陳闖嘉寶，黃秉洲，鄧?yán)钏熘疚模?，3*

(1. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611130；2. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物生物技術(shù)中心，四川 成都 611130；3. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611130)

病毒是一類非細(xì)胞形態(tài)以復(fù)制方式增殖的胞內(nèi)寄生微生物，部分具有高度傳染性和致病性，嚴(yán)重危害人畜健康。隨著醫(yī)學(xué)、藥學(xué)的高速發(fā)展，大量抗病毒藥物，包括核苷類似物、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、神經(jīng)氨酸酶抑制劑等不斷出現(xiàn)，通過抑制病毒的吸附、入侵、核酸合成、脫殼等過程發(fā)揮抗病毒作用。然而，預(yù)防和治療病毒性疾病的過程中存在耐藥毒株突變、嚴(yán)重的不良反應(yīng)等問題，尤其是許多病毒導(dǎo)致的免疫抑制性疾病，可通過破壞機(jī)體正常的免疫狀態(tài)實(shí)現(xiàn)自身的入侵與增殖[1]，如新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)、乙型肝炎病毒(HBV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)等。這類病毒具有攻擊宿主免疫系統(tǒng)的獨(dú)特能力，使用傳統(tǒng)抗病毒手段常難以治愈且預(yù)后不良，給全球生物安全造成了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。因此，亟待開展應(yīng)對(duì)免疫缺陷型病毒性傳染病的藥物研究。

胸腺肽是胸腺分泌的、具有生物活性的多種天然多肽類物質(zhì)的統(tǒng)稱，具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)活性。胸腺肽能通過多種機(jī)制和信號(hào)通路激活免疫系統(tǒng)，包括刺激T淋巴細(xì)胞分化和成熟，激活自然殺傷細(xì)胞(atural killer cell，NK)細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞(DCs)以及誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子釋放等。因其顯著的免疫調(diào)節(jié)活性，胸腺肽被視為重建機(jī)體免疫、輔助抵御病原體的潛在藥物[2]。近年來，胸腺肽類藥物已開始應(yīng)用于各種病毒、細(xì)菌、癌細(xì)胞等導(dǎo)致的免疫抑制或缺陷、惡性腫瘤和壞血病等的治療。目前，已從胸腺素組分V(thymosin Fraction V，TFV)中成功分離并報(bào)道的胸腺肽有40余種，主要包括胸腺素α原(ProTα)、胸腺素α-1(Tα1)、胸腺素β-4(Tβ4)、胸腺素β-10(Tβ10)，它們的免疫調(diào)節(jié)活性得到了廣泛的研究。

本文擬對(duì)胸腺肽的產(chǎn)生、免疫調(diào)節(jié)活性、抗病毒機(jī)制和應(yīng)用進(jìn)行綜述，為胸腺肽免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究及其在病毒性疾病中的進(jìn)一步應(yīng)用提供參考。

1 胸腺肽的產(chǎn)生

1.1 胸腺肽的發(fā)現(xiàn)

20世紀(jì)60年代初，Miller等[1]首次確認(rèn)了胸腺作為免疫器官的功能。胸腺肽(thymosin)是一種高度保守的多肽，最初于1966年由Goldstein[2]從小牛胸腺提取物中分離和鑒定，隨后被證明在維持機(jī)體免疫方面發(fā)揮有效作用。1981年，Goldstein等[2]進(jìn)一步純化得到TFV，其顯著的免疫增強(qiáng)活性具有巨大的研究價(jià)值，自此胸腺肽的研究進(jìn)入新階段。

研究表明，TFV至少由40個(gè)不同的分子組成，其中10～15個(gè)是主成分，主要是分子量在1 000～15 000 Da之間的酸性分子[3]?；诘入婞c(diǎn)(pI)的差異可將TFV分為α、β和γ 3類，其中pI小于5.0的肽稱為α-肽，pI在5.0～7.0的稱為β-肽，pI大于7.0的稱為γ-肽。各類多肽用下標(biāo)號(hào)進(jìn)行區(qū)分，代表它們從TFV中分離的順序，如α1、α2、α3等。研究證實(shí)這些多肽類物質(zhì)對(duì)先天免疫細(xì)胞，包括多形核白細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，具有免疫調(diào)節(jié)活性。其中，ProTα、Tα1、Tβ4是TFV中發(fā)揮功能的核心成分。目前，對(duì)它們研究主要集中在對(duì)機(jī)體特異和非特異性免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能上。

1.2 胸腺肽的生產(chǎn)提取

1.2.1 化學(xué)提取法

從小牛胸腺提取物中可通過物化手段直接分離胸腺肽，這也是最初分離胸腺肽的方法。此外，也可從TFV中提取，但該方法提取難度大、成本高、難以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；?，故基本不用于生產(chǎn)實(shí)踐。目前廣泛使用固相合成法制備胸腺肽，但此方法仍存在一定的缺陷。其合成過程中，大量必需基團(tuán)和中間體間會(huì)出現(xiàn)聚集，導(dǎo)致總收率偏低，通常僅25%左右[4]。盡管如此，目前廣泛應(yīng)用的胸腺肽類藥物都是通過化學(xué)方法合成的，如胸腺法新等。

1.2.2 基因工程法

以效率高、成本低為特征的基因工程技術(shù)有望成為Tα1制備的新突破。但目前該方法仍處于研究階段，距離市場化、商品化應(yīng)用還有不少差距。該方法分為原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)。

目前多以大腸桿菌作為胸腺肽的原核表達(dá)宿主。由于Tα1編碼的多肽過短，直接表達(dá)容易被宿主菌降解，因此在原核系統(tǒng)中的表達(dá)目前主要采用串聯(lián)體表達(dá)和融合表達(dá)的方式。李維娜等[4]將串聯(lián)體蛋白在大腸桿菌中表達(dá)，通過高效液相色譜法分析表明，純化后的串聯(lián)體的純度可達(dá)到95%以上。Fedorov等[5]成功構(gòu)建TNF和Tα1的重組質(zhì)粒，將TNF分別連接在Tα1的左側(cè)和右側(cè)，并在大腸桿菌中表達(dá)重組蛋白。王鏨彧等[6]建立了能夠大量、可溶表達(dá)具有生物活性的重組ProTα大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，并首次確認(rèn)了ProTα蛋白在小鼠體內(nèi)具有佐劑活性，為ProTα作為疫苗佐劑的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。此外，PASylation技術(shù)與RimJ酶原位n-乙?；夹g(shù)的結(jié)合有望為現(xiàn)有的胸腺肽原核表達(dá)系統(tǒng)帶來技術(shù)突破。Binder等[7]首次將這兩種技術(shù)結(jié)合，利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)了更加穩(wěn)定的Tα1，解決了現(xiàn)有表達(dá)宿主不穩(wěn)定、產(chǎn)物易被酶降解和生產(chǎn)成本高的問題，并有效提高了產(chǎn)物的總收率。

目前多以酵母細(xì)胞作為胸腺肽的真核表達(dá)宿主。劉敏等[8]將豬IFN-α與Tα1融合蛋白在畢赤酵母系統(tǒng)中表達(dá)，獲得了功能疊加的融合蛋白抗病毒產(chǎn)物，為高效抗病毒藥物的制備提供了新模式。此外，植物也能用于胸腺肽的真核表達(dá)。Chen等[9]根據(jù)植物密碼子使用偏向性設(shè)計(jì)了Tα1基因，并利用植物偏向性表達(dá)載體PG-pRD12將4xTα1的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入西紅柿進(jìn)行表達(dá)，首次報(bào)道了Tα1在植物中的表達(dá)。雖然相較于原核表達(dá)系統(tǒng)，真核表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白經(jīng)修飾后的產(chǎn)物更加接近天然蛋白的活性與功能[2]。但由于真核表達(dá)系統(tǒng)制取困難、成本較高，不利于胸腺肽的廣泛應(yīng)用，目前仍處于研究階段。

2 胸腺肽的免疫調(diào)節(jié)活性

2.1 Tα1的免疫調(diào)節(jié)活性

Tα1作為一種免疫調(diào)節(jié)多肽，由28個(gè)氨基酸組成，具有2個(gè)穩(wěn)定的螺旋區(qū)域[10]。Tα1具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，能增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能、抑制亢進(jìn)的體液免疫和自身免疫反應(yīng)，有利于病毒的清除。目前Tα1已被用于治療免疫缺陷疾病和惡性腫瘤，并作為增強(qiáng)疫苗應(yīng)答的手段應(yīng)用于敗血癥和許多感染性疾病以抑制發(fā)病率和死亡率，是目前研究最深、應(yīng)用最廣的胸腺肽類型。Tα1功能十分廣泛，能通過多種途徑促進(jìn)機(jī)體應(yīng)抗病毒感染的能力。

2.1.1 Tα1增強(qiáng)免疫細(xì)胞的數(shù)量和活性

Tα1能促進(jìn)T細(xì)胞發(fā)育和抑制凋亡以維持機(jī)體較高的T細(xì)胞水平，促進(jìn)T細(xì)胞向Th1亞型的分化、增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性，并放大成熟的T淋巴細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)，從而促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。Tα1在體內(nèi)還能促進(jìn)T細(xì)胞生長因子IL-2的分泌，IL-2能顯著促進(jìn)T細(xì)胞的生長分化，尤其是誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的表達(dá)，并在一定程度上提高機(jī)體β細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的水平。李彧等[11]還發(fā)現(xiàn)，Tα1提高了共培養(yǎng)系統(tǒng)中 IFN-α、IFN-γ的表達(dá)，提示Tα1治療能夠增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的抗病毒功能。此外，有研究[12]發(fā)現(xiàn)Tα1還能增強(qiáng)單核細(xì)胞增殖，刺激CD3+T細(xì)胞表達(dá)，并促進(jìn)CD3+、CD4+T細(xì)胞基質(zhì)細(xì)胞成熟及向CD3+、CD4+T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，促進(jìn) CD4+T細(xì)胞亞群成熟和表達(dá)。

2.1.2 Tα1促進(jìn)抗原呈遞

抗原呈遞細(xì)胞是指能夠攝取、加工處理抗原，并將處理過的抗原呈遞給T細(xì)胞的一類免疫細(xì)胞，包括單核-吞噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等。既往研究表明，胸腺肽可以通過刺激抗原呈遞細(xì)胞、誘導(dǎo)蛋白激酶C和IL-2分泌等途徑促進(jìn)免疫前期的抗原呈遞。Romani等[13]最先報(bào)道稱Tα1能通過刺激髓樣和漿細(xì)胞樣DCs上的toll樣受體，比如TLR-2和TLR-9，向機(jī)體免疫系統(tǒng)呈遞抗原信息。隨后，近期研究[14]進(jìn)一步證明Tα1還可增加主要組織相容性復(fù)合體MHCⅠ類和MHCⅡ類DCs的數(shù)量，并提高NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活性，促進(jìn)抗原呈遞與識(shí)別；并促進(jìn)蛋白激酶C進(jìn)入核內(nèi)激活細(xì)胞因子基因表達(dá)，介導(dǎo)β7家庭成員轉(zhuǎn)錄活化，進(jìn)而通過抗原呈遞細(xì)胞活化T細(xì)胞，激活獲得性免疫系統(tǒng)。此外，Tα1還能通過誘導(dǎo)白細(xì)胞介素IL-2的產(chǎn)生，提高巨噬細(xì)胞抗原呈遞的效率。

值得注意的是，Tα1還能增強(qiáng)感染細(xì)胞與免疫細(xì)胞的相互作用，促進(jìn)病原體的內(nèi)化和殺傷。Serafino等[15]發(fā)現(xiàn)在人類成熟單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞中，Tα1能促進(jìn)補(bǔ)體受體介導(dǎo)的吞噬作用，這表明Tα1可能是先天免疫前期抗原呈遞的重要激活因子。

2.1.3 Tα1誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放抗病毒因子

據(jù)報(bào)道Tα1能通過誘導(dǎo)CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞發(fā)揮正向免疫調(diào)節(jié)作用，維持病毒感染的免疫穩(wěn)態(tài)[16]。原始CD8+T細(xì)胞在急性感染過程中增殖，并分化為效應(yīng)CD8+T細(xì)胞，直接殺傷靶細(xì)胞，而CD4+T細(xì)胞主要協(xié)助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，最終清除病原體。

機(jī)體內(nèi)，CD4+T淋巴細(xì)胞被Tα1激活并分化為幾個(gè)效應(yīng)T輔助(Th)淋巴細(xì)胞亞群，包括Th1、Th2、Th9、Th17和Th22，它們直接分泌細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。Tα1能誘導(dǎo)Th2淋巴細(xì)胞分泌IL-3、IL-4、IL-5等間接促進(jìn)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體，并向分泌抗體的漿細(xì)胞分化。其中，IL-4還可與抗病毒的INF-γ結(jié)合，降低細(xì)胞易感性，下調(diào)病毒受體的表達(dá)。Tα1還通過刺激Th17以聚集巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞來預(yù)防和清除肺部黏膜呼吸道病毒感染。另外，Tα1還能提高Th1淋巴細(xì)胞活性，有效促進(jìn)細(xì)胞毒性CD8+T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞對(duì)胞內(nèi)病原體的殺傷，并調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的增殖和分化。

CD8+T淋巴細(xì)胞能通過產(chǎn)生IFN-γ來激活巨噬細(xì)胞對(duì)微生物的吞噬作用。Matteucci等[17]研究發(fā)現(xiàn)，Tα1能促進(jìn)CD8+細(xì)胞釋放可溶性的CD8抗病毒因子(CAF)。Tα1已被證明可以誘導(dǎo)CD8+細(xì)胞中調(diào)節(jié)免疫和抗感染反應(yīng)的大量基因的表達(dá)[6]，即能夠?qū)D8+細(xì)胞中的許多基因的表達(dá)進(jìn)行正向或負(fù)向調(diào)節(jié)，如AT-2、GATA3、4和SP3，這些轉(zhuǎn)錄因子能反饋調(diào)節(jié)基因表達(dá)和隨后產(chǎn)生的調(diào)節(jié)蛋白、促炎細(xì)胞因子和活化T淋巴細(xì)胞特有的趨化因子，促進(jìn)機(jī)體的抗病毒反應(yīng)。這些因子具有明顯的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒活性，能夠抑制體外HIV-1感染人單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞和外周血單核細(xì)胞，這提示Tα1可作為一種抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的潛在藥物。此外，Sgarbanti等[18]還發(fā)現(xiàn)Tα1介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)部的谷胱甘肽水平升高，基于此可通過阻礙包膜糖蛋白低聚所需的二硫鍵形成來阻斷病毒顆粒的組裝。

2.1.4 Tα1維持機(jī)體免疫應(yīng)答

CD4+、CD25+等調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)能夠分泌IL-10和TGF-β等抑制性細(xì)胞因子，并抑制NK細(xì)胞和CD8+效應(yīng)T細(xì)胞(Teff)的溶細(xì)胞反應(yīng)，在慢性病毒感染中發(fā)揮誘導(dǎo)機(jī)體免疫耐受的功能，但不利于機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)病毒的殺傷與清除。研究證實(shí)，Tα1能夠緩解Treg對(duì)自身反應(yīng)性細(xì)胞介導(dǎo)的病理性免疫應(yīng)答的抑制作用。李彧等[11]發(fā)現(xiàn)對(duì)慢性乙型肝炎患者給予Tα1、恩替卡韋聯(lián)合治療后，Treg抑制細(xì)胞增殖的功能顯著減弱、分泌水平顯著降低。此外，有研究表明Tα1促進(jìn)IL-6抑制CD4+Treg細(xì)胞，但不抑制CD8+Treg細(xì)胞，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體對(duì)病原體的清除[19]。

2.1.5 Tα1調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥反應(yīng)和抑制細(xì)胞因子風(fēng)暴

Tα1還可以通過促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平來抑制促炎細(xì)胞因子風(fēng)暴。細(xì)胞因子風(fēng)暴是指抗原刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)后，發(fā)生正反饋調(diào)節(jié)引起多種促炎性細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-1、IL-6、IFN-α、IFN-β、IFN-γ和IL-8等水平顯著升高，導(dǎo)致機(jī)體免疫狀態(tài)失去平衡，發(fā)生急性呼吸窘迫綜合征和多臟器衰竭的不適當(dāng)免疫反應(yīng)。Liu等[20]研究發(fā)現(xiàn)Tα1在炎癥過程中發(fā)揮雙重作用，除了能促進(jìn)淋巴細(xì)胞活化外，還能通過增加Treg細(xì)胞以有效抑制促炎細(xì)胞因子風(fēng)暴。此外，TLR9信號(hào)通路既是Tα1激活DCs的路徑，又是吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)激活免疫抑制的路徑。Romani等[13]注意到Tα1能選擇性地激活對(duì)IDO敏感的DCs，從而抑制過度激活的免疫系統(tǒng)。

2.2 ProTα的免疫調(diào)節(jié)活性

ProTα是胸腺上皮細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的一種天然免疫調(diào)節(jié)肽，ProTα是Tα1的前體物質(zhì)，其N端前28個(gè)氨基酸與Tα1完整序列相同。ProTα的基因序列在各物種間高度保守，人、牛、羊、豬等的ProTα均由109個(gè)氨基酸構(gòu)成。近年來，人們對(duì)ProTα的免疫調(diào)節(jié)功能有了更加深入全面的認(rèn)識(shí)，其作用機(jī)理與Tα1存在區(qū)別且可能具有更加強(qiáng)大的免疫增強(qiáng)功能。越來越多的研究表明，ProTα具有細(xì)胞因子樣功能，參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)HLA-DR、IL-2受體的上調(diào)和DCs的成熟趨化，具有抗病毒、抗癌和抗真菌活性。

2.2.1 ProTα調(diào)節(jié)機(jī)體免疫狀態(tài)

Goldstein等[21]最先證明了ProTα具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)活性，在體外促進(jìn)脾細(xì)胞分泌IFN-γ、IFN-α和TNF-γ，并增強(qiáng)淋巴細(xì)胞對(duì)PHA刺激的反應(yīng)活性，進(jìn)而提高細(xì)胞的增殖能力。Mosoian等[22]進(jìn)一步證明ProTα通過激活先天性免疫細(xì)胞上的toll樣受體來誘導(dǎo)干擾素的生成，且ProTα對(duì)HIV-1病毒復(fù)制的抑制是非特異性的。IFN-α能進(jìn)一步支持CD8+T細(xì)胞的發(fā)育和功能，尤其是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，能有效控制病毒在體內(nèi)的復(fù)制，這也是ProTα促進(jìn)機(jī)體免疫、提高機(jī)體抗病毒水平的最主要方式。此外，他們還進(jìn)一步證明ProTα能增加病毒感染細(xì)胞的表面標(biāo)記蛋白和腫瘤細(xì)胞特異性抗原的表達(dá)，防止這些細(xì)胞逃脫免疫細(xì)胞的識(shí)別。

值得注意的是，Birmpilis等[23]還將ProTα及其羧基端十肽ProTα(100～109)按人用劑量分別注射小鼠，結(jié)果表明小鼠外周血中促炎細(xì)胞因子和Th1型細(xì)胞因子的水平均增強(qiáng)，且無明顯不良反應(yīng)，提示ProTα安全性較高。

2.2.2 ProTα作為免疫佐劑的預(yù)防功能

合格的疫苗佐劑一方面要有利于機(jī)體生成記憶細(xì)胞、實(shí)現(xiàn)良好的免疫激活，另一方面要盡量減少免疫程序的不良反應(yīng)和刺激性。ProTα具有顯著增強(qiáng)機(jī)體免疫狀態(tài)的功能，又具有生物活性肽的低刺激性和安全性。近年來，ProTα不同氨基酸區(qū)域與免疫細(xì)胞相互作用的研究表明，其蛋白無規(guī)則卷曲的空間結(jié)構(gòu)特征使之具有極低的免疫原性，非常適合用作疫苗佐劑。

Jin等[24]將編碼ProTα的質(zhì)粒與表達(dá)乙肝病毒S抗原的質(zhì)粒共同注射到小鼠體內(nèi)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，表達(dá)后的質(zhì)粒通過發(fā)揮細(xì)胞因子樣作用，顯著提高了乙肝病毒DNA疫苗的效力。Shiau等[25]評(píng)價(jià)了ProTα作為偽狂犬病毒糖蛋白D基因疫苗和小鼠口服狂犬病疫苗的佐劑對(duì)免疫效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ProTα作為疫苗佐劑對(duì)兩種疫苗的免疫效果均有一定增強(qiáng)。此外，王鏨彧等[6]進(jìn)一步證明了ProTα不僅能夠以分子佐劑的形式增強(qiáng)核酸疫苗的免疫效果，以蛋白形式與抗原共同注射也可發(fā)揮佐劑作用。

2.3 Tβ的免疫調(diào)節(jié)活性

Tβ在人體內(nèi)主要存在3種形式：Tβ4、Tβ10和Tβ15，其中Tβ4和Tβ10能通過誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞和激活CD8+T細(xì)胞發(fā)揮正向免疫調(diào)節(jié)作用，維持病毒感染的免疫穩(wěn)態(tài)。

Tβ4含量最多，占β胸腺素總量的70%～80%，Tβ4具有抗氧化、抗炎和抗纖維化的生物活性，能夠抑制炎癥、防止創(chuàng)面感染、抑制細(xì)胞凋亡和瘢痕形成、促進(jìn)細(xì)胞遷移和血管生成[26]。在臨床實(shí)踐中，Tβ4已經(jīng)用于治療干眼癥、心力衰竭、肺纖維化、感染性休克、肝損傷和急性缺血性腎損傷等疾病。此外，有研究表明Tβ4對(duì)細(xì)胞因子風(fēng)暴也有一定的抑制作用[27]，雖然沒有直接的抗病毒功能，但可以通過平衡機(jī)體免疫狀態(tài)、促進(jìn)受損細(xì)胞再生、修復(fù)組織損傷等保護(hù)機(jī)體免受或少受病毒的損傷。

3 胸腺肽在病毒性疾病中的應(yīng)用

3.1 胸腺肽在新型冠狀病毒治療中的應(yīng)用

SARS-CoV-2已引發(fā)全球大流行，對(duì)人類生物安全、經(jīng)濟(jì)安全構(gòu)成了巨大的挑戰(zhàn)。由于缺乏針對(duì)該病毒的特異性藥物，目前對(duì)該疾病的治療主要是保護(hù)病人呼吸系統(tǒng)、減少炎癥反應(yīng)。SARS-CoV-2具有很強(qiáng)的免疫抑制活性，研究表明免疫缺陷患者的危重型SARS-CoV-2的發(fā)生率很高[28]。此外，SARS-CoV-2會(huì)引起細(xì)胞因子風(fēng)暴綜合征、嚴(yán)重淋巴細(xì)胞減少等一系列免疫缺乏癥狀，尤其是老年人和危重癥患者。適應(yīng)性免疫反應(yīng)的早期干預(yù)可能是預(yù)防嚴(yán)重SARS-CoV-2的關(guān)鍵，故具有免疫調(diào)節(jié)功能的胸腺肽被廣泛應(yīng)用于新冠病毒的治療。Lowery等[29]發(fā)現(xiàn)在SARS-CoV-2感染的CD8+T記憶干細(xì)胞組中，Tα1原蛋白、ProTα的表達(dá)顯著增加，并進(jìn)一步證明了Tα1可能在SARS-CoV-2感染后的淋巴細(xì)胞減少期間保護(hù)T淋巴細(xì)胞。此外，Liu等[30]報(bào)道稱Tα1通過恢復(fù)淋巴細(xì)胞減少癥和逆轉(zhuǎn)耗盡的T淋巴細(xì)胞來降低嚴(yán)重SARS-CoV-2的死亡率。

Wu等[31]針對(duì)8個(gè)國家指定的新冠治療中心的SARS-CoV-2危重病例開展回顧性分析，結(jié)果表明Tα1可顯著降低危重型SARS-CoV-2患者28死亡率并減輕器官功能障礙，但其作用機(jī)制、劑量和持續(xù)時(shí)間有待進(jìn)一步研究。值得注意的是，2020年2月14日，國家衛(wèi)生健康委員會(huì)及國家中醫(yī)藥管理局聯(lián)合發(fā)布的《關(guān)于印發(fā)新型冠狀病毒肺炎重型、危重型病例診療方案(試行 第二版)》中已將胸腺法新(即Tα1化學(xué)合成物)列為治療SARS-CoV-2患者的指導(dǎo)藥物。

3.2 胸腺肽在乙型肝炎病毒治療中的應(yīng)用

HBV會(huì)導(dǎo)致人的乙型病毒性肝炎，引起以急慢性肝臟炎性病變?yōu)橹饕卣鞯拿庖呷毕莶　Ｄ壳?，臨床上主要通過IFN-α或核苷酸類似物(NUCs)抑制病毒復(fù)制來治療HBV。然而只有恢復(fù)機(jī)體免疫、控制繼發(fā)感染才能從本質(zhì)上治療乙型肝炎(尤其是慢性乙肝)。胸腺肽能夠有效調(diào)節(jié)機(jī)體免疫狀態(tài)，提高機(jī)體對(duì)抗病毒的能力，并進(jìn)一步抑制HBV導(dǎo)致的繼發(fā)感染，是治療乙型肝炎的理想藥物。

Tα1在我國已被批準(zhǔn)用于治療慢性乙型肝炎患者。李崢等[32]對(duì)79例HBV患者進(jìn)行了連續(xù)12天的Tα1皮下注射治療，發(fā)現(xiàn)患者血清中HBV的DNA水平明顯降低，病情得到顯著改善。田穎等[11]發(fā)現(xiàn)Tα1還能夠抑制慢性乙型肝炎誘導(dǎo)的負(fù)性免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞 Treg的水平，有利于機(jī)體的抗病毒反應(yīng)。此外，Tα1聯(lián)用抗病毒藥物的治療方案在臨床實(shí)驗(yàn)中取得了不錯(cuò)的進(jìn)展，具有廣闊的應(yīng)用前景。張華強(qiáng)等[33]開展了8項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Tα1聯(lián)合拉米夫定治療在生化反應(yīng)、病毒學(xué)反應(yīng)和藥物敏感性方面都優(yōu)于拉米夫定單藥治療。鑒于Tα1的免疫調(diào)節(jié)活性，NUC聯(lián)用Tα1有望成為HBV的下一個(gè)最佳治療方案。張媛媛等[34]將Tα1與高效核苷(酸)類似物聯(lián)用，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合療法在ALT正常化率、病毒學(xué)應(yīng)答和HBeAg血清轉(zhuǎn)化率方面顯著優(yōu)于單用核苷(酸)類似物治療，這提示該療法能有效減少病毒載量并恢復(fù)機(jī)體主動(dòng)免疫。Naylor等[35]分析稱這種方法可能為更有效地控制慢性HBV感染提供新思路，而無需終身使用NUC，但目前該療法仍缺乏大型三期試驗(yàn)。近期研究表明，Tα1還可用于輔助HBV源性肝癌患者的術(shù)后恢復(fù)。He等[36]發(fā)現(xiàn)Tα1可一定程度上緩解肝臟切除后的免疫功能損傷問題，顯著提高相關(guān)患者的生存率和免疫功能、降低術(shù)后復(fù)發(fā)率。

3.3 胸腺肽在人類免疫缺陷病毒治療中的應(yīng)用

自從HIV-1被發(fā)現(xiàn)以來，Tα1就一直被認(rèn)為是一種潛在的治療藥物，但相關(guān)研究與應(yīng)用仍較少。CD8+淋巴細(xì)胞能夠通過釋放一系列具有非細(xì)胞溶解活性的細(xì)胞因子、趨化因子發(fā)揮抗HIV的作用，Matteucci等[17]在體外試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)Tα1通過LPS刺激的CD8+細(xì)胞增強(qiáng)抗病毒因子釋放的能力，能有效抑制HIV-1毒株的DNA整合。此外，Mosoian等[37]還發(fā)現(xiàn)ProTα能夠刺激T細(xì)胞激活分泌調(diào)節(jié)因子(rantes)的表達(dá)。Rantes已被證明能與HIV-1競爭性結(jié)合受體CCR5，抑制HIV-1對(duì)機(jī)體細(xì)胞的入侵。

3.4 胸腺肽在其他病毒性疾病治療中的應(yīng)用

胸腺肽除了用于人類的SARS-CoV-2、HBV、HIV等免疫缺陷型病毒性傳染病的治療，也開始應(yīng)用于動(dòng)物病毒性疾病的防治。地塞米松在我國禽類養(yǎng)殖中發(fā)生了大面積的藥物濫用，嚴(yán)重?fù)p害了雞群的正常生長代謝及免疫功能。鄭蓓等[38]將胸腺肽與地塞米松聯(lián)用治療感染新城疫的10日齡雞，證明了胸腺肽可以在一定程度上緩解由地塞米松引起的免疫抑制，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)劑的作用。此外，胸腺肽還開始在預(yù)防獸醫(yī)領(lǐng)域用作免疫佐劑。陳志勝等[39]在豬瘟和豬藍(lán)耳病的疫苗免疫程序中聯(lián)用Tα1作為免疫佐劑，發(fā)現(xiàn)在與豬瘟疫苗聯(lián)用時(shí)，Tα1可顯著提高其抗體產(chǎn)生率；在與豬藍(lán)耳病疫苗聯(lián)用時(shí)，Tα1雖然沒有顯著提高抗體產(chǎn)生率，但可維持抗體的長效性表達(dá)。

4 總結(jié)與展望

胸腺肽是對(duì)胸腺上皮細(xì)胞分泌的具有免疫調(diào)節(jié)功能的天然活性肽的總稱，最早由Goldstein于1966年提取鑒定，在不同物種中序列高度保守。ProTα、Tα1、Tβ4是胸腺肽發(fā)揮生物功能的主要成分，自分離以來得到了廣泛的研究與應(yīng)用。目前主要通過固相合成的方法生產(chǎn)胸腺肽，但該方法總收率很低，基于基因工程技術(shù)的原核表達(dá)法和真核表達(dá)法有望成為下一代制取技術(shù)。生產(chǎn)技術(shù)的迭代有望顯著促進(jìn)胸腺肽的推廣與應(yīng)用，因此具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。

大量研究表明，胸腺肽中的ProTα、Tα1、Tβ4等組分能有效增強(qiáng)免疫細(xì)胞的數(shù)量與活性，激活Toll樣受體促進(jìn)抗病毒因子的分泌，促進(jìn)抗原呈遞，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和抑制細(xì)胞因子風(fēng)暴，從而顯著提高機(jī)體免疫水平，提升機(jī)體對(duì)抗病毒的能力。此外，胸腺肽及其合成類似物的安全性已得到充分研究，其耐受性良好且副作用輕微[40]。臨床研究表明，胸腺肽在免疫和炎癥反應(yīng)中具有重要作用，在抗病毒領(lǐng)域中已廣泛應(yīng)用于HIV、HBV、SARS-CoV-2等免疫缺陷性疾病的輔助治療和預(yù)防。臨床數(shù)據(jù)表明，其能有效降低疾病的死亡率，重建患者的免疫系統(tǒng)。值得注意的是，畜牧生產(chǎn)中尚缺乏高效廉價(jià)的抗病毒生物制劑，干擾素受制于成本等因素難以大規(guī)模應(yīng)用，原核表達(dá)制取的胸腺肽成本低廉、效果良好，在獸醫(yī)臨床中具有良好的應(yīng)用前景，但目前仍缺乏相關(guān)研究。

目前，胸腺肽在我國已被批準(zhǔn)用于某些免疫缺陷性疾病的治療，但其機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究，且臨床應(yīng)用仍缺乏系統(tǒng)全面的支持性證據(jù)。未來，我們應(yīng)深入探索胸腺肽與疾病自然病程相互關(guān)系，盡快制定規(guī)范統(tǒng)一的胸腺肽用法用量標(biāo)準(zhǔn)和藥物聯(lián)用方案，并推動(dòng)胸腺肽在其他疾病，尤其是免疫抑制性疾病和癌癥中的進(jìn)一步研究和應(yīng)用。