馬苗苗，周佳敏，田 佳，路婷婷，侯麗娥，張艷梅，梅寧安，溫 萬(wàn)*

（1.寧夏回族自治區(qū)畜牧工作站，寧夏銀川 750011；2.寧夏農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，寧夏銀川 750011）

堅(jiān)木縮合單寧是以南美白堅(jiān)木為原料提取制備的單寧產(chǎn)品，其主要成分縮合單寧（Condensed tannin，CT），分子量為2900～28000，是以無(wú)分支黃酮類化合物為主的聚合物[1]，不易被水解，能與蛋白質(zhì)、多糖等物質(zhì)形成可逆和非可逆復(fù)合物[2]。奶牛僅依靠瘤胃菌體蛋白不能滿足其營(yíng)養(yǎng)需要，而縮合單寧酸能在反芻動(dòng)物瘤胃中與消化酶及飼料蛋白質(zhì)結(jié)合形成沉淀，增加過(guò)瘤胃蛋白數(shù)量，提高小腸蛋白利用率，進(jìn)而提高奶牛飼料效率[3]?？s合單寧作為保護(hù)瘤胃蛋白質(zhì)的添加劑具有很大潛力，同時(shí)在提高氮的利用效率和改善生鮮乳品質(zhì)等方面具有重要研究意義。單寧酸還具有一定的抑菌、抗氧化、抗炎癥和改善腸道微生態(tài)環(huán)境的作用，用單寧酸替代抗生素已在畜牧生產(chǎn)中應(yīng)用[4]。本試驗(yàn)旨在探究添加堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯奶牛泌乳前期生產(chǎn)性能和血清生化指標(biāo)的影響，以期為奶牛養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐中合理應(yīng)用堅(jiān)木縮合單寧提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用堅(jiān)木縮合單寧，其中天然堅(jiān)木多酚含量≥64%，磚紅色粉末狀，由寧夏農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間地點(diǎn)

試驗(yàn)時(shí)間為2022 年7—8 月，在寧夏永寧縣某奶牛場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)期共計(jì)37d，其中預(yù)試期7d，正試期30d。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)選取170 頭產(chǎn)奶量[(37.73±8.74)kg/d]、泌乳天數(shù)[(57.95±18.72)d]、胎次（1～2 胎）相近的泌乳中期健康荷斯坦奶牛170 頭，隨機(jī)分為2組，每組85 頭。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加50g/（頭·d）縮合單寧。

每天07:00、13:00 和19:00 按照5∶3∶2 的比例投喂奶牛3 次TMR，自由采食，自由飲水。使用阿菲金擠奶設(shè)備，每天擠奶3 次。基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 DMI

每天記錄TMR 投料量和剩料量，根據(jù)TMR干物質(zhì)含量和牛頭數(shù)，計(jì)算奶牛平均干物質(zhì)采食量。

1.4.2 產(chǎn)奶量

由Afifarm v5.4 系統(tǒng)記錄每天三個(gè)班次產(chǎn)奶量。

1.4.3 乳成分

試驗(yàn)開(kāi)始和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，按早、中、晚4∶3∶3 收集乳樣50mL，加入2 滴重鉻酸鉀防腐劑，搖勻放入冰箱冷藏。在寧夏DHI 測(cè)定中心測(cè)定乳蛋白率、乳脂率、乳尿素氮、體細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)。

1.4.4 血液生化指標(biāo)

試驗(yàn)第30 天，每組隨機(jī)選擇8 頭奶牛，尾根靜脈采集血液10mL，收集血清并保存在-20℃的冰箱中。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清丙二醛含量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性；采用ELISA 法測(cè)定血清腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-a，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）、白細(xì)胞介素6（Interleukin-6，IL-6）、免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）和免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）。使用愛(ài)德士血常規(guī)檢測(cè)儀測(cè)定血常規(guī)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)先經(jīng)由Excel 2010 初步整理，用SPSS 18.0 的獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.10 表示有顯著差異的趨勢(shì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯坦奶牛干物質(zhì)采食量和產(chǎn)奶量的影響

如表2 所示，添加堅(jiān)木縮合單寧荷斯坦奶牛的產(chǎn)奶量、4%乳脂校正乳產(chǎn)量、干物質(zhì)采食量和飼料轉(zhuǎn)化效率均無(wú)顯著影響（P＞0.05)。

表2 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯坦奶牛產(chǎn)奶量和干物質(zhì)采食量的影響

2.2 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯坦奶牛乳品質(zhì)的影響

如表3 所示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組添加堅(jiān)木縮合單寧可顯著降低生鮮乳體細(xì)胞數(shù)（P＜0.05），但對(duì)乳蛋白率、乳脂肪率、乳糖率、乳固物和尿素氮均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表3 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)乳品質(zhì)的影響

2.3 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯坦奶牛血液生化指標(biāo)的影響

血液免疫因子的影響結(jié)果如表4 所示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組添加堅(jiān)木縮合單寧顯著提高了荷斯坦奶牛血液中IL-1、IL-2 和TNF-α含 量（P＜0.05），但對(duì)IL-6、IgA、IgG 和IgM 等免疫因子無(wú)顯著影響（P＞0.05)。

表4 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯坦奶牛血液指標(biāo)的影響

從抗氧化物的影響結(jié)果看，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組添加堅(jiān)木縮合單寧顯著降低了丙二醛含量（P＜0.05），顯著提高了谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和超氧化物歧化酶含量（P＜0.05）。

從血常規(guī)的影響結(jié)果看，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組添加堅(jiān)木縮合單寧顯著提高了荷斯坦奶牛血液中白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞總數(shù)、中間細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞總數(shù)（P＜0.05），顯著降低了血小板總數(shù)（P＜0.05），顯著提高了血小板平均體積、血小板分布寬度、血小板壓積和大血小板總數(shù)（P＜0.05）。

3 討論

3.1 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯坦奶牛產(chǎn)奶量和DMI 的影響

Mezzom 等[5]在肉牛含豆粕或不含豆粕日糧中添加縮合單寧1g/10kg BW，發(fā)現(xiàn)縮合單寧對(duì)CP的消化率無(wú)顯著影響。Benchaar 等[6]和Baah等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在奶牛日糧中添加0.64%白堅(jiān)木縮合單寧和0.6%白堅(jiān)木單寧對(duì)奶牛采食量未產(chǎn)生影響，且DM、CP、NDF 和ADF 消化率也未受到影響，這與本研究結(jié)果一致。添加10%朱櫻花縮合單寧增加了18%的過(guò)瘤胃蛋白量，使其在小腸內(nèi)分解利用，從而提高飼料蛋白質(zhì)的利用效率[8]。Min 等[9]研究表明，日糧中添加縮合單寧的存在會(huì)提高小腸日糧蛋白質(zhì)的流量，提高氮的利用效率。單寧和蛋白質(zhì)通常是在瘤胃弱酸性（pH=6～7）的情況形成蛋白質(zhì)-單寧復(fù)合物，防止被瘤胃微生物降解；在皺胃內(nèi)pH 值小于3.5 時(shí)會(huì)發(fā)生解離，從而釋放出更多的蛋白質(zhì)供蛋白酶消化[10]。本研究在8 月奶牛熱應(yīng)激高發(fā)期添加堅(jiān)木縮合單寧，對(duì)照組高產(chǎn)荷斯坦奶牛產(chǎn)奶量隨著泌乳時(shí)間增加有下降的趨勢(shì)，而試驗(yàn)組產(chǎn)奶量隨著泌乳時(shí)間的增加有增加的趨勢(shì)，這可能與堅(jiān)木縮合單寧有一定的抗應(yīng)激作用有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果與Griffiths 等[11]和高巖[12]研究一致，添加縮合單寧對(duì)4%脂肪校正乳沒(méi)有顯著影響。

3.2 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯坦奶牛乳品質(zhì)的影響

Bhatta 等[13]在泌乳中期奶牛日糧中添加縮合單寧（7.5%羅望子殼），顯著提高了乳蛋白率，但對(duì)奶牛產(chǎn)奶量與乳脂率無(wú)影響。牛奶尿素氮是乳蛋白的一部分，源于血液尿素氮，熱應(yīng)激對(duì)牛奶尿素氮水平有較大影響[14]，牛奶尿素氮是評(píng)估日糧蛋白和能量水平的重要工具，測(cè)定牛奶尿素氮可作為監(jiān)測(cè)奶牛氮效率和提高牛奶氮產(chǎn)量的指標(biāo)[15]，本研究與Griffiths 等[11]和高巖[12]研究一致，添加縮合單寧酸對(duì)尿素氮等乳成分沒(méi)有顯著影響。體細(xì)胞數(shù)上升主要是血液中的白細(xì)胞進(jìn)入乳腺組織吞噬侵入的病原菌而引起的，大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)會(huì)對(duì)乳腺組織造成損傷，降低產(chǎn)奶量，奶牛受熱應(yīng)激影響體細(xì)胞數(shù)會(huì)大量上升，產(chǎn)奶量也會(huì)下降10%～20%[16]。本試驗(yàn)在熱應(yīng)激高發(fā)的8 月份開(kāi)展，在高產(chǎn)奶牛日糧中添加堅(jiān)木縮合單寧顯著降低了體細(xì)胞數(shù)，證明其有一定的抗炎、抗應(yīng)激能力。

3.3 堅(jiān)木縮合單寧對(duì)荷斯坦奶牛血液生化指標(biāo)的影響

堅(jiān)木縮合單寧是多酚類天然植物提取物，多酚會(huì)與蛋白質(zhì)結(jié)合生成單寧酸蛋白，在小腸堿性環(huán)境中單寧酸蛋白分解釋放單寧酸，進(jìn)而促進(jìn)血管收縮、減少炎性滲出物對(duì)小腸的刺激[17]，單寧的抗菌作用也可能是通過(guò)抑制微生物氮代謝來(lái)抑制細(xì)菌和真菌的繁殖[18]。有研究發(fā)現(xiàn)，單寧酸是一種天然抗氧化劑，能在氧化應(yīng)激條件下啟動(dòng)抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄，上調(diào)超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶等其他細(xì)胞抗氧化酶活性及表達(dá)量將機(jī)體氧化損傷降低[19]，可有效清除二苯基苦基苯肼自由基和超氧離子自由基，提高抗氧化酶活性及降低體內(nèi)氧化應(yīng)激水平[20]。丙二醛是機(jī)體自由基的氧化終產(chǎn)物，過(guò)多會(huì)引起細(xì)胞損傷。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和超氧化物歧化酶能清除在細(xì)胞呼吸代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化物和羥自由基，能消除生物體在新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的超氧陰離子自由基，保護(hù)機(jī)體免受損害。動(dòng)物通過(guò)抗氧化作用清除體內(nèi)自由基等物質(zhì)來(lái)提高機(jī)體免疫能力，已有研究發(fā)現(xiàn)，在奶牛每千克日糧中添加10g 栗樹(shù)單寧可顯著提高抗氧化能力[21]，在肉牛日糧中添加單寧酸顯著提高了總抗氧化能力[22]。這與本研究結(jié)果一致，本研究發(fā)現(xiàn)堅(jiān)木縮合單寧能顯著降低血液丙二醛含量，在高產(chǎn)奶牛日糧中添加堅(jiān)木縮合單寧顯著增加了谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和超氧化物歧化酶，增強(qiáng)了高產(chǎn)荷斯坦奶牛抗應(yīng)激水平。

炎癥是從機(jī)體移除有害病原體和毒素的重要生物反應(yīng)，吞噬細(xì)胞激活誘導(dǎo)干擾素信號(hào)通路和TRIF 相關(guān)接頭分子信號(hào)通路，產(chǎn)生促炎因子IL-1、IL-2、IL-6、和TNF-α 等，動(dòng)物體內(nèi)炎癥調(diào)控是通過(guò)調(diào)節(jié)IL-1、IL-6、IL-8 和TNF-α 等細(xì)胞因子在內(nèi)的基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)，單寧酸可能是通過(guò)影響吞噬細(xì)胞阻斷炎癥通路而達(dá)到抗炎作用[4]。本研究發(fā)現(xiàn)堅(jiān)木縮合單寧能通過(guò)提高高產(chǎn)荷斯坦奶牛IL-1、IL-2 和TNF-α 提高奶牛免疫性能，增強(qiáng)抗炎能力。淋巴細(xì)胞是主要的免疫活性細(xì)胞，白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的數(shù)量增加，機(jī)體免疫功能增強(qiáng)，本研究發(fā)現(xiàn)堅(jiān)木縮合單寧能通過(guò)提高奶牛血液中白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞總數(shù)、中間細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞總數(shù)的含量，提高機(jī)體免疫能力。

4 結(jié)論

在高產(chǎn)奶牛日糧中添加50g/(頭·d)堅(jiān)木縮合單寧能降低牛奶體細(xì)胞數(shù)，改善乳品質(zhì)；顯著降低血清丙二醛含量，顯著增加血清谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和超氧化物歧化酶含量，補(bǔ)飼堅(jiān)木縮合單寧可能是改善高產(chǎn)奶?？寡趸癄顟B(tài)的可行途徑；顯著增加了IL-1、IL-2 和TNF-α 等免疫因子含量，改善奶牛免疫性能，增強(qiáng)抗炎能力。