裴建灰，朱樂恒，朱曉龍

平煤神馬醫(yī)療集團總醫(yī)院普外科，河南平頂山 467000

世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）報道，結直腸癌是發(fā)病率僅次于肺癌的全球第二大惡性腫瘤，好發(fā)于40 歲以上中老年人群[1]，其發(fā)病機制尚不明確，目前多認為與環(huán)境、飲食習慣及遺傳等因素有關[2]。手術是目前針對結直腸癌最為有效的治療手段，能夠有效延長患者的生存時間，提高其生活質量[3]。然而研究發(fā)現(xiàn)，結直腸癌患者術后仍有較高的復發(fā)風險，對其預后產(chǎn)生不利影響。因此，尋求有效的臨床指標評估結直腸癌患者的術后復發(fā)情況，對改善患者預后尤為重要。CD4+和CD8+T 淋巴細胞是機體重要的免疫調節(jié)細胞，在腫瘤細胞的增殖和轉移過程中發(fā)揮積極的免疫調節(jié)作用[4]。缺氧誘導因子（hypoxia-inducible factor，HIF）-1α是一種具有轉錄活性的DNA 結合蛋白，與細胞增殖和凋亡具有緊密聯(lián)系[5]。相關研究報道，CD4+/CD8+和HIF-1α均是結直腸癌手術患者預后的重要影響因素[6-7]。本研究探討CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)的評估價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年5 月至2021 年5 月于平煤神馬醫(yī)療集團總醫(yī)院行腹腔鏡手術治療的結直腸癌患者。納入標準：符合結直腸癌臨床診斷標準[8]，經(jīng)病理檢查確診為結直腸癌；接受腹腔鏡手術且術前檢查及術后病理證實未發(fā)生淋巴結轉移及遠處轉移。排除標準：合并其他惡性腫瘤；合并心、肺等器官嚴重疾?。患韧懈共恐卮笫中g史。依據(jù)納入和排除標準，本研究納入124 結直腸癌患者，腫瘤類型：結腸癌55 例，直腸癌69 例；臨床分期：Ⅰ期60 例，Ⅱ期64 例；分化程度：低分化8 例，中分化73 例，高分化43 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法

術前采集所有患者空腹靜脈血2 ml，分別取100 μl 抗凝全血加入2 個試管中，2 個試管各加入CD4、CD8 抗體20 μ l，室溫避光孵育15 min，然后分別加入500 μl 細胞裂解液，振蕩混勻后室溫避光孵育10 min，采用免疫熒光標記技術檢測上層血清中CD4+、CD8+T 淋巴細胞水平，計算CD4+/CD8+。

術前采集所有患者空腹靜脈血2 ml，3000 r/min離心10 min 后取上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清HIF-1α水平。

1.3 觀察指標

比較不同臨床特征結直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平。根據(jù)復發(fā)情況將患者分為未復發(fā)組（n=100）和復發(fā)組（n=24），比較兩組患者的CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+，分析結直腸癌患者術后復發(fā)的影響因素。分析CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯(lián)合檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)的評估價值。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 23.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗；采用Logistic 回歸模型分析結直腸癌患者術后復發(fā)的影響因素；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，分析CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯(lián)合檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)的評估價值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床特征結直腸癌患者CD4+/CD8+和HIF-1α水平的比較

Ⅱ期結直腸癌患者的CD4+/CD8+明顯低于Ⅰ期患者，HIF-1α水平明顯高于Ⅰ期患者，差異均有統(tǒng)計學意義（t=5.196、5.934，P＜0.01）。不同分化程度結直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F=76.704、21.812，P＜0.01），CD4+/CD8+隨分化程度的升高而升高，HIF-1α水平隨分化程度的升高而降低。（表1）

表1 不同臨床特征結直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平

2.2 復發(fā)組和未復發(fā)組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較

復發(fā)組患者的CD4+水平及CD4+/CD8+均低于未復發(fā)組，CD8+、HIF-1α水平均高于未復發(fā)組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2 復發(fā)組和未復發(fā)組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較（±s）

表2 復發(fā)組和未復發(fā)組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較（±s）

組別復發(fā)組（n=24）未復發(fā)組（n=100）t值P值CD4+（%）25.57±5.15 41.62±5.43 16.228＜0.01 CD8+（%）35.45±5.85 21.64±4.72 12.267＜0.01 CD4+/CD8+1.18±0.24 1.35±0.31 2.320＜0.05 HIF-1α（ng/ml）67.54±7.25 63.42±7.38 2.293＜0.05

2.3 結直腸癌患者術后復發(fā)影響因素的多因素Logistic 回歸分析

多因素Logistic 回歸分析結果顯示，CD8+、HIF-1α均是結直腸癌患者術后復發(fā)的獨立危險因素（P＜0.01），而CD4+和CD4+/CD8+均是結直腸癌患者術后復發(fā)的獨立保護因素（P＜0.01）。（表3）

表3 結直腸癌患者術后復發(fā)影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯(lián)合檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)的評估價值

ROC 曲線顯示，CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測評估結直腸癌患者術后復發(fā)的曲線下面積為0.872，高于CD4+/CD8+、HIF-1α單獨檢測的0.784、0.790。（表4、圖1）

圖1 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯(lián)合檢測評估結直腸癌患者術后復發(fā)的ROC曲線

表4 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨及聯(lián)合檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)的評估價值

3 討論

結直腸癌作為病死率位居全球第二的惡性腫瘤，已對人類的生活質量和生命健康造成嚴重威脅[9]。研究證實，結直腸癌患者術后復發(fā)風險較高，而常規(guī)檢查方法（如CT、B 超檢查等）對患者術后復發(fā)風險的評估具有一定的局限性，因此需借助血清學指標進行評估[10]。張靜等[11]研究指出，CD4+T 細胞對機體抗腫瘤免疫功能具有調節(jié)作用，而CD8+T 細胞可對腫瘤細胞進行特異性殺滅，因此CD4+/CD8+可直接反映機體的抗腫瘤免疫力。楊寧波等[12]研究表明，HIF-1α在多種類型腫瘤中呈高表達，可直接參與腫瘤進展、血管生成及腫瘤細胞轉移等過程。然而CD4+/CD8+與HIF-1α聯(lián)合檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)的評估價值少有報道，因此本研究探討CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)的評估價值，旨在為臨床治療結直腸癌及評估其預后提供參考。

本研究結果顯示，Ⅱ期結直腸癌患者的CD4+/CD8+明顯低于Ⅰ期患者，HIF-1α水平明顯高于Ⅰ期患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；CD4+/CD8+隨分化程度的升高而升高，HIF-1α水平隨分化程度的升高而降低。表明CD4+、CD8+及HIF-1α在結直腸癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。相關研究指出，免疫功能低下是導致結直腸癌患者術后復發(fā)的因素之一[13]。劉夢瑤等[14]研究發(fā)現(xiàn)，CD4+T 細胞通過識別腫瘤細胞表面抗原，激活免疫系統(tǒng)，促進腫瘤細胞凋亡。于曉潔和丘木水[15]的研究表明，CD4+T 細胞可調節(jié)機體的免疫平衡，其水平與結直腸癌患者的預后呈正相關。CD8+T 細胞可分化出具有殺傷效應的細胞毒性T 細胞和具有免疫調節(jié)功能的調節(jié)性T 細胞，進而提高機體免疫力，殺滅腫瘤細胞[16-17]。HIF-1α可直接對腫瘤細胞的缺氧耐受性進行調控，通過激活機體內糖酵解相關因子，提高腫瘤細胞的缺氧耐受性及侵襲性，進而促進腫瘤發(fā)生浸潤和轉移[18]。孫艷麗等[19]研究指出，HIF-1α通過結合靶基因序列調控機體缺氧反應基因的表達，進而調節(jié)腫瘤細胞能量代謝平衡，保持腫瘤細胞供血供氧穩(wěn)定。本研究結果還顯示，復發(fā)組患者的CD4+水平及CD4+/CD8+均低于未復發(fā)組，CD8+、HIF-1α水平均高于未復發(fā)組，與相關研究報道的結果相似[20-21]。表明CD4+、CD8+T 細胞及HIF-1α均可能與結直腸癌復發(fā)有關。本研究的多因素Logistic 回歸分析結果顯示，CD8+、HIF-1α均是結直腸癌患者術后復發(fā)的獨立危險因素（P＜0.01），而CD4+和CD4+/CD8+均是結直腸癌患者術后復發(fā)的獨立保護因素（P＜0.01），與孫國鋼和宋新江[22]的研究結果部分相同。本研究的ROC 曲線顯示，CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測評估結直腸癌患者術后復發(fā)的曲線下面積為0.872，高于CD4+/CD8+、HIF-1α單獨檢測的0.784、0.790。表明CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)具有一定的評估價值。

綜上所述，CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測對結直腸癌患者術后復發(fā)具有一定的評估價值，可為臨床干預及治療提供參考。