林春芳,孫音,林曉嵐
福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院(福州 350002)
隨著我國經(jīng)濟(jì)和社會(huì)的發(fā)展,人們的生活水平得到顯著的提高,對(duì)于飲食的需求也不再滿足于食品的色香味,更多地追求飲食健康和食品的品質(zhì)方向,消費(fèi)者對(duì)身材體型的要求促使一些減肥保健類食品備受青睞。西布曲明是一類治療肥胖癥的高效藥物,擾亂人體內(nèi)激素的調(diào)節(jié)功能,并刺激交感神經(jīng),抑制人的食欲從而達(dá)到減肥效果。由于西布曲明可以有效減輕肥胖患者的體重[1],生產(chǎn)減肥保健藥品的廠商往往把西布曲明當(dāng)作減肥類或保健品類食品的主要添加劑成份,但在西布曲明心血管結(jié)局(SCOUT)試驗(yàn)表明它對(duì)人體的心血管有不良影響[2-3],尤其是患有心臟疾病的人群。這份報(bào)告發(fā)表后,西布曲明已然成為當(dāng)前社會(huì)各界關(guān)注的熱點(diǎn)話題,美國立即市場(chǎng)從市場(chǎng)上撤出西布曲明[4]。與此同時(shí),中國國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布停止使用西布曲明制劑和原料藥的公告。近幾年,許多不良商家為攫取更多的經(jīng)濟(jì)效益,在保健食品中非法添加西布曲明,并夸大其使用效果,導(dǎo)致市場(chǎng)上持續(xù)存在西布曲明非處方減肥配方,而大量、長(zhǎng)期且盲目地服用含有西布曲明的藥品,會(huì)給人體造成嚴(yán)重危害[5]。目前對(duì)保健食品中添加西布曲明的劑量沒有明確的標(biāo)準(zhǔn),且西布曲明與不同物質(zhì)之間的相互作用不明確等問題,市場(chǎng)對(duì)西布曲明的監(jiān)管力度小等因素,導(dǎo)致非法添加西布曲明的現(xiàn)象層出不窮,因此規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)化西布曲明的使用及檢測(cè)技術(shù)具有急迫性和重要性。
西布曲明(Sibutramine),分子式為C17H26ClN,分子量為334.33 g/mol,是一種非苯丙胺類中樞神經(jīng)抑制劑[6-7],其通過擾亂人體內(nèi)激素的調(diào)節(jié)功能,并刺激人體的交感神經(jīng),抑制人的食欲從而達(dá)到減肥效果[8]。動(dòng)物試驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)西布曲明具有致突變、致畸胎等作用,在臨床應(yīng)用中被證實(shí)其對(duì)心臟和神經(jīng)系統(tǒng)有極大的危害,甚至導(dǎo)致非致死性心臟病發(fā)作和非致死性中風(fēng)等嚴(yán)重心血管疾病風(fēng)險(xiǎn),嚴(yán)重影響人體健康[9-11]。同時(shí)對(duì)人體心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)造成不同程度的影響。失眠、口干、頭疼等是西布曲明作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的癥狀,其還會(huì)導(dǎo)致煩躁、易激惹、睡眠障礙、焦慮等問題,還會(huì)影響判斷、思考和運(yùn)動(dòng)能力。畏食、便秘等是西布曲明作用于消化系統(tǒng)常見的疾病,還會(huì)導(dǎo)致腹瀉、腹痛、胃腸脹氣、肝功能異常。呼吸困難、氣管炎等是西布曲明作用于呼吸系統(tǒng)上常見的疾病。對(duì)泌尿生殖系統(tǒng)來講,西布曲明會(huì)導(dǎo)致腎炎,月經(jīng)紊亂等問題。臨床試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)西布曲明帶來的副作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其減肥效益,但是由于西布曲明的成效好,不法商家為牟取暴利將西布曲明非法摻入減肥類保健食品中的現(xiàn)象層出不窮,而消費(fèi)者在不知情情況下使用非法摻入西布曲明的保健品后出現(xiàn)心肌損害、心力衰竭、嚴(yán)重致死亡的食品安全事故頻發(fā),嚴(yán)重的危害了民眾的身體健康,影響了民眾對(duì)食品安全的信心。
2.1.1 離子遷移譜快速檢測(cè)法
離子遷移譜(Ion Mobility Spectrometry,IMS)是20世紀(jì)60年代末發(fā)展起來的一種利用儀器分析樣品分子電離后的離子遷移率差異來進(jìn)行檢測(cè)分析的技術(shù)[12]。何歡等[13]建立離子遷移譜技術(shù)測(cè)定出保健食品中可能非法添加藥物的數(shù)據(jù)庫,并通過參數(shù)驗(yàn)證、實(shí)際樣品檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)室方法比較等表明IMS可以用于篩查保健食品中是否含有西布曲明。Dunn等[14]表明,使用便攜式IMS光譜儀可以在低水平(2 ng)檢測(cè)到從膳食補(bǔ)充劑中提取到的西布曲明,并將類似的方法用于分析其他減肥產(chǎn)品的摻雜物。離子遷移色譜儀具有裝置簡(jiǎn)單、靈敏度高、無需樣品處理、效率高、成本低[15-16]、攜帶方便、能與傳統(tǒng)檢測(cè)設(shè)備聯(lián)用等優(yōu)點(diǎn),可以快速篩查出保健食品中的化合物。
2.1.2 毛細(xì)血管電泳法
毛細(xì)血管電泳(Capillary Electrophoresis,CE)是一項(xiàng)以毛細(xì)管作為分離通道,高壓電場(chǎng)作為驅(qū)動(dòng)力的液相分離分析技術(shù)[17]。毛細(xì)管電泳法可對(duì)食品中的非法添加物、食品的摻假情況進(jìn)行分析。徐遠(yuǎn)金等[18]使用膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法測(cè)定食品中的西布曲明,根據(jù)其在電泳過程中,膠束電荷運(yùn)動(dòng)方向的不同而分離,這種方法能夠有效地檢測(cè)分析出食品中是否添加西布曲明,但無法確定西布曲明在其中的添加量。Carvalho等[19]研究了一種新的分析方法,通過毛細(xì)管電泳和非接觸式電導(dǎo)檢測(cè)來測(cè)定草藥制劑中西布曲明的摻雜物,所提出的方法已成功應(yīng)用于功能食品中兩種目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè),其回收率為95.3%~103.4%,測(cè)定結(jié)果良好。毛細(xì)血管電泳法簡(jiǎn)便、快速、靈敏、分離效率高、速度快、樣品用量少,其為食品中的西布曲明檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。然而,毛細(xì)管電泳技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離時(shí),由于蛋白質(zhì)與芯片內(nèi)壁之間的吸附能力很弱,使得其分離效率降低,峰形變寬,從而影響了樣品的重復(fù)性,這一問題仍需要進(jìn)一步研究,以提高樣品的效率。
2.1.3 質(zhì)譜聯(lián)用法
質(zhì)譜具有高特異性、高靈敏度、快速單次分析、檢測(cè)限低等的特點(diǎn),氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用以及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用是目前食品檢測(cè)中應(yīng)用最廣泛的質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),該法對(duì)復(fù)雜混合物的分離能力差,但對(duì)化合物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好,可用于減肥類保健食品中非法添加藥物的定量分析[20-23]。Lee等[24]建立了利用液相色譜和高分辨質(zhì)譜識(shí)別多種化合物減肥的碎片離子的方法,高分辨率質(zhì)譜的高選擇性與這些碎片途徑和串聯(lián)質(zhì)譜方法相結(jié)合,成功地應(yīng)用于篩選和鑒定減肥化合物,對(duì)非法銷售的保健功能食品、食品和非法藥物進(jìn)行連續(xù)阻斷和監(jiān)管。Jignesh等[25]開發(fā)并驗(yàn)證了一種新的、快速、靈敏的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法,用于常規(guī)生物等效性研究,該方法從血漿中快速固相萃取,省去了干燥和重組步驟,以伊米帕明為內(nèi)標(biāo),定量測(cè)定人血漿樣品中西布曲明活性代謝物一去甲基西布曲明(M1)和二去甲基西布曲明(M2)。Song等[26]利用流動(dòng)注射串聯(lián)質(zhì)譜法開發(fā)了一種新方法,用于半定量篩查膳食補(bǔ)充劑中的減肥藥物,包括膳食補(bǔ)充劑中的西布曲明,通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)一步確認(rèn)和量化樣品中西布曲明的陽性鑒定。何燕等[27]應(yīng)用通道型紙芯片結(jié)合敞開式質(zhì)譜,建立親水性通道確定溶液的流路,減少了噴霧溶劑的揮發(fā),減少檢測(cè)樣品的損失,提高電壓的有效利用率,通過產(chǎn)生的穩(wěn)定噴霧流提高目標(biāo)物的響應(yīng)信號(hào),以此來檢測(cè)出樣品,這種方法滿足了食品中違法添加物的檢測(cè)快速篩查的需求,但其檢測(cè)的精度不高,只能對(duì)西布曲明進(jìn)行半定量的分析。
2.1.4 熒光免疫層析法
免疫層析技術(shù)(Immuno Chromatographic Assay,ICA)是一種結(jié)合免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)的分析檢測(cè)方法[28-29],其在傳統(tǒng)膠體金試紙條檢測(cè)基礎(chǔ)上,加入了熒光檢測(cè)技術(shù)。譚貴良等[30]在結(jié)合免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)的基礎(chǔ)上,通過設(shè)計(jì)梯度抗體的反應(yīng)濃度,建立封裝抗原的檢測(cè)線,在一張?jiān)嚰埳蠘?gòu)建多層次的敏感免疫分析反應(yīng),在普通熒光手電照射后肉眼可以直接讀取出檢測(cè)結(jié)果。Steven等[31]制備膠體金納米粒子(CG),然后使之與單克隆抗體共軛形成CGmAb,將CG-mAb與抗原分別噴涂到基質(zhì)上形成結(jié)合墊和檢測(cè)條,可以應(yīng)用于同時(shí)檢測(cè)不同樣品中非法添加物質(zhì)。熒光免疫層析法測(cè)定樣品具有簡(jiǎn)單快速、重現(xiàn)性好、取樣量少等優(yōu)點(diǎn),但其靈敏度較差,無法準(zhǔn)確定量,可以作為樣品的初篩。
2.1.5 薄層色譜法
薄層色譜法(Thin layer chromatography,TLC),是一種操作簡(jiǎn)單、便捷的檢測(cè)方法,其顯色劑專屬性強(qiáng)、靈敏度高。國內(nèi)外的食品檢測(cè)工作者通過TLC圖像技術(shù)對(duì)天然中藥中的西布曲明進(jìn)行了定量檢測(cè),Phattanawasin等[32]建立了一種簡(jiǎn)單的薄層色譜(TLC)-圖像分析方法,采用硅膠60 F254 TLC板,以甲苯-己烷-二乙胺為流動(dòng)相,用Dragendorff試劑進(jìn)行斑點(diǎn)檢測(cè),實(shí)現(xiàn)西布曲明的色譜分離,用于快速檢測(cè)摻雜在減肥產(chǎn)品中的西布曲明的快速測(cè)定和定量。石保龍[33]采用薄層色譜法對(duì)樣品進(jìn)行快速檢測(cè),并且通過液質(zhì)聯(lián)用的方法驗(yàn)證了該方法的準(zhǔn)確性,結(jié)果顯示相吻合。TLC用于測(cè)定產(chǎn)品中的西布曲明具有令人滿意的特異性、精確性、準(zhǔn)確性和穩(wěn)健性,是目前主要的非法添加物的初步篩選法。
離子遷移譜是一種裝置簡(jiǎn)單、靈敏度高、效率高、成本低的檢測(cè)方法,但其檢出限高,不適用于含量較低目標(biāo)物的檢測(cè);毛細(xì)管電泳法分離效率高、速度快、樣品用量少,但必須用標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)比進(jìn)行定性,適用窄;質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是目前保健食品中最廣泛的一種方法,但由于儀器費(fèi)用昂貴,且需要專門的技術(shù)人員進(jìn)行操作,難以滿足市場(chǎng)快速篩查需求;免疫層析技術(shù)的重現(xiàn)性好、取樣量少,但其靈敏度較差,無法準(zhǔn)確定量;薄層色譜法專屬性強(qiáng)是準(zhǔn)確可靠的方法,但保健食品中的成分復(fù)雜,干擾較大,容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
通過對(duì)領(lǐng)域內(nèi)已有的西布曲明檢測(cè)主要文獻(xiàn)的整理分析,對(duì)比發(fā)現(xiàn)在西布曲明的定性定量檢測(cè)方面取得有效成效,但這些方法所需檢測(cè)的時(shí)間長(zhǎng)、分析基礎(chǔ)設(shè)施昂貴、成本高、樣品制備復(fù)雜以及需要專業(yè)的操作人員等方面阻礙了對(duì)西布曲明進(jìn)行具有成本效益的測(cè)試。因此,建立一種快速、簡(jiǎn)單低成本的比色篩選方法,開發(fā)出具有卓越的選擇性和敏感性的試劑盒,用于現(xiàn)場(chǎng)快速分析篩查西布曲明,還需要國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)一步深入研究。