莫秀麗，任紅紅，高晴晴，閆永濤，程天宇，李曉敏*，趙余慶*

1. 延邊大學(xué) 長(zhǎng)白山天然藥物研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 延吉 133002

2. 完美（廣東）日用品有限公司，廣東 中山 528402

3. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110016

人參PanaxginsengC. A. Mey.的成熟果實(shí)的形狀小而圓，屬于漿果類型，果實(shí)的內(nèi)部含有2 粒圓形的種子，其成熟前的生長(zhǎng)過(guò)程中呈深度不一的綠色，七、八月時(shí)種子成熟時(shí)果實(shí)呈鮮紅色，成熟后脫去漿果干燥后的皮殼，就是人參種子。具有“益氣、強(qiáng)身、延緩衰老”的作用，是我國(guó)特有的種質(zhì)資源之一。人參果實(shí)在我國(guó)的主要產(chǎn)地為吉林省，每年人參果實(shí)產(chǎn)量可達(dá)到800 余噸，其原料價(jià)格較人參性價(jià)比高。

近年來(lái)，多種化學(xué)成分從人參果肉中被分離出來(lái)，包括人參皂苷類[1-4]、多糖類[5]、氨基酸類[6-7]、無(wú)機(jī)元素[8-9]等，與人參根具有相似性[10-12]，使人參果也具有多種藥理作用，包括提高免疫力[13-14]、保護(hù)心肌[15]、治療糖尿病[16-17]、抑制癌細(xì)胞增殖[18-19]、減輕腦損傷[20]、抗疲勞[21]等。

文獻(xiàn)報(bào)道人參果中富含人參皂苷，原型人參皂苷含量高[22]，其中總皂苷含量約為人參根的4 倍，人參皂苷Re 為人參果中含量最高的皂苷單體，約為人參根的30 倍；人參果與人參根部共同含有的人參皂苷有人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rc、人參皂苷Rd、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1等，這些人參皂苷主要為原型人參皂苷。本課題組前期從人參果中分離得到多種稀有人參皂苷，如人參皂苷Rg3、人參皂苷Rg2、三醇組稀有皂苷元原人參三醇（protopanaxatriol，PPT），以及具有顯著抗腫瘤活性的新稀有皂苷元R 型AD-1、25-OCH3-PPT、20-OCH3-AD-2、20,25-2OCH3-PPD 等[23-26]。

干燥處理[27]是鮮人參制成藥材的關(guān)鍵步驟，使其易于保存和藥用?，F(xiàn)代研究證明，人參加熱后原生皂苷發(fā)生降解[28-31]，產(chǎn)生活性更強(qiáng)的稀有人參皂苷[32]。研究表明，人參果漿含有與人參根類似的皂苷類成分和生物活性，然而人參果漿易腐敗，不易保存，導(dǎo)致化學(xué)成分發(fā)生變化，擬通過(guò)干燥處理以延長(zhǎng)人參果漿的儲(chǔ)存期。目前，未見(jiàn)有人參果漿干燥處理的文獻(xiàn)報(bào)道，本研究通過(guò)研究不同干燥方式對(duì)人參果漿中原型皂苷降解和稀有皂苷生成的影響，優(yōu)選人參果漿的干燥處理方法，為人參果漿收集、存儲(chǔ)和資源的合理利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

BSA124S 型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），UV-2800 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（尤尼柯（上海）儀器有限公司），WB-2000 型水浴鍋（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），202-2AB 型電熱恒溫干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司），F(xiàn)D-1B-50型真空冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），DTA-27J 型超聲波清洗器（濟(jì)寧科源超聲波設(shè)備有限公司），L-2200 型高效液相色譜儀（株式會(huì)社日立制作所）。

人 參 皂 苷 Re （ PRF20092701 ）、 Rg1（ PRF22040803 ）、 F1（ PRF20070943 ）、 Rh1（ PRF21072101 ）、 Rb1（ PRF22030402 ）、 Rc（ PRF10021945 ）、 Rb2（ PRF21091822 ）、 Rb3（ PRF21042043 ）、 Rg3（ PRF21040801 ）、 Rk1（PRF20061501）、Rh2（PRF21032601）質(zhì)量分?jǐn)?shù)均＞98%，成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司，乙腈、甲醇（色譜純，天津市永大化學(xué)試劑有限公司），其他溶劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水。

人參果漿于2022 年8 月購(gòu)買于中國(guó)吉林集安市清河鎮(zhèn)參果加工廠（批號(hào)20220816）。

2 方法與結(jié)果

2.1 人參果漿的干燥處理方法

將人參果漿樣品搖晃均勻，稱取適量的人參果漿樣品，分為冷凍干燥人參果漿組（FGF）、電熱干燥人參果漿組（EGF）、汽熱干燥人參果漿組（SGF），每組分別稱取3 份，具體干燥流程如下。

（1）FGF：置于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)?70 ℃冷凍干燥24 h。

（2）EGF：置于蒸發(fā)皿中于恒溫電熱干燥箱內(nèi)，加熱溫度為100 ℃，干燥時(shí)間為3 h。

（3）SGF：置于蒸發(fā)皿中，置于水浴鍋上，加熱溫度為100 ℃，干燥時(shí)間為3 h。測(cè)定結(jié)果表明，3 種干燥方式的人參果漿失水率分別為94.2%、94.5%、94.5%。

2.2 不同干燥樣品中人參皂苷成分測(cè)定

2.2.1 不同干燥方式供試品溶液的制備 精密稱量人參果漿3 g、FGF 組為0.165 3 g、EGF 組為0.165 0 g、SGF 組為0.174 5 g（由失水率計(jì)算，3 組約為人參果漿3 g），分別用20 倍量75%乙醇超聲提取2次，每次30 min，靜置，濾過(guò)，合并2 次濾液，減壓回收溶劑，干燥后樣品用色譜甲醇溶解，定容至10 mL 量瓶，過(guò)0.45 μm 有機(jī)系濾頭，待測(cè)。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精確稱取人參皂苷對(duì)照品于1 mL 量瓶中，用色譜甲醇溶解，定容至刻度線，搖勻，用0.45 μm 有機(jī)系濾頭濾過(guò)，得到含28.220 mg/mL 人參皂苷Re、10.000 mg/mL 人參皂苷Rg1、0.105 mg/mL 人參皂苷F1、0.950 mg/mL 人參皂苷Rh1、0.500 mg/mL 人參皂苷Rb1、0.500 mg/mL 人參皂苷Rc、0.500 mg/mL 人參皂苷Rb2、2.700 mg/mL 人參皂苷Rb3、0.515 mg/mL 人參皂苷Rg3、0.575 mg/mL 人參皂苷Rk1、0.500 mg/mL 人參皂苷Rh2的混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 色譜條件 高效液相色譜配備UV 檢測(cè)器；色譜柱為Agela Promosil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣體積20 μL；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm；流動(dòng)相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫：0～10 min，22～27% A；10～15 min，27% A～30% A；15～35 min，30～32% A；35～40 min，32%～35% A；40～43 min，35～40% A；43～48 min，40～46.9% A；48～50 min，46.9～47.6% A；50～65 min，47.6～48.5% A；65～68 min，48.5～53% A；68～73 min，53～65% A；73～78 min，65%～85% A；78～83 min，85% A；83～85 min，85～22% A；85～95 min，22% A。

2.2.4 線性關(guān)系考察 將混合對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋到6 個(gè)不同質(zhì)量濃度，按色譜條件進(jìn)樣分析，以各對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），與之對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制各人參皂苷對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行回歸計(jì)算，得到線性回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)（r），詳見(jiàn)表1。

表1 11 種人參皂苷的線性方程Table 1 Linear equation of 11 kinds of ginsenosides

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定11 種皂苷色譜峰的峰面積。人參皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rg3、Rh2、Rk1、Re、Rg1、F1、Rh1峰面積的RSD 值分別為1.53%，1.55%，1.42%，0.96%，1.54%，1.68%，1.09%，1.22%，1.79%，1.01%，0.97%。各人參皂苷的RSD 值均小于2%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取一份電熱干燥的人參果漿樣品供試品溶液，分別在配制好后0、2、4、8、16、24 h 進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算供試品溶液中11 種人參皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rg3、Rh2、Rk1、Re、Rg1、F1、Rh1峰面積的RSD 值，分別為2.21%，2.34%，2.95%，2.46%，2.67%，1.83%，2.35%，2.56%，2.38%，2.49%，2.61%。各人參皂苷的RSD 值均小于3%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 平行制備6 份電熱干燥人參果漿樣品供試品溶液，按色譜條件，進(jìn)樣檢測(cè)分析，計(jì)算供試品溶液中11 種人參皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rg3、Rh2、Rk1、Re、Rg1、F1、Rh1峰面積的RSD 值，分別為2.21%，2.34%，2.95%，2.46%，2.67%，1.83%，2.35%，2.56%，2.38%，2.49%，2.61%。各人參皂苷的RSD 值均小于3%，表明供試品溶液制備方法重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取人參果漿電熱干燥樣品0.165 g，共6 份。分別加入與樣品中11 種人參皂苷含量相當(dāng)?shù)膶?duì)照品溶液，按照供試品制備方法制備成加樣供試品溶液。測(cè)定11 種人參皂苷的含量，計(jì)算加樣回收率。人參皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rg3、Rh2、Rk1、Re、Rg1、F1、Rh1的加樣回收率分別為99.13%、98.23%、100.48%、102.18%、101.32%、99.05%、98.69%、97.32%、100.65%、99.78%、101.35%，RSD值分別為1.26%、1.03%、1.12%、1.35%、0.89%、0.91%、1.32%、0.98%、0.86%、1.16%、1.48%。

2.2.9 人參皂苷含量測(cè)定 按“2.2.3”項(xiàng)色譜條件測(cè)定“2.2.1”項(xiàng)下制備的供試品溶液中11 種皂苷的含量。每個(gè)樣品重復(fù)進(jìn)樣3 次，取平均峰面積根據(jù)線性方程計(jì)算不同干燥處理方式人參果漿樣品中的11 種人參皂苷的含量。

2.3 人參皂苷含量測(cè)定結(jié)果

人參皂苷對(duì)照品混合溶液、GF、FGF、EGF 及SGF 的HPLC 色譜圖見(jiàn)圖1，11 種人參皂苷的含量見(jiàn)表2。

圖1 人參皂苷混合對(duì)照品和GF、FGF、EGF、SGF 樣品HPLC 色譜圖Fig. 1 HPLC Chromatogram of 11 kinds of ginsenosides,GF, FGF, EGF, SGF

表2 混合對(duì)照品和GF、FGF、EGF 和SGF 樣品中的11 種人參皂苷含量Table 2 Content of 11 kinds of ginsenosides in GF, FGF, EGF and SGF

如表2 所示，在加熱條件下，原型皂苷可以轉(zhuǎn)化為稀有皂苷，人參果漿經(jīng)過(guò)處理后，原型皂苷人參皂苷Re 變化最為明顯，其次是人參皂苷Rg1，除人參皂苷Rh2外，EGF、SGF 的稀有皂苷含量都明顯高于FGF。如圖2 所示，F(xiàn)GF 與GF 中11 種人參皂苷的含量變化較?。籈GF 中11 種人參皂苷的總含量最低，降解程度較高。

圖2 GF、FGF、EGF 和SGF 中11 種人參皂苷總含量Fig. 2 Total content of 11 kinds of ginsenosides in GF, FGF,EGF and SGF

如圖3 所示，4 組人參果漿樣品中稀有人參皂苷F1、Rh1、Rg3、Rk1和Rh2的含量由高到低分別為SGF＞EGF＞FGF＞GF；5 種稀有皂苷中人參皂苷Rh1和人參皂苷Rh2的含量較高。

圖3 GF、FGF、EGF 和SGF 中5 種稀有人參皂苷總含量Fig. 3 Total content of five rare ginsenosides in GF, FGF,EGF and SGF

3 討論

本實(shí)驗(yàn)分別采用冷凍干燥、電熱干燥、汽熱干燥等3 種干燥方法對(duì)人參果漿進(jìn)行處理，采用高效液相色譜法對(duì)新鮮果漿以及處理后的樣品中的11種人參皂苷Re、Rg1、F1、Rh1、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rg3、Rk1、Rh2進(jìn)行定性和定量分析。3 種干燥處理的人參果漿樣品（FGF、EGF 及SGF）與GF 的原型人參皂苷和稀有人參皂苷含量對(duì)比分析的結(jié)果顯示，F(xiàn)GF 與GF 中原型人參皂苷總含量接近。EGF及SGF 樣品在高溫加熱條件下，原型人參皂苷發(fā)生降解，稀有皂苷生成量不同程度的增加。人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3和Rc 可在高溫加熱條件下發(fā)生降解和轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生人參皂苷Rd。人參皂苷Rd 的C-20 位葡萄糖基的進(jìn)一步降解產(chǎn)生人參皂苷Rg3，人參皂苷Rg3在C-20 位的脫水產(chǎn)生人參皂苷Rk1，在C-20處為失去一個(gè)葡萄糖成為人參皂苷Rh2[34-35]。同理，Re 可以通過(guò)脫去葡萄糖和鼠李糖轉(zhuǎn)化為人參皂苷Rh1，人參皂苷Rg1和人參皂苷Rg2，Rg1也可以進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成人參皂苷Rh1。另一方面，人參皂苷Rg1和人參皂苷Rg2可以進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為人參皂苷F1，而最終人參皂苷F1和人參皂苷Rh1可轉(zhuǎn)化為PPT[35]。與未經(jīng)過(guò)處理的人參果漿相比，經(jīng)過(guò)3 種干燥方式后，11 種人參皂苷含量都有下降趨勢(shì)，人參皂苷Re含量的變化量最大，相比較于其它干燥方式，冷凍干燥對(duì)其影響最小，電熱干燥處理后11 種人參皂苷含量最低，降解程度較大。經(jīng)過(guò)汽熱干燥后，5 種稀有皂苷含量較高，其中人參皂苷Rh1、人參皂苷Rk2占比最高。

冷凍干燥可減少高溫對(duì)人參果漿中人參皂苷的降解，但干燥成本較高；汽熱干燥和電熱干燥操作簡(jiǎn)便，設(shè)備成本低，得到的人參果漿干燥品中含有生物活性較強(qiáng)的稀有人參皂苷，適用于產(chǎn)地及生產(chǎn)企業(yè)大量加工處理，可為人參果漿的保存及開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供參考。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突