延胡索是我國傳統(tǒng)中藥材中的常用大宗藥材之一，產(chǎn)地多且適應(yīng)性強(qiáng)，其中浙江省為其主要的道地產(chǎn)區(qū)之一.延胡索生產(chǎn)中多采用自繁自種的無性繁殖，易產(chǎn)生種質(zhì)退化等問題，導(dǎo)致其產(chǎn)量和品質(zhì)良莠不齊.采用基因條形碼ITS2序列檢測技術(shù)、田間延胡索性狀記錄及高效液相色譜分析等技術(shù)，對(duì)浙江省3個(gè)主要品種來源的延胡索浙胡1號(hào)（YHS-1）、浙胡2號(hào)（YHS-2）和延胡索3號(hào)（農(nóng)戶自保種，YHS-3）進(jìn)行延胡索的基源鑒定、田間性狀分析和主要芐基異喹啉型生物堿的含量分析，以篩選浙江地區(qū)延胡索的優(yōu)良品種.基源鑒定數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，YHS-2與延胡索Corydalis Yanhusuo W. T. Wang（NCBI編號(hào)MH260617.1和MH260618.1）的親緣關(guān)系較近，YHS-3次之，而YHS-1親緣關(guān)系較遠(yuǎn).田間數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，與另外2個(gè)品種相比，YHS-2具有花多且密，花期短以及塊莖產(chǎn)量高的優(yōu)良生產(chǎn)性狀.建立6種芐基異喹啉型生物堿的快速檢測方法分析3個(gè)品種中生物堿的含量.結(jié)果顯示，YHS-2中各生物堿的含量顯著優(yōu)于YHS-1和YHS-3（plt;0.05）.表明3個(gè)品種中YHS-2更為適合浙江地區(qū)的生存環(huán)境，可作為目前延胡索浙江栽培的優(yōu)質(zhì)品種推廣種植和使用.

延胡索; 基因條形碼; 田間性狀; 生物堿含量

Q948

A

0779-07

06.007

延胡索又名元胡、玄胡等，是我國傳統(tǒng)藥材中常用大宗藥材之一.由于藥用歷史悠久、各地用藥習(xí)慣不同，目前有超過15種延胡索類植物的球莖在不同地區(qū)作為延胡索藥材使用，品種較為混亂[1].藥材使用的混亂對(duì)藥物使用的安全性及有效性埋下巨大隱患.因此，自2020版《中華人民共和國藥典》起將正品延胡索藥材規(guī)定為罌粟科紫堇屬多年生草本植物延胡索Corydalis Yanhusuo W. T. Wang（NCBI編號(hào)MH260617.1和MH260618.1）的干燥塊莖[2].據(jù)《本草綱目》記載，延胡索能行血中氣滯，氣中血滯，專治一身上下諸痛，具有活血、行氣、止痛之功效[3].在我國及東亞等地，延胡索被廣泛用于治療胸脅、脘腹疼痛、經(jīng)閉通經(jīng)、產(chǎn)后瘀阻、跌撲腫痛等疾病[3-7].現(xiàn)代藥理和藥效分析表明：延胡索的主要藥用成分為芐基異喹啉型生物堿，包括延胡索乙素、延胡索甲素、四氫小檗堿等成分，具有潛在的抗腫瘤、抗心肌缺氧缺血、抗炎、抗腫瘤、抑制血小板聚集、鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜安眠等作用[8-11].

延胡索多生于蔭蔽、潮濕的山林等地，喜溫暖濕潤氣候，怕干旱＼，畏強(qiáng)光＼，能耐寒，因其適應(yīng)性強(qiáng)、栽培周期短等特點(diǎn)，全國產(chǎn)地分布廣泛，在我國南方和北方皆有種植[12-15].目前延胡索的主要種植區(qū)有浙江、安徽、陜西及三峽庫區(qū)等地[12].而浙江省因氣候和地理等因素一直是延胡索的主要道地產(chǎn)區(qū)，浙江產(chǎn)的延胡索與白術(shù)、白芍、浙貝母、杭白菊、玄參、筧麥冬、溫郁金并稱“浙八味”.目前市場上流通的延胡索大多數(shù)以人工無性繁殖（塊莖繁殖）的種植方式為主，且農(nóng)戶多為自家留種，種質(zhì)資源混亂，藥材質(zhì)量良莠不齊[12].因此，規(guī)范延胡索的種植品種，選取優(yōu)質(zhì)的延胡索品種，對(duì)延胡索的中藥材產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有極其重要的意義[1].

本實(shí)驗(yàn)以浙江地區(qū)的常用品種浙胡1號(hào)（YHS-1）、浙胡2號(hào)（YHS-2）以及隨機(jī)從農(nóng)戶手中收集延胡索3號(hào)（YHS-3）進(jìn)行基因條形碼基源鑒定和田間實(shí)驗(yàn)，觀察延胡索遺傳背景、田間生產(chǎn)形狀和藥效成分含量分析，為獲得浙江產(chǎn)區(qū)的優(yōu)質(zhì)延胡索種質(zhì)資源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試品種：浙胡1號(hào)，源于地方品種，2007年通過浙江省認(rèn)定［審定編號(hào)：浙認(rèn)藥2007002］;浙胡2號(hào)，來源于本地種變異株，2015年通過浙江省審定［審定編號(hào)：浙（非）審藥2014001］;延胡索3號(hào)，農(nóng)戶自保品種.

對(duì)照品：非洲防己堿（成都普思生物科技股份有限公司，CAS：3621-36-1）、鹽酸巴馬?。ㄔ慈~生物，CAS：10605-02-4）、脫氫紫堇堿（成都普思生物科技股份有限公司，CAS：30045-16-0）、延胡索乙素（成都普思生物科技股份有限公司，CAS：2934-97-6）、四氫小檗堿（源葉生物，CAS：522-97-4）、延胡索甲素（成都普思生物科技股份有限公司，CAS：518-69-4）純度≥98%.乙腈為色譜級(jí);水為超純水.DNA聚合酶（美國APE×BIO，編號(hào)：K103445133F073）、CTAB提取液（北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，編號(hào)：NEP044）、DNA抽提液Ⅱ（北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，編號(hào)：NEP040）.

1.2 方法

1.2.1 3種延胡索DNA的提取

延胡索的基因提取采用CTAB法提取DNA.取延胡索塊莖，粉碎機(jī)粉碎，稱取約0.5 g粉末.將粉末移入1.5 mL離心管，加入800 μL CTAB（65 ℃預(yù)熱）分離緩沖液，上下顛倒離心管，混合均勻.將盛有樣品的離心管置于65 ℃水浴中保溫1 h，其間每隔3～4 min輕搖混勻.12 000 r/min離心5 min，將上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中.加入等體積的苯酚∶氯仿∶異戊醇（體積比25∶24∶1），上下顛倒離心管，混合均勻;低溫12 000 r/min離心5 min，將上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中.加入2/3倍體積的異戊醇，輕輕混勻，置于-20 ℃沉淀30 min.加500 μL體積分?jǐn)?shù)75%無水乙醇清洗DNA，12 000 r/min離心5 min去上清，沉淀盡量干燥.加入適量的DEPC-Water（20～50 μL）溶解沉淀.取適量基因組DNA樣品，電泳檢測.

1.2.2 基因條形碼ITS2序列基因的PCR擴(kuò)增

反應(yīng)體系：模板DNA1 μL，2×PCR Mixture 25 μL，上游引物2 μL，下游引物2 μL，無菌水20 μL.正向引物ITS2F：5′-ATG CGA TAC TTG GTG TGA AT-3′.反向引物ITS2R：5′-GAC GCT TCT CCA GAC TAC AAT-3′.PCR反應(yīng)條件：95 ℃，5 min（95 ℃，30 s;50 ℃，30 s;72 ℃，90 s）循環(huán)30次;72 ℃，10 min.反應(yīng)體系一共50 μL，置于200 μL PCR管中，混勻離心，進(jìn)行PCR反應(yīng).反應(yīng)結(jié)束后，立即進(jìn)行瓊脂糖凝膠（質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%）電泳，根據(jù)電泳結(jié)果，將PCR條帶位置正確的樣品，送擎科基因測序公司測序.

1.2.3 序列鑒別及基源鑒定

根據(jù)測序結(jié)果獲得ITS2序列基因，并與NCBI數(shù)據(jù)庫的延胡索（Corydalis Yanhusuo W. T. Wang）序列進(jìn)行對(duì)比，利用mega軟件進(jìn)行進(jìn)化關(guān)系分析.

1.2.4 "3種延胡索的種植和大田實(shí)驗(yàn)觀察

2020年10月8日將3種延胡索（YHS-1、YHS-2和YHS-3）播種于浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)田，觀察3個(gè)品種的出芽和開花情況，并于2021年5月15日進(jìn)行采收烘干，并統(tǒng)計(jì)塊莖直徑、單位畝產(chǎn)量.

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

稱取非洲防己堿0.003 4 g;鹽酸巴馬汀0.007 8 g;脫氫紫堇堿0.005 1 g;四氫小檗堿0.007 6 g;延胡索甲素0.002 6 g;延胡索乙素0.001 5 g;一起混合加入10 mL容量瓶中定容，搖勻，得混合對(duì)照品溶液，再依次逐級(jí)稀釋.

1.2.6 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈（A）-體積分?jǐn)?shù)0.1%磷酸水溶液（B）（三乙胺調(diào)節(jié)pH=6.03），梯度洗脫條件（0～16 min，體積分?jǐn)?shù)24%～29%（A）;16～40 min，體積分?jǐn)?shù)29%～70%（A））;體積流量1.0 mL/min;柱溫35 ℃;檢測波長280 nm;進(jìn)樣量20 μL.

1.2.7 延胡索藥效成分的提取

根據(jù)藥典方法[2]，3種延胡索的干燥跨境粉碎機(jī)粉碎，過3號(hào)篩，稱取約0.5 g，精密稱定于平底燒瓶中，精密加入濃氨試液∶甲醇體積比1∶20混合溶液50 mL，稱定質(zhì)量，冷浸1 h后加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用濃氨試液∶甲醇體積比1∶20混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過.精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，過膜，即得.

1.2.83種延胡索6種生物堿含量測定

線性關(guān)系：稱取非洲防己堿0.003 4 g;鹽酸巴馬汀0.007 8 g;脫氫紫堇堿0.005 1 g;四氫小檗堿0.007 6 g;延胡索甲素0.002 6 g;延胡索乙素0.001 5 g;溶解在10 mL容量瓶中，定容到10 mL，按等級(jí)逐級(jí)稀釋得到7個(gè)質(zhì)量濃度梯度的對(duì)照品，依次進(jìn)行上樣，得到其峰面積，進(jìn)而算出線性關(guān)系.

精密度實(shí)驗(yàn)：取同一份對(duì)照品（混合液），連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，得到6種生物堿的峰面積，進(jìn)行精密度計(jì)算.

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：將供試品溶液置于室溫下放置，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣6次，測得鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素峰面積，進(jìn)行穩(wěn)定性計(jì)算.

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取3種延胡索樣品各6份，制備成供試品，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測得各自的峰面積，并進(jìn)行重復(fù)性計(jì)算.

加樣回收率：精密稱取已測定含量的延胡索樣品0.5 g，每種各3份，依次加入“1.2.5”的對(duì)照品溶液中，制備加樣回收率的供試品溶液，按照“1.2.6”的條件進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算加樣回收率.

2 結(jié)果與分析

2.1 3種延胡索基源鑒定和進(jìn)化關(guān)系

利用CTAB法提出的3種延胡索的DNA，通過ITS2基因條形碼引物進(jìn)行PCR反應(yīng)擴(kuò)增，并進(jìn)行質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：擴(kuò)增獲得目的ITS2基因序列的大小在500 bp左右（圖1A）.將擴(kuò)增的ITS2序列進(jìn)行DNA測序，并于延胡索Corydalis Yanhusuo（MH260617.1和MH260618.1）進(jìn)行對(duì)比和進(jìn)化樹分析，結(jié)果顯示：YHS-2與該延胡索基因序列有93%的基因序列相同，進(jìn)化親緣關(guān)系較為接近;而YHS-1和YHS-3與該延胡索基因序列的進(jìn)化親緣關(guān)系疏遠(yuǎn)（圖1B）.

2.2 3種延胡索的田間生產(chǎn)數(shù)據(jù)

經(jīng)延胡索種植田間數(shù)據(jù)收集顯示：3種延胡索種植后在2個(gè)半月左右的時(shí)間均見新葉，但3個(gè)品種的開花時(shí)間和花期不同.其中YHS-1的開花期較早，并且花期較長約38 d;YHS-2的開花時(shí)間比YHS-1晚，但花期最短僅約15 d;而YHS-3的開花時(shí)間最晚，花期約18 d（表1）.同時(shí)發(fā)現(xiàn)：YHS-1的地上部分和花均較小，YHS-2的地上部分中等但花較為茂盛，而YHS-3的地上部分較為茂盛（圖2A和B）.3種延胡索塊莖的產(chǎn)量結(jié)果顯示：YHS-2的橫截面最大，約為1.38 cm2，產(chǎn)量最高，單顆質(zhì)量約1.005 g，YHS-3的橫截面次之，約為1.19 cm2，但產(chǎn)量最低，單顆質(zhì)量約0.836 g，而YHS-1的橫截面最低，約為1.14 cm2，單顆質(zhì)量約0.870 g;同時(shí)YHS-1與YHS-2的橫截面具有極顯著性的差異（plt;0.05），而YHS-3與YHS-2的橫截面無顯著差異（表2）.但3個(gè)品種干燥后的單顆質(zhì)量差異不顯著（表1＼，表2和圖2C）.

2.3 HPLC色譜分析

通過“1.2.6”色譜條件進(jìn)行液相分析，獲得了1-非洲防己堿、2-鹽酸巴馬汀、3-脫氫紫堇堿、4-四氫小檗堿、5-延胡索甲素和6-延胡索乙素6種混合標(biāo)準(zhǔn)品較好的分離結(jié)果（圖3A）.同時(shí)對(duì)YHS-1、YHS-2和YHS-3提取物的6種物質(zhì)分離效果也較為理想（圖3B～D）.

2.4 精密度試驗(yàn)

取同一份對(duì)照品，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，測得鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素峰面積RSD分別為0.77%、0.31%、0.96%、0.93%、0.46%、0.34%.表明儀器精密度良好.

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將供試品溶液置于室溫下放置，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣6次，測得鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素峰面積RSD分別為0.68%、1.01%、1.77%、1.78%、1.72%、1.54%.表明供試品溶液穩(wěn)定性在24 h內(nèi)良好.

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取3種延胡索樣品各6份，制備成供試品，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得YHS-1中鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素峰面積RSD分別為2.12%、0.60%、2.81%、1.34%、1.68%、2.68%;YHS-2中鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素峰面積RSD分別為1.32%、0.73%、1.67%、1.20%、0.54%、0.72%;YHS-3中鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素峰面積RSD分別為0.85%、1.63%、2.00%、1.33%、1.81%、1.76%.表明該條件下的供試品溶液重復(fù)性良好.

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已測定的含量的延胡索樣品0.5 g，每種各3份，依次加入“1.3.5”的對(duì)照品溶液中，制備加樣回收率的供試品溶液，按照“1.2.6”的條件進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率.YHS-1中鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素的平均回收率為97.03%、97.87%、96.63%、98.93%、101.27%、96.97%，RSD分別為1.47%、1.51%、0.61%、2.83%、1.87%、1.40%;YHS-2中鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素的平均回收率為99.30%、97.83%、98.70%、97.90%、98.03%、97.70%，RSD分別為1.22%、1.02%、0.59%、1.28%、1.60%、0.90%;YHS-3中鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素的平均回收率為97.93%、98.20%、99.10%、95.90%、96.73%、99.57%;RSD分別為1.21%、1.50%、0.22%、0.92%、1.60%、0.20%.

2.8 線性關(guān)系考察

稱取非洲防己堿0.003 4 g;鹽酸巴馬汀0.007 8 g;脫氫紫堇堿0.005 1 g;四氫小檗堿0.007 6 g;延胡索甲素0.002 6 g;延胡索乙素0.001 5 g;溶解在10 mL的容量瓶中，定容到10 mL，按等級(jí)逐級(jí)稀釋得到7個(gè)質(zhì)量濃度梯度的對(duì)照品.按“1.3.6”的條件進(jìn)樣.以對(duì)照品峰面積作為縱坐標(biāo)（y），質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)（x）進(jìn)行回歸，結(jié)果顯示6種成分的線性系數(shù)均達(dá)到0.999，實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性良好（表3）.

2.9 樣品含量測定

取3份延胡索各0.5 g，按照“1.2.5”的條件制備供試品溶液，按照“1.2.6”的條件進(jìn)樣，用外標(biāo)法計(jì)算3個(gè)延胡索品種樣品中鹽酸巴馬汀、四氫小檗堿、脫氫紫堇堿、非洲防己堿、延胡索甲素、延胡索乙素的含量，結(jié)果顯示非洲防己堿、鹽酸巴馬汀、脫氫紫堇堿、延胡索甲素、延胡索乙素和四氫小檗堿均在YHS-2中含量最高（表4），并且YHS-1/YHS-2和YHS-3/YHS-2的含量均具有顯著性差異（plt;0.05）.

3 討論

中藥的質(zhì)量是保證臨床應(yīng)用安全有效的前提，但由于中藥的基源復(fù)雜、產(chǎn)地和種植方式的不同，其不同批次存在顯著的藥效差異[16].此外，中藥的加工炮制過程也會(huì)因中藥材有效成分的減少與流失，造成質(zhì)量與藥效的差異，如藥材的粉碎、貯藏條件、包裝材料等[17-18].隨著近些年來中藥材及飲片的研究不斷深入，其質(zhì)量水平2013—2021年呈現(xiàn)穩(wěn)步上升的趨勢[19].但同時(shí)不能忽視在中藥材生產(chǎn)過程中存在的明顯不足，其中一方面是資源環(huán)境的破壞導(dǎo)致部分中藥材資源的流失;另一方面是在中藥材生產(chǎn)中高合格率的趨勢下中藥整體質(zhì)量的下降[20].因此挑選高質(zhì)量中藥材原料是中藥材及飲片制作過程中最為關(guān)鍵的一步.

延胡索是傳統(tǒng)藥材中常用藥材之一，其主要藥用成分芐基異喹啉型生物堿，具有潛在的抗腫瘤、抗心肌缺氧缺血、抗炎、抗腫瘤、抑制血小板聚集、鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜安眠等作用[8-11].延胡索類藥材種類豐富、分布廣、產(chǎn)地多，各地生態(tài)習(xí)性有所不同，不同品種、同一品種不同產(chǎn)地藥材在化學(xué)成分上比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[21-25].在實(shí)際生產(chǎn)中又多采用自繁自種，種質(zhì)退化嚴(yán)重，導(dǎo)致產(chǎn)量不穩(wěn)定、質(zhì)量參次不齊等問題[12].本研究利用基因條形碼ITS2序列[26-27]，對(duì)浙江省的3個(gè)延胡索品種：YHS-1、YHS-2和YHS-3進(jìn)行延胡索的基源鑒定后發(fā)現(xiàn)：YHS-2與延胡索（MH260617.1和MH260618.1）親緣關(guān)系較近.同時(shí)通過田間數(shù)據(jù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)YHS-2的各方面生產(chǎn)性狀在3種延胡索中最為突出.這可能與YHS-2為浙江省培育的適合浙江地域條件的延胡索的變異株有關(guān)[28].同時(shí)建立了可在40 min內(nèi)檢測延胡索中6種芐基異喹啉型生物堿的快速高效液相的方法，較之前已報(bào)道的檢測方法（平均檢測時(shí)間在50 min以上）明顯縮短檢測時(shí)間[29-33].本實(shí)驗(yàn)利用該法對(duì)3種延胡索品種中具有潛在藥用價(jià)值的6種生物堿含量進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)YHS-2的各生物堿的含量，顯著高于YHS-1和YHS-3.因此，從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，浙江省認(rèn)定的浙胡2號(hào)（YHS-2）可能因突變原因適合浙江地區(qū)的生長環(huán)境，可作為目前延胡索浙江栽培的優(yōu)質(zhì)品種進(jìn)行推廣和使用.但本實(shí)驗(yàn)僅選取了3種延胡索品種進(jìn)行了生物堿含量的測定，是否存在有比YHS-2更優(yōu)質(zhì)的延胡索品種仍需后續(xù)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步推動(dòng)浙江延胡索作為中藥材產(chǎn)品的質(zhì)量提升.

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Study on Character and Alkaloid Content for High-quality Varieties

of Rhizoma Corydalis in Zhejiang Province

DONG Liyao1， LI Qun1， LI Jiacheng1， ZHAO Xinyun1， ZOU Hongling1， MA Huanyan2，CHEN Lin3， LI Mingqian4， ZHU Yongqiang4， WANG Shufang1

（1. School of Life Science， Sichuan Normal University， Chengdu 610101， Sichuan;

2. Zhejiang Agricultural Technology Extension Center， Hangzhou 310020， Zhejiang;

3. Sericultural Research Institute， Zhejiang Academy of Agricultural Sciences， Hangzhou 310021， Zhejiang;

4. Cancer Institute， Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine， Hangzhou 310012， Zhejiang）

Corydalis Yanhusuo is one of the most commonly used popular medicinal materials in traditional Chinese medicine， with many producing areas and strong adaptability， among which Zhejiang Province is one of its primary areas. Self-seed and vegetative propagation in the production of C. Yanhusuo are prone to germplasm degradation， resulting in uneven yield and quality. In this study， the technique of gene bar code ITS2 sequence detection， field character recording and high-performance liquid chromatography were utilized to provide original identification， field character and main benzyl isoquinoline alkaloids content analysis for three principal C. Yanhusuo species from Zhejiang Province， including Zhejiang Hu 1 （YHS-1）， Zhejiang Hu 2 （YHS-2） and Corydalis 3 （farmers’ self-preservation varieties， YHS-3） were conducted， so as to screen the excellent varieties of C. Yanhusuo in Zhejiang area. Results of original identification showed that YHS-2 is close to the reported relatives of Wang et al.， and YHS-3 is second， while YHS-1 is distant. Field data revealed that compared with the other two varieties， YHS-2 had more flowers， shorter flowering period and higher tuber yield. A rapid assay method for 6 benzyl isoquinoline alkaloids was established to analyze the content of alkaloids in the three varieties. The findings reflected that the content of alkaloids in YHS-2 was significantly superior to that in YHS-1 and YHS-3（plt;0.05）. It is concluded that YHS-2 was more suitable for the living environment of Zhejiang area， and could be widely used as the high-quality varieties cultivated in Zhejiang province.

Rhizoma Corydalis; gene barcoding; field characters; alkaloid content

（編輯 周 ?。?/p>