摘要:為探索氧傳感技術(shù)在燕麥(Avena sativa L.)種子活力測定中的應(yīng)用,分別將不同含水量(4%,10%,16%和28%)燕麥種子進(jìn)行室溫及低溫貯藏6—18個(gè)月以及45oC,48 h控制劣變處理,通過對燕麥種子的發(fā)芽率以及氧傳感進(jìn)行測定,結(jié)果表明,燕麥種子可維持相對較高活力的貯藏條件為:4%和10%含水量室溫貯藏短于6個(gè)月,低溫貯藏少于18個(gè)月;16%和22%含水量低溫貯藏短于6個(gè)月。發(fā)芽率與非低氧脅迫條件下的理論萌發(fā)時(shí)間呈極顯著負(fù)相關(guān),與氧氣消耗速率呈顯著正相關(guān),與萌發(fā)啟動(dòng)時(shí)間呈負(fù)相關(guān),但相關(guān)關(guān)系不顯著;非低氧脅迫條件下的理論萌發(fā)時(shí)間是測定不同處理燕麥種子活力的最佳指標(biāo)。
關(guān)鍵詞:燕麥;種子活力;氧傳感;種子發(fā)芽率
中圖分類號:S339.3+2
文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A
文章編號:1007-0435(2023)06-1714-06
Preliminary Study on Seed Vigor Testing of Oat Seeds Based on Oxygen Sensing Technology
YE Wen-xing1, KONG Ling-qi2*
(1. College of Grassland, Resources and Environment, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot, Inner Mongolia 010011, China;2. Institute of Grassland Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hohhot, Inner Mongolia 010010, China)
Abstract:In order to explore the application of oxygen sensing technology to the determination of oat seed vigor,oat seeds with different water contents (4%,10%,16%,and 28%) were stored at room temperature and low temperature for 6 to 18 months,and controlled treatment of seed deterioration at 45℃ for 48 hours. The germination rate and oxygen sensing of all stored oat seeds were measured. The results showed that the storage conditions for oat seeds to maintain the relatively high vigor were:4% and 10% moisture content,stored at room temperature for less than 6 months,and stored at low temperature for less than 18 months;Low temperature storage with 16% and 22% moisture content is shorter than 6 months. Germination rate was significantly negatively correlated with relative germination time under non hypoxic stress,positively correlated with oxygen consumption rate,and negatively correlated with germination initiation time,but not significantly. The relative germination time under non hypoxic stress is the best indicator for measuring oat seed vigor under different treatments.
Key words:Oat;Seed vigor;Oxygen sensing technology;Seed germination
燕麥(Avena sativa L.)屬禾本科燕麥屬一年生草本植物,是優(yōu)良的糧飼兼用作物[1],具有耐鹽堿、抗干旱及寒冷等特性[2]。我國燕麥以內(nèi)蒙古、河北、山西、甘肅等地種植面積最大[3-4]。由于燕麥種子含有豐富的不飽和脂肪酸,并且脂肪衍生物易酸敗,因此脂肪含量高會導(dǎo)致燕麥種子更易發(fā)生劣變[5]。因此,研究燕麥種子活力對其種質(zhì)資源的保存與利用具有重要意義。
種子活力(Seed vigor)是1950年由國際種子檢驗(yàn)會議提出的[6],1980年由官方種子分析家協(xié)會對其做出定義[7],2004年國際種子檢驗(yàn)規(guī)程對種子活力的表現(xiàn)能力進(jìn)行了闡述,如種子的發(fā)芽率,貯藏后種子發(fā)芽能力的保持[8]。種子活力是檢驗(yàn)種子質(zhì)量的重要指標(biāo),與劣變過程及種子貯藏壽命聯(lián)系緊密。劣變程度越高,種子活力越低,貯藏壽命越短。
氧傳感技術(shù)(Oxygen sensing technology,Q2)是由荷蘭的ASTEC公司發(fā)展的通過監(jiān)測萌發(fā)過程中呼吸耗氧量從而判定種子活力的一種自動(dòng)、高效、精確檢測方法[9-11]。低活力種子,呼吸活力弱,萌發(fā)需較長時(shí)間的呼吸作用;高活力種子,呼吸活力強(qiáng),萌發(fā)時(shí)則需較短時(shí)間的呼吸作用。目前,Q2氧傳感技術(shù)已應(yīng)用于煙草(Nicotiana tabacum L.)、甜菜(Beta vulgaris L.)、水稻(Oryza sativa L.)、林木類等種子的活力檢測[12-14],且效果較好,燕麥種子活力研究多基于貯藏年限對發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)等相關(guān)指標(biāo)[15-16]以及不同方法對燕麥種子活力測定的適用性研究[17],而Q2氧傳感技術(shù)在燕麥種子活力檢測方面的應(yīng)用尚未見報(bào)道。因此,利用氧傳感技術(shù)檢測不同含水量(4%,10%,16%,22%,28%)的燕麥種子,通過不同老化處理(45℃,48 h以及4℃低溫和室溫條件下自然老化6個(gè)月、12個(gè)月和18個(gè)月)后的氧傳感指標(biāo),探討發(fā)芽指標(biāo)與氧傳感指標(biāo)的相關(guān)性,分析該技術(shù)在燕麥種子活力測定方面的應(yīng)用效果,為燕麥種子活力的快速測定提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料
試驗(yàn)所用燕麥種子發(fā)芽率及含水量見表1。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 種子水分調(diào)整及貯藏 種子含水量測定參照ISTA規(guī)程(2012),并調(diào)節(jié)試驗(yàn)用種子水分,獲得含水量分別為4%,10%,16%,22%和28%的樣品并封口[18]。將水分調(diào)節(jié)封口后種子進(jìn)行以下處理:(1)對照(CK),直接測定相關(guān)指標(biāo);(2)45℃水浴劣變48 h(CDT);(3)4℃冰箱貯藏6,12和18個(gè)月(LT-6,12,18);(4)室溫(25℃恒溫)貯藏6,12和18個(gè)月(RT-6,12,18)。
1.2.2 發(fā)芽率測定 選取均勻飽滿的燕麥種子,放置于10 cm培養(yǎng)皿中,每皿50粒,4次重復(fù),20℃恒溫,8 h光照/16 h黑暗。第5天初次計(jì)數(shù),第10天末次計(jì)數(shù)。
發(fā)芽率=發(fā)芽終期全部正常種苗數(shù)供試種子數(shù)×100%
1.2.3 單粒種子呼吸速率測定 單粒燕麥種子置于含蓋的0.5 mL管中,管中有350 μL的1% 瓊脂。ASTEC Q2(ASTEC-global,USA)儀器上可放置16個(gè)架子,每架有48支管子,每30 min掃描每管1次。每處理3個(gè)重復(fù),每重復(fù)48粒種子,其中2支對照,一支0%含氧量,另一支100%含氧量。掃描后經(jīng)ASTEC分析,可獲得萌發(fā)啟動(dòng)時(shí)間(Increased metabolism time,IMT)、氧氣代謝速率(Oxygen metabolism rate,OMR)和理論萌發(fā)時(shí)間(Relative germination time,RGT)。
1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)利用Excel 2013軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、相關(guān)分析。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同處理對燕麥種子發(fā)芽率的影響
燕麥種子經(jīng)過6,12和18個(gè)月室溫貯藏,均隨著含水量的增加,發(fā)芽率呈下降趨勢(表2)。相同時(shí)間不同種子含水量室溫貯藏后,含水量為4%和10%的種子發(fā)芽率間差異不顯著,但顯著高于含水量為16%,22%和28%的種子發(fā)芽率(Plt;0.05);16%,22%和28%含水量的燕麥種子發(fā)芽率均降為0%,喪失發(fā)芽能力。4%和10%含水量的燕麥種子室溫貯藏6個(gè)月的發(fā)芽率顯著高于室溫貯藏12和18個(gè)月(Plt;0.05),但其二者之間差異不顯著。
燕麥種子經(jīng)過6,12和18個(gè)月低溫貯藏,均隨著含水量的增加,發(fā)芽率呈下降趨勢(表2)。低溫貯藏6個(gè)月,4%~22%含水量的燕麥種子發(fā)芽率差異不顯著,但顯著高于含水量為28%的種子(Plt;0.05)。低溫貯藏12和18個(gè)月,含水量為4%和10%的種子發(fā)芽率差異不顯著,但顯著高于其余含水量的種子發(fā)芽率(Plt;0.05);22%含水量種子發(fā)芽率顯著下降到3%和7%(Plt;0.05);28%含水量的種子發(fā)芽率低為0%。4%和10%含水量的種子發(fā)芽率在不同低溫貯藏時(shí)間間差異不顯著;16%和22%含水量的種子發(fā)芽率則是低溫貯藏6個(gè)月顯著高于低溫貯藏12和18個(gè)月(Plt;0.05),二者間差異不顯著;28%含水量的種子發(fā)芽率均降至最低,且差異不顯著。
經(jīng)過控制劣變(45℃,48 h)處理的燕麥種子發(fā)芽率,隨著含水量的增加,呈現(xiàn)下降趨勢(表2)。4%~16%含水量的種子發(fā)芽率顯著高于其余處理(Plt;0.05),但三者間差異不顯著。22%含水量種子發(fā)芽率降為41%,28%含水量降為0%,喪失發(fā)芽能力。未經(jīng)劣變處理燕麥種子(CK)發(fā)芽率在含水量為4%~22%間差異不顯著,當(dāng)含水量增為28%時(shí),種子發(fā)芽率降為48%,顯著低于前者(Plt;0.05)。CK與控制劣變處理在4%~16%含水量種子發(fā)芽率差異不顯著,22%和28%含水量控制劣變種子發(fā)芽率顯著低于CK。
2.2 不同處理對燕麥種子呼吸速率的影響
2.2.1 不同處理對燕麥種子理論萌發(fā)時(shí)間的影響 燕麥種子經(jīng)過6,12和18個(gè)月室溫貯藏,均隨著含水量的增加,非低氧脅迫條件下的理論萌發(fā)時(shí)間(Relative germination time,RGT)延長(表3)。貯藏6個(gè)月,含水量為4%和10%的種子RGT顯著低于其余含水量處理(Plt;0.05);貯藏12和18個(gè)月燕麥種子RGT,4%和10%含水量間差異不顯著,16%~28%含水量無測定值。4%和10%含水燕麥種子RGT隨著貯藏時(shí)間延長而顯著增加(Plt;0.05)。
燕麥種子經(jīng)過6和12個(gè)月低溫貯藏,均隨著含水量的增加RGT延長(表3),貯藏6個(gè)月時(shí),28%含水量RGT顯著升高;貯藏12個(gè)月時(shí),22%含水量RGT顯著升高。貯藏18個(gè)月時(shí),4%~16%含水量燕麥種子RGT差異不顯著,22%和28%含水量RGT無測定值。4%~16%含水量燕麥種子,隨著貯藏時(shí)間延長,RGT值延長,貯藏6和12個(gè)月顯著低于貯藏18個(gè)月(Plt;0.05),二者之間差異不顯著。
隨著含水量增加,控制劣變和對照燕麥種子RGT延長(表3)。4%和10%含水量RGT差異不顯著,但顯著低于其余處理(Plt;0.05);16%和22%含水量RGT差異不顯著,但顯著低于28%含水量(Plt;0.05)。
2.2.2 不同處理對燕麥種子氧消耗速率的影響 燕麥種子萌發(fā)氧氣消耗速率即胚根突破種皮后到受低氧脅迫氧氣消耗率變慢之間的呼吸率(Oxygen metabolism rate,OMR)。燕麥種子經(jīng)過6,12和18個(gè)月室溫貯藏,均隨著含水量的增加,OMR增加(表4)。貯藏6個(gè)月,含水量為4%和10%的種子OMR顯著高于其余含水量處理(Plt;0.05);貯藏12和18個(gè)月燕麥種子OMR,4%和10%含水量間差異不顯著,16%~28%含水量時(shí)為0。4%和10%含水燕麥種子OMR隨著貯藏時(shí)間延長而顯著降低(Plt;0.05)。
燕麥種子經(jīng)過6和12個(gè)月低溫貯藏,均隨著含水量的增加OMR呈降低趨勢(表3),貯藏6個(gè)月時(shí),28%含水量OMR顯著降低(Plt;0.05);貯藏12個(gè)月時(shí),22%含水量OMR顯著降低(Plt;0.05)。貯藏18個(gè)月時(shí),10%和16%含水量燕麥種子OMR差異不顯著,22%和28%含水量的OMR為0。4%~16%含水量燕麥種子,隨著貯藏時(shí)間延長,OMR降低,貯藏6和12個(gè)月顯著高于貯藏18個(gè)月(Plt;0.05)。
隨著含水量增加,控制劣變和對照燕麥種子OMR降低(表3)??刂屏幼冄帑湻N子4%~22%含水量的OMR值差異不顯著,28%含水量降為0。對照燕麥種子4%~16%含水量的OMR值差異不顯著??刂屏幼冄帑湻N子4%~16%含水量的OMR值顯著低于對照(Plt;0.05)。
2.2.3 不同處理對燕麥種子萌發(fā)啟動(dòng)時(shí)間的影響 燕麥種子經(jīng)過6,12和18個(gè)月室溫貯藏,均隨著含水量的增加,燕麥種子萌發(fā)啟動(dòng)時(shí)間(Increased metabolism time,IMT)增加(表5)。貯藏6個(gè)月,含水量為4%和10%的種子IMT顯著低于其余含水量處理(Plt;0.05);貯藏12和18個(gè)月燕麥種子IMT,4%和10%含水量間差異不顯著,16%~28%含水量時(shí)無測定值。4%和10%含水燕麥種子IMT隨著貯藏時(shí)間延長而升高(Plt;0.05)。
燕麥種子經(jīng)過6和12個(gè)月低溫貯藏,均隨著含水量的增加IMT呈升高趨勢(表5),貯藏6個(gè)月時(shí),28%含水量IMT顯著升高(Plt;0.05);貯藏12個(gè)月時(shí),22%含水量IMT顯著升高(Plt;0.05)。貯藏18個(gè)月時(shí),10%和16%含水量燕麥種子IMT差異不顯著,22%和28%含水量的IMT無測定值。4%~16%含水量燕麥種子在貯藏12個(gè)月時(shí),IMT最低,顯著低于貯藏6和18個(gè)月(Plt;0.05)。
隨著含水量增加,控制劣變和對照燕麥種子IMT升高(表5)??刂屏幼冄帑湻N子在28%含水量時(shí)無測定值。對照燕麥種子4%和10%含水量的IMT差異不顯著??刂屏幼冄帑湻N子的IMT顯著低于對照(Plt;0.05)。
2.3 不同處理燕麥種子發(fā)芽率與呼吸速率的相關(guān)性
不同處理燕麥種子發(fā)芽率與呼吸速率相關(guān)分析結(jié)果表明(表6),發(fā)芽率與RGT呈極顯著負(fù)相關(guān)(Plt;0.01),與OMR呈顯著正相關(guān)(Plt;0.05),與IMT呈負(fù)相關(guān),但相關(guān)關(guān)系不顯著;OMR與RTG和IMT均呈顯著負(fù)相關(guān)(Plt;0.05)。因此,RGT是測定不同處理燕麥種子活力的最佳指標(biāo)。
3 討論
3.1 不同處理對燕麥種子發(fā)芽率的影響
種子發(fā)芽率可有效指征種子的發(fā)芽能力,種子發(fā)芽能力強(qiáng)其發(fā)芽率高,種子活力高,但是種子經(jīng)過貯藏會引起種子劣變,使活力下降,從而降低發(fā)芽率。種子活力受貯藏條件的影響,貯藏時(shí)間、含水量及溫度等條件均會影響種子活力及發(fā)芽率。有研究表明,人工老化即可使種子活力下降[19]。貯藏0~4年燕麥種子發(fā)芽相關(guān)指標(biāo)隨貯藏時(shí)間的延長而下降,其含水量隨貯藏年限變化不大[20],這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)在4oC和室溫條件下進(jìn)行貯藏,結(jié)果表明,在4%和10%含水量時(shí),無論室溫還是低溫貯藏均可使種子保持較高活力,耐貯藏;16%含水量是種子貯藏的轉(zhuǎn)折點(diǎn),低溫貯藏可使種子發(fā)芽率保持在70%左右,而室溫貯藏均降為0%;在28%含水量時(shí),低溫較室溫貯藏更不易受種子含水量的影響。種子發(fā)芽率隨著種子貯藏時(shí)間的延長下降,但在貯藏12個(gè)月后,貯藏時(shí)間不再成為主要影響因素,這與Parmoon[21]的研究結(jié)果相似,即在一定貯藏時(shí)間內(nèi),隨著貯藏時(shí)間延長,種子活力下降。同時(shí),低溫貯藏6個(gè)月是有較保存種子活力的方法??刂屏幼兲幚砗蟮姆N子發(fā)芽率是介于低溫貯藏6和12個(gè)月間。
3.2 不同處理對燕麥種子呼吸率的影響
種子萌發(fā)需要呼吸作用協(xié)同完成,控制好種子的呼吸作用,可以減少貯藏物質(zhì)的消耗,保持種子高活力,達(dá)到安全貯藏目的[22]。Q2技術(shù)則是一種新的呼吸測定方式,與種子活力密切相關(guān)[23],可進(jìn)行大量單粒種子呼吸測定,是種子活力的敏感指標(biāo)[24]。RGT與每粒種子的實(shí)際萌發(fā)時(shí)間直接相關(guān);IMT下種子吸漲萌動(dòng)至胚根突破種皮的快慢相關(guān),高活力種子的IMT值低。OMR是種子胚根突破種皮后到受低氧脅迫氧氣消耗率變慢之間的呼吸率,高活力種子OMR值高。陳能阜等[9]利用Q2技術(shù)測定了番茄、黃瓜和辣椒等植物種子耗氧情況,發(fā)現(xiàn)其活力相同的種子,耗氧曲線類似。有研究表明,杉木種子活力的最佳指標(biāo)是RGT[11],其與種子萌發(fā)時(shí)間密切聯(lián)系;秈稻和粳稻種子最佳指標(biāo)分別為RGR和MOR[14]。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明,RGT隨含水量增加而延長,低溫貯藏18個(gè)月以及室溫貯藏12和18個(gè)月時(shí),RTG無限延長,種子活力喪失,這一結(jié)果與種子發(fā)芽率結(jié)果一致;IMT與RGT結(jié)果相似;OMR則隨著含水量及貯藏時(shí)間增加而下降,表明Q2技術(shù)測定種子呼吸可有效區(qū)別未老化與老化種子,該結(jié)果與大米種子結(jié)果一致[25-26]。種子呼吸速率受到貯藏時(shí)間及含水量的影響,種子活力以及耐貯藏性下降,這可能與脂質(zhì)過氧化作用相關(guān),其破壞了線粒體結(jié)構(gòu),使呼吸作用下降,從而使種子發(fā)芽率下降。控制劣變種子與自然老化種子結(jié)果相似。
4 結(jié)論
燕麥種子維持相對較高活力的條件:4%和10%含水量室溫貯藏以及16%和22%含水量低溫貯藏短于6個(gè)月;4%和10%含水量低溫貯藏少于18個(gè)月;測定不同處理燕麥種子活力的最佳指標(biāo)是RGT。
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(責(zé)任編輯 劉婷婷)