雷凱君 強(qiáng)潤潤 李懷國 鄭芳昊 焦自學(xué) 王宗良王 宇 何明豐* 章培標(biāo)*

（1佛山市中醫(yī)院， 佛山 528000）

（2中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所， 生態(tài)環(huán)境高分子材料重點實驗室， 長春 130022）

傷口愈合是創(chuàng)傷修復(fù)的關(guān)鍵因素，創(chuàng)傷創(chuàng)面的修復(fù)又是創(chuàng)傷骨科的重要問題之一。 傷科黃水（Shangkehuangshui， HS）是基于傳統(tǒng)中藥理論的驗方，作為佛山市中醫(yī)院自制的一種純中藥院內(nèi)制劑，臨床上可用于治療各種開放性軟組織損傷，在改善骨折圍手術(shù)期的病情方面效果顯著［1］。 但是，傷科黃水為洗劑，目前臨床對于傷科黃水的應(yīng)用僅限于紗布濕敷、灌洗和散劑外敷等，對于骨傷導(dǎo)致的皮膚組織創(chuàng)傷，為了保護(hù)創(chuàng)面，減少感染，加速傷口愈合，一般采用無菌紗布或浸有中藥黃水的紗布處理傷口，這種治療手段藥效短，需要反復(fù)用藥。 同時，紗布易與傷口粘連，形成結(jié)痂，換藥時常常破壞新生肉芽組織，病人疼痛難忍，然而，浸有中藥黃水的紗布無法在吸收創(chuàng)口分泌物的同時防止水分和電解質(zhì)的流失，限制了傷科黃水的應(yīng)用和效果。

高壓靜電紡絲技術(shù)可制備納米纖維，所得納米纖維具有高比表面積、小孔徑、高孔隙率和易制備等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)工程、過濾材料、催化反應(yīng)和傳感器等領(lǐng)域［2-4］。

水溶性高分子材料聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol， PVA）是一種具有生物可降解和生物親和性的生物醫(yī)用材料，具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、生物相容性、低毒性和成膜性，其水溶液能在物理、化學(xué)或輻照的條件下交聯(lián)形成水凝膠，由PVA 制備的水凝膠無溶血作用，對肝、腎無明顯影響，已被廣泛用作組織填充材料、藥物包膜和藥物載體［5-6］。 水凝膠可作為創(chuàng)口敷料使用，具有以下優(yōu)點： ①主要成分是水，熱容量大，使人感覺涼爽； ②吸收傷口分泌物而不易粘連； ③透光性好，便于觀察傷口愈合情況；④對水和氧有良好通透性，同時能阻隔細(xì)菌，防止感染； ⑤具有空間網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，可將藥物包埋其中，緩慢持續(xù)釋放到病變區(qū)，達(dá)到治愈傷口和其它皮膚疾病的目的［7-9］； ⑥良好的生物相容性，不會造成排異反應(yīng)或?qū)е聜诟腥尽?/p>

針對傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對于傷科黃水應(yīng)用方式的局限及應(yīng)用過程中所存在的問題，通過靜電紡絲，制備了一種擔(dān)載傷科黃水、可用于開放性骨傷創(chuàng)口修復(fù)的醫(yī)用級聚乙烯醇靜電紡絲納米纖維創(chuàng)面敷料。本文旨在拓寬院內(nèi)制劑中藥“傷科黃水”的應(yīng)用形式，對傷科黃水/PVA靜電紡絲納米纖維創(chuàng)面敷料的制備方法進(jìn)行了闡述，探究了不同PVA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)條件下傷科黃水/PVA 靜電紡絲納米纖維膜的可紡性，選出適宜應(yīng)用于傷科黃水/PVA 靜電紡絲納米纖維醫(yī)用敷料的紡絲液，在此基礎(chǔ)上討論了不同含藥量的傷科黃水/PVA 靜電紡絲納米纖維膜的生物相容性、吸水性、藥物釋放和對大鼠皮膚全層缺損的修復(fù)效果等性能。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

ESEM XL-30 型場發(fā)射掃描電子顯微鏡（SEM，荷蘭飛利浦公司）；S6000 型高效液相色譜儀（HPLC，華譜科儀（北京）科技有限公司）；Thermo MK3 型酶標(biāo)儀（熱電上海儀器有限公司）；WDW-5 型微機(jī)控制電子萬能試驗機(jī)（長春新特試驗機(jī)有限公司）；V-750型紫外分光光度計（UV，日本JASCO 公司）；靜電紡絲制備裝置（自制）；PLUSS Zeiss 型正置顯微鏡（奧地利TissueGnostics 公司）；E100 型顯微鏡（尼康儀器有限公司）；QYC-2102 C 型恒溫立式搖床（上海福瑪實驗設(shè)備有限公司）；ZGD-50B-7 型紫外臭氧箱（順德索奇實業(yè)有限公司）。

取質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%（傷科黃水原液）的傷科黃水溶液，加入聚乙烯醇粉末，配制成PVA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為8%、10%和12%的PVA/2%傷科黃水紡絲液，備用，分別命名為PVA/HS 8%-2%、PVA/HS 10%-2%和PVA/HS 12%-2%，以探究不同PVA含量的PVA/2%傷科黃水紡絲液的可紡性。

針對某零售企業(yè)配送中心存在的流程問題、信息系統(tǒng)問題和車輛調(diào)度問題，對其配送中心的配送流程，包括配送作業(yè)流程，倉儲作業(yè)信息化，配送車輛配裝和運輸線路等方面進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。

1.2 實驗方法

1.2.1 傷科黃水/聚乙烯醇PVA復(fù)合纖維敷料的制備

國企并購私企屬于某種意義上的重組，有助于企業(yè)在會計核算和財務(wù)管理過程中的工作有效、規(guī)范開展，有助于加快工作效率。國企并購私企卻不可避免的導(dǎo)致企業(yè)的內(nèi)部的管理制度出現(xiàn)了較多問題，使得企業(yè)在管理和決策過程中出現(xiàn)失誤，給企業(yè)造成較大的損失。

1.2.1.1 紡絲液的配制

用去離子水、PVA 粉末配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為4%、8%、10%、12%和14%的PVA 紡絲液，室溫靜置冷卻除泡，備用，以探究不同濃度PVA紡絲液的可紡性。

聚乙烯醇（藥輔級1799 型）購自江西阿爾法高科藥業(yè)有限公司；傷科黃水由佛山市中醫(yī)院提供；磷酸鹽緩沖液（PBS，pH=7.4，自制）；去離子水（自制）；NIH-3T3成纖維細(xì)胞購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會上海細(xì)胞庫。

實驗用SPF級SD大鼠35只（北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，動物合格號： wish-2021040），體重（250±20） g，腹腔注射速眠新麻醉（0.4 mL/kg）。 每只大鼠背部皮膚去毛后雙側(cè)制作直徑為15 mm 的全層皮膚缺損創(chuàng)面，以背脊為中心左右各一組，一組兩個創(chuàng)面。 術(shù)后觀察大鼠皮膚修復(fù)情況，于第3、7和14 d處死大鼠，取皮膚組織樣品，用多聚甲醛溶液固定，作組織病理學(xué)及免疫組織化學(xué)觀察。 本研究動物實驗經(jīng)中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所實驗動物福利倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：［2022］年動審［0089］號）。

1.2.1.2 靜電紡絲

不同載藥量的傷科黃水/PVA 靜電紡絲納米纖維膜（PVA/HS-2%、PVA/HS-1%和PVA/HS-0.5%）的藥物累計釋放曲線如圖5所示。 從圖5A可以看出，釋放初期各樣品組藥物釋放曲線的斜率隨著載藥量的增加而增大。這說明隨著纖維中藥物濃度的增加，藥物從纖維中擴(kuò)散出來的速率也增加。 藥物持續(xù)釋放0.5 h 后，釋放曲線斜率逐漸變小，釋放速率逐漸減慢。 可能是隨著藥物的釋放，纖維內(nèi)部的藥物含量逐漸減少，包裹在纖維內(nèi)部的藥物向外擴(kuò)散的路徑變長，所以釋放速率逐漸減慢。 在藥物釋放初期，靠近纖維表面的藥物首先擴(kuò)散出來，引起藥物的突然釋放，從釋放曲線圖5B 可以看出，由這種擴(kuò)散作用引起的最初的藥物釋放量也隨著載藥量的增加而增加。 從整個釋放曲線可以看出： 該傷科黃水/PVA靜電紡絲納米纖維膜不僅在初期有較高的藥物釋放速度，還能在較長的時間內(nèi)平穩(wěn)釋放藥物。 對于創(chuàng)面修復(fù)藥物的控制釋放來說，這種釋放行為是很理想的。 開始的突釋適合快速抑制炎癥反應(yīng)，后期很長一段時間內(nèi)的持續(xù)釋放能進(jìn)一步促進(jìn)組織修復(fù)，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。 因此，這種劑型特別適合用于急、慢性創(chuàng)面的修復(fù)［11］。

圖1 靜電紡絲裝置結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 Structure diagram of electrostatic spinning device

1.2.2 吸液能力測定

將已知干重的靜電紡絲纖維膜根據(jù)含藥濃度進(jìn)行分組，每組6 個平行樣切割成相同的大小，放入PBS溶液（模擬傷口滲出液）中，37 ℃恒溫放置不同時間間隔后將材料取出，用濾紙除去溶脹薄膜表面的多余液體，稱重，直至恒重。測定樣品吸液能力（S）的計算公式為（1）：

式中，m0為樣品干燥后的初始質(zhì)量（g），mt為樣品在溶液中浸泡不同時間后的質(zhì)量（g）。

其二，通過具體的事例，引導(dǎo)社會各群體理性地看待他人的文化習(xí)俗、道德理念、價值觀念以及行為方式，在底線倫理的范圍內(nèi)，排除以群體的優(yōu)勢對其他非主流的文化習(xí)俗、道德理念、價值觀念以及行為方式橫加干涉的作法，并以“不同的生活方式崇尚不同的善和德性這一事實”作為各參與主體政治經(jīng)濟(jì)生活中的基本價值指導(dǎo)和道德支持，為社會多元一致的實現(xiàn)獲得共識上的保障。

1.2.3 體外釋放實驗

在具體的復(fù)習(xí)教學(xué)過程中，教師可以引導(dǎo)學(xué)生重新觀看教學(xué)視頻，通過視頻找到習(xí)題應(yīng)用的知識點，對其進(jìn)行反復(fù)觀察以及記錄，以提升學(xué)生的學(xué)習(xí)質(zhì)量以及自主學(xué)習(xí)能力。在此過程中，學(xué)生還可以根據(jù)自身的學(xué)習(xí)能力對視頻的速度以及內(nèi)容進(jìn)行調(diào)整，提升復(fù)習(xí)工作的人性化，進(jìn)而提升自身的習(xí)題學(xué)習(xí)效率。

以上，我們分析了將多媒體應(yīng)用到計算教學(xué)中的策略，并對多媒體環(huán)境下的計算教學(xué)進(jìn)行了反思。如今的教學(xué)離不開多媒體，但是如何更有效地利用多媒體來輔助教學(xué)，值得我們進(jìn)一步探索。希望本文的研究能夠為數(shù)學(xué)教師的教學(xué)提供一些參考，從而更充分地利用多媒體提高學(xué)生的計算能力，為學(xué)生今后的數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)打牢基礎(chǔ)。

傷科黃水由黃連、黃柏、梔子、紫草、白礬和薄荷6味中藥組成，這6味藥材的主要成分是6種重要的生物堿（黃柏堿、藥根堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿）和梔子苷，根據(jù)《中國藥典》對傷科黃水中6味藥材主要成分的含量要求，選擇含量高且在藥效上起到主要作用的小檗堿、梔子苷等，通過HPLC檢測來評估紡絲膜樣品的藥物釋放情況［10］。

建立河道管理執(zhí)法基地，加強(qiáng)河道管理裝備建設(shè)和河道管理隊伍能力建設(shè)。為加強(qiáng)河道管理裝備建設(shè)，市水利局積極協(xié)調(diào)市財政局，將市級和區(qū)縣級水行政主管部門歸集的河道砂石資源費完全用于河道管理能力建設(shè)，購買河道巡查車輛，配置采砂在線監(jiān)測系統(tǒng)、計算機(jī)、攝像照相等設(shè)備。各級河道管理站作為河道管理監(jiān)督主管單位，要秉承服務(wù)至上的理念，努力為管理對象提供優(yōu)質(zhì)服務(wù)。一是提升協(xié)調(diào)能力，加強(qiáng)與相關(guān)單位的橫向聯(lián)系，建立定期溝通制度，主動為服務(wù)對象排憂解難。二是加強(qiáng)培訓(xùn)和考察，拓寬河道管理人員的知識面，提高應(yīng)對復(fù)雜問題的處置能力，培養(yǎng)一批綜合型人才，促進(jìn)河道管理人員的結(jié)構(gòu)優(yōu)化。

傷科黃水的體外釋放實驗在37 ℃的PBS 溶液中進(jìn)行。稱取不同傷科黃水濃度的PVA/傷科黃水靜電紡絲纖維樣品各20 mg，裁剪成 2 cm×1.5 cm大小，浸泡于裝有4 mL PBS溶液的Eppendorf管中封好（每個樣品4 個平行樣），置于恒溫?fù)u床中，在37 ℃下，以90 r/min 振蕩，取0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64和128 h，共10個時間點的材料釋放液，用HPLC法測藥物的釋放，評估傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜的釋放行為（模擬體液釋放）。

1.2.4 材料浸提液的細(xì)胞毒性檢測

當(dāng)時，火鍋的質(zhì)地有陶瓷、純銀、銀鍍金、銅、錫、鐵數(shù)種。其基本形式有兩種：一種為組合式，由鍋、爐支架、爐圈、爐盤、酒精碗5部分組成，可以同時上桌燒煮食物，也可單獨用鍋溫食品。另一種為鍋中帶爐，爐內(nèi)燒炭火，能把水燒開，生魚、生肉、蔬菜等放入沸水中可以煮熟。

傷科黃水/PVA 靜電紡絲膜作為一種創(chuàng)面敷料，應(yīng)當(dāng)具有良好的生物相容性。 由圖6 細(xì)胞毒性分析可以看出，傷科黃水/PVA 靜電紡絲納米纖維膜組的細(xì)胞存活率均在75%以上，各組材料浸提液的細(xì)胞存活率大小為PVA＞PVA/HS-0.5%＞PVA/HS-1%＞HS＞PVA/HS-2%。 PVA/HS-2%組的細(xì)胞存活率略低于HS 組，這可能與PVA 吸水使浸提液中藥物濃度變大有關(guān)，但參照《美國藥典》細(xì)胞毒性分級評價標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)RGR≥75%時，細(xì)胞毒性等級為0/1 級，屬于無明顯細(xì)胞毒性范疇，作為醫(yī)用材料使用屬于可以接受的范圍，可見本文中各濃度傷科黃水/PVA 靜電紡絲膜均沒有毒性可應(yīng)用于創(chuàng)面敷料。

參考GB/T 16886.5-2017/ISO 10993-5：2009標(biāo)準(zhǔn)和MTT 法，用NIH-3T3成纖維細(xì)胞測試?yán)w維膜樣品的體外細(xì)胞毒性。首先，制備浸提液。根據(jù)GB/T 16886.12-2017/ISO 10993-12：2012標(biāo)準(zhǔn)，按照樣品表面積（樣品的上下兩面面積之和）與浸提介質(zhì)的體積比為6 cm2/mL。浸提材料的介質(zhì)采用無血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基。將純PVA纖維膜和擔(dān)載不同濃度傷科黃水的PVA纖維膜樣品裁剪成1.0 cm×3.0 cm的形狀，通過紫外臭氧箱進(jìn)行消毒，在超凈工作臺中將材料放入無菌的浸提管內(nèi)，使材料完全浸泡在培養(yǎng)基中。浸提24 h后，過濾除菌，將處理后的浸提液密封后置于4 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

采用SD 大鼠全層皮膚切除創(chuàng)面模型模擬嚴(yán)重創(chuàng)面損傷。 將構(gòu)建的靜電紡絲纖維敷料植于成年大鼠背部皮膚缺損處，于3、7和14 d時間點，觀察創(chuàng)面修復(fù)情況。 每個時間點設(shè)立空白對照組、傷科黃水原藥組、PVA、PVA/HS-0.5%、PVA/HS-1%和PVA/HS-2%組。

取出后，每孔加入MTT溶液（5 mg/mL）20 μL，置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中，繼續(xù)孵育4 h。 選擇490 nm波長，用酶標(biāo)儀檢測各孔吸光度值（OD值），與對照組對比，按照公式（2）計算細(xì)胞存活率（Cell viability， CV）。

式中， ODs為實驗組值， OD0為對照組值。

1.2.5 大鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面修復(fù)實驗

將處于指數(shù)生長期的NIH-3T3成纖維細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，以每孔5×103個細(xì)胞接種于96孔板中，然后將培養(yǎng)板置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中24 h 進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁生長后，更換培養(yǎng)液，按以下方式進(jìn)行換液： 1）培養(yǎng)對照組，換無血清培養(yǎng)基，不加任何藥物，每組6 孔； 2）空白材料組，即不含傷科黃水的PVA 纖維膜浸提液，每組6 孔； 3）擔(dān)載傷科黃水的PVA 纖維膜組，即PVA/HS-2%、PVA/HS-1%和PVA/HS-0.5%靜電紡絲纖維膜組，換對應(yīng)的浸提液，每組6孔。繼續(xù)培養(yǎng)48 h。

取去離子水及質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.5%、1%和2%的傷科黃水溶液各90 g，分別加入10 g PVA粉末，恒溫加熱攪拌使其充分溶解，以獲得PVA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的不同含藥量PVA/傷科黃水紡絲液，室溫靜置冷卻除泡，備用，分別命名為PVA、PVA/HS-0.5%、PVA/HS-1%和PVA/HS-2%。

運用思維地圖進(jìn)行教學(xué)是培養(yǎng)學(xué)生形成清晰思路的一種方法，但不是唯一方法。沒有一種教學(xué)方法是萬能的，教師在課堂上需要根據(jù)實際情況，把這種方法與其他教學(xué)方法搭配使用，在不斷嘗試的過程中探索出效果最佳的教學(xué)路徑。思維地圖在課堂上展現(xiàn)的是教師講解知識的思路，把本來孤立零散的知識通過圖示方式實現(xiàn)具體化，更有效激發(fā)學(xué)生的思維，加強(qiáng)思考和不斷聯(lián)系，讓學(xué)生快速抓住重點，并不斷向外延伸。

2 結(jié)果與討論

2.1 溶液可紡性及SEM表征

在PVA 溶液的靜電紡絲過程中，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＜8%或＞12%時，表現(xiàn)出不穩(wěn)定的泰勒錐和不連續(xù)的射流，或出現(xiàn)針頭堵塞等現(xiàn)象，成膜狀態(tài)較差，作為創(chuàng)面敷料的加工性和可操作性均不理想。 因此，本文后續(xù)工作中首先采用8%、10%和12%PVA溶液進(jìn)行中藥傷科黃水的靜電紡絲纖維膜制備研究。

通過SEM 對靜電紡絲纖維膜的表面進(jìn)行表征。 如圖2 所示，10% PVA 靜電紡絲纖維膜纖維粗細(xì)較勻，表面光滑（圖2A 和2E），而載藥PVA 靜電紡絲膜纖維表面粗糙，可見明顯藥物聚集的顆粒狀表面結(jié)構(gòu)（圖2F-2H）。 載藥組中，當(dāng)PVA 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%（PVA/HS 8%-2%）時，所得藥膜纖維間存在串珠（圖2B和2F），纖維直徑分布為（172.03±31.13） nm； 當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%（PVA/HS 10%-2%）時，紡絲無節(jié)點串珠等結(jié)構(gòu)缺陷（圖2C 和2G），纖維直徑分布為（280.90±79.19） nm，紡絲質(zhì)量明顯改善，表現(xiàn)出最優(yōu)異的表面構(gòu)型； 當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12% （PVA/HS 12%-2%）時（圖2D和2H），紡絲液黏度變大，纖維直徑分布為（537.34±139.89） nm。 結(jié)果表明，PVA/HS 10%-2%組的纖維形貌、尺寸以及成膜效果最為理想。

圖2 10%PVA（A、E）、PVA/HS 8%-2%（B、F）、PVA/HS 10%-2%（C、G）、PVA/HS 12%-2%（D、H）靜電紡絲膜的4KX（A-D）和25KX（E-H）的SEM圖Fig.2 SEM images of 4KX （A-D） and 25KX （E-H） of the electrospinning films of 10%PVA（A， E）， PVA/HS 8%-2% （B， F）， PVA/HS 10%-2% （C， G）， PVA/HS 12%-2% （D， H）

2.2 力學(xué)性能

理想的敷料需要具備良好的貼附性和延展拉伸性能，以便更好地固定在創(chuàng)面上，避免肉芽組織的過度增生而得以控制傷口創(chuàng)面的收縮和變形。 圖3為不同PVA含量的傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜的應(yīng)力-應(yīng)變曲線（圖3A-3C）以及拉伸強(qiáng)度（圖3D）、彈性模量（圖3E）和斷裂伸長率（圖3F）分析結(jié)果，可見PVA/HS 10%-2%靜電紡絲纖維膜的拉伸強(qiáng)度和彈性模量均明顯高于PVA/HS 8%-2%和PVA/HS 12%-2%，并且具有（57.81±7.38）%的斷裂延伸率，表明具有良好的機(jī)械性能和延展性。 由于所紡得的纖維膜應(yīng)用于醫(yī)用敷料，必須具有一定的機(jī)械強(qiáng)度和適當(dāng)?shù)难诱剐砸詽M足關(guān)節(jié)或皮膚的運動，結(jié)合SEM 結(jié)果，PVA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜更適合用于創(chuàng)面敷料。

圖3 PVA/HS 8%-2%（A）、PVA/HS 10%-2%（B）和PVA/HS 12%-2%（C）靜電紡絲膜的拉伸應(yīng)力-應(yīng)變曲線；拉伸強(qiáng)度分析（D）； 彈性模量分析（E） ； 斷裂伸長率分析（F）。 *P＜0.05， **P＜0.01， ***P＜0.001Fig. 3 The tensile stress-strain curves of the electrospinning films of PVA/HS 8%-2% （A）， PVA/HS 10%-2% （B），PVA/HS 12%-2% （C）； Tensile strength analysis （D）； Elastic modulus analysis （E）； Elongation at break analysis （F）.*P＜0.05， **P＜0.01， ***P＜0.001

2.3 不同含藥量傷科黃水/PVA靜電紡絲納米纖維敷料的吸液能力

不同的吸液率可以決定靜電紡絲纖維敷料吸收創(chuàng)口滲出的能力，是作為良好創(chuàng)面覆蓋物的一個影響因素。由圖4 可知，10%溶液的純PVA 靜電紡絲膜具有更強(qiáng)的吸水溶脹性能。擔(dān)載藥物后的傷科黃水/PVA 復(fù)合靜電紡絲纖維膜的吸液能力有所下降，但初始吸液能力仍可達(dá)自身重量的8 倍以上，黃水含量不同的PVA/HS-2%、PVA/HS-1%和PVA/HS-0.5%靜電紡絲纖維膜，其吸液能力相當(dāng)。 說明傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜適合用于創(chuàng)面敷料，吸收創(chuàng)口滲出。

圖4 傷科黃水/PVA靜電紡絲納米纖維敷料的吸液能力Fig.4 Fluid absorption capacity of Shangkehuangshui/PVA composite fiber membrane in trauma department

2.4 體外藥物釋放性能

依照圖1 所示，搭建高壓電場靜電紡絲裝置，取紡絲液進(jìn)行靜電紡絲，與接收屏上收集靜電紡絲纖維［2］。 具體紡絲工藝參數(shù)為： 電場電壓18～24 kV，紡絲距離20 cm，進(jìn)樣速度0.019 mL/min，針頭內(nèi)徑為0.4 mm，溫度25 ℃，空氣相對濕度25%，制得靜電紡絲納米纖維膜。 將納米靜電紡絲纖維膜從鋁箔表面分離，對所得紡絲膜進(jìn)行SEM 表征觀測其表面形態(tài)，用電子萬能試驗機(jī)測試其力學(xué)性能（每組樣品的平行樣本數(shù)≥5），篩選出適宜做藥膜的相關(guān)參數(shù)，并進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞生物學(xué)、病理學(xué)等相關(guān)性能測試。

圖5 不同載藥量傷科黃水/PVA靜電紡絲納米纖維膜的（A）藥物累計釋放百分比和（B）累計藥物釋放量Fig. 5 （A） The percentage of cumulative drugs released and （B） the amount of cumulative drugs released of Shangkehuangshui/PVA electrospinning nanofiber films in traumatology with different drug load

2.5 細(xì)胞毒性檢測分析

新會計制度中添加了預(yù)算會計管理，原有會計要素從5個變成了8個，由此看出國家在逐步加強(qiáng)對行政事業(yè)單位的預(yù)算管理監(jiān)管力度。固定資產(chǎn)管理在本次會計制度變更中也有較大變化，因此加強(qiáng)固定資產(chǎn)的預(yù)算管理也十分重要。

圖6 不同含藥量傷科黃水/PVA靜電紡絲納米纖維敷料的細(xì)胞毒性分析，*P＜0.05， ****P＜0.0001Fig. 6 Cytotoxicity analysis of different drug content of traumatology Shangkehuangshui/PVA electrostatic spinning nanofiber dressing， *P＜0.05， ****P＜0.0001

2.6 大鼠全層皮膚缺損修復(fù)能力評價

2.6.1 創(chuàng)面外觀觀察

如圖7A 所示，從不同時期的創(chuàng)面照片可以直觀地看出，隨著時間的增加，各組創(chuàng)面均有愈合的趨勢。 傷口閉合在傷口愈合中具有最重要的意義，收縮的傷口可以提供一個屏障，防止微生物的入侵。在所有組中，均觀察到創(chuàng)面面積減小，而傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜組創(chuàng)面愈合速度最快。 其中，14 d 后，傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜組創(chuàng)面恢復(fù)最好，表現(xiàn)為新形成的皮膚，皮膚附著物再生，而其它組創(chuàng)面仍有明顯的創(chuàng)口殘余，圖7B 為通過修復(fù)面積計算得出的創(chuàng)面愈合率。 創(chuàng)面愈合過程中，特別是第3-7 天，傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜組的愈合速率明顯高于其它組。 傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜組的創(chuàng)面愈合率在第14 天均達(dá)到80%以上。 這些結(jié)果表明，傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜組可以通過更快的再上皮化和更短的傷口閉合時間來加速傷口修復(fù)。

圖7 （A）第3-14 天不同材料修復(fù)創(chuàng)面效果代表性照片； （B）第3-14 天創(chuàng)面愈合率。 *P＜0.05， **P＜0.01，***P＜0.001， ****P＜0.0001Fig. 7 （A） Representative photos of wound healing effects of different materials on days 3-14； （B） Wound healing rate on the 3rd to 14th day. *P＜0.05， **P＜0.01， ***P＜0.001， ****P＜0.0001

2.6.2 病理學(xué)觀察

為從病理學(xué)角度分析傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜組相比其它治療方法的顯微療效，評價創(chuàng)面的愈合病理，進(jìn)行H&E染色、Masson's染色、α-SMA和CD31免疫組化染色、TNF-α和IL-6免疫熒光染色試驗（圖8）。

圖8 （A） 第7 天和第14 天創(chuàng)面邊緣組織H&E 染色（標(biāo)尺： 100 μm）。 （B） 第14 天Masson's 三色染色和放大圖。 （C） 第7 天和第14 天α-SMA 免疫組化染色（標(biāo)尺： 100 μm）。 （D） 第7 天和第14 天CD 31 免疫組化染色（標(biāo)尺： 100 μm）。（E） 第3天和第7天TNF-α和IL-6免疫熒光雙標(biāo)（標(biāo)尺： 50 μm）Fig. 8 （A） H&E staining of wound margin on days 7 and 14 （the bar indicates 100 μm）. （B） Masson's trichromatic staining and magnification on day 14. （C） α-SMA immunohistochemical staining on days 7 and 14 （the bar indicates 100 μm）. （D） Immunohistochemical staining of CD 31 on days 7 and 14 （the bar indicates 100 μm）.（E） TNF-α and IL-6 immunofluorescence on days 3 and 7 （the bar indicates 50 μm）

首先，使用蘇木精和伊紅（H&E）染色評估第7、14天的組織樣本（圖8A）。 術(shù)后第7天空白組、HS組和PVA 組仍可見較明顯的炎癥反應(yīng)，新生組織中可見大量的新生毛細(xì)血管和纖維母細(xì)胞，并伴有炎細(xì)胞浸潤。 所有組可見肉芽組織填充傷口，其中PVA/HS-2%組最厚。 傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜PVA/HS-0.5%、PVA/HS-1%和PVA/HS-2%組炎癥反應(yīng)明顯減弱，而且傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜組的微血管數(shù)量明顯多于其它組，呈現(xiàn)PVA/HS-2%＞PVA/HS-1%＞PVA/HS-0.5%趨勢。

術(shù)后第14 天，可見含傷科黃水原藥組及傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜組基底細(xì)胞增生形成單層上皮覆蓋于肉芽組織表面，同時可見微血管數(shù)量開始減少，特別是PVA/HS-2%組的愈合效果明顯好于其他各組，可見纖維母細(xì)胞數(shù)量減少，表皮組織再生，肉芽組織已逐漸生長成熟。

展覽期間，“紀(jì)念譚建丞先生誕辰120周年座談會”在湖州市博物館舉行，受邀專家學(xué)者與譚老的學(xué)生共同緬懷這位藝術(shù)先賢。

如圖8B所示，采用Masson's三色染色（Masson's trichrome， Masson）觀察術(shù)后第14天的膠原沉積及組織情況。 空白組、PVA 組仍可見較明顯的炎癥反應(yīng)，并伴有豐富的微血管。 高倍視野觀察可見，PVA/HS-2%組膠原蛋白沉積量明顯高于其它各組，并可觀察到新生組織中膠原纖維粗大致密，松散分布在真皮組織中，表現(xiàn)出更成熟的表型，具有規(guī)則的方向和膠原網(wǎng)絡(luò)拓?fù)洌?2-13］。 膠原蛋白沉積總量排列順序為： PVA/HS-2%＞PVA/HS-1%＞HS＞PVA/HS-0.5%＞空白組＞PVA 組。 以上組織學(xué)結(jié)果表明，PVA/HS-2%傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜組對全層創(chuàng)面具有較好的愈合效果。

在創(chuàng)面閉合的中間階段，肌成纖維細(xì)胞的高水平表達(dá)通常與創(chuàng)口收縮的持續(xù)時間有關(guān)，最終導(dǎo)致更好的創(chuàng)面愈合，需要注意的是α-SMA 的表達(dá)具有時間依賴性［14-15］。 用α-SMA 免疫組化染色檢測第7 天和第14 天的組織樣本，如圖8C 所示。 HS 組、PVA 組處理的創(chuàng)面α-SMA 表達(dá)在第14 天仍然較高，表明這些創(chuàng)面仍處于創(chuàng)面修復(fù)的增殖期。 相比之下，傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜組在第14天出現(xiàn)α-SMA表達(dá)明顯下調(diào)，并且α-SMA 表達(dá)量排列順序為PVA/HS-0.5%＞PVA/HS-1%＞PVA/HS-2%。 這表明傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜組進(jìn)入重塑期，肌成纖維細(xì)胞凋亡，肉芽組織收縮減弱，從而防止異常瘢痕形成［16］。

對上下左右四個方向產(chǎn)生的結(jié)果進(jìn)行評估，評估方式為建立多個子算法加權(quán)得分，而得分最高的方向即為當(dāng)前行動的最佳方向，下一步向該方向移動，為局部最優(yōu)策略。由于不同子算法之間評判標(biāo)準(zhǔn)的不同，可能出現(xiàn)相互干擾，甚至相互對立的情況，同時不同時期受到的影響也可能不同，所以我們需要通過調(diào)整數(shù)字權(quán)重以及子算法權(quán)重完成優(yōu)化，找到較好的評判標(biāo)準(zhǔn)，提高勝率。

血管的浸潤和生長是皮膚功能再生的關(guān)鍵。 CD31可以識別傷口處新形成的血管［17-19］。 為了評價傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜對新生血管的影響，在術(shù)后第7天、14天，通過CD31免疫組化染色，研究皮膚缺損區(qū)的血管分布［20-21］。 如圖8D 所示，第7天，各組創(chuàng)面的新生組織中出現(xiàn)了大量的微血管，數(shù)量多且孔徑較小，而且傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜組處理的創(chuàng)面的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和微血管明顯多于其他組。 隨著血管的生成成熟，血管數(shù)在術(shù)后第14天迅速減少，其中傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜組處理的創(chuàng)面的毛細(xì)血管數(shù)減少幅度最大，并且微血管數(shù)排列順序為PVA/HS-0.5%＞PVA/HS-1%＞PVA/HS-2%。 該結(jié)果與H&E 染色結(jié)果一致，表明從微血管數(shù)量變化情況分析，PVA/HS-2%傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜組處理的創(chuàng)面愈合速度明顯快于其他組。

大量研究表明，炎癥因子等細(xì)胞因子與傷口愈合密切相關(guān)。 TNF-α和IL-6是促炎細(xì)胞因子，TNF-α和IL-6 的過度表達(dá)會引起嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，阻礙皮膚修復(fù)。 第3 天和第7 天用IL-6、TNF-α雙標(biāo)免疫熒光染色法檢測各組大鼠創(chuàng)口處的炎癥反應(yīng)，來評估預(yù)防炎癥的療效（圖8E）。 術(shù)后第3 天，各組均有明顯的陽性表達(dá)，而且表達(dá)強(qiáng)度相似，說明傷口處出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)。 術(shù)后第7 天，IL-6 炎性表達(dá)進(jìn)一步增加，其中空白組和PVA 組明顯高于其他各組，PVA/HS-2%組在第7 天的IL-6、TNF-α免疫熒光表達(dá)均低于其它各組，說明PVA/HS-2%具有良好的抗炎能力，在創(chuàng)面植入PVA/HS-2%傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜，可降低創(chuàng)面的炎癥反應(yīng)，縮短炎癥反應(yīng)時間，使創(chuàng)面能夠更快地進(jìn)入再生階段。

經(jīng)過激烈的角逐，最終，洛川縣鳳棲鎮(zhèn)西井村果農(nóng)王建云的蘋果，憑借縱橫比0.95、糖度18.6、硬度7.9的內(nèi)在品質(zhì)，以及外觀、口感綜合9.7的專家評審最高分，摘得首屆洛川蘋果親土狀元的桂冠。

3 結(jié) 論

通過高壓靜電紡絲的方式制備了傷科黃水/PVA 靜電紡絲納米纖維敷料。 經(jīng)實驗證明，該創(chuàng)面敷料具有良好的機(jī)械性能、吸液能力和藥物緩釋功能。 細(xì)胞毒性實驗和大鼠皮膚全層缺損修復(fù)實驗結(jié)果表明，傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜具有較好的生物相容性，不會造成排異反應(yīng)，且與傳統(tǒng)臨床應(yīng)用傷科黃水的方法相比可起到類似人工皮膚的作用，進(jìn)而防止創(chuàng)口感染，易于吸收創(chuàng)口恢復(fù)前期滲出，加速皮膚缺損修復(fù)。 其中，PVA/HS-2%傷科黃水/PVA靜電紡絲纖維膜組，有更好的創(chuàng)面修復(fù)效果。

綜上可見，傷科黃水/PVA 靜電紡絲纖維膜具有作為一種良好的創(chuàng)面覆蓋物、吸收創(chuàng)口滲出和加速皮膚缺損修復(fù)的巨大潛力，在拓寬院內(nèi)制劑中藥“傷科黃水”的應(yīng)用形式，增強(qiáng)其使用效果方面具有十分廣闊的前景，后期將進(jìn)行中試放大實驗并重點關(guān)注其在臨床上用于骨傷導(dǎo)致的輕度皮膚創(chuàng)傷或嚴(yán)重皮膚組織創(chuàng)傷的即時關(guān)閉及修復(fù)效果。