杜海，黃寶學(xué)，梁發(fā)旺，陸春禮

（1.廣西田東縣平馬鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西 田東 531500；2.廣西田東縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西 田東 531500；3.廣西田東縣印茶鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西 田東 531500；4.廣西百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西 百色 533000）

雞大腸桿菌病是由禽致病性大腸埃希菌(Avi—an pathogenic Escherichia coli，APEC)引起的一種急性或慢性傳染病，主要通過水平傳播和垂直傳播，發(fā)病率和死亡率較高。臨床癥狀有多種表現(xiàn)形式，主要包括大腸埃希菌敗血病、卵黃性腹膜炎、輸卵管炎、全眼球炎及肉芽腫等[1]。近年來，隨著百色市參煌養(yǎng)殖有限公司、廣西富鳳農(nóng)牧集團(tuán)等養(yǎng)殖公司在田東縣推行的“公司+農(nóng)戶”養(yǎng)殖模式以及養(yǎng)雞行業(yè)科技水平的提高，田東縣養(yǎng)雞業(yè)得到了長足發(fā)展，2022 年末，全縣雞飼養(yǎng)量達(dá)2 300 多萬羽，比上年同期增長了5.1%。由于飼養(yǎng)密度增大、飼養(yǎng)環(huán)境等外界因素的改變及影響，帶來細(xì)菌性疾病的單一或混合感染，呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化，增加了防治難度。其中，影響較為嚴(yán)重的是大腸桿菌病。致病性大腸桿菌具有區(qū)域流行性特點(diǎn)，其致病性在不同地區(qū)也存在較大差異，因此加強(qiáng)本地區(qū)肉雞大腸桿菌病的診斷與防治研究具有重要意義。近期，田東縣某肉雞場發(fā)生了大腸桿菌病，為有效快速控制疫情和了解本地區(qū)肉雞大腸桿菌的病原學(xué)特性及耐藥性，采用臨床診斷、細(xì)菌分離培養(yǎng)、藥敏試驗(yàn)、生化試驗(yàn)等方法進(jìn)行了診斷和用藥治療，收到了良好效果。

1 發(fā)病情況

田東縣平馬鎮(zhèn)某肉雞場養(yǎng)殖面積約為380 m2，2022 年5 月2 日，購進(jìn)2 日齡靈山土雞6 500 羽，65 日齡前，雞的采食與飲水量、精神、運(yùn)動(dòng)、糞便均正常，并已按本場免疫程序免疫了雞新城疫-傳染性氣管炎二聯(lián)活疫苗、雞傳染性法氏囊病活疫苗、雞痘活疫苗、重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗等。7 月15 日部分雞群受雨淋出現(xiàn)異常癥狀，開始出現(xiàn)零星死亡，雞個(gè)體重0.9～1.1 kg，雞群每天飼喂料量約455 kg。 發(fā)病第二天，雞場使用阿莫西林、柴胡、鹽酸多西環(huán)素等藥物進(jìn)行治療4 d，但療效不明顯，發(fā)病7 d 內(nèi)死亡305 羽，死亡率4.8%。

2 臨床癥狀

患病雞機(jī)體嚴(yán)重脫水，消瘦，雞毛暗淡無光澤，精神沉郁，拉灰白色或水樣糞便，肛門和周邊的羽毛污穢，被白色糞便嚴(yán)重污染；雞群采食量減少1/3。有的病雞翅下垂，呆立一角，在圈舍當(dāng)中不愿意走動(dòng)；有的病雞眼結(jié)膜潮紅，眼前房有漿液性的滲出物，眼瞼腫脹，嚴(yán)重時(shí)上下眼瞼粘連；有的病雞呼吸困難，咳嗽，伸脖呼吸，鼻分泌物增多；有的病死雞腹部膨大，呈淡綠色。

3 剖檢病變

剖檢病死雞6 只：肝周炎（5/6），肝腫大，肝臟表面被白色物質(zhì)不完全包裹，用鑷子撕開此膜后肝呈土黃色； 心包炎（4/6），心臟表面有纖維素性物質(zhì)附著，心包增厚不透明、積有淡黃色液體；腹氣囊渾濁增厚，有干酷樣物附著；腹腔內(nèi)積有淡黃色樣的纖維素性滲出物或干酪樣物如同蛋黃，有惡臭味；有的腸壁粘連，腸黏膜充血、出血，腸腔黏膜脫落，菲薄透明，腸內(nèi)有淡黃色泡沫狀分泌物（4/6）。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌操作取6 只病死雞的肝臟分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基，置37℃溫箱中培養(yǎng)48 h 后觀察。有5 株分離菌珠在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上呈現(xiàn)的是淺灰色、圓形、中等大小、微凸、半透明菌落； 而在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上呈現(xiàn)的則是半透明、光滑濕潤、邊緣整齊、中間稍隆起的紅色菌落。在麥康凱培養(yǎng)基上挑取紅色單個(gè)菌落，分別接種到普通肉湯培養(yǎng)基，37 ℃純化培養(yǎng) 24 h，放 4 ℃冰箱中，備用。

4.2 涂片鏡檢

以接種棒挑取純化培養(yǎng)的菌落進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢發(fā)現(xiàn)有大量紅色、短小桿狀、兩端鈍圓、散在或成對的革蘭氏陰性桿菌。

4.3 生化試驗(yàn)

把純化培養(yǎng)后的5 株分離菌接種到 V-P、MR、H2S 等10 種微量生化鑒定管中，均發(fā)現(xiàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)和 M-R 試驗(yàn)均為陽性， 枸櫞酸鹽酸試驗(yàn)和 V-P 試驗(yàn)均為陰性，H2S 反應(yīng)呈陰性，與糖反應(yīng)產(chǎn)酸產(chǎn)氣等（表1），生化結(jié)果符合大腸桿菌的生化特性。

表1 分離菌生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果

4.4 藥敏試驗(yàn)

采用Kirby-Bauer 紙片擴(kuò)散法，用9 種藥物進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)：將純化細(xì)菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，然后將各藥敏紙片貼于培養(yǎng)基表面，37℃培養(yǎng)18 h，對抑菌圈大小進(jìn)行測量比較。抑菌圈小于10 mm 為低度敏感，處于11～15 mm 為中度敏感，大于15 mm 為高度敏感。結(jié)果表明，該細(xì)菌對頭孢噻呋鈉、硫酸安普霉素和恩諾沙星高度敏感，對硫酸粘菌素和阿莫西林中度敏感；對氨芐青霉素、磺胺間甲氧嘧啶、氟苯尼考、鏈霉素低度敏感（耐藥）。藥敏結(jié)果詳見表2。

表2 分離菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)臨床檢查、病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室診斷，初步判定該雞場發(fā)生大腸桿菌病。

5 防治措施

5.1 做好消毒滅源

為防止病原菌擴(kuò)散污染，對病死雞進(jìn)行集中深埋，做好雞場內(nèi)外環(huán)境清潔消毒工作，清除雞舍內(nèi)糞便并集中推放消毒。用1:1 000 倍戊二醛溶液和40%的二氯異氰脲酸鈉粉按1:500 倍稀釋用水配成溶液，隔天交替使用對雞舍和周邊場地每天消毒1 次，連用7 d。

5.2 使用藥物治療

結(jié)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果，在治療的第1 天，按每羽均重1 kg 計(jì)算全場雞體重為6 500 kg，然后按每公斤體重頭孢噻呋鈉10 mg、10% 恩諾殺星注射液0.05 mL 計(jì)算出頭孢噻呋鈉的用量65 g、10% 恩諾殺星注射液325 mL，與0.9% 生理鹽水1 625 mL 混合，每只雞0.3 mL 進(jìn)行肌肉注射；第2～3d 天，按發(fā)病前雞群每天需飼料量約455 kg計(jì)算，每天使用10%硫酸粘菌素粉900 g、10%恩諾沙星900 g 進(jìn)行拌料飼喂；同時(shí)，為減少各種應(yīng)激反應(yīng)和增強(qiáng)雛雞免疫抵抗力，按發(fā)病前雞群每天飲水量910 kg 計(jì)算，每天在飲水中加入電解多維粉200 g、10%黃芪多糖粉200 g。經(jīng)以上治療，雞群病情得到有效控制。

6 討論

6.1 大腸桿菌致病的血清型眾多，不同血清型菌株之間因缺乏交叉免疫保護(hù)性，給疫苗研制帶來了一定困難，現(xiàn)階段還是依靠抗菌藥物作為防治雞大腸桿菌病的主要手段[1]?？股氐氖褂脼榉乐未竽c桿菌病帶來了很大的幫助，但是在養(yǎng)雞生產(chǎn)中，部分飼養(yǎng)人員盲目使用抗生素，雞群沒病的時(shí)候也用藥來預(yù)防疾病發(fā)生，有病的時(shí)候就加大治療劑量來使用，造成越來越多細(xì)菌耐藥株產(chǎn)生，進(jìn)而使有些抗生素失去了效力，導(dǎo)致了大腸桿菌病越來越難防治。本病例采用 Kirby-Bauer 紙片擴(kuò)散法選擇9 種抗菌藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，分離菌對氨芐青霉素、磺胺間甲氧嘧啶、氟苯尼考、鏈霉素產(chǎn)生耐藥，申子平等[2]研究表明晉東南地區(qū)雞源大腸桿菌對羅紅霉素、鏈霉素等9 種藥物產(chǎn)生不同程度耐藥性，表明大腸桿菌耐藥現(xiàn)象在生產(chǎn)上比較常見。當(dāng)前，養(yǎng)雞場在養(yǎng)雞生產(chǎn)中，若發(fā)現(xiàn)雞群有大腸桿菌病典型癥狀、疫情有蔓延態(tài)勢時(shí)，應(yīng)盡可能采集病料送檢，進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，以篩選敏感藥物進(jìn)行治療。

6.2 應(yīng)用益生菌制劑來防治大腸桿菌病是綠色養(yǎng)殖的迫切需要。在肉雞飼料中添加益生菌制劑，不僅能改善雞只消化道中的菌群平衡，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，而且能提高肉料比和生產(chǎn)速度、縮短飼養(yǎng)周期及減少有害氣體的產(chǎn)生，因此可減少雞疾病的發(fā)生和提高養(yǎng)雞經(jīng)濟(jì)效益。目前，益生菌添加劑由于其具有綠色環(huán)保特性在養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)用越來越廣泛，國內(nèi)外學(xué)者都很重視研究生產(chǎn)和應(yīng)用。張娟等[3]研究表明，芽孢桿菌通過拌料進(jìn)入腸道后，能夠幾乎全部復(fù)活，在雞消化系統(tǒng)內(nèi)能產(chǎn)生各種酶和維生素B 等，促進(jìn)雞腸道內(nèi)有益菌的生長繁殖，抑制病原菌群繁殖生長，刺激腸道內(nèi)免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，提高料肉比，可獲得較好的經(jīng)濟(jì)效益。

6.3 大腸桿菌為條件性致病菌，廣泛存在于飼料、飲用水、料槽等養(yǎng)殖場內(nèi)外環(huán)境及正常動(dòng)物的腸道中，當(dāng)環(huán)境因素改變、飼養(yǎng)管理不當(dāng)、繼發(fā)和混合感染其他疾病等因素引起機(jī)體抵抗力下降時(shí)，大腸桿菌的致病性就表現(xiàn)出來，引發(fā)感染[4]。通過現(xiàn)場調(diào)查了解，本次發(fā)病的重要誘因是部分雞受淋雨與飼養(yǎng)密度過大，這提示生產(chǎn)上一方面要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，供給全價(jià)營養(yǎng)飼料，定期清理雞舍內(nèi)糞便，保持良好通風(fēng)換氣以及合適的飼養(yǎng)密度和溫濕度，減少各種應(yīng)激發(fā)生等；另一方面要根據(jù)本場的科學(xué)免疫程序，做好雞新城疫、高致病性禽流感、傳染性支氣炎、雞痘、雞傳染性法氏囊病等疫苗免疫，提高雞群免疫密度和抗體水平，減少病毒性疾病繼發(fā)或混合感染大腸桿菌病的風(fēng)險(xiǎn)。

6.4 雞大腸桿菌病由于侵害的部位不一樣，臨床表現(xiàn)也不一樣[5]，呈現(xiàn)咳嗽、伸脖呼吸、腹瀉、跗關(guān)節(jié)或趾關(guān)節(jié)腫大造成雞跛行、單或雙眼瞼腫脹、頭頸震顫與角弓反張、嚴(yán)重消瘦脫水等單一或多種癥狀，臨床上與禽出血性敗血癥、雞沙門氏菌病、滑液囊支原體病等癥狀相似，基層獸醫(yī)工作者應(yīng)當(dāng)做好疾病的鑒別診斷。禽出血性敗血癥主要發(fā)生在成年雞，剖檢病變可見肝有灰白色的壞死灶和心內(nèi)外膜有出血點(diǎn)；雞沙門氏菌病包括雞白痢、雞傷寒和雞副傷寒，雞白痢剖檢見肝有“雪花”樣壞死灶，雞傷寒和雞副傷寒剖檢可見肝呈銅綠色或古銅色，無心包炎、肝周炎；雞滑液囊支原體病常發(fā)生于4～12 周齡的肉雛雞，成年雞多為慢性或隱性感染，臨床多數(shù)表現(xiàn)為附關(guān)節(jié)、趾關(guān)節(jié)、翼關(guān)節(jié)或爪墊腫脹繼而出現(xiàn)跛行。