史永燦

（山東省濟(jì)寧市金鄉(xiāng)縣人民醫(yī)院病理科，山東 濟(jì)寧 272200）

肺癌是全球范圍內(nèi)常見的癌癥之一，也是導(dǎo)致癌癥相關(guān)死亡的主要原因。臨床上，準(zhǔn)確的肺癌病理診斷和鑒別診斷對于制定有效的治療方案和預(yù)后評估至關(guān)重要。支氣管沖洗液細(xì)胞學(xué)檢查作為一種無創(chuàng)性的檢查方法，在肺癌的早期診斷、鑒別診斷和療效監(jiān)測等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。傳統(tǒng)的肺癌組織學(xué)診斷通常需要通過活檢獲得組織標(biāo)本，然后進(jìn)行石蠟包埋、切片染色等多個步驟，流程繁瑣且耗時[1]。相比之下，支氣管沖洗液細(xì)胞學(xué)檢查是一種近年來備受關(guān)注的研究熱點，尤其是在胸部疾病的早期診斷和鑒別診斷中具有重要的臨床應(yīng)用前景。該檢查方式是用生理鹽水沖洗患者的肺部，再行回收并對其中的細(xì)胞樣本進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢測，因其具有簡便無創(chuàng)、侵襲性小等特點，在臨床實踐中備受青睞。如果能夠有效結(jié)合支氣管沖洗液細(xì)胞學(xué)檢查與其他組織學(xué)和免疫組化技術(shù)，有望為肺癌等疾病的早期診斷和治療提供更加準(zhǔn)確和及時的幫助。免疫組化染色是通過特定抗體結(jié)合組織中的特定抗原，然后利用化學(xué)方法使其呈色，從而對組織中的抗原進(jìn)行定性定量檢測的技術(shù)[2]。免疫組化染色技術(shù)在癌癥的診斷和治療中被廣泛應(yīng)用，對于肺癌的鑒別診斷和分子亞型的判定起著重要作用。結(jié)合支氣管沖洗液細(xì)胞塊蘇木精- 伊紅（HE）切片和免疫組化染色技術(shù)，有望提高肺癌病理診斷的準(zhǔn)確性和可靠性[3]?；谶@一研究背景，本研究選取了支氣管沖洗液細(xì)胞塊HE 切片和免疫組化染色技術(shù)，結(jié)合兩者的特點，旨在探討其在肺癌病理診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用價值，為提高肺癌診斷的準(zhǔn)確性以及本病的早期干預(yù)提供新的思路，推動肺癌的早期診斷和治療取得新的突破，具體研究方法和結(jié)果報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

本研究應(yīng)用隨機抽樣法選取2021 年9 月至2023年9 月期間我院收治的支氣管沖洗液陽性患者118 例作為研究對象，其中包含分型明確與不明確的患者。在這些患者中，有男性患者73 例，女性患者45 例；其最小年齡為49 歲，最大年齡為73 歲，平均年齡為（60.32±9.08）歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器設(shè)備 本研究所用的儀器設(shè)備包括低速離心機（安必平醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)，型號SC-3612）和微量振蕩器等，所有儀器設(shè)備在應(yīng)用前均已完成檢查準(zhǔn)備工作，符合實驗標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 檢查方法 液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查方法：取支氣管沖洗液與檢查保存液，將兩種液體等量均勻混合在一起。取適量的混合液靜置30 min，然后置于振蕩器中進(jìn)行振動處理，振動時間為10 min。振動結(jié)束后將液體倒入離心管中，置于離心機中離心10 min，離心速度為每分鐘1832 r。離心結(jié)束后，去除上部分的液體，在剩余液體中加入適量的緩沖液，再次搖晃均勻，并重復(fù)離心操作。再次離心完成后振蕩細(xì)胞塊，并將其涂抹試劑后放置于制片板上，添加樣本后靜置10 min進(jìn)行巴氏染色并封片。制備液基細(xì)胞塊、HE 切片與免疫組化染色的具體操作步驟如下：（1）液基細(xì)胞塊制備：將振動處理后的混合液倒入離心管中，置于離心機中進(jìn)行離心處理，離心時間為10 min，離心速度為每分鐘1832 r。離心結(jié)束后，去除上部分的液體，在剩余液體中加入適量的緩沖液，再次搖晃均勻，重復(fù)離心操作。再次離心完成后，振蕩細(xì)胞塊，將其涂抹在制片板上。（2）HE 切片制備：將涂抹好細(xì)胞塊的制片板放入切片機中，切取適當(dāng)厚度的切片，然后將切片放入染色缸中，進(jìn)行HE 染色。染色結(jié)束后，用封片膠封片，晾干備用。（3）免疫組化染色：將染色后的切片放入抗原修復(fù)液中，進(jìn)行抗原修復(fù)。修復(fù)結(jié)束后，用磷酸緩沖鹽水（PBS）沖洗切片，然后將切片放入含有第一抗體的孵育盒中，4 ℃孵育過夜。次日，用PBS 沖洗切片，再將切片放入生物素化二抗的孵育盒中，室溫孵育1 ～2 h。用PBS 沖洗切片，加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，室溫孵育1 ～2 h。最后，用DAB 顯色劑進(jìn)行顯色，觀察切片的染色效果。若需要進(jìn)一步加深染色，可加入適量復(fù)染劑（如蘇木精）進(jìn)行復(fù)染。染色結(jié)束后，用封片膠封片，晾干備用。本研究中所用的抗體包括：Ki-67、TTF-1、CK7、Syn、CD56、p63、CK5/6、Naspin-A。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并比較液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查與支氣管沖洗液細(xì)胞塊HE 切片及免疫組化染色檢查的肺癌分型檢出率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析與處理，計數(shù)資料以% 表示，用χ2 檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對118 例支氣管沖洗液陽性患者進(jìn)行液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)肺鱗狀細(xì)胞癌患者43 例，肺腺癌患者7 例，小細(xì)胞肺癌患者19 例，肺癌分型檢出率為58.47% ；對118 例支氣管沖洗液陽性患者進(jìn)行支氣管沖洗液細(xì)胞塊HE 切片及免疫組化染色檢查，發(fā)現(xiàn)肺鱗狀細(xì)胞癌患者57 例，肺腺癌患者25 例，小細(xì)胞肺癌患者19 例，肺癌分型檢出率為85.59%。相較于液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查，支氣管沖洗液細(xì)胞塊HE 切片及免疫組化染色檢查的肺癌分型檢出率更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜0.05）。詳見表1。

表1 兩種檢查方法的肺癌分型檢出率

3 討論

肺癌是臨床常見的癌癥之一，是肺部細(xì)胞異常增殖所形成的惡性腫瘤。肺癌通常分為兩種類型：小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌。其中小細(xì)胞肺癌是一種侵襲性較強的癌癥，在確診時多已經(jīng)擴(kuò)散至其他部位。而非小細(xì)胞肺癌則更為常見，占肺癌總數(shù)的80% ～85%。肺癌的主要病因是吸煙，過度吸煙會增加罹患肺癌的風(fēng)險。暴露于二手煙、空氣污染、放射線和臭氧等環(huán)境中也會增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險。此外，家族遺傳因素、一些化學(xué)藥物、石棉等也可能引起肺癌[4]。肺癌早期通常無明顯癥狀，隨著病情的惡化，患者可能出現(xiàn)咳嗽、咳痰、咯血、呼吸困難、胸痛、聲音嘶啞、體重減輕等癥狀?；颊咭坏┏霈F(xiàn)上述癥狀，應(yīng)盡快就醫(yī)并進(jìn)行相應(yīng)檢查[5]。根據(jù)肺癌的類型、分期以及患者的身體狀況，可選擇手術(shù)、放療、化療、靶向治療、免疫治療等治療方案。手術(shù)是治療肺癌的常見方式，通過手術(shù)可將腫瘤切除。放療和化療可以有效控制腫瘤的擴(kuò)散和生長。靶向治療和免疫治療是近年來新興的治療方式，通過干擾腫瘤細(xì)胞的生長、增強機體免疫功能來治療肺癌[6]。肺癌患者的預(yù)后取決于多種因素，包括腫瘤類型、分期、患者的年齡和健康狀況等。早期診斷和綜合治療對于改善患者的預(yù)后具有重要意義。然而，由于肺癌的發(fā)病風(fēng)險較高且早期通常無癥狀，大多數(shù)肺癌患者在確診時已進(jìn)展至晚期，因此其治療難度非常大?？傮w來說，肺癌是一種常見且危險的癌癥，可給患者的身心健康造成極大的影響。近年來隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步和治療手段的不斷改進(jìn)，肺癌患者的生存率和生活質(zhì)量均有了較大的提高。早期診斷和綜合治療是控制肺癌進(jìn)展的關(guān)鍵，希望通過不懈的努力，肺癌能夠早日得到有效控制和治療[7]。

薄層細(xì)胞學(xué)在纖維支氣管鏡檢查中應(yīng)用廣泛，可以幫助診斷活檢鉗無法到達(dá)的部位，從而提高陽性診斷率。然而，在細(xì)胞學(xué)診斷中，特別是對于分化差的癌癥，有時形態(tài)上存在相似點，例如非角化型鱗癌和腺癌都可能出現(xiàn)明顯的核仁，可以是單個散在或者松散成群，僅憑形態(tài)很難做出準(zhǔn)確的診斷，經(jīng)?；\統(tǒng)地診斷為非小細(xì)胞肺癌[8]。一方面，這可能是由于診斷醫(yī)師的經(jīng)驗不足，另一方面，細(xì)胞學(xué)本身存在著一定的局限性。通過使用HE 切片和免疫組化染色法，可以彌補上述檢測方法的不足。細(xì)胞塊HE 切片及免疫組化染色是一種在病理學(xué)診斷中廣泛應(yīng)用的檢查方法，該方法通過對細(xì)胞塊進(jìn)行HE 染色和免疫組化染色，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)和抗原性的變化，能夠?qū)膊∵M(jìn)行診斷和鑒別診斷。HE 染色是一種常用的組織染色方法，分別染色細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，從而呈現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)[9]。蘇木精與細(xì)胞核中的核酸結(jié)合后，會使細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色；伊紅則與細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)結(jié)合，使細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)紅色。這種染色方法能夠清晰地顯示組織細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，便于病理學(xué)家觀察和診斷。HE 切片廣泛應(yīng)用于肺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的病理診斷中。通過觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)的變化，可以對腫瘤的良惡性、分化程度、侵襲性和轉(zhuǎn)移性等進(jìn)行評估，為臨床治療提供重要依據(jù)。免疫組化染色是一種檢測特定抗原或抗體表達(dá)的方法，應(yīng)用于各種腫瘤和炎癥性疾病的診斷中。通過檢測特定抗原或抗體的表達(dá)，可以評估腫瘤的分子分型、預(yù)后和治療策略。同時還可以協(xié)助鑒別病原體、評估疾病的活動度及指導(dǎo)治療方案。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞塊HE切片及免疫組化染色具有高分辨率和敏感性，能夠清晰地顯示細(xì)胞形態(tài)學(xué)和抗原性的變化，這使得病理學(xué)家能夠?qū)膊∵M(jìn)行精確的診斷和鑒別診斷，提高臨床診斷和治療的準(zhǔn)確性。細(xì)胞塊HE 切片及免疫組化染色可以提供豐富的病理學(xué)信息，包括細(xì)胞形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)、抗原表達(dá)等，這些信息有助于臨床醫(yī)生全面了解患者的病情，為治療方案的制定提供更多依據(jù)[10]。

本研究采用先行HE 切片、再開展免疫組化染色的方法，旨在達(dá)到定位腫瘤細(xì)胞的效果，利于肺癌的病理診斷與鑒別診斷。在實際操作過程中，若發(fā)現(xiàn)患者的癌細(xì)胞數(shù)量較少或幾乎沒有，可以省略免疫組化染色步驟，從而提高檢測效率。在完成切片和染色后，通過抗體組合染色，可以對患者的腫瘤病理情況進(jìn)行詳細(xì)分析。本研究中，不同分型的肺癌患者表現(xiàn)出差異化的染色結(jié)果，經(jīng)支氣管沖洗液細(xì)胞塊HE 切片及免疫組化染色，肺癌分型檢出率達(dá)到85.59%，而液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查的肺癌分型檢出率僅為58.47%，明顯體現(xiàn)出前者的優(yōu)越性。深入分析這一結(jié)果，首先，HE 切片和免疫組化染色的組合能夠更準(zhǔn)確地定位腫瘤細(xì)胞，為病理診斷和鑒別診斷提供有力支持。尤其是在癌細(xì)胞數(shù)量較少的情況下，免疫組化染色能夠提高檢測的準(zhǔn)確性，避免誤診和漏診。其次，抗體組合染色能夠針對不同的腫瘤類型，呈現(xiàn)出特定的染色結(jié)果，為腫瘤分型提供依據(jù)。本研究中，抗體組合染色分型檢出率達(dá)到85.59%，顯著高于液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查的58.47%。這說明抗體組合染色在腫瘤診斷方面的敏感性和特異性較高，有助于臨床醫(yī)生對患者進(jìn)行精細(xì)化管理。此外，本研究方法還具有以下應(yīng)用優(yōu)勢：一方面，通過HE 切片和免疫組化染色的優(yōu)化組合，可以降低檢測成本，提高檢測效率。另一方面，抗體組合染色能夠滿足臨床對腫瘤診斷的精準(zhǔn)性需求，有助于提高患者的治療效果和生存率。需要注意的是，小細(xì)胞肺癌的惡性程度較高，因此Ki-67 的表達(dá)具有較高的參考價值。在腫瘤細(xì)胞較少的情況下，如果考慮為小細(xì)胞肺癌，需要與淋巴瘤進(jìn)行鑒別，并借助PAX-5 進(jìn)行診斷分析。

綜上所述，支氣管沖洗液細(xì)胞塊HE 切片及免疫組化染色在肺癌病理診斷和鑒別診斷中具有較高的應(yīng)用價值，能夠為臨床醫(yī)生提供可靠的診斷依據(jù)，值得在臨床上廣泛應(yīng)用。