(dá)miR-146a-3p可抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng),并誘導(dǎo)癌細(xì)胞衰老[6]。另有研究顯示,非小細(xì)胞肺癌癌變組織中miR-146a的表達(dá)顯著降低,部分變異基因型如SNP rs2910164可以促進(jìn)miR-146a的表達(dá),進(jìn)而上調(diào)miR-146a-3p,降低非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[7]。持續(xù)或頻繁的結(jié)腸炎癥是導(dǎo)致結(jié)直腸癌的重要因素,通過(guò)對(duì)壞死性小腸結(jié)腸炎及克羅恩病的研究發(fā)現(xiàn),給予miR-146a模擬物能改善結(jié)直腸的致瘤性炎癥[8-9]。通過(guò)以上我們推測(cè),miR-146a-3p可作為結(jié)腸癌潛在的治療靶點(diǎn)。通過(guò)對(duì)Lncbase V.2數(shù)據(jù)庫(kù)[10]檢索可知,lncRNA CASC11與miR-146a-3p之間存在潛在的結(jié)合位點(diǎn),因此推想lncRNA CASC11可能通過(guò)對(duì)miR-146a-3p的靶向下調(diào)來(lái)影響結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖及侵襲。本研究通過(guò)對(duì)體外培養(yǎng)的SW620細(xì)胞進(jìn)行l(wèi)ncRNA CASC11的表達(dá)調(diào)節(jié),對(duì)此猜想進(jìn)行驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

實(shí)驗(yàn)所用人結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞、人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞及HCT116、SW620、SW480細(xì)胞系,以及細(xì)胞培養(yǎng)所用胎牛血清(FBS)、胰酶、雙抗、培養(yǎng)液等購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司;lncRNA CASC11 siRNA、lncRNA CASC11 inhibitor陰性對(duì)照、miR-146a-3p inhibitor、lncRNA CASC11空載質(zhì)粒、lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)質(zhì)粒、miR-146a-3p 3′-UTR無(wú)義序列、野生型miR-146a-3p 3′-UTR報(bào)告質(zhì)粒、突變型miR-146a-3p 3′-UTR報(bào)告質(zhì)粒、相關(guān)引物、反轉(zhuǎn)錄熒光定量試劑盒、Trizol試劑均購(gòu)自上海生工生物工程股份有限公司;EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒、基底膠、LipofectamineTM2000、MTT試劑盒、結(jié)晶紫染色液、兔源抗人Bax抗體、小鼠源抗人Bcl-2抗體、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司;SDS-PAGE凝膠、5%抗體封閉液、小鼠抗人Vimentin及E-cadherin抗體、Alexa Fluor488標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗、Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗兔二抗、辣根酶標(biāo)記多克隆二抗均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

儀器:M200 PRO型全波長(zhǎng)自動(dòng)酶標(biāo)儀(Tecan公司,瑞士);FSX100型倒置熒光雙目顯微鏡、AE2000型倒置光學(xué)顯微鏡(奧林巴斯公司,日本);CFX96型熒光定量PCR儀(BIO-RAD公司,美國(guó));ABI 7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)(Applied Biosystems公司,美國(guó))等。

1.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)

細(xì)胞培養(yǎng):37℃水浴解凍細(xì)胞后離心,以含有10% FBS和1%雙抗的完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,然后分別接種在培養(yǎng)瓶中于37.5℃、5% CO2無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞長(zhǎng)至95%匯合度時(shí)進(jìn)行傳代。

使用Trizol試劑分別提取人結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞、人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞及人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116、SW620、SW480中的總RNA,通過(guò)一步法反轉(zhuǎn)錄熒光定量試劑盒進(jìn)行定量PCR,選取GAPDH作為lncRNA CASC11的內(nèi)參,U6作為miR-146a-3p的內(nèi)參,配制20 μL反應(yīng)體系,反應(yīng)程序設(shè)定:50℃ 5 min,95℃ 3 min,95℃ 10 s,60℃ 30 s,共40個(gè)循環(huán)。通過(guò)2-ΔΔCt法計(jì)算lncRNA CASC11、miR-146a-3p的相對(duì)表達(dá)量,引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.3 蛋白免疫印跡(Western blot)實(shí)驗(yàn)

將細(xì)胞置于冰上研磨,使用RIPA提取細(xì)胞總蛋白。蛋白上樣量為20 μg,使用10%的SDS-PAGE凝膠電泳并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。5%BSA封閉,一抗(1∶1000)4℃搖床孵育過(guò)夜。第二天室溫孵育二抗(1∶5000)1 h。ECL顯色液顯影。

1.4 SW620細(xì)胞轉(zhuǎn)染

將傳代后的SW620細(xì)胞接種在無(wú)菌12孔板中,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(未處理組)、lncRNA CASC11 siRNA組、lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組及l(fā)ncRNA CASC11 siRNA+miR-146a-3p inhibitor共轉(zhuǎn)染組(miR-146a-3p抑制組),培養(yǎng)12 h后更換為Opti-MEMⅠ培養(yǎng)液,使用LipofectamineTM2000對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,lncRNA CASC11 siRNA組與lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組分別轉(zhuǎn)染lncRNA CASC11 siRNA及其陰性對(duì)照,miR-146a-3p抑制組轉(zhuǎn)染lncRNA CASC11 siRNA與miR-146a-3p inhibitor,6 h后更換為完全培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞備用。

1.5 檢測(cè)SW620細(xì)胞增殖

MTT法:將SW620細(xì)胞接種在無(wú)菌96孔板中分組處理,每組設(shè)6個(gè)重復(fù)孔。轉(zhuǎn)染24 h后更換為50 μL含MTT的培養(yǎng)液,并繼續(xù)培養(yǎng)4.5 h后吸出,保留底部結(jié)晶,加入150 μL二甲基亞砜充分溶解結(jié)晶,于酶標(biāo)儀490 nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔吸光度值,計(jì)算細(xì)胞活力(%)=(轉(zhuǎn)染組吸光度值-空白對(duì)照組吸光度值)/(對(duì)照組吸光度值-空白對(duì)照組吸光度值)×100%。

EdU法:將分組處理的SW620細(xì)胞接種在無(wú)菌的12孔板,加入50 μmol/L EdU溶液繼續(xù)培養(yǎng)2 h后吸出,PBS洗滌細(xì)胞,加入4%多聚甲醛溶液固定后,參照EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒說(shuō)明于熒光顯微鏡下觀察并拍照,所得圖像運(yùn)用Image J軟件進(jìn)行計(jì)數(shù),得出EdU陽(yáng)性率=EdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.6 檢測(cè)SW620細(xì)胞侵襲能力

通過(guò)Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲。將1.4中收集的各組SW620細(xì)胞調(diào)整至相同密度后分組接種在含F(xiàn)BS的完全培養(yǎng)液的上室中培養(yǎng),在下室中加入不含血清的Leibovitz’s L-15培養(yǎng)液,培養(yǎng)24 h后棄去下室培養(yǎng)液,PBS洗滌后,用4%多聚甲醛溶液固定,結(jié)晶紫染色液染色,于光學(xué)顯微鏡下觀察、拍照、計(jì)數(shù)著色細(xì)胞。

1.7 檢測(cè)SW620細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)

將傳代后的SW620細(xì)胞接種在預(yù)先置入爬片的無(wú)菌12孔板中,培養(yǎng)、分組及轉(zhuǎn)染方法同1.4。24 h后取出爬片,經(jīng)漂洗、固定、通透、封閉后,進(jìn)行一抗孵育,兔源抗人Bax抗體(1∶200)和小鼠源抗人Bcl-2抗體(1∶100)4℃孵育過(guò)夜;第2天PBS漂洗爬片后以Alexa Fluor 488標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗及Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗兔二抗室溫避光孵育10 min,染核后封片。每張爬片隨機(jī)采集3個(gè)視野,Image J軟件對(duì)每個(gè)視野Bax、Bcl-2蛋白的平均熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量后取均值,并計(jì)算Bax/Bcl-2比值(Bax蛋白的平均熒光強(qiáng)度/Bcl-2蛋白的平均熒光強(qiáng)度)。

1.8 檢測(cè)SW620細(xì)胞lncRNA CASC11、miR-146a-3p及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志Vimentin、E-cadherin mRNA及蛋白表達(dá)量

提取1.4中各組細(xì)胞總RNA,通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中l(wèi)ncRNA CASC11、miR-146a-3p表達(dá)量。通過(guò)Western blot檢測(cè)Vimentin、E-cadherin的蛋白表達(dá)量。選擇GAPDH作為Vimentin、E-cadherin的內(nèi)參基因。各基因引物序列見(jiàn)表1。

1.9 檢測(cè)SW620細(xì)胞中l(wèi)ncRNA CASC11對(duì)miR-146a-3p的靶向調(diào)控

將傳代后的SW620細(xì)胞接種于無(wú)菌12孔板,37.5℃、5%CO2培養(yǎng)12 h后隨機(jī)分為miR-146a-3p無(wú)義序列+lncRNA CASC11空載組、miR-146a-3p無(wú)義序列+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組、野生型miR-146a-3p+lncRNA CASC11空載組、野生型miR-146a-3p+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組、突變型miR-146a-3p+lncRNA CASC11空載組、突變型miR-146a-3p+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組,按照1.4中方法分別對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)轉(zhuǎn)染處理,24 h后收集各組細(xì)胞,參照雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒說(shuō)明檢測(cè)各組細(xì)胞雙熒光素酶的相對(duì)活性。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 lncRNA CASC11和miR-146a-3p在結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)

與人結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞相比,人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞和人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116、SW480、SW620中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)量明顯升高(均P<0.05),而miR-146a-3p表達(dá)量明顯降低(均P<0.05)(圖1)。

1:人結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞;2:人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞;3:HCT116;4:SW480;5:SW620;A:lncRNA CASC11表達(dá)水平;B:miR-146a-3p表達(dá)水平;*P<0.05

2.2 lncRNA CASC11調(diào)控SW620細(xì)胞增殖

與空白對(duì)照組相比,lncRNA CASC11 siRNA組細(xì)胞活力、EdU陽(yáng)性率均降低(均P<0.05),lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組細(xì)胞活力、Edu陽(yáng)性率均無(wú)顯著變化(均P>0.05);與lncRNA CASC11 siRNA組相比,共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞活力、EdU陽(yáng)性率均升高(均P<0.05)(圖2)。

1:空白對(duì)照組;2:lncRNA CASC11 siRNA組;3:lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組;4共轉(zhuǎn)染組;A:EdU染色代表性圖;B:MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力;C:EdU陽(yáng)性細(xì)胞比例;*P<0.05

2.3 lncRNA CASC11調(diào)控SW620細(xì)胞侵襲能力

與空白對(duì)照組相比,lncRNA CASC11 siRNA組侵襲細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.05),lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組侵襲細(xì)胞數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05);與lncRNA CASC11 siRNA組相比,共轉(zhuǎn)染組侵襲細(xì)胞數(shù)升高(P<0.05)(圖3)。

1:空白對(duì)照組;2:lncRNA CASC11 siRNA組;3:lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組;4共轉(zhuǎn)染組;A:細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果代表圖;B:侵襲細(xì)胞數(shù)目;*P<0.05

2.4 lncRNA CASC11調(diào)控SW620細(xì)胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表達(dá)

與空白對(duì)照組相比,lncRNA CASC11 siRNA組細(xì)胞Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05),lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組Bax/Bcl-2比值無(wú)顯著差異(P>0.05);與lncRNA CASC11 siRNA組相比,共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞Bax/Bcl-2比值有所降低(P<0.05)(圖4)。

1:空白對(duì)照組;2:lncRNA CASC11 siRNA組;3:lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組;4共轉(zhuǎn)染組;A:Bax/Bcl-2免疫熒光染色代表圖;B:Bax/Bcl-2熒光強(qiáng)度比值;*P<0.05

2.5 lncRNA CASC11調(diào)控SW620細(xì)胞中miR-146a-3p和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志基因的表達(dá)

與空白對(duì)照組相比,lncRNA CASC11 siRNA組細(xì)胞Vimentin蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05),miR-146a-3p及E-cadherin表達(dá)均升高(均P<0.05),而lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組miR-146a-3p與Vimentin、E-cadherin表達(dá)無(wú)顯著差異(均P>0.05);與lncRNA CASC11 siRNA組相比,共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞Vimentin表達(dá)升高(P<0.05),miR-146a-3p及E-cadherin表達(dá)均降低(P<0.05)見(jiàn)圖5。

1:空白對(duì)照組;2:lncRNA CASC11 siRNA組;3:lncRNA CASC11 siRNA陰性對(duì)照組;4:共轉(zhuǎn)染組;A:miR-146a-3p mRNA表達(dá)水平;B:E-cadherin蛋白表達(dá)水平;C:Vimentin蛋白表達(dá)水平;*P<0.05

2.6 lncRNA CASC11靶向調(diào)控SW620細(xì)胞中miR-146a-3p的表達(dá)

通過(guò)Lncbase V.2預(yù)測(cè)到lncRNA CASC11與miR-146a-3p之間可能存在結(jié)合位點(diǎn)(圖6A)。與野生型miR-146a-3p+lncRNA CASC11空載組相比,野生型miR-146a-3p+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組相對(duì)熒光素酶活性顯著降低(P<0.05)(圖6B);而miR-146a-3p無(wú)義序列+lncRNA CASC11空載組、miR-146a-3p無(wú)義序列+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組、突變型miR-146a-3p+lncRNA CASC11空載組、突變型miR-146a-3p+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組之間相對(duì)熒光素酶活性無(wú)顯著差異(均P>0.05)(圖6B)。

A:miR-146a-3p與CASC11結(jié)合位點(diǎn);B:相對(duì)熒光素酶報(bào)告基因活性;a:miR-146a-3p無(wú)義序列+lncRNA CASC11空載組;b:miR-146a-3p無(wú)義序列+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組;c:野生型miR-146a-3p+lncRNA CASC11空載組;d:野生型miR-146a-3p+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組;e:突變型miR-146a-3p+lncRNA CASC11空載組;f:突變型miR-146a-3p+lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組;*P<0.05

2.7 lncRNA CASC11調(diào)控SW620細(xì)胞中miR-146a-3p的下游靶基因c-Met的表達(dá)

Bleau等[11]研究發(fā)現(xiàn)在結(jié)腸癌細(xì)胞中,c-Met是miR-146a的靶蛋白。因此,我們采用qRT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證lncRNA CASC11對(duì)miR-146a-3p下游靶基因c-Met的調(diào)控作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比較,過(guò)表達(dá)lncRNA CASC11可以顯著上調(diào)c-Met的mRNA和蛋白表達(dá),反之,敲低lncRNA CASC11可以顯著下調(diào)c-Met的mRNA和蛋白表達(dá)(圖7)。

1:siRNA陰性對(duì)照組;2:lncRNA CASC11 siRNA組;3:對(duì)照組;4 lncRNA CASC11過(guò)表達(dá)組;A:c-Met的mRNA表達(dá)水平;B:c-Met的蛋白表達(dá)水平;*P<0.05

3 討論

近年來(lái),我國(guó)結(jié)腸癌患病人數(shù)不斷增加,并且呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)。手術(shù)、放療及化療是結(jié)腸癌診療指南中的常規(guī)治療手段,但結(jié)腸癌患者死亡率仍居高不下。因此,探究結(jié)腸癌的潛在致病機(jī)制和癌細(xì)胞的生物學(xué)行為及其影響因素,對(duì)于探索新型結(jié)腸癌治療策略的意義重大[12-13]。CASC11作為一種在多種癌癥中均有過(guò)報(bào)道存在過(guò)表達(dá)的lncRNA,研究報(bào)道其對(duì)大多數(shù)類(lèi)型腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移起到促進(jìn)作用,敲除CASC11可抑制包括前列腺癌在內(nèi)的多種癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移[14-15]。另有研究證實(shí),CASC11在結(jié)直腸癌中異常高表達(dá)[16],因此CASC11有可能成為結(jié)直腸癌的潛在治療靶點(diǎn)。我們的研究結(jié)果顯示,與人正常結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞相比,人結(jié)腸癌組織源細(xì)胞和人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116、SW480、SW620中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)明顯升高。lncRNA CASC11沉默后的SW620細(xì)胞,細(xì)胞活力和EdU染色陽(yáng)性率明顯降低;而對(duì)Bax/Bcl-2比值及E-cadherin、Vimentin的表達(dá)及細(xì)胞侵襲能力的調(diào)控作用,表明lncRNA CASC11還能夠介導(dǎo)結(jié)腸癌的凋亡及轉(zhuǎn)移過(guò)程。Zhang等[17]研究發(fā)現(xiàn)lncRNA CASC11通過(guò)與miR-646及miR-381-3p結(jié)合并促進(jìn)結(jié)直腸癌的惡性進(jìn)展,并在機(jī)制上明確了RAB11 FIP2是miR-646和miR-381-3p的共同靶蛋白。本研究豐富了lncRNA CASC11在結(jié)直腸癌中作用的機(jī)制,我們發(fā)現(xiàn)lncRNA CASC11可通過(guò)抑制miR-381-3p的表達(dá)進(jìn)而抑制凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),并最終誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因的表達(dá),促進(jìn)c-Met的mRNA和蛋白表達(dá),從而影響結(jié)直腸癌的增殖與侵襲。

除此之外,我們知道炎癥是結(jié)腸癌的重要致病因素[18]。以往有研究報(bào)道,miR-146a-3p在結(jié)腸炎患兒腸道中的表達(dá)明顯下調(diào),證實(shí)其低表達(dá)可能與結(jié)腸炎的發(fā)生有關(guān)[8];除此之外,下調(diào)miR-146a-3p還能夠顯著提高前列腺癌細(xì)胞的存活率及癌細(xì)胞對(duì)雄激素剝奪療法的抵抗性[19];促進(jìn)miR-146a表達(dá)可反應(yīng)性升高miR-146a-3p的表達(dá)水平,可以降低肺癌、鼻咽癌的基因易感性[7,20]。而miR-146a作為一種已知的腫瘤抑制因子,不僅具有抗炎作用,還能夠促進(jìn)白血病病變細(xì)胞凋亡,減緩白血病進(jìn)展[21],由此推測(cè)miR-146a-3p也可以作為結(jié)腸癌的潛在治療靶點(diǎn)。我們通過(guò)Lncbase V.2數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)到lncRNA CASC11與miR-146a-3p之間有潛在的結(jié)合位點(diǎn),因而推測(cè)通過(guò)敲減lncRNA CASC11表達(dá)來(lái)抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及侵襲的作用可能是通過(guò)下調(diào)下游miR-146a-3p實(shí)現(xiàn)的。本研究通過(guò)拯救實(shí)驗(yàn)對(duì)此猜想進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果證實(shí)相比lncRNA CASC11 siRNA組的SW620細(xì)胞,miR-146a-3p抑制組(共轉(zhuǎn)染組)的SW620細(xì)胞活力、EdU染色陽(yáng)性率、侵襲細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞Vimentin表達(dá)均升高,而B(niǎo)ax/Bcl-2比值、miR-146a-3p及E-cadherin表達(dá)均降低,證實(shí)miR-146a-3p inhibitor能夠減弱通過(guò)敲減CASC11對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生的增殖侵襲的抑制作用。且雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)證實(shí)SW620細(xì)胞中l(wèi)ncRNA CASC11可靶向降低miR-146a-3p的表達(dá),提示CASC11能夠通過(guò)靶向下調(diào)miR-146a-3p的表達(dá)參與結(jié)腸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程,而沉默CASC11后miR-146a-3p的表達(dá)增加,結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖及侵襲活力降低。

綜上所述,本研究證實(shí)了lncRNA CASC11在人結(jié)腸癌細(xì)胞中高表達(dá),lncRNA CASC11可通過(guò)靶向下調(diào)miR-146a-3p調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移,敲低CASC11可顯著降低結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖及侵襲,促進(jìn)其凋亡。本研究為尋求結(jié)腸癌新的臨床診療手段提供了思路。