摘 要：目前，人們對(duì)豬圓環(huán)病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）引起的豬圓環(huán)病毒病（porcine circovirus diseases，PCVDs）的認(rèn)識(shí)是，該病包括PCV2的亞臨床感染（porcine circovirus 2 subclinical infection，PCV2-SI）、全身性疾?。≒CV2 systemic diseases，PCV2-SD）和繁殖障礙（PCV2 reproductive diseases，PCV2-RD）以及豬皮炎腎病綜合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）。多年來，確診這些疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)沒有變，因此，由臨床癥狀、病變和病變組織中病毒的檢測(cè)組成的三要素仍然是PCV2-SD和PCV2-RD確診的標(biāo)志。相比之下，正常情況下不對(duì)PCV2-SI進(jìn)行診斷，因?yàn)檫@種疾病被默認(rèn)通過接種疫苗就能得到控制。PDNS可以通過大體病變和組織病理學(xué)檢查進(jìn)行診斷，檢測(cè)PCV2被認(rèn)為不是該病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。在過去十年中，分子生物學(xué)方法作為PCVDs診斷的替代方法已得到廣泛使用，不過這些技術(shù)被視為監(jiān)測(cè)工具，而不是診斷工具。多年來，PCV2的流行病學(xué)發(fā)生了很大的變化，由于大規(guī)模接種疫苗，豬群的感染壓下降，豬群的整體免疫力降低。因此，近來來對(duì)PCVDs診斷的需求有所增加，尤其是接種疫苗后仍出現(xiàn)PCV2-SD癥狀的病例。本綜述的目的是更新有關(guān)PCVDs診斷標(biāo)準(zhǔn)，并在PCV2感染的不同流行病學(xué)情況下，將分子生物學(xué)方法應(yīng)用于這些疾病的整體診斷中。

關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型；豬圓環(huán)病毒??；臨床癥狀；病理學(xué)；診斷；流行病學(xué)

中圖分類號(hào)：S816.8 " 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2024）03-0001-09

10年前，Segalés等（2012）發(fā)表了一篇關(guān)于豬圓環(huán)病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）感染的臨床癥狀、組織病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)室診斷的綜述文章，試圖統(tǒng)一現(xiàn)有的診斷標(biāo)準(zhǔn)，建立對(duì)其感染結(jié)局的正確群體診斷技術(shù)。當(dāng)時(shí)，在全球各地開始大規(guī)模接種預(yù)防PCV2感染的疫苗（下文簡稱“PCV2疫苗”）的短短幾年后，人們發(fā)現(xiàn)PCV2亞臨床感染（porcine circovirus 2 subclinical infection，PCV2-SI）不僅是這種病毒感染常見的表現(xiàn)形式，也是一種昂貴的形式。從那時(shí)起，養(yǎng)豬業(yè)開始考慮了10多年來接種PCV2疫苗背后的成功案例，以至于很難想象在不接種這種病原體疫苗的情況下生產(chǎn)豬。

除了對(duì)仔豬接種PCV2疫苗所產(chǎn)生的良好效果外，對(duì)該年齡段的豬進(jìn)行免疫接種的事實(shí)意味著改變了這種病毒感染的流行病學(xué)。斷奶時(shí)系統(tǒng)性地接種疫苗意味著顯著降低了整個(gè)豬群的感染壓，一些批次的豬群在屠宰年齡時(shí)血清反應(yīng)幾乎為陰性，或只有少量豬發(fā)生血清轉(zhuǎn)換。因此，面對(duì)現(xiàn)有PCV2感染流行病學(xué)的變化，重要的是必須使診斷需求適應(yīng)新情況。

考慮到多種情況會(huì)導(dǎo)致豬消瘦，出現(xiàn)呼吸道或消化道癥狀，以及產(chǎn)量下降，診斷豬圓環(huán)病毒病（porcine circovirus diseases，PCVDs）并評(píng)估其對(duì)豬群生產(chǎn)性能的影響可能與10年前一樣重要，甚至比10年前更重要。因此，本文的目的是更新確診PCV2感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并討論在大規(guī)模接種疫苗的養(yǎng)豬業(yè)中不同流行病學(xué)情景下的診斷線索。

1" PCV2感染結(jié)果及其診斷

由PCVDs引起的大體病變和顯微病變已有報(bào)道。事實(shí)上，這些疾病的病理結(jié)果與最初報(bào)道的情況并無差異。但需要強(qiáng)調(diào)的是，亞臨床感染與臨床感染的主要區(qū)別是病變的嚴(yán)重程度。通常PCV2亞臨床感染沒有肉眼可見的病變，沒有或有輕微的顯微病變，但臨床感染[PCV2全身性疾?。≒CV2 systemic diseases，PCV2-SD）、PCV2-SD和PCV2繁殖障礙（PCV2 reproductive diseases，PCV2-RD）]的特征是受感染組織（斷奶仔豬的淋巴組織和胎兒的心臟）出現(xiàn)中等至嚴(yán)重的病變。此外，血清和組織中的病毒載量通常與病變的嚴(yán)重程度相關(guān)，病變?cè)絿?yán)重，PCV2含量越高。最近，Unterweger等（2021）指出，發(fā)病豬出現(xiàn)高水平病毒載量和繁殖問題，但沒有觀察到心肌炎，而心肌炎是胎兒PCV2-RD的標(biāo)志性病變。其他研究也一致發(fā)現(xiàn)，這種病變與心臟組織中高水平PCV2含量有關(guān)。

2" PCV2感染結(jié)局及其診斷

表1概述了目前公認(rèn)的PCVDs及其主要臨床癥狀和獨(dú)特的診斷標(biāo)準(zhǔn)?？偟膩碚f，表1中所示的PCVDs的臨床癥狀多年來沒有變化，并在其他地方進(jìn)行了說明。

在大多數(shù)教科書和綜述文章中，PCV2-SD仍被認(rèn)為是一種新興疾病。1991年將其描述為斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS），說明該病30多年前就已出現(xiàn)。此外，1962年和1985年豬PCV2感染和PCV2-SD診斷的證據(jù)已得到了回顧性證實(shí)。因此，沒有必要再將PCVDs視為新出現(xiàn)的疾病，而應(yīng)視為地方病。PCVDs對(duì)養(yǎng)豬生產(chǎn)的影響取決于PCV2的流行病學(xué)和免疫豬群的健康狀態(tài)。此外，接種過PCV2-SD疫苗的豬偶爾會(huì)被診斷出PCV2-SD，這一事實(shí)提醒人們應(yīng)注意該疾病的多因素致病性，以及在豬場(chǎng)中消除這些誘發(fā)因素的必要性。

斷奶仔豬中發(fā)現(xiàn)的PCV2-SI與無明顯臨床疾病的豬場(chǎng)中仔豬接種PCV2疫苗有關(guān)。這一效應(yīng)促使疫苗在世界各地廣泛使用，而與臨床狀況無關(guān)。當(dāng)時(shí)，這也是PCV2感染診斷被認(rèn)為不再需要作為決定是否接種疫苗的決策過程的一部分的原因。這種原理與疫苗接種來預(yù)防PCV2-SD的巨大成果相吻合。

傳統(tǒng)上，PCV2-RD的出現(xiàn)頻率被認(rèn)為很低或非常低，主要是由于經(jīng)產(chǎn)母豬層面上現(xiàn)有的群體免疫。然而，通過PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，宮內(nèi)感染的數(shù)量可能變化很大（取決于豬場(chǎng)）。此外，盡管生殖系統(tǒng)缺乏臨床癥狀，但在某種情況下，胎兒或新生仔豬感染的證據(jù)可能相當(dāng)有說服力。雖然PCV2-SI對(duì)斷奶仔豬的影響是明確的且可測(cè)量的，但沒有關(guān)于生殖系統(tǒng)亞臨床感染的可靠數(shù)據(jù)。一些研究試圖在生殖系統(tǒng)沒有明顯臨床癥狀的豬場(chǎng)中確定這種宮內(nèi)感染的影響，但尚未充分記錄到明確、結(jié)論性和可重復(fù)的影響。因此，PCV2亞臨床宮內(nèi)感染的影響還有待闡明。

豬皮炎腎病綜合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）仍被認(rèn)為是PCVDs的一種臨床表現(xiàn)。然而，自PDNS首次被發(fā)現(xiàn)至今已有30年，提出其與PCV2之間的關(guān)聯(lián)也有20年，但至今尚未確定病因。PCV2與PDNS相關(guān)的證據(jù)具有很強(qiáng)的確定性，但只是間接證據(jù)。在大規(guī)模接種PCV2疫苗的同時(shí)，全球的病例數(shù)突然減少，這可能是PDNS與這種病毒感染的密切聯(lián)系。盡管有人聲稱通過試驗(yàn)重現(xiàn)了豬托克特諾病毒（又稱“豬細(xì)環(huán)病毒”；Torque teno sus virus 1a，TTSuV1a），加上豬繁殖和呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRSV）和豬圓環(huán)病毒3（PCV3）的感染，但這些描述在大體病變和顯微病變層面上都不符合PDNS最初的報(bào)告。要注意的是，在過去20年中，有人提出了一些與PCV2相關(guān)的特殊病癥，如PCV2-肺疾病（PCV2-lung disease，PCV2-LD）、PCV2-腸疾?。≒CV2-enteric disease，PCV2-ED）和急性肺水腫（acute pulmonary edema，APE），本綜述未將這些疾病考慮在內(nèi)。隨后，Tico等（2013）和Baro等（2015）提出PCV2-LD和PCV2-ED是PCV2-SD的一部分，因?yàn)樗鼈兣c全身感染診斷標(biāo)準(zhǔn)沒有顯著偏差，并且APE作為一種單一、未進(jìn)一步描述的疾病持續(xù)存在。

3" PCV2感染的診斷技術(shù)

3.1 PCVDs的診斷標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)PCVDs的確診不能排除其他病毒、細(xì)菌、寄生蟲或真菌的參與，從而導(dǎo)致臨床癥狀的惡化。因此，在懷疑PCVDs之前，明智的做法是嘗試建立一個(gè)全面綜合的診斷，評(píng)估臨床病例中涉及的不同病因和風(fēng)險(xiǎn)因素。值得提醒的是，文獻(xiàn)記錄的嚴(yán)重的PCVDs病例同時(shí)涉及多種病原體，尤其是PRRSV。

基于上述引發(fā)PCVDs的多因素致病原因，重要的是建立可靠、精確和明確的診斷標(biāo)準(zhǔn)來確診這些疾病，同時(shí)假設(shè)臨床癥狀可能并不完全歸因于PCV2。Segalés（2012）已對(duì)這些診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了廣泛的介紹和總結(jié)?？傊瑧?yīng)考慮三個(gè)步驟：" "（1）臨床和大體病理表現(xiàn)，在PCV2-SD的情況下，也與符合所謂的“群體病例定義”的適當(dāng)流行病學(xué)表現(xiàn)相關(guān)；（2）發(fā)病豬的靶組織出現(xiàn)特定的中等水平或嚴(yán)重的組織病理學(xué)變化，PCV2-SD的靶組織為淋巴組織，PCV2-RD的為心臟，PDNS的為血管/腎小球；（3）這些靶組織含有中高水平的PCV2。目前，第三條診斷標(biāo)準(zhǔn)不適用于PDNS，當(dāng)感染PDNS時(shí)，PCV2的檢出水平往往較低。通常采用組織學(xué)病變與病毒存在關(guān)聯(lián)的技術(shù)，如免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）法或原位雜交（in situ hybridization，ISH）法，檢測(cè)組織中的PCV2。

中等水平至高度嚴(yán)重的病變和中等至高水平病毒抗原或基因組的檢測(cè)（分別采用IHC法和ISH法），并非缺乏主觀解釋。此外，多年來實(shí)際的組織病理學(xué)診斷工作向我們展示了“意想不到”的組合，其中明顯嚴(yán)重的病變卻伴有少量PCV2，或輕微的淋巴組織病變卻攜帶大量的病毒。然而，從全球來看，這些都是例外情況，而不是規(guī)律。對(duì)這些罕見病例沒有合理的解釋，但它們可能是由于感染時(shí)間、豬的免疫狀態(tài)和遺傳背景，或其他未知個(gè)體因素的特定組合造成的。

綜上所述，上述診斷標(biāo)準(zhǔn)仍然有效，特別是當(dāng)診斷方法包括以下內(nèi)容時(shí)：（1）PCVDs樣本； （2）采樣豬處于正確的臨床時(shí)機(jī)（發(fā)病豬從急性到亞急性的演變，而不是慢性發(fā)病豬）；（3）使用多頭豬而不是單頭豬或單個(gè)樣本進(jìn)行診斷嘗試。

3.2 PCR方法學(xué)的診斷價(jià)值

PCR是目前應(yīng)用廣泛的PCV2基因組檢測(cè)技術(shù)之一，尤其是實(shí)時(shí)定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）。qPCR的優(yōu)勢(shì)在于可以確定病毒核酸的絕對(duì)數(shù)量，如前文所述，組織中PCV2的數(shù)量是區(qū)分臨床PCVDs和PCV2-SI的關(guān)鍵指標(biāo)?？紤]到PCV2的廣泛性以及在感染豬的許多樣本中檢測(cè)到的可能性，這一事實(shí)就顯得更為重要。僅在血液、組織、初乳、精液、唾液以及鼻腔、肛門和尿液中檢測(cè)到PCV2核酸，而且也在環(huán)境（空氣、糞便、水、母豬和仔豬腋窩皮膚表面、妊娠欄地板和欄桿表面）以及豬場(chǎng)的其他動(dòng)物（嚙齒動(dòng)物、無脊椎動(dòng)物）中檢測(cè)到了PCV2核酸。總之，首先要討論的問題是使用qPCR診斷PCVDs和/或進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)測(cè)的方便性。

疾病診斷不僅僅是簡單地檢測(cè)到病原體，因?yàn)椴≡w無處不在。因此，使用qPCR來幫助診斷PCVDs必須意味著將其與表征這些疾病的明確事實(shí)相結(jié)合。如果臨床表現(xiàn)與相應(yīng)的組織病理學(xué)病變（表1）相一致，則可以明確診斷為潛在的PCVDs。在這種情況下，使用qPCR并在全身部位（血清或組織）檢測(cè)到中等至高水平PCV2病毒載量也可確診為PCVDs，IHC法或ISH法一樣。接下來的一個(gè)關(guān)鍵問題是，通過qPCR檢測(cè)到的中等至高水平病毒載量有多少。

不同的研究小組已經(jīng)提出了用血清中的qPCR閾值作為PCV2-SD確診的指標(biāo)。這些閾值因不同的研究而異，包括104.7、106.91、107和106.21～107.43個(gè)病毒拷貝數(shù)/mL血清。此外，一個(gè)研究小組提出了用淋巴組織和非淋巴組織中的qPCR閾值（106.8～108.4個(gè)病毒拷貝/g組織）來作為PCV2-SD的確診指標(biāo)。此外，不同研究小組在qPCR檢測(cè)極限和靈敏度上存在顯著差異。因此，上述閾值對(duì)這些特定的qPCR法是特定的，不能推廣到任何一種qPCR技術(shù)。重要的是，目前使用的大多數(shù)qPCR技術(shù)對(duì)應(yīng)于商用技術(shù)，這些技術(shù)通常具有比上述論文（未發(fā)表的結(jié)果）所述的更高的靈敏度。因此，鑒別臨床和亞臨床PCVDs的閾值很可能應(yīng)該是至少108個(gè)PCV2拷貝/mL血清，或者可能更高。然而，在使用qPCR作為診斷方法的情況下，必須結(jié)合臨床癥狀和組織病理學(xué)數(shù)據(jù)。如果沒有，則應(yīng)將唯一的qPCR方法視為監(jiān)測(cè)工具，而非診斷工具。

與PCV2-SD相比，利用qPCR對(duì)其他PCVDs的診斷提示要有限。

盡管病毒正在豬場(chǎng)流行，但豬群沒有出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，并且在被檢豬上發(fā)現(xiàn)輕微或沒有組織病理學(xué)淋巴病變時(shí)，診斷為PCV2-SI。許多研究人員已經(jīng)描述了這種情況，qPCR的檢測(cè)結(jié)果通常是多變的，但大多數(shù)低于前面提到的閾值。然而，在個(gè)體水平上，一些非明顯發(fā)病的豬體內(nèi)的病毒載量很可能高于閾值，而按照經(jīng)典標(biāo)準(zhǔn)診斷出的PCV2-SD的病毒載量可能低于閾值。這在qPCR法的早期描述中已有說明?？紤]到PCV2在全球豬場(chǎng)中的普遍存在，得出這樣的結(jié)論，PCV2-SI診斷本身提供的信息量很少，在無明顯臨床癥狀的豬場(chǎng)中使用qPCR，應(yīng)側(cè)重于病毒監(jiān)測(cè)目的。關(guān)于qPCR和PDNS的實(shí)用性，也可以得出非常相似的結(jié)論，因?yàn)樵谶@些動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的病毒載量與PCV2-SI的病毒載量相當(dāng)。

借助qPCR診斷PCV2-RD的方法，可能應(yīng)遵循與PCV2-SD相似的方法，不過它可能更復(fù)雜。早期的一項(xiàng)研究提出，在木乃伊胎或死胎的組織樣本（心肌、脾臟和肝臟）中檢測(cè)到高水平的病毒載量（＞107個(gè)PCV2基因組拷貝/500 ng DNA），以及在患有心肌炎的新生仔豬組織樣本中檢測(cè)出中等水平的病毒載量（＞105個(gè)PCV2基因組拷貝/500 ng DNA），即可確診為PCV2-RD。有趣的是，在心肌炎病例中，只有PCV2基因組拷貝數(shù)為1010個(gè)/500 ng DNA時(shí)才能通過IHC檢測(cè)出陽性結(jié)果，而基因組拷貝數(shù)為105個(gè)/500 ng DNA時(shí)病毒抗原檢測(cè)結(jié)果為陰性。隨后，另一項(xiàng)研究也得到了非常相似的結(jié)果，108個(gè)基因組拷貝/500 ng DNA的值與IHC陽性結(jié)果相關(guān)。

然而，大量心臟未受損的胎兒qPCR檢測(cè)結(jié)果為陽性，IHC檢測(cè)呈陰性。在后一種情況下，這些研究人員得出結(jié)論，胎兒心臟PCV2 IHC檢測(cè)陽性出現(xiàn)在妊娠母豬生殖功能衰竭的急性階段，而qPCR被發(fā)現(xiàn)是一種在更寬的時(shí)間內(nèi)更為敏感的診斷方法。

最近發(fā)表的第三項(xiàng)研究表明，109個(gè)基因組拷貝/g心臟的閾值與ISH檢測(cè)結(jié)果為陽性相吻合，將是滿足表1中所示中等至高水平病毒載量診斷標(biāo)準(zhǔn)的最合適的閾值?？傮w而言，這些結(jié)果不足為奇，因?yàn)镮HC和ISH檢測(cè)結(jié)果與病變的存在相關(guān)，因此與臨床疾病相關(guān)，而qPCR可檢測(cè)PCV2的臨床和亞臨床感染。因此，區(qū)分PCV2-RD和生殖系統(tǒng)亞臨床感染的特異性qPCR閾值，再次取決于所使用的qPCR法（如前文所述的PCV2-SD），并且在使用早期發(fā)表的技術(shù)時(shí)，它與閾值為107個(gè)基因組拷貝/500 ng DNA非常吻合，與Unterweger等（2021）指出閾值為109個(gè)基因組拷貝/g心臟組織吻合。值得注意的是，一些研究對(duì)提取的DNA以納米克（ng）為基因組拷貝數(shù)的計(jì)量單位，而第三種研究使用克（g）來表示在心臟組織中檢測(cè)到的基因組拷貝數(shù)，但這兩種方法尚未進(jìn)行比較。

qPCR法的應(yīng)用范圍已擴(kuò)展到其他類型的樣本，如口腔液、胎盤臍帶、加工液或組織和環(huán)境樣本。這種方法非常適用于監(jiān)控、監(jiān)測(cè)和調(diào)查流行病學(xué)的目的，但不適用于疾病診斷。

3.3 抗體檢測(cè)方法學(xué)的診斷價(jià)值

豬體內(nèi)的PCV2抗體可以通過自然感染、母豬向仔豬傳遞母源免疫力或接種疫苗產(chǎn)生。此外，由于接種PCV2疫苗已經(jīng)在世界范圍內(nèi)得到廣泛普及，育肥豬或成年豬體內(nèi)出現(xiàn)的抗體滴度/值很可能是接種疫苗和自然感染PCV2后共同作用的結(jié)果。這些抗體的來源無法追溯（缺乏可區(qū)分自然感染還是接種疫苗產(chǎn)生的抗體的疫苗產(chǎn)品），因此抗體檢測(cè)的作用有限。

通過血清學(xué)方法（ELISA試驗(yàn)、免疫過氧化物酶單層檢測(cè)法、免疫熒光檢測(cè)法或其他方法）檢測(cè)PCV2抗體，不能為PCVDs的診斷提供依據(jù)。不過，這些技術(shù)不依賴于分析所用的基質(zhì)（血清、口腔液或肉汁），對(duì)監(jiān)控和監(jiān)測(cè)很有價(jià)值。

4" PCV2流行病學(xué)和免疫接種

4.1 改變PCV2流行病學(xué)

自PCV2疫苗問世并在世界范圍內(nèi)大規(guī)模使用以來，PCV2的流行病學(xué)已經(jīng)發(fā)生了重大的變化。盡管該病毒在豬群中仍存在，但感染模式、病毒載量、感染動(dòng)物中自然感染的比例和疾病表現(xiàn)形式都已發(fā)生了變化，以至于最終可能會(huì)產(chǎn)生一批從斷奶舍到屠宰場(chǎng)都極少或根本沒有接觸過該病毒的豬。事實(shí)上，在“PCV2凈化”的短期嘗試中，母豬和仔豬接種PCV2疫苗6個(gè)月后，無法利用PCR法檢測(cè)到PCV2，豬也沒有血清轉(zhuǎn)換。

很少有人研究PCV2流行病學(xué)這種變化所引起的后果。我們假設(shè)，從中長期來看，僅仔豬接種疫苗，或仔豬和后備母豬接種疫苗；僅后備母豬/經(jīng)產(chǎn)母豬接種疫苗，或育肥豬加上后備母豬/經(jīng)產(chǎn)母豬接種疫苗，應(yīng)該會(huì)產(chǎn)生不同的PCV2感染結(jié)果。例如，當(dāng)僅給仔豬接種疫苗時(shí)，育肥期結(jié)束時(shí)產(chǎn)生血清陰性豬的可能性會(huì)提高。這些豬中的一部分最終可能成為后備種豬，從而產(chǎn)生血清陰性繁育種群，可能容易感染PCV2。這種情況與在只給仔豬接種疫苗的豬群中發(fā)現(xiàn)的后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的血清學(xué)水平異常吻合。因此，隨著時(shí)間的推移，持續(xù)地給仔豬接種疫苗可能會(huì)在群體水平上產(chǎn)生免疫多樣性的后備母豬/經(jīng)產(chǎn)母豬“亞群”。盡管母豬在3～4周齡時(shí)就接種了PCV2疫苗，但這種情況還是會(huì)發(fā)生，因?yàn)檫@種疫苗的免疫期被認(rèn)為可持續(xù)6個(gè)月左右。

考慮到PCV2存在于世界上幾乎所有的豬場(chǎng)，那些“無免疫力的”經(jīng)產(chǎn)母豬感染的可能性很高。盡管經(jīng)產(chǎn)母豬的總體感染率通常較低，但正如PCV2-RD在初繁母豬群中的基本描述所證實(shí)的那樣，沒有免疫力的豬群會(huì)有更高的感染率。根據(jù)這一原理，豬場(chǎng)中存在易感后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的同時(shí)，一部分種母豬也會(huì)出現(xiàn)宮內(nèi)感染。因此，這種情況會(huì)導(dǎo)致妊娠母豬產(chǎn)出已感染PCV2的新生仔豬，在自然條件和實(shí)驗(yàn)條件下這種情況都有大量的報(bào)道。因此，在仔豬接種PCV2疫苗之前，豬群中一定比例的豬可能已經(jīng)處于PCV2感染早期。

總的來說，妊娠母豬、后備母豬以及新生仔豬的感染比例在不同的豬場(chǎng)會(huì)有所不同，目前，還沒有辦法根據(jù)群體免疫水平預(yù)測(cè)這一比例。此外，這些感染對(duì)豬場(chǎng)整體生產(chǎn)性能的影響以及對(duì)已經(jīng)感染的經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬和仔豬的影響尚不清楚。

4.2 免疫豬群中的PCVDs

PCV2疫苗被認(rèn)為是非常有效的產(chǎn)品，可能是豬用疫苗中最好的疫苗之一，這也解釋了它為何能夠非常有效地預(yù)防PCV2-SD并在世界范圍內(nèi)被廣泛使用。然而，在過去十年中，豬群在接種PCV2疫苗后偶爾也會(huì)出現(xiàn)PCV2-SD病例。事實(shí)上，在過去的幾年里，這些病例有明顯增加的趨勢(shì)，并且與PCV2d存在潛在的聯(lián)系，因?yàn)樵谧罱欢螘r(shí)間中它是PCV2流行毒株中主要的基因型。PCVDs是一種由多種因素共同作用引發(fā)的疾病，因此，豬群中暴發(fā)顯性疾病的原因之一是PCV2感染的情況下，有疾病誘發(fā)因子的共存。還有一種可能的原因是，豬場(chǎng)不能正常進(jìn)行免疫接種工作，但由于缺乏誘發(fā)因素，導(dǎo)致未能明確觀察到顯性但亞臨床的疾病。在這些情況下，連續(xù)給豬接種PCV2疫苗可能無法獲得預(yù)期的效果，因而仍然沒有引起注意。

盡管接種了疫苗，但接種了PCV2-SD疫苗的豬群仍然會(huì)發(fā)生PCV2-SD，出現(xiàn)這種情況的原因包括：（1）沒有真正接種疫苗；（2）疫苗使用不當(dāng)；（3）疫苗的接種時(shí)間過晚（豬在接種疫苗前或接種疫苗期間發(fā)生了自然感染）；（4）疫苗接種時(shí)間過早（母源抗體的潛在干擾或仔豬免疫系統(tǒng)未發(fā)育成熟）；（5）在同時(shí)感染免疫調(diào)節(jié)病原體的情況下接種疫苗。前兩種原因與疫苗接種管理不當(dāng)有關(guān)，或者只是某一群豬沒有真正接種疫苗。雖然這兩種情況都是偶爾發(fā)生，但在假定疫苗接種失敗的情況下，一定要排除這兩種情況。

PCV2疫苗接種過晚意味著疫苗是在豬群已經(jīng)自然感染PCV2后接種的。因此，在病毒誘發(fā)疾病之前，疫苗沒有足夠的時(shí)間使動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生充足的免疫反應(yīng)（在前文所述PCV2-SD多因素誘發(fā)情況下）。為年齡相對(duì)較大的豬（5周齡以上）接種疫苗的可能性很小，因?yàn)橥ǔＪ窃跀嗄糖昂螅?～4 周齡）接種疫苗。事實(shí)上，疫苗接種晚的情況（就免疫前的感染而言）似乎與前文提到的PCV2流行病學(xué)發(fā)生變化有關(guān)（圖1）。在PCV2疫苗問世之前，存在PCV2感染和誘發(fā)因素的豬場(chǎng)有一部分豬暴發(fā)了PCV2-SD（圖1A）。當(dāng)PCV2疫苗開始用于發(fā)病豬場(chǎng)的仔豬時(shí)，PCV2-SD得到了有效控制（圖1B）。

隨著時(shí)間的推移，持續(xù)接種疫苗會(huì)產(chǎn)生高效的預(yù)防效果，但如前文所述，也會(huì)慢慢地產(chǎn)生無免疫力的后備母豬/母豬亞群，或產(chǎn)生免疫力相對(duì)較低的母豬和后代。這意味著，從中長期來看，感染壓總體會(huì)下降，豬群免疫水平降低，宮內(nèi)感染和仔豬提前感染的風(fēng)險(xiǎn)隨之也增加。在接種疫苗前或接種疫苗時(shí)，疾病誘發(fā)因素與豬的提前感染并存，將會(huì)導(dǎo)致PCV2-SD病例的出現(xiàn)（圖1C）?？傮w結(jié)果是已接種疫苗的仔豬會(huì)出現(xiàn)全身性疾病。值得注意的是，這些病例通常出現(xiàn)在6～8周齡的豬群中，因此現(xiàn)今豬的發(fā)病年齡相對(duì)小于疫苗問世前豬的發(fā)病年齡。

給仔豬接種PCV2疫苗是在體內(nèi)PCV2抗體水平達(dá)到一定程度的情況下進(jìn)行的。因此，仔豬的母源免疫力（maternally derived immunity，MDI）被疫苗產(chǎn)生的免疫應(yīng)答所削弱，有利于仔豬自身免疫力的產(chǎn)生。盡管在接種疫苗時(shí)，仔豬體內(nèi)的MDI水平在同一批次豬群內(nèi)或不同批次豬群之間不一致，但在斷奶前后接種疫苗是一個(gè)通常有利可圖的計(jì)劃。盡管接種疫苗時(shí)豬體內(nèi)的抗體水平越高，疫苗引起的血清陽轉(zhuǎn)率越低，但這些值對(duì)豬生產(chǎn)性能的潛在有害影響似乎很低或不存在。然而，一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，在PCV2抗體ELISA S/P值非常高的一小部分豬亞群中，疫苗效力（vaccine efficacy，VE）會(huì)明顯影響仔豬的平均日增重（average daily weight gain，ADWG）。由于受影響豬的比例相當(dāng)?shù)?，在田間條件下，MDI對(duì)VE的潛在干擾對(duì)大多數(shù)豬場(chǎng)產(chǎn)生的影響可能可以忽略不計(jì)，但并非對(duì)所有豬場(chǎng)都有必要。如果仔豬接種疫苗的時(shí)間比平常的時(shí)間更早，理論上潛在干擾的影響程度會(huì)更高。從這個(gè)意義上說，Haake等（2014）發(fā)現(xiàn)，在給1周齡和3周齡仔豬接種疫苗時(shí)，疫苗產(chǎn)生的免疫效果存在顯著的差異。這些研究人員認(rèn)為，影響主動(dòng)免疫和被動(dòng)轉(zhuǎn)移的其他年齡相關(guān)因素不是抗體水平，可能是導(dǎo)致1周齡疫苗接種組仔豬缺乏VE的原因。然而，在該研究中，3周齡疫苗接種組仔豬的PCV2抗體滴度明顯低于1周齡疫苗接種組仔豬的。因此，研究認(rèn)為MDI干擾也是造成非常年幼的動(dòng)物接種疫苗后主動(dòng)免疫效力較低的一個(gè)假定原因。

豬可能會(huì)感染多種能夠調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)的病原體。關(guān)于這些傳染性病原體或甚至其他非傳染性因素對(duì)PCV2 VE潛在影響的數(shù)據(jù)很少。然而，一項(xiàng)研究表明，接種PCV2疫苗時(shí)感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV），會(huì)顯著損害疫苗引起的細(xì)胞免疫應(yīng)答，而不是體液免疫應(yīng)答。因此，可以預(yù)期，仔豬接種PCV2疫苗后發(fā)生的PRRSV血癥將導(dǎo)致保護(hù)不完全和VE表現(xiàn)不佳。有趣的是，Sinha等（2010）沒有觀察到這種效應(yīng)。還有待闡明這種效應(yīng)是否取決于豬感染的PRRSV毒株。

由于在接種PCV2疫苗的次數(shù)上母豬要少很多，沒有資料顯示母豬免疫接種可能會(huì)受到任何傳染性或非傳染性因素的不利影響。在任何情況下，出現(xiàn)PCV2-RD的豬場(chǎng)取消疫苗接種將會(huì)導(dǎo)致母豬再次發(fā)生繁殖障礙。

5" 討論

PCV2-SD的診斷標(biāo)準(zhǔn)自Segalés等（1999）和Sorden（2000）提出以來沒有改變，隨后Segalés于2012年進(jìn)行了匯編和修訂。因此，經(jīng)過后一次修訂10年后，有必要對(duì)現(xiàn)有的PCVDs診斷方法進(jìn)行修訂和更新，尤其是面對(duì)全球范圍內(nèi)大規(guī)模接種PCV2疫苗的情況和PCV2流行所經(jīng)歷的流行病學(xué)變化。

必須從實(shí)際角度考慮PCV2感染引起的三個(gè)主要結(jié)局：PCV2-SI，PCV2-SD和PCV2-RD。雖然亞臨床形式一直是主要結(jié)果，但直到疫苗問世時(shí)才引起人們的注意。這意味著，當(dāng)PCV2-SD在世界范圍內(nèi)嚴(yán)重暴發(fā)時(shí)，亞臨床感染豬的比例幾乎是其余所有未表現(xiàn)出全身性疾病的豬的總和（也就是說，在一個(gè)批次的豬群中，如果豬的PCV2-SD發(fā)病率為20％～30％，意味著70％～80％的豬發(fā)生了PCV2-SI）。疫苗可以控制感染的亞臨床影響，因此尚沒有對(duì)這種情況的診斷做出真正的努力。然而，盡管PCV2疫苗非常有效，但它并不完美，只能預(yù)防臨床疾病，不能預(yù)防感染。因此，一部分接種過疫苗的豬在生產(chǎn)期間仍會(huì)受到感染，不過這種感染似乎不會(huì)影響豬的ADWG。然而，目前尚不清楚血清中特定的PCV2負(fù)荷閾值是否與個(gè)體水平上無明顯臨床癥狀的豬的有害影響相關(guān)。考慮到豬的遺傳背景會(huì)影響PCV2-SD的表達(dá)和血清中的病毒載量，給定病毒載量很可能因豬個(gè)體、遺傳品系或品種的不同，而對(duì)豬生產(chǎn)性能產(chǎn)生不同的影響。

系統(tǒng)性和生殖系統(tǒng)疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)確立，最初的描述[見Segalés等（2005）的綜述]仍然被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)。在這兩種情況下，由臨床癥狀、病變和病變組織中病毒的檢測(cè)組成的三要素可以用于診斷這些疾病，哪怕發(fā)病豬可能并發(fā)了其他疾病。值得注意的是，盡管通過ISH法或qPCR法發(fā)現(xiàn)了中等至高水平的PCV2，但PCV2-RD病例中胎兒心肌病變的存在可能是多變的。這種情況對(duì)根據(jù)組織學(xué)病變?cè)\斷PCV2-RD的價(jià)值提出了合理的懷疑，但到目前為止，心肌炎是該病癥中觀察到的最一致的病變。因此，本綜述認(rèn)為心肌損害仍應(yīng)被納入病例定義，盡管不是強(qiáng)制性的，但卻是確診該病的有力支持。

如今，盡管給豬接種疫苗能夠很好地預(yù)防PCVDs，但這些單個(gè)病例的定義尚未修改。多年來，作為技術(shù)進(jìn)步的產(chǎn)物，qPCR檢測(cè)結(jié)果作為診斷這些疾病的替代標(biāo)準(zhǔn)的使用和解讀發(fā)生了變化。雖然早期的報(bào)告主要使用內(nèi)部開發(fā)的分子生物學(xué)技術(shù)，提出了診斷PCV2-SD和PCV2-RD的閾值分別為107個(gè)基因組拷貝/mL血清和500 ng DNA，但是，目前商用qPCR技術(shù)尚未在這一意義上得到有效的驗(yàn)證。就在最近，Unterweger等（2021）提出，每克心臟組織中109個(gè)病毒基因組拷貝有助于診斷PCV2-RD。迄今為止，未對(duì)較早的qPCR法與目前使用的方法進(jìn)行比較，以設(shè)定PCV2-SD的新閾值，但預(yù)計(jì)更高的閾值是可取的。值得注意的是，靶組織，如淋巴器官（但也包括肺）中的病毒載量總是高于感染動(dòng)物血清中的病毒含量。已在血清水平上確定了疑似PCV2-SD的潛在閾值，但未在組織層面建立；必須謹(jǐn)慎對(duì)待組織中的qPCR檢測(cè)結(jié)果，因?yàn)槊亢辽逯?07個(gè)PCV2基因組拷貝可能對(duì)應(yīng)于PCV2-SI。此外，檢測(cè)到病毒基因組并不意味著病毒具有傳染性。然而，如果利用qPCR法在發(fā)病豬的淋巴組織中檢測(cè)到大量的PCV2核酸，且淋巴組織出現(xiàn)了特征性組織學(xué)病變，則這些數(shù)據(jù)與通過IHC法和ISH法檢測(cè)到的病毒抗原或基因組具有很好的相關(guān)性。

PDNS的診斷技術(shù)沒有取得進(jìn)一步的進(jìn)展。間接證據(jù)表明這種情況與PCV2有關(guān)，但尚未確定明確的因果關(guān)系。因此，PDNS的診斷仍然被認(rèn)為是一種基于大體病變和微觀病變?cè)\斷的免疫復(fù)合物病。

盡管qPCR法和抗體檢測(cè)法被廣泛應(yīng)用于監(jiān)測(cè)PCV2感染，接種疫苗被大規(guī)模采用，但仍有幾種情況需要建立一套完整的PCVDs診斷標(biāo)準(zhǔn)。首先，當(dāng)豬場(chǎng)出現(xiàn)與PCVDs相符的明顯疾病時(shí)（即仔豬斷奶后消瘦或母豬妊娠后期繁殖障礙）。其次，當(dāng)豬出現(xiàn)生長不良的普通疾病或非特異性繁殖障礙時(shí)，應(yīng)排除可能發(fā)生了PCVDs。最后，也是目前最重要的一種情況，當(dāng)有理由懷疑疫苗的免疫效果不佳時(shí)，需要對(duì)PCVDs進(jìn)行明確的診斷。在后一種情況下，全面確診必須是考慮改變PCV2疫苗接種計(jì)劃和深化豬場(chǎng)病毒流行病學(xué)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)測(cè)控的第一步。重點(diǎn)應(yīng)放在母豬的宮內(nèi)感染和/或仔豬感染提前以及母豬群抗體水平的變化上。

6" 結(jié)論

本文旨在更新PCVDs的診斷標(biāo)準(zhǔn)（和診斷工具）及其實(shí)際意義、實(shí)用性、局限性的解讀。PCVDs是一種由多種因素引發(fā)的疾病，因此，僅檢測(cè)甚至量化病毒載量不足以建立PCV2與特定臨床疾病因果關(guān)系的確鑿證據(jù)。然而，要解決病毒性疾病的流行病學(xué)背景，確診是第一步，但正確監(jiān)測(cè)感染與診斷同樣重要。

原題名：Revisiting porcine circovirus disease diagnostic criteria in the current porcine circovirus 2 epidemiological context（英文）

原作者：Joaquim Segalés和Marina Sibila