摘要：目的"探討miR-125b促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的分子機(jī)制。方法"應(yīng)用qRT-PCR檢測(cè)miR-125b在胃癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)；胃癌細(xì)胞在上調(diào)或下調(diào)miR-125b時(shí)，Western blotting檢測(cè)DKK3和SERPINA4的蛋白表達(dá)，雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-125b能否與DKK3、SERPINA4靶向結(jié)合，MKN45細(xì)胞共轉(zhuǎn)染miR-125b抑制物和靶基因siRNA，用遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)觀察miR-125b能否通過DKK3、SERPINA4調(diào)節(jié)MKN45細(xì)胞的生物學(xué)功能，并觀察EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)；進(jìn)一步通過慢病毒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞上調(diào)或下調(diào)血清反應(yīng)因子（SRF）表達(dá)并經(jīng)尾靜脈注射裸鼠后觀察體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中肺轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)目，探討SRF對(duì)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響。"結(jié)果""qRT-PCR結(jié)果顯示miR-125b在胃癌組織的表達(dá)上調(diào)，且與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)顯示DKK3和SERPINA4是miR-125b在胃癌細(xì)胞中的直接靶點(diǎn)，并激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Twist1和Slug的轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)EMT的發(fā)生，促進(jìn)胃癌轉(zhuǎn)移。體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子SRF通過正向調(diào)節(jié)miR-125b的表達(dá)促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。結(jié)論"SRF/miR-125b軸促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的EMT和轉(zhuǎn)移，這些調(diào)節(jié)因子有望成為胃癌新的潛在治療靶點(diǎn)或生物標(biāo)志物。

關(guān)鍵詞：胃癌；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）；轉(zhuǎn)移；miR-125b；Wnt/β-catenin

中圖分類號(hào)：R735.2""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.7652/jdyxb202405004

miR-125b promotes EMT and metastasis via Wnt/β-catenin

signaling pathway in human gastric cancer

CHANG Shuai， ZHAO Yao， LI Shunle， ZHANG Di， ZHANG Li， ZHAI Hongjun， JI Hong

（Department of General Surgery， The Second Affiliated Hospital of

Xi’an Jiaotong University， Xi’an 710004， China）

ABSTRACT： Objective"To explore the molecular mechanism of miR-125b promoting invasion， metastasis and epithelial-mesenchymal transition （EMT） of gastric cancer cells. Methods"The expression of miR-125b in gastric cancer and its adjacent tissues was studied by qRT-PCR. After upregulating or downregulating miR-125b in gastric cancer cells， the protein expressions of DKK3 and SERPINA4 were detected by Western blotting. Dual luciferase reporting assay was used to verify whether miR-125b can target DKK3 and SERPINA4. MKN45 cells were co-transfected with miR-125b inhibitor and target gene siRNA. Migration and invasion experiments were conducted to explore whether miR-125b can regulate the biological function of MKN45 cells through DKK3 and SERPINA4. Then， the regulatory mechanism of SRF on miR-125b was investigated. Finally， by in vivo experiments， the expression of SRF in gastric cancer cells was upregulated or downregulated by lentivirus transfection; the number of lung metastases in nude mice was detected to explore the effect of SRF on gastric cancer cell metastasis. Results"In this study， the expression of miR-125b increased in gastric cancer tissues， which was correlated with clinical stage and lymph node metastasis. Dual luciferase reporting experiments showed that DKK3 and SERPINA4 were the direct targets of miR-125b in gastric cancer cells， and could activate the Wnt/β-catenin signaling pathway， thereby promoting the transcription process of EMT-related transcription factors Twist1 and Slug， inducing the occurrence of EMT， and promoting the metastasis of gastric cancer. In vitro and in vivo experiments confirmed that SRF promoted the invasion and metastasis of gastric cancer cells by positively regulating the expression of miR-125b. Conclusion"Taken together， SRF/miR-125b axis promotes the EMT and metastasis of gastric cancer cells， and these regulators represent new potential therapeutic targets or biomarkers for gastric cancer.

KEY WORDS： gastric cancer; epithelial-mesenchymal transition （EMT）; metastasis; miR-125b; Wnt/β-catenin

胃癌是全球癌癥相關(guān)死亡的一個(gè)重要原因，而轉(zhuǎn)移是胃癌最主要的死因""［1］"。轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的、多步驟過程，原發(fā)腫瘤細(xì)胞需要經(jīng)過包括局部侵襲、內(nèi)滲、通過脈管系統(tǒng)移位、外滲和再生等一系列連續(xù)的過程，才能發(fā)生轉(zhuǎn)移""［2］"。最初的轉(zhuǎn)移級(jí)聯(lián)階段取決于被稱為上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition， EMT）的重要生物學(xué)事件，其特征是特定的形態(tài)發(fā)生改變、細(xì)胞-細(xì)胞黏附喪失和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)""［3］"。但是迄今為止，胃癌轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制尚未完全闡明。

microRNAs（miR）是一類小細(xì)胞RNA，通過結(jié)合靶向mRNA的3′非翻譯區(qū)（3′UTR）導(dǎo)致靶向mRNA降解或抑制其翻譯。本課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-125b在胃癌細(xì)胞和組織中高表達(dá)，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-125b可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移""［4］"。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miR-125b的胃癌細(xì)胞形態(tài)由緊密連接的“鋪路石”多邊形形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚⒌募忓N形形態(tài)，類似于EMT過程。然而，在胃癌中miR-125b的上游調(diào)控機(jī)制及如何調(diào)控下游靶基因的功能，還有待進(jìn)一步研究。因此，本研究通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究血清反應(yīng)因子（SRF）/miR-125b軸調(diào)控胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制，為研究胃癌轉(zhuǎn)移提供一種新思路，并為胃癌臨床治療的有效靶點(diǎn)提供數(shù)據(jù)支持和參考。

1"材料與方法

1.1"組織樣本

對(duì)2017年1月-2019年12月在西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院普外科行胃癌手術(shù)的210例患者的癌組織及其對(duì)應(yīng)的癌旁組織進(jìn)行取材，立即用液氮冷凍，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩１狙芯恳勋@得西安交通大學(xué)臨床研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署了使用樣本的知情同意書。

1.2"細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

人胃癌細(xì)胞株SGC7901、AGS、MGC803、BGC823、MKN45、永生上皮細(xì)胞株GES-1和HEK293T購自中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞資源中心。用RPMI1640 （GES-1、SGC7901、MKN28、MKN45、MGC803）或DMEM （HEK293T）培養(yǎng)基，添加100 mL/L胎牛血清（"GIBCO"， Carlsbad， CA， USA），在含50 mL/L CO2 37 ℃恒溫細(xì)胞孵箱進(jìn)行培養(yǎng)后進(jìn)行相關(guān)"檢測(cè)。

miR-125b-mimic、mimic-NC、miR-125b-inhibitor、inhibitor NC、si-DKK3、si-SERPINA4、siRNA-NC、si-SRF、SRF過表達(dá)質(zhì)粒購于上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司。根據(jù)參考說明書使用Lipofectamine3000 （Invitrogen英杰公司，美國(guó)）轉(zhuǎn)染模擬物（mimic）、抑制劑（inhibitor）、質(zhì)粒、小干擾RNA （siRNA）和各自陰性對(duì)照至各組細(xì)胞中。

1.3"熒光實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）

使用TRIzol試劑（Invitrogen， Carlsbad， CA， USA），根據(jù)生產(chǎn)商的說明書提取組織樣品和胃癌細(xì)胞SGC7901或MKN45中的總RNA。第一鏈cDNA的合成使用the RevertAid first-strand cDNA synthesis kit （Thermo Fisher Scientific Inc.， Rockford， IL， USA），在Bio-Rad CFX-96實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)上進(jìn)行qRT-PCR。其中miRNA檢測(cè)以U6作為內(nèi)對(duì)照，mRNA檢測(cè)以GAPDH作為內(nèi)對(duì)照。引物序列為：GAPDH正向5′-GACTCATGACCACAGTCCAT GC-3′，反向5′-AGAGGCAGGGATGATGTTCTG-3′；SRF正向5′-GTTCATCGACAACAAGCTGC-3′，反向5′-CTGTCAGCGTGGACAGCTCATAG-3′；DKK3正向5′-CTGGGAGCTAGAGCCTGATG-3′，反向5′-TCATACTCATCGGGGACCTC-3′；SERPINA4正向5′-GTGGGCACAATCCAGCTTAT-3′，反向5′-ACCCGGACTGTTGTGTTCTC-3′。內(nèi)參U6引物序列由試劑公司提供。反應(yīng)條件：94 ℃ 3 min，34個(gè)循環(huán)，94 ℃ 15 s，60 ℃ 55 s，72 ℃ 30 s。結(jié)果用2""-ΔΔCt"值比較對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的目的基因相對(duì)表達(dá)差異。

1.4"Western blotting 實(shí)驗(yàn)

裂解細(xì)胞提取總蛋白，蛋白定量試劑盒（BCA法）測(cè)定蛋白濃度。每孔上樣40 mg，SDS-PAGE電泳后將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene difluoride，PVDF）膜。室溫50 g/L脫脂牛奶封閉2 h，DKK3、SERPINA4、Slug、Vimentin、E-cadherin、"β-catenin兔"單克隆抗體（1∶1 000，Abcam，英國(guó)）和SRF、Twist1鼠單克隆抗體（1∶1 000，Abcam，英國(guó)）4 ℃孵育過夜，用1×TBST溶液在室溫下洗膜"5 min"，沖洗3次。辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗山羊抗兔IgG （1∶5 000，Abcam，英國(guó)）孵育2 h，ECL化學(xué)發(fā)光，拍照觀察。

1.5"細(xì)胞遷移和侵襲試驗(yàn)

進(jìn)行遷移實(shí)驗(yàn)時(shí)，將5×10""4""SGC7901或MKN45細(xì)胞鋪于上層小室（24孔插入；孔徑8 μm；康寧公司）。進(jìn)行侵襲試驗(yàn)時(shí)，將1.5×10""5""SGC7901或MKN45細(xì)胞鋪于上層小室。在這兩種實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞都鋪于不含血清的上層小室中，并在下層小室中使用含100 mL/L血清的培養(yǎng)基。孵育24 h（遷移試驗(yàn)）或48 h（侵襲試驗(yàn)）后，用棉簽去除未通過小孔遷移或侵襲的細(xì)胞。40 g/L多聚甲醛固定，1 g/L結(jié)晶紫染色，隨機(jī)選取5個(gè)視野分別計(jì)數(shù)取平均值。

1.6"雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)

轉(zhuǎn)染前 1 d將HEK293T細(xì)胞接種于24孔板中，每孔5×10""4"細(xì)胞。用X-tremeGENE siRNA轉(zhuǎn)染試劑（Roche Molecular Biochemicals， Indianapolis， IN， USA）將含有DKK3或SERPINA4野生型或突變3′UTR的500 ng pmiR-RB-ReportTM （"RiboBio""Co， Ltd， Guangzhou， China）和50～100 nmol/L miR-125b模擬物或模擬對(duì)照物的混合物共轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48 h，使用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)（Promega， Madison， WI， USA）檢測(cè)熒光素酶活性。以螢火蟲熒光素酶活性為內(nèi)參。

1.7"慢病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)或下調(diào)胃癌細(xì)胞中SRF表達(dá)

含有SRF DNA序列（LV-SRF）、SRF siRNA （LV-shSRF）和陰性對(duì)照（LV-control）的慢病毒產(chǎn)品購自吉?jiǎng)P基因 （GeneChem Co.，Ltd，上海， 中國(guó)）。按照生產(chǎn)商說明書，用產(chǎn)品加5 μg/mL聚苯乙烯（Sigma-Aldrich， St. Louis， USA）轉(zhuǎn)染細(xì)胞（LV-SRF轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞，LV-shSRF轉(zhuǎn)染MKN45細(xì)胞）。通過熒光激活細(xì)胞分選（FACS）分析確定，GFP+細(xì)胞占感染細(xì)胞的90%以上。

1.8"體內(nèi)轉(zhuǎn)移試驗(yàn)及組織病理觀察

將獲得的慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞（LV-SRF轉(zhuǎn)染的SGC7901細(xì)胞、LV-shSRF轉(zhuǎn)染的MKN45細(xì)胞）經(jīng)尾靜脈注射裸鼠（BALB/c-nu/nu，每組5只，每只小鼠2×10""6"細(xì)胞），5周后，處死小鼠，熒光顯微鏡檢測(cè)裸鼠肺熒光強(qiáng)度，并對(duì)肺組織進(jìn)行HE染色，統(tǒng)計(jì)肺轉(zhuǎn)移數(shù)目。所有涉及動(dòng)物的研究均遵守上海市醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)委員會(huì)批準(zhǔn)的方案。

1.9"應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)（iTRAQ）檢測(cè)過表達(dá)miR-125b的SGC7901細(xì)胞的差異表達(dá)蛋白

收集過表達(dá)miR-125b的SGC7901細(xì)胞（由公司制作提供）加入適量蛋白裂解液SDT，沸水浴15 min。離心15 min，取上清。采用BCA法進(jìn)行蛋白定量。分裝樣品，-80 ℃保存。對(duì)照組和過表達(dá)miR-125b組蛋白經(jīng)過SDS-PAGE電泳、FASP酶解、iTRAQ標(biāo)記等步驟后進(jìn)行質(zhì)譜分析，并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。該部分實(shí)驗(yàn)由吉?jiǎng)P基因（GeneChem Co.，Ltd， 上海， 中國(guó)）協(xié)助完成。

1.10"統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)涉及數(shù)據(jù)均采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示計(jì)量資料，比較采用t檢驗(yàn)；卡方（χ""2""）檢驗(yàn)分析計(jì)數(shù)資料；采用Spearman檢驗(yàn)SRF與miR-125b的相關(guān)性。每種實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，采用雙側(cè)檢驗(yàn)，Plt;0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2"結(jié)""果

2.1"miR-125b在胃癌組織的表達(dá)上調(diào)且與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)

qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與癌旁組織相比，miR-125b在胃癌組織中明顯上調(diào)（圖1，Plt;0.000 1）。而且，miR-125b在TNM分期較晚（Ⅲ期和Ⅳ期）胃癌組織中的表達(dá)高于TNM分期較早胃癌組織（Ⅰ期和Ⅱ期）（P=0.002 3），在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌中miR-125b的表達(dá)明顯上調(diào)（P=0.000 4，表1），這表明miR-125b可能在胃癌進(jìn)展中有非常重要的作用。

2.2"DKK3和SERPINA4是miR-125b在胃癌細(xì)胞中的直接靶點(diǎn)

本課題組前期的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-125b能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲""［4］"。為了尋找下游靶基因，應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定過表達(dá)miR-125b的SGC7901細(xì)胞中的差異表達(dá)蛋白，結(jié)果顯示W(wǎng)nt/β-catenin信號(hào)通路中負(fù)調(diào)控因子DKK3和SERPINA4的表達(dá)顯著降低（圖2A）；結(jié)合TargetScan、PicTar等miRNA靶基因預(yù)測(cè)程序，DKK3和SERPINA4可能是miR-125b的下游靶基因（圖2B）。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，過表達(dá)miR-125b明顯降低SGC7901細(xì)胞中DKK3和SERPINA4蛋白表達(dá)，而抑制miR-125b的表達(dá)增加了MKN45細(xì)胞中DKK3和SERPINA4蛋白表達(dá)（圖2C）。隨后的雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)，DKK3和SERPINA4是miR-125b的靶基因（圖2D）。為了進(jìn)一步證實(shí)DKK3和SERPINA4是否是miR-125b調(diào)控胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的原因之一，分別在MKN45細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染miR-125b-inhibitor和DKK3-siRNA或miR-125b-inhibitor和SERPINA4-siRNA，結(jié)果顯示，兩個(gè)靶基因的siRNA顯著減弱了miR-125b-inhibitor對(duì)MKN45細(xì)胞遷移和侵襲的抑制（圖3A、3B）。這些結(jié)果表明，DKK3和SERPINA4都是miR-125b的直接和功能性靶點(diǎn)。

2.3"miR-125b促進(jìn)胃癌細(xì)胞EMT及調(diào)控Wnt/"β-catenin信"號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

鏡下觀顯示過表達(dá)miR-125b的SGC7901細(xì)胞形態(tài)從緊密連接的“鋪路石”多邊形形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚⒌募忓N形形態(tài)，類似于EMT過程（圖4A）。而EMT分子標(biāo)記和相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子蛋白檢測(cè)結(jié)果顯示，過表達(dá)miR-125b的SGC7901中，E-cadherin的表達(dá)降低，vimentin和EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Twist1和Slug的表達(dá)升高（圖4B）；此外，磷酸化β-catenin表達(dá)降低，以更活躍的功能狀態(tài)存在（圖4C）?？傊@些結(jié)果提示miR-125b促進(jìn)胃癌細(xì)胞EMT并調(diào)控Wnt/"β-catenin"信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

2.4"miR-125b受轉(zhuǎn)錄因子SRF調(diào)控

在眾多與胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子中，基于以下原因?qū)RF是否能夠調(diào)控miR-125b進(jìn)行進(jìn)一步研究。①SRF血清反應(yīng)元件SRE的DNA序列為CArG盒。信息學(xué)分析顯示，哺乳動(dòng)物中近169種miRNA在其啟動(dòng)子區(qū)含有至少一個(gè)CArG元件，其中43種miRNA含有3個(gè)或更多CArG元件，miR-125b-1和miR-125b-2基因均含有CArG元件。"②越"來越多的研究表明，SRF是調(diào)控腫瘤增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的重要轉(zhuǎn)錄因子，有報(bào)道稱在心肌細(xì)胞""［5］"、非小細(xì)胞肺癌""［6］"中，SRF調(diào)控啟動(dòng)子區(qū)含有CArG元件的miRNA的表達(dá)。③在胃腸道平滑肌細(xì)胞中進(jìn)行的芯片研究數(shù)據(jù)顯示，SRF下調(diào)后miR-125b的表達(dá)下降，qRT-PCR""［7］"證實(shí)了這一結(jié)果。

SRF在胃癌臨床標(biāo)本和細(xì)胞中的表達(dá)結(jié)果顯示，SRF在胃癌組織中較癌旁組織明顯上調(diào)（圖5A），這與SRF在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)變化一致（圖5B）；Spearman分析表明，SRF和miR-125b在癌旁和胃癌組織中均呈正相關(guān)（圖5C）；然后還發(fā)現(xiàn)SRF正調(diào)控miR-125b的表達(dá)（圖5D）。上調(diào)SRF在SGC7901細(xì)胞中的表達(dá)后，細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)，下調(diào)SRF在MKN45細(xì)胞中的表達(dá)后，細(xì)胞遷移和侵襲減弱（圖5E）。進(jìn)而在SGC7901細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染SRF過表達(dá)質(zhì)粒和miR-125b-inhibitor，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-125b-inhibitor減弱了SRF過表達(dá)對(duì)SGC7901細(xì)胞遷移和侵襲的促進(jìn)作用（圖5F）。這些結(jié)果為SRF在胃癌中調(diào)控miR-125b提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。

2.5"SRF促進(jìn)胃癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移

將轉(zhuǎn)染慢病毒SRF或?qū)φ战M的SGC7901細(xì)胞通過尾靜脈植入裸鼠體內(nèi)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LV-SRF組肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的數(shù)量和大小明顯增加（圖6A、6B）。同時(shí)，注射LV-shSRF轉(zhuǎn)染的MKN45細(xì)胞后，小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的數(shù)量和大小明顯減少（圖6C、6D）。這表明SRF/miR-125b軸可以正向調(diào)節(jié)胃癌轉(zhuǎn)移。

3"討""論

miRNAs對(duì)腫瘤的影響已有廣泛研究，其作為癌基因或抑癌基因參與了腫瘤的增殖、凋亡、分化、侵襲轉(zhuǎn)移、免疫應(yīng)答等多種生物學(xué)過程""［7］"。本研究發(fā)現(xiàn)miR-125b在胃癌組織的表達(dá)明顯高于癌旁組織。研究表明，miR-125b在結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌中過表達(dá)""［8-9］"，在膀胱癌、肝癌中低表達(dá)""［10-11］"。這提示miR-125b可能在不同腫瘤中發(fā)揮作用有所不同。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-125b能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲，這初步證實(shí)miR-125b作為胃癌的致癌基因發(fā)揮作用。

多項(xiàng)研究表明，許多腫瘤早期的侵襲轉(zhuǎn)移都與EMT有關(guān)，包括肝癌、肺癌、結(jié)腸癌、胃癌等腫瘤""［12-15］"。而有關(guān)miR-125b與EMT的研究目前僅在少數(shù)腫瘤中有報(bào)道。Cancer Research發(fā)表的一項(xiàng)高通量數(shù)據(jù)揭示結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（包括mRNA、miRNAs、lncRNAs）的研究，提示miR-125b可能參與ZEB1的表達(dá)，但其具體調(diào)控機(jī)制尚未描述""［16］"。越來越多的研究表明，EMT是胃癌進(jìn)展的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素之一，在胃癌早期侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)中起著基礎(chǔ)性作用，但其確切機(jī)制尚不清楚。本研究結(jié)果表明，過表達(dá)miR-125b可以提高胃癌細(xì)胞中Vimentin、Twist1和Slug的表達(dá)，同時(shí)降低E-cadherin的表達(dá)。這提示miR-125b可能通過調(diào)控EMT影響胃癌侵襲性。

Wnt信號(hào)通路是一個(gè)非常保守的信號(hào)通路，在各種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。近期研究表明，miRNAs可通過靶向和調(diào)控Wnt通路中的信號(hào)分子，激活或抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路，影響腫瘤形成、細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和耐藥""［17］"。本研究上調(diào)胃癌細(xì)胞中miR-125b的表達(dá)并進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DKK3和SERPINA4的表達(dá)明顯降低；而后續(xù)雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)以及侵襲遷移實(shí)驗(yàn)證實(shí)，DKK3和SERPINA4是miR-125b的直接功能靶基因。這提示miR-125b可能通過靶向DKK3和SERPINA4激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路。

轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)miR-125b的表達(dá)中發(fā)揮重要作用。在一項(xiàng)急性髓系白血病研究中，轉(zhuǎn)錄因子NRF2上調(diào)miR-125b-1的表達(dá)，從而發(fā)揮抗凋亡作用""［18］"。在膠質(zhì)瘤中，轉(zhuǎn)錄因子TCF4上調(diào)miR-125b-1的表達(dá)，促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性行為""［19］"。在黑色素瘤中，TCF4正調(diào)控miR-125b-1，促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞的遷移和侵襲""［20］"。在胃癌中，miR-125b的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制至今未見報(bào)道。而SRF是一種高度保守的磷酸化DNA結(jié)合蛋白，是一種重要的細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。在乳腺癌中，SRF通過調(diào)節(jié)IL-11、長(zhǎng)鏈非編碼RNA HOTAIR的轉(zhuǎn)錄促進(jìn)細(xì)胞侵襲""［21-22］"。在肝癌中，SRF調(diào)節(jié)Myoferlin的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和侵襲""［23］"。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步證實(shí)了SRF在胃癌中與miR-125b表達(dá)相關(guān)，并且SRF正調(diào)控miR-125b的表達(dá)。然而SRF調(diào)控miR-125b的具體機(jī)制還需要進(jìn)一步探索。

綜上所述，本研究探討了miR-125b在胃癌轉(zhuǎn)移中的作用及其潛在的調(diào)控機(jī)制。因此，SRF/miR-125b軸為胃癌轉(zhuǎn)移提供了新的視角，并可能代表胃癌治療的有效靶點(diǎn)。

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（編輯"國(guó)"榮）