朱秋軼，劉果，龍明芳，劉星雨，喬子驕，宋玉，曾志安，殷光玲，曹素芳，曹庸

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東廣州510642）（2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)財(cái)務(wù)處，廣東廣州510642）（3.湯臣倍健股份有限公司，廣東廣州 510663）（4.澳優(yōu)乳業(yè)（中國(guó)）有限公司，湖南長(zhǎng)沙 410200）

人類一生中大約有三分之一的時(shí)間處于睡眠狀態(tài)[1]，睡眠質(zhì)量與身心健康密切相關(guān)。在現(xiàn)代的快節(jié)奏生活中，慢性壓力[2]、焦慮[3]、抑郁[4]、輪班工作[5]和營(yíng)養(yǎng)不良[6]等環(huán)境因素嚴(yán)重影響睡眠質(zhì)量，睡眠障礙會(huì)導(dǎo)致各種健康問(wèn)題，包括肥胖[7]、糖尿病[8]和高血壓[9]等疾病。

我國(guó)超3億人存在睡眠障礙[10]，使用安眠藥和鎮(zhèn)靜抗抑郁藥對(duì)慢性失眠進(jìn)行藥物治療已被廣泛采用，但是長(zhǎng)期使用這些合成藥物常常伴隨耐受性、依賴性等不可忽視的副作用，包括睡眠質(zhì)量較差、覺(jué)醒次數(shù)增多、快速眼動(dòng)睡眠受損或受到抑制等[11]。因此，挖掘副作用小或無(wú)副作用的新型助眠物質(zhì)成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

生物活性肽是從蛋白質(zhì)衍生的片段，在人體中發(fā)揮多種生理功能。乳蛋白中包含豐富的生物活性肽，已經(jīng)從乳蛋白中分離出了具有促睡眠作用的活性肽[12-15]。Dela等[12]研究發(fā)現(xiàn)牛乳酪蛋白酶解物（150 mg/kg）能夠延長(zhǎng)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠，同時(shí)大鼠腦電波記錄結(jié)果表明，牛乳酪蛋白酶解物（150 mg/kg）顯著增強(qiáng)大鼠的慢波睡眠時(shí)長(zhǎng)。Yayeh等[14]使用腦電波信號(hào)監(jiān)控大鼠睡眠期間的清醒、非快速眼動(dòng)睡眠和快速眼動(dòng)睡眠狀態(tài)，結(jié)果表明，牛乳酪蛋白酶解物（300 mg/kg）顯著延長(zhǎng)大鼠的睡眠時(shí)長(zhǎng)并減少睡眠-覺(jué)醒周期次數(shù)。Kim等[15]在臨床研究中發(fā)現(xiàn)牛乳酪蛋白酶解物可以改善睡眠質(zhì)量并且具有良好的耐受性，長(zhǎng)期給藥可能會(huì)產(chǎn)生累積的促睡眠效果。

隨著人們對(duì)羊乳質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)認(rèn)知度的不斷提高，羊乳產(chǎn)品越來(lái)越流行。市場(chǎng)上的羊乳產(chǎn)品主要有鮮羊乳、羊奶粉、酸羊乳和羊奶酪等，但是羊乳資源的深度開(kāi)發(fā)不足。因此，對(duì)羊乳蛋白進(jìn)行酶解，挖掘?qū)θ梭w健康有益的生物活性肽符合現(xiàn)階段羊乳制品深加工的需求。據(jù)報(bào)道，羊乳蛋白的酶解過(guò)程可以產(chǎn)生具有抗高血壓、抗氧化、降糖、抗炎、抗菌、阿片類或免疫調(diào)節(jié)活性的多肽[16-20]，但羊乳酪蛋白及其酶解產(chǎn)物的促睡眠活性卻鮮有研究。本實(shí)驗(yàn)對(duì)GMCH改善小鼠睡眠的功能進(jìn)行研究，并初步探究其改善睡眠的作用及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)6～8周BALB/c近交性小鼠，雄性，體質(zhì)量均為18～22 g，由廣東斯嘉景達(dá)生物科技有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2020-0052，環(huán)境溫度25～30 ℃，濕度35%～50%，實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)華南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 材料與設(shè)備

羊乳酪蛋白，澳優(yōu)乳業(yè)有限公司；戊巴比妥鈉、巴比妥鈉，美國(guó)Sigma公司；5-HT、GABA、NA和DA檢測(cè)試劑盒，南京建成生物工程研究所；地西泮，山東信宜制藥有限公司。

EnSpire酶標(biāo)儀，美國(guó)PerkinElmer公司；萬(wàn)分之一天平，梅特勒-托利多儀器有限公司；高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf公司；Supermaze動(dòng)物行為學(xué)分析軟件，上海欣軟信息科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 GMCH的制備

稱取適量酪蛋白置于燒杯中，以料液比1:10加入超純水，胰蛋白酶添加量為0.4%（m/m），酶解2.5 h，使用2 mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)酶解液pH，酶解過(guò)程中pH值維持在8.0，酶解溫度控制為40 ℃。酶解完成后，加熱至95 ℃，維持10 min以使胰蛋白酶失活。隨后冷卻到室溫，4000 r/min離心10 min，取上清液凍干，得到GMCH干粉。

1.3.2 動(dòng)物分組及處理

將200只小鼠分四批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每批50只，隨機(jī)分為5組，分別為空白組、GMCH低劑量組、GMCH中劑量組、GMCH高劑量組和地西泮陽(yáng)性組，每組10只。GMCH低、中、高劑量組的給藥劑量分別為100、400、700 mg/kg，地西泮陽(yáng)性組的給藥劑量為3 mg/kg，灌胃容量均為0.2 mL/20 g，空白組灌胃同等體積蒸餾水，每天灌胃一次，連續(xù)灌胃4周。

1.3.3 直接睡眠實(shí)驗(yàn)

末次給藥1 h后觀察小鼠是否進(jìn)入睡眠狀態(tài)，睡眠狀態(tài)的判斷取決于翻正反射是否消失。將小鼠于背臥位放置60 s，期間動(dòng)物如果沒(méi)有翻轉(zhuǎn)則判定翻正反射消失，翻正反射消失至恢復(fù)期間認(rèn)為動(dòng)物處于睡眠狀態(tài)[21]。

1.3.4 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[22]的方法并略作改動(dòng)，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定戊巴比妥鈉的給藥劑量為40 mg/kg，在各組小鼠末次給藥1 h后腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.2 mL。記錄各組小鼠睡眠時(shí)間，觀察不同受試樣品對(duì)小鼠戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響。

1.3.5 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[22]的方法并略作改動(dòng)，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定戊巴比妥鈉的給藥劑量為25 mg/kg。在各組小鼠末次給藥1 h后腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量，注射量為0.2 mL，認(rèn)為翻正反射消失1 min以上的動(dòng)物進(jìn)入睡眠狀態(tài)，記錄動(dòng)物注射完成后在30 min內(nèi)的入睡只數(shù)。

1.3.6 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[22]的方法并略作改動(dòng)，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定巴比妥鈉的給藥劑量為250 mg/kg。在各組小鼠末次給藥1 h后腹腔注射巴比妥鈉，注射量為0.2 mL，注射完成至翻正反射消失期間為入睡潛伏期，記錄各組小鼠入睡潛伏期，觀察不同受試樣品對(duì)小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。

1.3.7 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[23,24]的方法并略作改動(dòng)，整個(gè)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)需要在安靜的環(huán)境下進(jìn)行，曠場(chǎng)反應(yīng)箱高50 cm，底邊長(zhǎng)50 cm，底部中心區(qū)域?yàn)?5 cm×25 cm，其余部分為邊緣區(qū)域。實(shí)驗(yàn)人員每次操作需保持一致，由固定角度將小鼠沿壁放入箱內(nèi)適應(yīng)1 min后，開(kāi)始進(jìn)行攝像和計(jì)時(shí)。通過(guò)攝像頭記錄小鼠活動(dòng)情況，每只小鼠測(cè)試5 min并記錄其運(yùn)動(dòng)軌跡，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)完成后，清潔曠場(chǎng)箱，避免曠場(chǎng)箱內(nèi)壁及底面留下氣味及排泄物等。記錄小鼠運(yùn)動(dòng)總路程、靜止總時(shí)間，平均運(yùn)動(dòng)速度、中央停留次數(shù)。

1.3.8 下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的含量測(cè)定

參考文獻(xiàn)[25]的方法并略作改動(dòng)，實(shí)驗(yàn)小鼠測(cè)試觀察完畢后，使用CO2麻醉，心臟取血后冰浴開(kāi)顱取出大腦，分離出下丘腦，稱重后放入液氮保存?zhèn)溆?，隨后按照1:9的比例添加生理鹽水，在4 ℃條件下勻漿，勻漿液在3000 r/min，4 ℃條件下冷凍離心15 min，取上清液到2 mL離心管中。放于-80 ℃冰箱備用。分別取下丘腦上清液按照試劑盒操作說(shuō)明測(cè)定5-HT、GABA、DA和NE的含量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有實(shí)驗(yàn)均至少重復(fù)三次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，通過(guò)SPSS 25.0軟件采用單因素方差分析法進(jìn)行顯著性分析，P＜0.05為顯著差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 GMCH對(duì)小鼠體質(zhì)量與臟器系數(shù)的影響

動(dòng)物體內(nèi)各個(gè)臟器質(zhì)量與動(dòng)物體質(zhì)量的比值為臟器系數(shù)，在正常情況下臟器系數(shù)一般不會(huì)有明顯差異。由下表可知，相較與空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組和GMCH低、中、高劑量組小鼠的體質(zhì)量與臟器系數(shù)均無(wú)顯著差異，表明低、中、高劑量GMCH并未對(duì)小鼠產(chǎn)生器質(zhì)性的影響。

表1 小鼠體質(zhì)量與臟器系數(shù)表Table 1 Body weight and organ coefficient of mice

2.2 GMCH改善小鼠睡眠的試驗(yàn)評(píng)價(jià)

2.2.1 GMCH對(duì)小鼠直接睡眠的影響

各組小鼠在給予相應(yīng)的受試樣品后，1 h內(nèi)均未發(fā)生翻正反射消失的現(xiàn)象，說(shuō)明GMCH對(duì)小鼠無(wú)直接睡眠作用。

2.2.2 GMCH對(duì)小鼠延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)長(zhǎng)的影響

通過(guò)戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GMCH具有改善睡眠的作用。戊巴比妥鈉和巴比妥鈉是已知的GABAA受體激動(dòng)劑，當(dāng)GABA或GABAA受體激動(dòng)劑與GABAA受體結(jié)合時(shí)，CI-離子通道打開(kāi)，導(dǎo)致細(xì)胞超極化，細(xì)胞興奮性降低，睡眠發(fā)生[26]。具有促進(jìn)睡眠作用的受試物可以延長(zhǎng)巴比妥類藥物引起的睡眠時(shí)間[27]。由表2可知，GMCH可以顯著延長(zhǎng)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)長(zhǎng)。與空白組相比，陽(yáng)性組睡眠時(shí)間延長(zhǎng)71.02%（P＜0.05），GMCH低、中、高劑量組小鼠睡眠時(shí)間分別延長(zhǎng)34.46%、48.83%（P＜0.05）、63.19%（P＜0.05），隨著給藥劑量的提升，小鼠的睡眠時(shí)間也在延長(zhǎng)。說(shuō)明GMCH與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用，可以顯著（P＜0.05）延長(zhǎng)小鼠睡眠時(shí)間。Dela等[12]發(fā)現(xiàn)150 mg/kg和300 mg/kg的牛乳酪蛋白酶解物可以顯著延長(zhǎng)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)長(zhǎng)。

表2 GMCH對(duì)小鼠戊巴比妥鈉睡眠時(shí)長(zhǎng)的影響Table 2 Effects of goat milk casein hydrolysates on sleep duration of sodium pentobarbital in mice

2.2.3 GMCH對(duì)小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的影響

由表3可知，空白組小鼠注射戊巴比妥鈉溶液閾下劑量后的入睡率為10%，陽(yáng)性組小鼠入睡率較空白組提升70.00%，GMCH低、中、高劑量組的小鼠入睡率較空白組分別提升20.00%、60.00%、80.00%，樣品組小鼠入睡率隨著GMCH劑量的提升而增加。Qian等[28]的研究表明，與對(duì)照組（58.33%）相比，酪蛋白酶解物組（100 mg/kg，66.67%）、十肽組（2 mg/kg，75.00%）和陽(yáng)性組（1 mg/kg，91.67%）的睡眠率均有所提高。

表3 GMCH對(duì)小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量入睡率的影響Table 3 Effect of goat milk casein hydrolysates on sleep rate of mice with sodium pentobarbital subthreshold dose

2.2.4 GMCH對(duì)小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

由表4可知，與空白組相比，陽(yáng)性組入睡潛伏期縮短140.74%（P＜0.05），低劑量組入睡潛伏期縮短42.86%（P＜0.05），中劑量組入睡潛伏期縮短56.63%（P＜0.05），高劑量組入睡潛伏期縮短91.18%（P＜0.05），隨著GMCH劑量的提升小鼠的睡眠潛伏期也在縮短。結(jié)果表明，GMCH與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用，可以顯著縮短小鼠的睡眠潛伏期。結(jié)合2.2.1～2.2.3節(jié)的結(jié)果，說(shuō)明GMCH具有改善小鼠睡眠的作用。黃遠(yuǎn)英等[29]經(jīng)口灌胃給予小鼠不同濃度酪蛋白水解物與γ-氨基丁酸復(fù)配劑后，200、600 mg/kg劑量組較空白組睡眠時(shí)長(zhǎng)顯著延長(zhǎng)12.23%、10.08%，入睡潛伏期顯著縮短7.50%、6.32%，受試物無(wú)直接睡眠作用。Chen等[30]使用核桃肽和γ-氨基丁酸組合治療小鼠30 d，結(jié)果顯示，小鼠睡眠時(shí)長(zhǎng)呈劑量依賴性增加，分別增加21.74%，20.23%和28.10%，中、高劑量組小鼠入睡率顯著增加，入睡潛伏期顯著減少。

表4 GMCH對(duì)小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響Table 4 Effect of goat milk casein hydrolysates on sleep latency of sodium barbitone in mice

2.3 GMCH對(duì)小鼠行為學(xué)的影響

2.3.1 GMCH對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)軌跡的影響

為了判斷GMCH對(duì)小鼠是否有鎮(zhèn)靜作用，設(shè)置曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察小鼠行為學(xué)變化。由圖1可知，與陽(yáng)性組和GMCH樣品組相比，空白組小鼠在曠場(chǎng)中的活動(dòng)區(qū)域主要分布在邊緣且運(yùn)動(dòng)軌跡更為密集，這表明GMCH和陽(yáng)性藥物能夠減輕小鼠在曠場(chǎng)中的焦慮感。

圖1 小鼠運(yùn)動(dòng)軌跡圖Fig.1 Mouse motion track

2.3.2 GMCH對(duì)小鼠曠場(chǎng)指標(biāo)的影響

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)用于測(cè)試動(dòng)物的自發(fā)活動(dòng)和探索行為，中央?yún)^(qū)停留時(shí)間以及進(jìn)入中央?yún)^(qū)的次數(shù)可作為評(píng)價(jià)動(dòng)物焦慮狀態(tài)的指標(biāo)[31,32]，動(dòng)物在曠場(chǎng)中的活動(dòng)越少表明藥物的鎮(zhèn)靜作用越強(qiáng)[12]。由表5可知，空白組小鼠在曠場(chǎng)中的中央停留次數(shù)、平均運(yùn)動(dòng)速度、靜止總時(shí)間、運(yùn)動(dòng)總路程分別為5.80、31.88 mm/s、87.41 s、9560.30 cm，與空白組相比，GMCH低、中、高劑量組小鼠在曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)總路程有所減少，中央停留時(shí)間、中央停留次數(shù)和靜止總時(shí)間均增多，但無(wú)顯著差異，陽(yáng)性組小鼠在曠場(chǎng)中的中央停留時(shí)間、中央停留次數(shù)和靜止總時(shí)間與空白組相比有顯著增多（P＜0.05），以上指標(biāo)在一定的程度上反映了GMCH有改善小鼠在曠場(chǎng)中的焦慮狀況的趨勢(shì)。梁曹雯等[23]的研究表明，酸棗仁百合睡眠肽復(fù)合物處理后，大鼠在中央停留次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間、總靜止時(shí)間增加，運(yùn)動(dòng)總路程減少，但無(wú)顯著性差異。Dela等[12]分別以75、150、300、500 mg/kg的牛乳酪蛋白酶解物灌胃小鼠，與空白組相比，小鼠的運(yùn)動(dòng)總路程有減少的趨勢(shì)，但沒(méi)有顯著性差異。

表5 GMCH對(duì)小鼠曠場(chǎng)運(yùn)動(dòng)的影響Table 5 Effect of goat milk casein hydrolysates on open field movement in mice

2.4 GMCH對(duì)小鼠下丘腦中神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響

為了初步探討GMCH改善睡眠的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用ELISA法測(cè)定了小鼠下丘腦中的5-HT、DA、GABA、NE的含量。由表6可知，空白組小鼠下丘腦中GABA、5-HT、DA和NE的含量分別為78.60、158.40、659.40、129.20 ng/g。與空白組相比，GMCH低、中、高劑量組均能明顯升高小鼠腦內(nèi)GABA和5-HT含量（P＜0.05），GABA含量分別增加64.72%、41.16%、56.19%，5-HT分別增加25.87%、33.50%、43.67%。隨著GMCH劑量的提升，小鼠下丘腦中GABA和5-HT的含量也在增加，但次于陽(yáng)性組；GMCH低、中、高劑量組小鼠下丘腦中DA和NE的含量較空白組顯著降低（P＜0.05），DA含量分別降低7.02%、12.85%、13.72%，NE含量分別降低18.73%、23.37%、29.41%，低、中、高劑量GMCH對(duì)小鼠下丘腦中DA和NE的降低作用與給藥劑量呈負(fù)相關(guān)。這些結(jié)果在相關(guān)文獻(xiàn)中有類似的報(bào)道[23,33-35]。

表6 GMCH對(duì)小鼠下丘腦5-HT、GABA、DA、NE含量的影響(ng/g)Table6 Effects of goat milk casein hydrolysates on the contents of 5-HT, GABA, DA and NE in mouse hypothalamus (ng/g)

下丘腦是調(diào)節(jié)睡眠-覺(jué)醒模式的中心樞紐，同時(shí)分布著喚醒區(qū)域和睡眠區(qū)域。下丘腦中的神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中進(jìn)行了廣泛的研究[36]，如5-HT、NE、腺苷、DA、GABA、組胺、下丘腦素等，這些系統(tǒng)在對(duì)睡眠障礙治療的應(yīng)用中有巨大潛力[37,38]。DA能神經(jīng)元分布在相對(duì)較少的小大腦區(qū)域，包括腹側(cè)被蓋區(qū)（VTA）、黑質(zhì)致密部（SNpc）、腹側(cè)導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)（VPAG）和一些下丘腦區(qū)域[39]。DA是一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，在調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)控制、認(rèn)知和喚醒方面具有重要作用[40]。GABA是一種非蛋白氨基酸，作為一種主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)存在于哺乳動(dòng)物大腦中，也是改善睡眠障礙的已知藥物[41]。GABAA受體上的BZD結(jié)合位點(diǎn)是大多數(shù)鎮(zhèn)靜催眠藥的靶點(diǎn)。5-HT是最早被證明與睡眠-覺(jué)醒周期相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)之一，有研究表明，5-HT參與睡眠的準(zhǔn)備、觸發(fā)和維持[42]。抑制5-HT能神經(jīng)元的活性會(huì)導(dǎo)致失眠，這種失眠可以通過(guò)在視前區(qū)注射5-羥色氨酸來(lái)逆轉(zhuǎn)，這表明5-羥色胺在大腦結(jié)構(gòu)中是睡眠所必需的[43]。NE在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要由藍(lán)斑（Locus Coeruleus，LC）產(chǎn)生，NE能神經(jīng)元活性在清醒時(shí)高，在NREM階段降低，在REM睡眠期間幾乎沉默[44]。NE能神經(jīng)元在清醒時(shí)抑制VLPO區(qū)域（誘導(dǎo)睡眠），而VLPO區(qū)域的抑制解除是睡眠的關(guān)鍵前提[45]。本研究的結(jié)果表明，GMCH降低了下丘腦中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)DA、NE的含量，提高了下丘腦中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA、5-HT的含量。已有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GMCH改善睡眠的作用似乎與調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)多神經(jīng)遞質(zhì)途徑有關(guān)，但GMCH是否參與到神經(jīng)遞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)及與不同類型受體的結(jié)合過(guò)程，以及在GMCH中起到核心作用的標(biāo)志性物質(zhì)還未被篩選出來(lái)，這些內(nèi)容都需要進(jìn)一步的研究。

3 結(jié)論

本課題組對(duì)GMCH的生物活性進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)GMCH具有改善睡眠的作用。在戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠實(shí)驗(yàn)中，地西泮和不同劑量的GMCH均可延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)長(zhǎng)、提高戊巴比妥鈉閾下劑量入睡率、縮短睡眠潛伏期，其中GMCH的促睡眠功效隨著給藥濃度的增加而增強(qiáng)，在700 mg/kg時(shí)達(dá)到峰值。觀察不同劑量GMCH對(duì)小鼠在曠場(chǎng)中自主活動(dòng)的影響，結(jié)果表明，不同劑量組GMCH減少了小鼠在曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)總路程同時(shí)增多中央停留次數(shù)、中央停留時(shí)間和靜止總時(shí)間，但與空白組相比均無(wú)顯著性差異，GMCH在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中有抑制動(dòng)物活動(dòng)的趨勢(shì)，但沒(méi)有明確的鎮(zhèn)靜作用。神經(jīng)遞質(zhì)測(cè)定結(jié)果表明，GMCH各劑量能提高小鼠下丘腦中5-HT和GABA的含量同時(shí)減少DA 和NE的含量。綜上，GMCH具有較好的改善睡眠作用，其作用途徑可能與其調(diào)節(jié)下丘腦中神經(jīng)遞質(zhì)水平有關(guān)。