馮玲玲，陳樹杰，車煒

（邯鄲市中心醫(yī)院老年病二科，邯鄲 056001）

心力衰竭（HF）是ST 抬高型急性心肌梗死（AMI）患者最常見并發(fā)癥。據(jù)統(tǒng)計(jì)，AMI 后1 年內(nèi)HF 發(fā)病率超過45%，而AMI 后HF（HF-AMI）患者5 年生存率不足40%，HF-AMI 是影響AMI 患者中遠(yuǎn)期預(yù)后的重要因素[1-2]。HF-AMI 病理機(jī)制復(fù)雜，其中氧化應(yīng)激和心肌組織纖維化在HF-AMI 發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色，由核因子E2 相關(guān)因子2（Nrf2）及其下游蛋白血紅素加氧酶1（HO-1）組成的信號(hào)通路對氧化應(yīng)激具有重要調(diào)控作用。有文獻(xiàn)報(bào)道通過干預(yù)Nrf2/HO-1 信號(hào)通路可有效減輕 HF-AMI大鼠心肌組織氧化應(yīng)激和纖維化，改善心功能[3]。

刺五加（又名五加參）為《中國藥典（一部）》收錄中藥品種，以五加科植物刺五加的干燥根和根莖入藥，性溫、味辛，歸脾、腎、心經(jīng)，具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神等功效。刺五加注射液（CWJI）是以刺五加水醇提取物為有效成分制成的中成藥，目前主要用于缺血性腦病以及冠心病、心絞痛的治療。有研究報(bào)道CWJI 可通過激活Nrf2/HO-1 信號(hào)通路減輕氧化應(yīng)激對大鼠腎缺血再灌注損傷起到保護(hù)作用[4]，并且CWJI 對化療藥物等所致大鼠心肌損傷具有保護(hù)作用[5-6]，但CWJI 對HF-AMI 大鼠的影響及相關(guān)機(jī)制尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過復(fù)制HF-AMI 大鼠模型，探討CWJI 對HF-AMI 大鼠心肌組織的影響及相關(guān)機(jī)制，以期為HF-AMI 臨床治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級Wistar 大鼠（雄性、7 周齡、210～240 g）105 只購自北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心[許可證號(hào)：SCXK（京）2018-0010]。在（23±1）℃、相對濕度（55±10）%、光照12 h 黑暗12 h 的控制環(huán)境中飼養(yǎng)，進(jìn)食飲水不限。本實(shí)驗(yàn)獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相關(guān)操作遵循減少、替代、優(yōu)化原則。

1.2 藥物與試劑 CWJI（黑龍江烏蘇里江制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z23023215，批號(hào)21A0917005）；卡托普利注射液（CPT，常州制藥廠有限公司，國藥準(zhǔn)字H10970293，批號(hào)220113）；心肌肌鈣蛋白T（cTnT）、血管緊張素Ⅱ（Ang Ⅱ）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒和蘇木精-伊紅（HE）、原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記（TUNEL）、馬松（Masson）染色試劑盒（北京索萊寶生物科技公司，貨號(hào)SEKR-0047、SEKR-0049、G1120、T2190、G1340）；醛固酮（ALD）ELISA法試劑盒（泉州市睿信生物科技有限公司，貨號(hào)RXJ302392R）；總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）檢測試劑盒和RIPA 裂解液、2，2’-聯(lián)喹啉-4，4’-二甲酸二鈉（BCA）法蛋白定量試劑盒（上海碧云天生物科技有限公司，貨號(hào)S0109、S0056、S0131S、W063-1-1、A045-4-1）；活性氧（ROS）檢測試劑盒、TRIzol 總RNA 提取試劑、一步法RT-PCR 試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)E004-1-1、N065、N116）；Nrf2、HO-1、β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）抗體和免疫球蛋白G 抗體（IgG 二抗）、增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光液（ECL）（北京博奧森生物技術(shù)公司，貨號(hào)bs-1074R、bs-2075R、bs-0061R、bs-0295G、C05-07004）。

1.3 主要儀器 小動(dòng)物呼吸機(jī)（DW-3000 型，安徽正華生物儀器公司）；多普勒超聲儀（770TM-120型，加拿大Visual Sonics 公司）；生理信號(hào)采集系統(tǒng)（MP150 型，美國BSI 公司）；酶標(biāo)儀（DTX880 型，美國貝克曼公司）；紫外-可見分光光度計(jì)（ND2000C型，美國Thermo 公司）；930F 型熒光分光光度計(jì)（上海儀電分析儀器有限公司）；石蠟切片機(jī)（RM2016型，上海徠卡儀器公司）；超薄切片機(jī)（EMUC7 型，德國Leica 公司）；透射電子顯微鏡（HT7700 型，日本日立公司）；蛋白電泳轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)（PowerPac 型，美國Bio-Rad 公司）；QuantStudio 5 型PCR 儀（美國ABI公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 HF-AMI 大鼠模型制備與給藥 適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)取105 只大鼠中的16 只作為假手術(shù)（Sham）組，剩余89 只通過結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支復(fù)制HF-AMI 大鼠模型，結(jié)扎后心尖部位顏色變蒼白、心電圖ST 段明顯抬高或T 波高聳則說明心肌梗死制備成功，2 周后通過多普勒超聲檢測左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF），LVEF ＜50%即可判定HF-AMI 大鼠模型制備成功[7]。共造模成功82 只，隨機(jī)取80 只HF-AMI 成模大鼠隨機(jī)分為模型（Model）組、CPT 組和CWJI 低（CWJI-L）、中（CWJI-M）、高劑量（CWJIH）組，每組16 只。Sham 組大鼠除了不結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支外，其余操作同Model 組。CPT 組腹腔注射給藥10 mg/kg[8]，CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組分別腹腔注射給藥15、30、60 mg/kg（參照人臨床應(yīng)用劑量，根據(jù)人與大鼠劑量換算公式計(jì)算所得，分別相當(dāng)于人臨床劑量的1/2、1、2 倍），Sham 組和Model組分別腹腔注射給予生理鹽水，給藥頻次均為1 次/日，療程4 周。

1.4.2 大鼠心功能指標(biāo)檢測 治療完成后，隨機(jī)取每組8 只大鼠，腹腔注射水合氯醛溶液（0．35 mg/kg）進(jìn)行麻醉后，通過多普勒超聲儀，取左室短軸解剖位M 模式圖像，檢測大鼠心功能指標(biāo)[LVEF 和左室短軸縮短率（LVFS）]；通過生理信號(hào)采集系統(tǒng)檢測心功能指標(biāo)[左室內(nèi)壓最大上升速率和最大下降速率（+dp/dtmax、-dp/dtmax）]。

1.4.3 ELISA 法檢測血清 cTnI、AngⅡ、ALD 水平 經(jīng)腹主動(dòng)脈采血 5 mL 并離心（1 500 r/min，離心半徑10 cm，5 min）取血清，遵照試劑盒操作說明，采用ELISA 法檢測血清 cTnI、Ang Ⅱ、ALD 水平。

1.4.4 計(jì)算左室心肌肥厚指數(shù)（LVHI） 稱量大鼠體質(zhì)量（M1），開胸取心臟，剪取左心室心肌用生理鹽水沖洗干凈后稱質(zhì)量（M2），LVHI（%）=（M2/M1）×100%。

1.4.5 HE、TUNEL、Masson 染色法觀察心肌組織病理學(xué)改變、細(xì)胞凋亡和組織纖維化狀況 取左心室缺血區(qū)心肌組織，經(jīng)4%多聚甲醛溶液固定、石蠟包埋、切片、展片、烤片等處理后，按照各試劑盒操作說明：1）行HE 染色后顯微鏡下觀察心肌組織病理學(xué)改變。2）行TUNEL 染色后觀察心肌細(xì)胞凋亡狀況（細(xì)胞核黃褐色為陽性著色），400 倍光學(xué)顯微鏡下取每張切片5 個(gè)互不重疊的視野，計(jì)數(shù)視野內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，凋亡指數(shù)（AI）=（凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)）×100%。3）行Masson 染色后觀察心肌組織纖維化狀況（藍(lán)色為膠原著色），400 倍光學(xué)顯微鏡下拍取5 個(gè)互不重疊的視野，通過Image J 軟件分析視野內(nèi)藍(lán)色膠原纖維面積和視野總面積，膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）=（藍(lán)色膠原纖維面積/視野總面積）×100%。

1.4.6 透射電子顯微鏡觀察心肌細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)變化 取每組剩余的8 只大鼠，頸椎脫臼處死后開胸取心臟，剪取少量左心室心肌修飾成1 mm3小塊后行2．5%戊二醛3 h 和1%鋨酸1 h 雙固定，脫水和丙酮置換后環(huán)氧樹脂包埋，50 nm 超薄切片后行醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛雙染色，通過透射電子顯微鏡觀察心肌細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)。

1.4.7 分光光度法檢測心肌組織T-SOD、GSH-Px 活性和MDA、ROS 含量 取部分左心室缺血區(qū)心肌組織加入適量4 ℃生理鹽水研磨勻漿，離心（3 500 r/min，離心半徑10 cm，5 min）取上清液，遵照試劑盒操作說明，通過紫外-可見分光光度計(jì)檢測心肌組織TSOD 活性（檢測波長560 nm）、GSH-Px 活性（檢測波長340 nm）、MDA 含量（檢測波長535 nm）；通過熒光分光光度計(jì)檢測心肌組織ROS 含量（激發(fā)波長502 nm，發(fā)射波長530 nm）。

1.4.8 RT-PCR 法檢測心肌組織Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá) 取適量左心室缺血區(qū)心肌組織，TRIzol 法提取總RNA，按試劑盒說明將RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后行PCR 擴(kuò)增，引物序列：Nrf2 上游引物5’-TGACAATGAGGTTTCTTCGGCTACG-3’，下游引物5’-TGCCCCTGAGATGGTGACAA-3’，擴(kuò)增長度 112 bp；HO-1 上游引物5’-GGCCTCCCTGTACCACATCT-3’，下游引物5’-CTGCA TGGCTGGTGTGTAGG-3’，擴(kuò)增長度 173 bp；β-actin 上游引物5’-CTGTGTTG TCCCTGTATGCC TCTG’，下游引物5’- GGAACCG CTCATTGCCGATAGTG-3’，擴(kuò)增長度 116 bp。擴(kuò)增程序：95 ℃5 min；95 ℃30 s、60 ℃30 s，重復(fù)40 個(gè)循環(huán)。以β-actin 為內(nèi)參，運(yùn)用公式2-ΔΔCt計(jì)算Nrf2、HO-1 mRNA 相對表達(dá)量。

1.4.9 Western Blot 法檢測心肌組織Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá) 取100 mg 左心室缺血區(qū)心肌組織加入1 mL RIPA 裂解液提取總蛋白，BCA 法進(jìn)行蛋白定量后，30 μg 總蛋白量上樣、凝膠電泳分離蛋白、轉(zhuǎn)PVDF膜、5%蛋白封閉液室溫封閉2 h 后，加目標(biāo)蛋白一抗稀釋液Nrf2（1∶1 000）、HO-1（1∶1 000）和內(nèi)參蛋白稀釋液β-actin（1∶2 000）4 ℃孵育過夜，洗膜后加二抗稀釋液IgG（1∶2 000）室溫孵育1 h，洗膜后加ECL 顯影，通過蛋白條帶灰度值半定量目標(biāo)蛋白相對表達(dá)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20．0 軟件行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t 檢驗(yàn)，P＜0．05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心功能指標(biāo)比較 與Sham 組比較，Model 組大鼠LVEF、LVFS、+dp/dtmax、-dp/dtmax 顯著降低（P＜0．05）。與Model 組比較，CPT 組和CWJIL、CWJI-M、CWJI-H 組LVEF、LVFS、+dp/dtmax、-dp/dtmax（CWJI-L 組除外）顯著升高（P＜0．05），CWJI各劑量組間上述效應(yīng)呈劑量依賴性（P＜0．05）。與CPT 組比較，CWJI-H 組LVEF、+dp/dtmax、-dp/dtmax 顯著升高（P＜0．05），兩組間LVFS 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。見表1。

表1 各組大鼠心功能指標(biāo)比較（±s）Tab.1 Comparison of cardiac function indexes of rats in each group（±s）

表1 各組大鼠心功能指標(biāo)比較（±s）Tab.1 Comparison of cardiac function indexes of rats in each group（±s）

注：與Sham 組比較，*P＜0．05；與Model 組比較，#P＜0．05；與CPT 組比較，△P＜0．05；與CWJI-L 組比較，▲P＜0．05；與CWJI-M 組比較，&P＜0．05。

組別動(dòng)物數(shù)LVEF（%）LVFS（%）+dp/dtmax（mmHg/s）-dp/dtmax（mmHg/s）Sham 組879．84±8．1353．09±5．262 399．04±243．181 871．92±230．71 Model 組836．02±3．97*25．48±2．33*1 193．57±160．31*1 145．07±148．26*CPT 組862．14±6．50#5．24#41．36±4．20#1 834．71±212．28#1 424．35±187．31#CWJI-L 組848．66±30．14±3．17#1 442．89±191．76#1 274．30±155．62 CWJI-M 組859．31±6．40#▲37．96±3．68#▲1 800．64±206．05#▲1 438．75±170．19#▲CWJI-H 組870．78±7．53#△▲&45．07±4．41#▲&2 095．32±227．28#△▲&1 659．11±193．27#△▲&

2.2 各組大鼠血清 cTnI、Ang Ⅱ、ALD 水平比較 與Sham 組比較，Model 組大鼠血清 cTnI、Ang Ⅱ、ALD水平顯著升高（P＜0．05）。與Model 組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組血 清 cTnI、Ang Ⅱ、ALD 水平顯著降低（P＜0．05），CWJI 各劑量組間上述效應(yīng)呈劑量依賴性（P＜0．05）。與CPT 組比較，CWJIH 組cTnI、Ang Ⅱ、ALD 水平顯著降低（P＜0．05）。見表2。

表2 各組大鼠血清cTnI、Ang Ⅱ、ALD 水平比較（±s）Tab.2 Comparison of the level of cTnI，Ang Ⅱ，ALD in serum of rats in each group（±s）

表2 各組大鼠血清cTnI、Ang Ⅱ、ALD 水平比較（±s）Tab.2 Comparison of the level of cTnI，Ang Ⅱ，ALD in serum of rats in each group（±s）

注：與Sham 組比較，*P＜0．05；與Model 組比較，#P＜0．05；與CPT組比較，△P＜0．05；與CWJI-L 組比較，▲P＜0．05；與CWJI-M 組比較，&P＜0．05。

?組別動(dòng)物數(shù) cTnI（pg/L） Ang Ⅱ（pg/mL）ALD（pg/mL）Sham 組824．75±2．9185．17± 9．03469．20± 52．47 Model 組873．00±8．26*162．49±18．50*991．57±104．33*CPT 組839．84±4．50#114．08±11．92#658．13± 72．54#CWJI-L 組863．29±7．12#135．74±16．24#853．09± 92．17#CWJI-M 組846．30±4．97#▲ 112．61±12．38#▲ 672．48± 75．40#▲CWJI-H 組831．26±3．38#△▲& 96．27±10．85#△▲& 561．73± 61．28#△▲&

2.3 各組大鼠LVHI 比較 與Sham 組比較，Model組大鼠LVHI 顯著升高（P＜0．05）。與Model 組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組LVHI 顯著降低（P＜0．05），CWJI 各劑量組間上述效應(yīng)呈劑量依賴性（P＜0．05）。與CPT 組比較，CWJI-H 組LVHI 顯著降低（P＜0．05）。見表3。

表3 各組大鼠LVHI、AI 及CVF 比較（±s）Tab.3 Comparison of LVHI，AI，CVF of rats in each group（±s）

表3 各組大鼠LVHI、AI 及CVF 比較（±s）Tab.3 Comparison of LVHI，AI，CVF of rats in each group（±s）

注：與Sham 組比較，*P＜0．05；與Model 組比較，#P＜0．05；與CPT組比較，△P＜0．05；與CWJI-L 組比較，▲P＜0．05；與CWJI-M 組比較，&P＜0．05。

?

2.4 各組大鼠心肌組織病理學(xué)改變比較 Sham 組大鼠心肌組織形態(tài)和細(xì)胞結(jié)構(gòu)均未見異常。Model組心肌組織可見明顯的病理學(xué)改變，如心肌纖維斷裂，細(xì)胞排列紊亂、空泡變性、壞死、消失，結(jié)締組織增生，間質(zhì)區(qū)水腫、巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤等炎性細(xì)胞浸潤。與Model 組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組心肌組織病理學(xué)改變均明顯改善，CWJI 各劑量組改善效果呈劑量依賴性，且CWJI-H 組效果優(yōu)于CPT 組。見圖1。

圖1 各組大鼠心肌組織病理學(xué)改變比較（HE 染色，×400）Fig.1 Comparison of myocardial histopathological changes of rats in each group(HE staining，×400)

2.5 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡狀況及AI 比較 Sham組心肌組織可見少量散在分布的凋亡細(xì)胞。Model組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量較Sham 組明顯增多。與Model組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯減少，CWJI 各劑量組上述效應(yīng)呈劑量依賴性，且CWJI-H 組優(yōu)于CPT 組。與Sham 組比較，Model 組AI 顯著升高 （P＜0．05）。與Model 組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H組AI 顯著降低（P＜0．05），CWJI 各劑量組對AI 的作用呈劑量依賴性（P＜0．05）。與CPT 組比較，CWJI-H組AI 顯著降低（P＜0．05）。見圖2、表3。

圖2 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡狀況比較（TUNEL 染色，×400）Fig.2 Comparison of cardiomyocyte apoptosis of rats in each group(TUNEL staining，×400)

2.6 各組大鼠心 肌組織纖維化狀況及CVF 比較 Sham 組心肌組織可見生理狀態(tài)下極少量絲狀的膠原纖維分布。Model 組心肌組織間質(zhì)區(qū)和血管壁周圍可見大量條索狀膠原纖維沉積，部分融合成片狀。與Model 組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJIM、CWJI-H 組膠原纖維沉積狀況明顯減輕，CWJI各劑量組效應(yīng)呈劑量依賴性，且CWJI-H 組優(yōu)于CPT 組。與Sham 組比較，Model 組CVF 顯著升高（P＜0．05）。與Model 組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組CVF 顯著降低（P＜0．05），CWJI各劑量組對CVF 的作用呈劑量依賴性（P＜0．05）。與CPT 組比較，CWJI-H 組CVF 顯著降低（P＜0．05）。見圖3、表3。

圖3 各組大鼠心肌組織纖維化狀況比較（Masson 染色，×400）Fig.3 Comparison of myocardial fibrosis of rats in each group(Masson staining，×400)

2.7 各組大鼠心肌細(xì)胞線粒體超 微結(jié)構(gòu)變化比較 Sham 組大鼠左心室心肌細(xì)胞線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)均未見異常。與Sham 組比較，Model 組可見肌原纖維紊亂，線粒體空泡化、腫脹、破裂，嵴斷裂或者減少，可見線粒體自噬體。與Model 組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組心肌細(xì)胞線粒體上述病變明顯改善，CWJI 各劑量組效果呈劑量依賴性，且CWJI-H 組效果優(yōu)于CPT 組。見圖4。

圖4 各組大鼠心肌細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)變化比較（透射電子顯微鏡，×20 000）Fig.4 Comparison of mitochondrial ultrastructural changes of cardiomyocyte of rats in each group(Transmission electron microscope，×20 000)

2.8 各組大鼠心肌組織T-SOD、GSH-Px 活性和MDA、ROS 含量比較 與Sham 組比較，Model 組大鼠心肌組織T-SOD、GSH-Px 活性顯著降低，MDA、ROS 含量顯著升高（P＜0．05）。與Model 組比較，CPT組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組T-SOD、GSH-Px活性顯著升高，MDA、ROS 含量顯著降低（P＜0．05）；CWJI 各劑量組間上述效應(yīng)呈劑量依賴性（P＜0．05）。與CPT 組比較，CWJI-H 組T-SOD、GSH-Px 活性顯著升高，MDA、ROS 含量顯著降低（P＜0．05）。見表4。

表4 各組大鼠心肌組織T-SOD、GSH-Px 活性和MDA、ROS 含量比較（±s）Tab.4 Comparison of the activity of T-SOD，GSH-Px and the content of MDA，ROS in myocardial tissue of rats in each group（±s）

表4 各組大鼠心肌組織T-SOD、GSH-Px 活性和MDA、ROS 含量比較（±s）Tab.4 Comparison of the activity of T-SOD，GSH-Px and the content of MDA，ROS in myocardial tissue of rats in each group（±s）

注：與Sham 組比較，*P＜0．05；與Model 組比較，#P＜0．05；與CPT 組比較，△P＜0．05；與CWJI-L 組比較，▲P＜0．05；與CWJI-M 組比較，&P＜0．05。

?組別動(dòng)物數(shù)T-SOD（U/mg）GSH-Px（U/mg）MDA（nmol/mg）ROS（μmol/mg）Sham 組849．35±6．4738．16±4．091．27±0．22120．64±11．52 Model 組820．08±2．83*15．37±2．14*4．36±0．60*351．76±43．09*CPT 組835．61±5．40#25．83±3．32#2．31±0．28#243．03±27．46#CWJI-L 組827．50±3．61#19．48±2．27#3．53±0．49#299．58±30．27#CWJI-M 組836．28±5．38#▲27．62±3．51#▲2．47±0．32#▲235．19±25．61#▲CWJI-H 組844．25±6．09#△▲&33．17±4．16#△▲&1．64±0．19#△▲&171．40±18．83#△▲&

2.9 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 mRNA 表達(dá)比較 與Sham 組比較，Model 組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 mRNA 表達(dá)量顯著降低（P＜0．05）。與Model組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組Nrf2、HO-1 表達(dá)量顯著升高（P＜0．05）；CWJI 各劑量組間上述效應(yīng)呈劑量依賴性（P＜0．05）。與CPT 組比較，CWJI-H 組Nrf2、HO-1 表達(dá)量顯著升高 （P＜0．05）。見表5。

表5 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 mRNA 表達(dá)量比較（±s）Tab.5 Comparison of the expression of Nrf2，HO-1 mRNA in myocardial tissue of rats in each group（±s）

表5 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 mRNA 表達(dá)量比較（±s）Tab.5 Comparison of the expression of Nrf2，HO-1 mRNA in myocardial tissue of rats in each group（±s）

注：與Sham 組比較，*P＜0．05；與Model 組比較，#P＜0．05；與CPT組比較，△P＜0．05；與CWJI-L 組比較，▲P＜0．05；與CWJI-M 組比較，&P＜0．05。

?組別動(dòng)物數(shù)Nrf2HO-1 Sham 組82．15±0．191．95±0．18 Model 組80．36±0．04*0．40±0．05*CPT 組81．09±0．11#1．17±0．14#CWJI-L 組80．71±0．08#0．82±0．11#CWJI-M 組81．15±0．13#▲1．30±0．15#▲CWJI-H 組81．68±0．17#△▲&1．72±0．19#△▲&

2.10 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)比較 與Sham 組比較，Model 組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0．05）。與Model 組比較，CPT 組和CWJI-L、CWJI-M、CWJI-H 組Nrf2（CWJI-L 組除外）、HO-1 蛋白表達(dá)量顯著升高 （P＜0．05）；CWJI 各劑量組間上述效應(yīng)呈劑量依賴性（P＜0．05）。與CPT 組比較，CWJI-H 組Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)量顯著升高（P＜0．05）。見圖5、表6。

圖5 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)比較Fig.5 Comparison of the expression of Nrf2，HO-1 in myocardial tissue of rats in each group

表6 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)量比較（±s）Tab.6 Comparison of the expression of Nrf2，HO-1 in myocardial tissue of rats in each group（±s）

表6 各組大鼠心肌組織Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)量比較（±s）Tab.6 Comparison of the expression of Nrf2，HO-1 in myocardial tissue of rats in each group（±s）

注：與Sham 組比較，*P＜0．05；與Model 組比較，#P＜0．05；與CPT組比較，△P＜0．05；與CWJI-L 組比較，▲P＜0．05；與CWJI-M 組比較，&P＜0．05。

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3 討論

CWJI 是由刺五加水醇提取物制成的一種中藥注射劑，主要成分包括刺五加苷D、刺五加苷E、異嗪皮啶、咖啡酸、綠原酸等，具有較好的抗氧化、抗凋亡等藥理學(xué)作用[9-10]。本研究探討了CWJI 對HFAMI 大鼠心肌組織的影響及相關(guān)機(jī)制，結(jié)果顯示，CWJI 可劑量依賴性提高 HF-AMI 大鼠LVEF、LVFS、+dp/dtmax、-dp/dtmax，提示CWJI 具有改善HF-AMI 大鼠心功能的作用，與李影雄等[11]報(bào)道相似。HE、TUNEL 染色結(jié)果顯示，HF-AMI 模型大鼠心肌組織可見心肌纖維斷裂，細(xì)胞空泡變性、數(shù)量減少，結(jié)締組織增生，間質(zhì)區(qū)水腫、炎性細(xì)胞浸潤等病理學(xué)改變，以及大量心肌細(xì)胞凋亡，與顧崢等[12]研究結(jié)果一致；線粒體是細(xì)胞能量代謝的場所，對維持細(xì)胞生理狀態(tài)及新陳代謝具有重要作用，本研究發(fā)現(xiàn)HF-AMI 模型大鼠心肌線粒體呈現(xiàn)空泡化、腫脹、破裂，嵴斷裂或者減少，自噬體形成等超微結(jié)構(gòu)改變，與Cheng 等[13]研究結(jié)果一致。CWJI 可劑量依賴性改善HF-AMI 大鼠心肌組織病理學(xué)改變、細(xì)胞凋亡和線粒體結(jié)構(gòu)改變，并且CWJI-H 組效果優(yōu)于CPT 組，提示CWJI 具有減輕 HF-AMI 大鼠心肌組織損傷的作用。

氧化應(yīng)激和心肌組織纖維化是HF-AMI 發(fā)生和進(jìn)行性加重的重要原因，并且心肌組織纖維化與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。AMI 發(fā)生后線粒體結(jié)構(gòu)和功能受損導(dǎo)致氧化呼吸鏈電子傳遞受阻，致使大量活性氧簇（ROS）生成，過度消耗內(nèi)源性ROS 還原性清除酶T-SOD、GSH-Px 等，導(dǎo)致ROS 蓄積而引發(fā)氧化應(yīng)激，損傷線粒體脊結(jié)構(gòu)、線粒體膜等，并破壞細(xì)胞膜、核酸、結(jié)構(gòu)蛋白等引發(fā)細(xì)胞凋亡[14-15]。心室重構(gòu)是HF-AMI 的病理基礎(chǔ)，而心肌纖維化是導(dǎo)致心室重構(gòu)的關(guān)鍵，血清 cTnT 水平能夠敏感地反映心肌損傷程度，而Ang Ⅱ、ALD 水平能夠反映心肌纖維化及心室重構(gòu)狀況[16]。ROS 可刺激心肌成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化，分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）而促進(jìn)心肌組織纖維化病變[17]。Nrf2 是哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的一種核轉(zhuǎn)錄因子，可誘導(dǎo)T-SOD、GSH-Px等抗氧化酶和下游靶蛋白HO-1 轉(zhuǎn)錄表達(dá)，HO-1具有催化血紅素降解的生理學(xué)作用，降解產(chǎn)物中 Fe2+、膽綠素等均具有較好的抗氧化作用，從而提高機(jī)體抗氧化能力[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn)，CWJI可劑量依賴性降低HF-AMI 大鼠血清cTnI、Ang Ⅱ、ALD 水平，改善心肌組織纖維化狀況，提高 T-SOD、GSH-Px 活性并降低MDA、ROS 含量，提高 Nrf2、HO-1 mRNA 和蛋白表達(dá)量，并且CWJI-H 組效果優(yōu)于CPT 組，提示CWJI具有抑制HF-AMI 大鼠心肌組織纖維化和氧化應(yīng)激的作用，激活Nrf2/HO-1 信號(hào)通路可能是其重要的作用機(jī)制。與紀(jì)新博等[20]報(bào)道相似。

綜上，CWJI 可減輕 HF-AMI 大鼠心肌組織病變、細(xì)胞凋亡、組織纖維化和線粒體超微結(jié)構(gòu)病變，改善心功能，其機(jī)制可能與激活Nrf2/HO-1 信號(hào)通路，抑制氧化應(yīng)激有關(guān)。本研究結(jié)果為CWJI 作為HF-AMI 治療備選藥物提供了理論依據(jù)，但其作用機(jī)制尚需深入研究。