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        基于特異性調(diào)控的氟苯尼考與氟苯尼考胺寬譜免疫分析方法研究

        2023-12-11 03:32:40周文玥楊金易張?jiān)亙x李然王弘徐振林田元新沈玉棟
        分析化學(xué) 2023年11期
        關(guān)鍵詞:檢測(cè)方法

        周文玥,楊金易,張?jiān)亙x,李然,王弘,徐振林,田元新 ,沈玉棟

        1(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州 5106422)2(南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,廣東省新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州 510515)

        1 HPLC-MS/MS 方法的建立

        取豬肉樣品,分別添加已知濃度的氟苯尼考和氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行前處理并凈化后采用icELISA 方法與HPLC-MS/MS 方法同時(shí)測(cè)定,進(jìn)行結(jié)果比對(duì)。

        色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,2.7 μm);流速:0.5 mL/min;柱溫:40℃;進(jìn)樣量:10 μL;流動(dòng)相:A 為水溶液,B 為乙腈溶液;梯度洗脫程序:0~7.5 min,35%~95% B;7.5~9.5 min,95% B;9.5~9.6 min,95 %~35% B;9.6~12 min,35% B。

        質(zhì)譜條件:電噴霧電離(ESI);掃描方式:ESI 負(fù)模式(0 min~6 min)和ESI 正模式(6 min~12 min);監(jiān)測(cè)模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮?dú)猓环侥峥己头侥峥及范侩x子對(duì)、定性離子對(duì)、去簇電壓、碰撞氣能量等參數(shù)如下表:

        表S1 HPLC-MS/MS方法檢測(cè)條件Table S1 The detection conditions of HPLC-MS/MS

        2 兩種方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度的相關(guān)性

        以HPLC-MS/MS 所測(cè)得的氟苯尼考及氟苯尼考胺濃度為Y 軸,以icELISA 測(cè)得的氟苯尼考及氟苯尼考胺濃度為X 軸,繪制散點(diǎn)圖。對(duì)兩種方法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析,結(jié)果表明如下圖所示?;貧w方程為:y=0.99x-1.68,R2為0.99,說明建立的icELISA 方法的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

        圖S1 icELISA 與HPLC-MS/MS 方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度的相關(guān)性Fig S1 The correlation between the accuracy of detection results using icELISA and HPLC-MS/MS methods

        3 抗體性能

        3.1 抗體純化

        采用辛酸-硫酸銨沉淀法純化兔血清后,經(jīng)SDS-PAGE 電泳圖分析(圖 S2),純化前的兔血清雜帶較多,純化后雜帶減少且在55KD 和25KD 處清晰可見抗體重鏈和輕鏈。

        圖 S2 多克隆抗體純化SDS-PAGE 電泳鑒定Fig.S2 SDS-PAGE analysis of purification of polyclonal antibody

        3.2 抗體特異性

        表S2 icELISA方法對(duì)氟苯尼考、氟苯尼考胺及其結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率Table S2 CRs of Florfenicol, Florfenicol amine and its analogs by icELISA method

        3.3 精密度與穩(wěn)定性

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