王思晴?祖姆熱提·阿布都克依木?李霞

【摘要】目的 探討早期生長反應(yīng)因子3（Egr3）、促炎細胞因子IL-6和TNF-α與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（CHD）的相關(guān)性。方法 收集確診CHD的患者共138例，均行冠狀動脈造影檢查，基于冠狀動脈造影結(jié)果和Gensini評分分為2組，其中輕度狹窄組66例，重度狹窄組72例，另取冠狀動脈造影結(jié)果正常的受試者47名為對照組。通過ELISA檢測受試者血清中Egr3和IL-6、TNF-α水平。收集受試者一般臨床資料，比較各組Egr3和IL-6、TNF-α水平的差異， 探討三者水平與Gensini評分之間的關(guān)系。結(jié)果 重度狹窄組患者血清中Egr3、IL-6水平高于對照組和輕度狹窄組，重度狹窄組TNF-α水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P均< 0.05）。受試者操作特征（ROC）曲線顯示，Egr3、IL-6、TNF-α曲線下面積（AUC）分別為0.769、0.784、0.565，Egr3對CHD有良好的預測價值。結(jié)論 在CHD患者中Egr3、IL-6、TNF-α明顯高表達，Egr3可作為判斷CHD患者病情嚴重程度的指標。

【關(guān)鍵詞】早期生長反應(yīng)因子3；冠狀動脈粥樣硬化性心臟病；白介素-6；腫瘤壞死因子-α；炎癥

Correlation analysis of Egr3， IL-6， TNF-α and the severity of coronary heart disease Wang Siqing， Zumureti·Abudukeyimu，Li Xia. Department of General Practice， the Fifth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Urumqi 830000， China

Corresponding author， Li Xia， E-mail： 250456230@qq.com

【Abstract】Objective To investigate the correlation between early growth response factor 3（Egr3）， pro-inflammatory cytokines IL-6 and TNF-α and coronary atherosclerotic heart disease （CHD）. Methods A total of 138 patients with confirmed CHD were collected， all of whom underwent coronary angiography and were divided into 2 groups based on the results of coronary angiography and Gensini score， including 66 patients in the mild stenosis group and 72 patients in the severe stenosis group， and 47 subjects with normal coronary angiography results were selected as the control group. Serum levels of Egr3， IL-6 and TNF-α were detected by ELISA. The general clinical data of the subjects were collected， and the differences of Egr3， IL-6 and TNF-α levels among all groups were compared to explore the relationship between the levels of EGR3 and Gensini scores. Results The serum levels of Egr3 and IL-6 in severe stenosis group were higher than those in control group and mild stenosis group， and the level of TNF-α in severe stenosis group was higher than that in control group， with statistical significance （all P < 0.05）. The subject operation characteristic （ROC） curve showed that the area under the curve （AUC） of Egr3， IL-6 and TNF-α were 0.769， 0.784 and 0.565， respectively， and Egr3 had a good predictive value for CHD. Conclusion Egr3， IL-6 and TNF-α are highly expressed in CHD patients， and Egr3 can be used as an indicator to judge the severity of CHD patients.

【Key words】Early growth factor 3； Coronary heart disease； Interleukin-6； Tumor necrosis factor-α； Inflammation

冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。–HD）是一種常見的心血管疾病，是全球非傳染性疾病中死亡的首要原因［1］。我國CHD患者已達到1139萬，CHD已成為中國人群的第2位死亡原因，給我國居民健康造成嚴重威脅［2-3］。因此，尋找影響CHD的干預靶點，對于提升CHD患者的臨床救治質(zhì)量有重要價值。在CHD的早期階段，內(nèi)皮血管平滑肌黏附分子和炎癥細胞因子例如IL-6、TNF-α表達增加，發(fā)生CHD病變的患者血管系統(tǒng)普遍處于炎癥狀態(tài)［4-5］。早期生長反應(yīng)因子3（Egr3）是一種轉(zhuǎn)錄因子，對于炎癥反應(yīng)至關(guān)重要［6］。有研究證實，敲低Egr3基因可減弱人原代內(nèi)皮細胞的生長、遷移和血管形成、單核細胞黏附和組織因子活性，Egr3基因會引起血管病理性再生、炎癥及動脈硬化［7-8］。本研究旨在評估Egr3在臨床實踐中作為CHD患者病情嚴重程度指標的實用價值。

對象與方法

一、研究對象

本研究為病例對照研究，利用PASS 12.0軟件計算樣本量，得到樣本量為120例，每組樣本至少40例。收集2022年6至12月在我院就診，表現(xiàn)為CHD癥狀的患者573例，均完善冠狀動脈造影檢查。符合CHD造影診斷標準的患者138例，根據(jù)Gensini評分的中位數(shù)（36分）和造影結(jié)果將CHD患者分成2組：輕度狹窄組（<36分，n=66）和重度狹窄組（≥36分，n=72）。另取同期冠狀動脈造影結(jié)果正常的患者為對照組，共47名。納入標準：①年齡≥18歲；②CHD的確診是經(jīng)冠狀動脈造影檢查證實冠狀動脈至少存在一支血管腔狹窄程度≥50%［9］。排除標準：①存在精神疾??；②急慢性感染；③存在嚴重瓣膜性心臟病、心肌病、心肌炎、肺源性心臟病、先天性心臟病、心源性休克等病史；④既往或現(xiàn)在有惡性腫瘤病史；⑤肝腎功能不全、近期有創(chuàng)傷、手術(shù)史；⑥血液病、自身免疫系統(tǒng)疾?。虎邔υ煊皠┻^敏者。本研究按照《赫爾辛基宣言》進行，并獲得本院醫(yī)學倫理委員會批準（批件號：XYDWFYLSH-2022-042），研究對象均簽署了知情同意書。

二、觀察指標與檢測方法

1.收集和計算患者入院后的基線資料

一般資料：性別、年齡、血壓、BMI和吸煙史。既往病史：高血壓、糖尿病。各項血液生化指標：白細胞、尿酸、尿素氮、血肌酐、空腹血糖、總膽固醇、甘油三酯、LDL、HDL、GHbAlc、脂蛋白、Egr3、IL-6、TNF-α水平。

2. Egr3、IL-6、TNF-α檢測方法

將受試者在冠狀動脈造影時，行冠狀動脈取血2 mL，室溫靜置30 min后以1 500 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液保存于-80℃ 環(huán)境下。采用ELISA方法檢測血清中炎癥細胞因子，試劑盒Egr3（貨號JL38299）、IL-6（貨號JL14113）、TNF-α（貨號JL10208）操作步驟嚴格按照（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）說明書進行；采用酶標儀（型號 K6600A，北京凱奧科技發(fā)展有限公司）在450 nm波長處測OD值。

3.冠狀動脈造影結(jié)果分析

評估冠狀動脈造影結(jié)果，將冠狀動脈分成14段，利用Gensini評分方法將狹窄程度和病變位置賦分。冠狀動脈狹窄程度賦分：冠狀動脈狹窄程度1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為4分，76%～90%為8分，91%～99%為16分，100%狹窄為32分。權(quán)重系數(shù)依據(jù)冠狀動脈病變不同位置確定：左主干×5，左前降支近段或回旋支近段×2.5，前降支中段×1.5，前降支遠段×1.0，回旋支中、遠段×1.0，右冠狀動脈、左心室后側(cè)支×1.0，鈍緣支動脈、第一對角支、心尖支×1.0，第二對角支×0.5［10］。冠狀動脈狹窄程度總分是病變位置得分乘以相應(yīng)系數(shù)，是所有病變分支得分的總和。

三、統(tǒng)計學處理

用SPSS 26.0進行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的計量資料采用表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法。非正態(tài)分布的計量資料采用M（P25，P75）表示，組間比較使用Kruskal-Wallis H秩和檢驗，兩兩比較采用Bonferroni法，調(diào)整P值為0.017（0.05/3）。計數(shù)資料以例（百分比）［n（%）］進行描述，比較采用

χ 2檢驗及Fisher確切概率法；Egr3與炎癥指標、臨床指標的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析；繪制受試者操作特征（ROC）曲線分析Egr3、IL-6和TNF-α對CHD的預測價值。P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

一、對照組、輕度狹窄組、重度狹窄組的基線資料比較

對照組、輕度狹窄組、重度狹窄組患者的一般資料和臨床資料比較，見表1。3組的高血壓史、白細胞、尿素氮、血肌酐、空腹血糖、GHbAlc、舒張壓比較差異均有統(tǒng)計學意義（P均< 0.05）。其中重度狹窄組及輕度狹窄組白細胞、GHbAlc水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P均< 0.017）。

二、對照組、輕度狹窄組、重度狹窄組血清Egr3、IL-6、TNF-α水平比較

重度狹窄組血清Egr3、IL-6、TNF-α水平高于對照組；重度狹窄組Egr3、IL-6水平高于輕度狹窄組，差異均有統(tǒng)計學意義（P均< 0.05）。見表2。

三、Egr3與炎癥指標、臨床指標的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，Egr3與Gensini評分（r=0.291，P < 0.01）、IL-6（r=0.574，P < 0.01）、TNF-α（r=0.228，P < 0.01）呈正相關(guān)。Gensini評分與IL-6（r=0.171，P < 0.05）呈正相關(guān)，與TNF-α（r=0.045，P > 0.05）無線性相關(guān)性。見圖1A～E。

四、血清Egr3、IL-6、TNF-α水平對CHD的預測價值

以CHD為因變量，分別對Egr3、IL-6、TNF-α進行ROC曲線分析。Egr3、IL-6、TNF-α預測CHD的ROC曲線下面積（AUC）見圖1F，靈敏度、特異度見表3。

討論

近年來，CHD發(fā)病率呈明顯上升趨勢，嚴重威脅人們健康。炎癥在CHD的所有階段——包括從脂肪條紋形成到心血管疾病事件的發(fā)生均有重要作用［11］。隨著患者病情加重和病程延長，其炎癥因子表達水平也明顯增加［12］。探索影響CHD炎癥的危險因素，對于評估、分析和預測患者疾病發(fā)展有重要價值。

Egr3在炎癥反應(yīng)中至關(guān)重要［13］。核因子-κB（NF-κB）對于CHD的炎癥反應(yīng)有重要作用。在CHD患者纖維化增厚的內(nèi)膜/中膜病變的區(qū)域中，能檢測到活化的NF-κB；在平滑肌細胞、巨噬細胞和內(nèi)皮細胞發(fā)生炎性反應(yīng)時存在NF-κB的激活［14］。Egr3通過參與NF-κB信號通路促進炎癥反應(yīng)［15］。抑制Egr3蛋白的激活可使炎癥因子表達下調(diào)，減緩CHD發(fā)展［16］。因此，Egr3可能成為CHD治療的一個新切入點。本研究結(jié)果顯示，3組患者血清中Egr3水平存在明顯差異，其中重度狹窄組患者血清中Egr3表達水平最高，而且Egr3與Gensini評分呈正相關(guān)。Li等［17］研究表明，Egr3基因多態(tài)性與CHD具有明顯相關(guān)性。Egr3在CHD發(fā)展中起重要作用，對CHD患者的病情評估具有一定價值。Egr3作為一種響應(yīng)促有絲分裂刺激而被誘導的立刻早期生長反應(yīng)基因，可以在多種細胞中被誘導以響應(yīng)刺激，包括壓力、缺氧、損傷、細胞因子和生長因子等刺激［18-19］。目前研究中，主要關(guān)注Egr3在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、肌肉牽張受體功能、血管生成和癌癥等方面的研究［20-21］。本研究結(jié)果提示，Egr3可能是未來臨床判斷CHD患者病情嚴重程度的一個重要生物標志物。

炎癥反應(yīng)是CHD發(fā)生和發(fā)展的驅(qū)動力，在CHD發(fā)病過程中能分泌大量炎癥細胞因子，如TNF-α、IL-6、IL-1β、基質(zhì)金屬蛋白酶-9以及趨化因子（CC基序）配體2（CCL2），加劇血管炎癥并降低斑塊穩(wěn)定性［22］。本研究中，重度狹窄組患者IL-6水平高于對照組和輕度狹窄組，重度狹窄組患者TNF-α水平高于對照組，IL-6與Gensini評分呈正相關(guān)，與前人研究結(jié)果一致。但是，目前尚未有臨床研究證實有關(guān)Egr3、炎癥細胞因子IL-6、TNF-α之間關(guān)聯(lián)的機制，關(guān)于Egr3與炎癥因子及CHD之間的相關(guān)性的前期研究仍然不足，本研究將對這一問題進行進一步探討。

在細胞水平上，Yang等［23］將細胞經(jīng)模擬體外炎性環(huán)境的脂多糖處理后，細胞中Egr3、TNF-α和IL-6水平上調(diào)，Egr3的過表達促進TNF-α、p65表達上調(diào)和NF-κB啟動子活性增加。用IL-1β或TNF-α處理原代人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞分離物，Egr3 受TNF-α刺激后被靶向上調(diào)［24］。Egr3激活有助于炎癥反應(yīng)進行，Egr3下調(diào)減輕上皮細胞的炎癥反應(yīng)，以及降低了炎癥環(huán)境刺激產(chǎn)生的IL-6、TNF-α蛋白質(zhì)水平［25］。炎癥細胞因子IL-6、IL-8、IL-1β是Egr3的相關(guān)基因 ，其啟動子中都富含Egr3結(jié)合位點［26］。本研究結(jié)果顯示，IL-6、TNF-α水平與Egr3表達水平呈正相關(guān)。ROC曲線是用于評估預測指標準確性的重要方式，ROC曲線結(jié)果顯示，Egr3、IL-6、TNF-α的AUC為0.769、0.784、0.565，靈敏度為74.6%、70.3%、93.5%，特異度為68.1%、74.5%、25.5%。Egr3作為預測CHD的檢測指標具有較好的可行性，需擴大樣本量進一步探討。

綜上所述，Egr3能作為判斷CHD嚴重程度的指標，Egr3還與炎癥指標IL-6、TNF-α具有明顯相關(guān)性，臨床中可通過檢測Egr3水平判斷CHD患者病情。檢測Egr3指標有助于指導患者及早實施相應(yīng)干預措施，對提示患者的診治有較高的應(yīng)用價值。本研究為橫斷面研究，并仍存在一些不足，需開展大樣本量分析，并對出院患者進行隨訪。

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（收稿日期：2023-07-25）

（本文編輯：楊江瑜）