馬尚杰，馬 強(qiáng)，張 晉

（甘肅省家畜繁育改良管理站，甘肅武威 733000）

21 世紀(jì)以來，微生態(tài)制劑研發(fā)一直是行業(yè)內(nèi)的研究熱點(diǎn)。眾多研究表明微生態(tài)制劑可以提高飼料轉(zhuǎn)化率并提升動物免疫力，但其對幼齡家畜消化道疾病的預(yù)防、治療方面臨床應(yīng)用甚少[1,2]。微生態(tài)制劑具有無毒、不產(chǎn)生耐藥性，長期存活于消化道等優(yōu)點(diǎn)，在疾病診療中是最理想的抗生素替代品，因此利用微生態(tài)制劑治療疾病具有一定科研價值[3,4]。腎陽虛是最為常見的犢牛腹瀉病類型，且公犢牛臨床癥狀表征突出，以公犢牛腎陽虛功能性腹瀉病癥為基礎(chǔ)研究微生態(tài)制劑對消化系統(tǒng)的干預(yù)作用最具代表性。本文旨在建立腎陽虛功能性腹瀉公牛犢模型，并用復(fù)合微生態(tài)制劑對其進(jìn)行治療，為復(fù)合微生態(tài)制劑的科研提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 微生態(tài)制

復(fù)合微生態(tài)制劑配方：枯草芽孢桿菌+植物乳桿菌+低聚果糖。單一微生態(tài)制劑配方：枯草芽抱桿菌制劑（活菌數(shù)109CFU/g）。

1.1.2 試驗(yàn)動物

雄性3 月齡內(nèi)公犢牛72 頭（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供），體重(100±20)kg，飼養(yǎng)于武威市牛樂有限責(zé)任公司養(yǎng)殖場，自由飲水和采食。

1.1.3 試驗(yàn)器材

采血針、手術(shù)刀、醫(yī)用手套、一次性注射器、電子體溫計、真空采血管、電子天平、冷凝回流裝置、實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)CREAT、SHZ循環(huán)水真空泵、恒溫箱和電冰箱等。

1.1.4 主要試劑

75%酒精（批號201910087）購自于甘肅蘭州生工生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；甲醛（批號20190106）購自北京化工廠生產(chǎn)；水合氯醛（批號20190620）購自于北京北方生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 預(yù)試驗(yàn)

選西門塔爾公犢牛12 頭，隨機(jī)分為3 組，分別為：對照組、模型組、復(fù)合微生態(tài)制劑組。除腎陽虛功能性腹瀉模型組采取肌肉注射氫化可的松以外，其余均進(jìn)行灌服給藥，給藥前后測體溫、體重，預(yù)試驗(yàn)為期7d。

1.2.2 正式試驗(yàn)

挑選72 頭公牛犢，隨機(jī)分為6 組，對照組、復(fù)合微生態(tài)制劑高、中、低劑量組、單一組和腎陽虛模型組，各組處理方式見表1。各組公犢牛體重進(jìn)行t 檢驗(yàn)，P=0.378＞0.05，差異不顯著，說明各組之間犢牛體質(zhì)量差別不會對試驗(yàn)結(jié)果造成影響。犢牛分群飼養(yǎng)，接受自然光照，可自由飲水和采食。公犢?；A(chǔ)日糧與飼養(yǎng)管理按《實(shí)驗(yàn)動物 中國地鼠飼養(yǎng)管理》（DB14/T 1945—2019）標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。正式試驗(yàn)于2023 年6 月15 日至8 月3 日進(jìn)行，共計50d。

表1 各試驗(yàn)組處理劑量

1.2.3 公犢牛臨床癥狀觀察

造模和給藥前對72 頭公犢牛進(jìn)行體溫和體重的測量，觀察并記錄其精神狀態(tài)，采食量，飲水量，體毛光澤度和是否有蜷縮，弓背姿態(tài)等一般臨床癥狀。給藥和造模1h 后，再測量體重和體溫，觀察是否出現(xiàn)蜷縮弓背姿態(tài)等一般理指標(biāo)。

1.2.4 公犢牛的剖檢和采樣

試驗(yàn)第25、50 天觀察犢牛腹瀉情況，用羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)診斷，計算腹瀉發(fā)病率。給藥共計50d，第50 天給藥結(jié)束后，注射水合氯醛麻醉公犢牛后頸靜脈采血，以4000r/min 離心15min 分離血清；處死公犢牛后，每組選4 頭體重差異較小公犢牛，取腎臟、睪丸、丘腦、垂體、下丘腦稱重并采樣于甲醛溶液中固定。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

上述記錄的數(shù)據(jù)錄入Excel 2010，由他人核查數(shù)據(jù)，保證數(shù)據(jù)的高度精確后，導(dǎo)入SPSS 21.0 進(jìn) 行t 檢 驗(yàn)，P＜0.05 表示差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

由表2 可知，灌服后腎陽虛功能性腹瀉模型組、微生態(tài)組與對照組相比，體溫、體重顯著降低（P＜0.05），說明微生態(tài)制劑可能對公犢牛體溫、體重具有一定影響。

表2 預(yù)試驗(yàn)用藥前后平均體重和平均溫度

2.2 正式試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 一般臨床癥狀

對照組公犢牛在試驗(yàn)流程中被毛光滑潔白、活動性高、食欲飲水良好；模型組漸漸出現(xiàn)精神萎靡、倦怠少動、弓背豎毛、體溫與體重度降低等癥狀，伴隨給藥天數(shù)的延長，上述癥狀日益明顯，且出現(xiàn)不同程度的腹瀉，表明模型建立成功；復(fù)合微生態(tài)制劑組與單一組無肉眼可見臨床癥狀變化。

2.2.2 用藥后對公犢牛體重、體溫、腹瀉率和臟器系數(shù)的影響

由表3 可知，模型組與空白組相比體重顯著降低（P＜0.05），表明腎陽虛功能性腹瀉證公犢牛體重增長緩慢；高劑量組與單一組相比，體重顯著升高（P＜0.05），表明復(fù)合微生態(tài)制劑與單一促進(jìn)腎陽虛功能性腹瀉公犢牛體重增長，而且復(fù)合微生態(tài)制劑的促進(jìn)效果隨用藥劑量升高而提升。

表3 用藥后公犢牛體重、體溫、腹瀉率和臟器系數(shù)對比

模型組與空白組相比體溫差顯著降低（P＜0.05），與腎陽虛功能性腹瀉臨床癥狀畏寒肢冷是相互一致的，證明本試驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒊晒Γ粡?fù)合微生態(tài)制劑低劑量組、高劑量組與模型組體溫相比顯著升高（P＜0.05），表明復(fù)合微生態(tài)制劑與單一均能促進(jìn)公犢牛產(chǎn)熱致使體溫升高，且復(fù)合微生態(tài)制劑明顯優(yōu)于單一微生態(tài)制劑。

模型組下丘腦和垂體臟器系數(shù)均高于對照組（P＜0.05），表明腎陽虛功能性腹瀉損傷公犢牛下丘腦-腺垂體系統(tǒng)功能，抑制神經(jīng)、體液性聯(lián)系；復(fù)合微生態(tài)制劑高劑量組與模型組相比，下丘腦和垂體臟器系數(shù)明顯偏高（P＜0.05），表明復(fù)合微生態(tài)制劑對下丘腦與垂體作用效果明顯，能調(diào)節(jié)腎陽虛模型公犢牛下丘腦與垂體的機(jī)能。

模型組與空白組相比，睪丸指數(shù)顯著降低（P＜0.05），且均低于其他組，表明腎陽虛證引起睪丸萎縮，降低睪丸質(zhì)量。單一組、復(fù)合微生態(tài)制劑與對照組相比，睪丸質(zhì)量無顯著差異（P＞0.05），表明單一微生態(tài)制劑與復(fù)合微生態(tài)制劑對腎陽虛證引起的睪丸萎縮均有療效。

腎陽虛模型組腹瀉率最高（44.81%），證明公犢牛腎陽虛癥狀常伴隨腹瀉的出現(xiàn)；復(fù)合微生態(tài)制劑組和單一組腹瀉率明顯低于模型組，證明微生態(tài)制能降低腹瀉的發(fā)生。第50 天時復(fù)合微生態(tài)制中劑量試驗(yàn)組與對照組相比，腹瀉率降低，但低劑量、高劑量組高于對照組，低于單一組和模型組，證明微生態(tài)制劑對腎陽虛功能性腹瀉有一定治療作用。

3 結(jié)論

復(fù)合微生態(tài)制劑與單一枯草芽抱桿菌制劑均能改善公犢牛腎陽虛功能性腹瀉臨床癥狀，增加公犢牛體重、下丘腦和垂體指數(shù)，提升公犢牛體溫，改善機(jī)體下丘腦—垂體—睪丸軸的功能，從而降低腹瀉的發(fā)生。在體溫調(diào)節(jié)方面，復(fù)合微生態(tài)制劑療效整體優(yōu)于單一枯草芽抱桿菌制劑。復(fù)合微生態(tài)制劑給藥量10.2g/(kg·d)時治療腎陽虛功能性腹瀉效果最佳。