程志芳，史艷艷，李 麗，韓婭楠，董曉宇，常曉軻，姚秋菊

（河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蔬菜研究所，河南 鄭州 450002）

辣椒（Capsicum annuumL.）為茄科辣椒屬植物，多是1年生草本，常異花授粉，采用傳統(tǒng)育種方式培育一個(gè)自交系需要5～6 代，選育效率較低。隨著花藥培養(yǎng)技術(shù)在辣椒遺傳育種中的應(yīng)用，僅需1～2 代即可獲得純合體，縮短了育種年限，提高了育種效率；花藥培養(yǎng)再生植株還可以廣泛應(yīng)用于遺傳圖譜構(gòu)建[1]、基因定位[2]、轉(zhuǎn)基因育種以及染色體工程[3]等。自1973年王玉英等[4]首次成功獲得了辣椒花藥培養(yǎng)再生植株后，許多學(xué)者進(jìn)行了相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)很多因素影響花藥培養(yǎng)效率，如培養(yǎng)基種類[5]、預(yù)處理時(shí)間[6]、碳源[7]、外源添加物[8]和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑[9]等。其中，在碳源研究方面，王仲慧等[9]研究認(rèn)為，3%蔗糖最適合辣椒花藥培養(yǎng)；RAMON 等[10]和楊芷秋[7]研究表明，麥芽糖作碳源的花藥培養(yǎng)效率顯著高于蔗糖、果糖和葡萄糖；趙激等[5]研究表明，麥芽糖作碳源，胚狀體誘導(dǎo)率雖略高于蔗糖，但差異不顯著；而靜一等[11]研究表明，辣椒花藥培養(yǎng)中碳源為不重要因素。在水稻花藥培養(yǎng)中，朱永生等[12]研究表明，蔗糖和麥芽糖合并作碳源對(duì)提高出愈率和綠苗分化率效果顯著，且使用混合碳源比使用單一碳源效果好。而在辣椒花藥培養(yǎng)研究中，鮮少采用混合碳源。在外源添加物方面，許多學(xué)者研究了活性炭和AgNO3對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)的影響，如黃亞杰等[13]研究表明，5 g/L 活性炭最適合辣椒花藥培養(yǎng)，不加活性炭?jī)H形成愈傷組織；陳曉等[14]研究表明，低濃度活性炭之間辣椒花藥培養(yǎng)胚誘導(dǎo)率差別不顯著，2.5 g/L 活性炭即可；而RAMON 等[10]研究表明，活性炭雖提高辣椒花藥培養(yǎng)胚狀體誘導(dǎo)率，但會(huì)導(dǎo)致不正常胚發(fā)生；蔡連華等[15]研究表明，1 mg/L AgNO3顯著促進(jìn)彩色甜椒花藥胚狀體誘導(dǎo)，最高出胚率為22.4%，但獲得的胚狀體中大多是畸形胚；而王仲慧等[9]研究表明，50 μmol/L（≈8.49 mg/L）AgNO3可提高胚狀體誘導(dǎo)率。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用始終是學(xué)者們的研究熱點(diǎn)，前人[9，16-17]研究多是利用NAA 與KT 組合，且認(rèn)為0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L KT 組合最適合辣椒花藥培養(yǎng)，其中出胚率最高為31.76%[9]；另有研究[13-14，18]表明，低濃度2，4-D 與KT 組合也可直接誘導(dǎo)辣椒花藥產(chǎn)生胚狀體，其中出胚率最高為9.76%[14]。辣椒花藥培養(yǎng)再生植株倍性復(fù)雜，可能有單倍體、二倍體、多倍體、混倍體和非整倍體等不同倍性水平[19]。不同倍性植株用途不同，因此再生株系的倍性鑒定是其充分利用的前提。目前常用的倍性鑒定方法有形態(tài)學(xué)鑒定[20]、細(xì)胞學(xué)鑒定[21-23]及近些年廣泛應(yīng)用的DNA流式細(xì)胞儀鑒定法[24-25]。在辣椒花藥培養(yǎng)再生植株倍性鑒定方面，付文婷等[26]比較了染色體計(jì)數(shù)法、DNA 流式細(xì)胞儀檢測(cè)法、形態(tài)鑒定法的可靠性，發(fā)現(xiàn)DNA 流式細(xì)胞儀檢測(cè)法和染色體計(jì)數(shù)法吻合度達(dá)93%。

盡管在辣椒花藥培養(yǎng)方面取得許多進(jìn)展，但研究混合碳源對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)的影響報(bào)道較少，且前人研究中活性炭和AgNO3的最適濃度分別相差較大，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類及其濃度配比不佳進(jìn)而造成出胚率和成苗率較低，這些問題都限制了辣椒花藥培養(yǎng)的應(yīng)用規(guī)模。因此，采用14 個(gè)辣椒基因型，比較不同質(zhì)量濃度蔗糖和麥芽糖碳源組合、活性炭、AgNO3和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合4 個(gè)因素對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)的影響，并采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)法對(duì)再生植株進(jìn)行倍性鑒定，旨在為提高辣椒花藥培養(yǎng)效率及再生植株充分利用提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

2021 年4 月下旬，將供體植株定植在河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院河南現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研究開發(fā)基地露地試驗(yàn)區(qū)，5月中下旬至6月中旬采樣。參試材料共14個(gè)辣椒基因型，其名稱及來源見表1。

表1 參試?yán)苯坊蛐图捌鋪碓碩ab.1 Test pepper genotypes and origins

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 花藥培養(yǎng) 摘取辣椒萼瓣等長(zhǎng)或花瓣微露出花萼的花蕾（多數(shù)小孢子處于單核靠邊期），于4 ℃低溫預(yù)處理1～7 d。接種前剝?nèi)ロ敹?5%～50%的花萼，露出青綠色花瓣。然后在超凈工作臺(tái)上用70% 乙 醇 浸 泡 消 毒30 s，再 用0.1% HgCl2消 毒10 min，無菌水沖洗3～4 次，每次3～5 min，最后將花蕾倒入鋪有無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，蓋上蓋子防止失水或褐化。接種時(shí)用解剖刀在花蕾1/2 處橫切，然后捏住花冠部分，將花藥敲入培養(yǎng)皿中，用保鮮膜封口。接種后于32 ℃恒溫暗培養(yǎng)7 d，之后26 ℃下暗培養(yǎng)直至胚狀體長(zhǎng)出，將其轉(zhuǎn)入無任何添加物的MS 基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為26 ℃，光周期為12 h/d，直至分化成苗。采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，探究碳源組合、活性炭、AgNO3和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合4 個(gè)因素對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)的影響。每處理2～3 皿，每皿接種30 個(gè)花藥，重復(fù)3 次。所有試驗(yàn)均采用MS 基本培養(yǎng)基，含8 g/L瓊脂，pH值為5.8。

1.2.1.1 碳源組合 基本培養(yǎng)基中分別加入不同質(zhì)量濃度的麥芽糖和蔗糖（表2），此外，均加入1.000 mg/L 2，4-D、1.50 mg/L KT、4 mg/L AgNO3和2 g/L 活性炭。參試5 個(gè)基因型分別為19HG11、19HG16、19HG22、20G159和20G52。

表2 碳源組合處理Tab.2 The carbon source combination treatment g/L

1.2.1.2 活性炭 基本培養(yǎng)基中分別加入1、2、3 g/L活性炭，以不加活性炭為對(duì)照，此外，均加入20 g/L麥芽糖、10 g/L蔗糖、1.000 mg/L 2，4-D、1.50 mg/L KT和4 mg/L AgNO3。參試5 個(gè)基因型分別為20G52、19HG11、19HG16、19HG09和17-86。

1.2.1.3 AgNO3基本培養(yǎng)基中分別加入2、4、6、8 mg/L AgNO3，以不加AgNO3為對(duì)照，此外，均加入20 g/L 麥 芽 糖、10 g/L 蔗 糖、1.000 mg/L 2，4-D、1.50 mg/L KT 和2 g/L 活性炭。參試4 個(gè)基因型分別為艷椒808、艷椒485、線椒一號(hào)和艷椒465。

1.2.4 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合 基本培養(yǎng)基中分別加入不同種類及其質(zhì)量濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（表3），此外均加入20 g/L 麥芽糖、10 g/L 蔗糖、2 g/L活性炭和4 mg/L AgNO3。參試5 個(gè)基因型分別為星悅、艷椒808、華之秀1號(hào)、艷椒425和線椒一號(hào)。

表3 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合處理Tab.3 Plant growth regulator combination treatment mg/L

1.2.2 倍性鑒定 待再生苗在瓶中長(zhǎng)至6～7片葉時(shí)打開瓶蓋，馴化煉苗3 d，然后用自來水將根部培養(yǎng)基沖洗干凈，定植到裝有基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽中，覆蓋保濕7 d，期間弱光管理。當(dāng)苗子定植長(zhǎng)出新葉后，取新鮮幼嫩葉片采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性鑒定。采用Sysmex 公司的CYStain UV Precise P 試劑盒進(jìn)行裂解和染色，用PARTEC 公司的CyFlow? Cube8 流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性鑒定。每株系取1～2片約0.5 cm2的新鮮幼嫩葉片，加入300 μL 細(xì)胞裂解液，用手術(shù)刀片切碎，然后加入1 200 μL染色液，50 μm篩子過濾，收集濾液，避光染色5～10 min 后利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)該樣品DNA 含量，讀取峰值。用二倍體雜交種華之秀二號(hào)作對(duì)照調(diào)試電壓，使對(duì)照的DNA 峰值在相對(duì)熒光強(qiáng)度200 道。每個(gè)樣本測(cè)定1次，根據(jù)峰值曲線判斷待測(cè)樣品倍性。DNA 峰值處于相對(duì)熒光強(qiáng)度100道、200道、300道和400道分別為單倍體、二倍體、三倍體和四倍體，其余為非整倍體。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

接種20 d 后每7 d 觀察一次胚狀體的萌發(fā)情況，直至接種80 d 后統(tǒng)計(jì)其出胚率與成苗率。出胚率=（出胚數(shù)/接種花藥數(shù)）×100%；成苗率=（成苗數(shù)/接種花藥數(shù)）×100%。方差分析中，采用DPS（9.01）軟件進(jìn)行完全隨機(jī)設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同質(zhì)量濃度碳源組合對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)效率的影響

從表4 可以看出，參試5 個(gè)辣椒基因型在不同質(zhì)量濃度碳源組合培養(yǎng)基上花藥培養(yǎng)效率均產(chǎn)生差異。其中，M4 可誘導(dǎo)所有參試基因型出胚及成苗，4 個(gè)基因型19HG11、19HG16、19HG22、20G159均在M4 上出胚率和成苗率最高，且19HG16、19HG22、20G159三個(gè)基因型在M4的出胚率和成苗率均顯著高于其他碳源組合。只有基因型20G52在M2 上出胚率和成苗率略高于M4，分別為5.53%和3.33%，但M2 與M4 成苗率差異不顯著，且2 個(gè)基因型19HG16 和19HG22 在M2 上成苗率為0，因此M2 廣適效果較差。綜上所述，在辣椒花藥培養(yǎng)中，不同基因型所需蔗糖和麥芽糖比例略有不同，但M4（20 g/L麥芽糖與10 g/L蔗糖合并作碳源）適合較廣泛的辣椒基因型花藥培養(yǎng)，參試基因型最高出胚率為9.43%，最高成苗率為3.85%。

表4 不同質(zhì)量濃度碳源組合對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)效率的影響Tab.4 Effects of different mass concentrations of carbon sources combination on anther culture of pepper %

2.2 不同質(zhì)量濃度活性炭對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)效率的影響

從表5 可以看出，添加不同質(zhì)量濃度活性炭對(duì)參試5個(gè)辣椒基因型的花藥培養(yǎng)效率均有不同的影響，并呈現(xiàn)出隨著活性炭質(zhì)量濃度升高其出胚率和成苗率先升高后降低的規(guī)律，且均在2 g/L活性炭時(shí)出胚率和成苗率達(dá)到最高，其中19HG11、19HG16和19HG09（成苗率例外）3 個(gè)基因型均在2 g/L 活性炭時(shí)出胚率和成苗率顯著高于其他質(zhì)量濃度。因此，2 g/L 活性炭最適宜辣椒花藥培養(yǎng)，參試基因型最高出胚率和成苗率分別為9.43%和3.85%。另外，參試基因型在無活性炭培養(yǎng)基上均未出胚，僅有愈傷組織形成，說明活性炭顯著促進(jìn)了辣椒胚狀體的形成。

表5 不同質(zhì)量濃度活性炭對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)效率的影響Tab.5 Effects of different mass concentrations of activated carbon on anther culture of pepper %

2.3 不同質(zhì)量濃度AgNO3對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)效率的影響

從表6 可以看出，添加不同質(zhì)量濃度AgNO3，參試4 個(gè)辣椒基因型花藥培養(yǎng)效率均產(chǎn)生差異，并呈如下規(guī)律：在出胚率方面，艷椒808、艷椒485 和艷椒465 三個(gè)基因型均在6 mg/L AgNO3時(shí)達(dá)最高，分別為13.88%、29.63%、20.55%，線椒一號(hào)在4 mg/L AgNO3時(shí)出胚率達(dá)最高（11.67%）且顯著高于其他質(zhì)量濃度；在成苗率方面，參試基因型均在6 mg/L AgNO3時(shí)最高，4 mg/L AgNO3時(shí)次之，且同一基因型兩者差異不顯著，其中，艷椒485 在6 mg/L AgNO3時(shí)成苗率高達(dá)15.20%。綜上所述，在培養(yǎng)基中添加一定濃度的AgNO3有助于辣椒胚狀體的形成，6 mg/L AgNO3較廣泛地適宜辣椒花藥培養(yǎng)。

表6 不同質(zhì)量濃度AgNO3對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)效率的影響Tab.6 Effects of different mass concentrations of silver nitrate on anther culture of pepper %

2.4 不同質(zhì)量濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)效率的影響

從表7 可以看出，不同質(zhì)量濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)參試5個(gè)辣椒基因型的花藥培養(yǎng)效率均有不同影響。星悅在5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度下的出胚率和成苗率均以M5 最高，分別為6.09% 和1.67%，且顯著高于其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度組合，因此，M5最適合星悅基因型花藥培養(yǎng)。艷椒808在5 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度下出胚率差異均顯著，以M6最高，達(dá)16.67%，M5次之，為11.67%。成苗率方面以M5 和M6 最高，均為4.41%，M7、M8 和M9 依次降低，分別為3.33%、2.16%和0.74%。因此，M5 和M6最適合艷椒808基因型花藥培養(yǎng)。華之秀1號(hào)的出胚率和成苗率均以M5 最高，分別為63.33%和23.88%，且M5 出胚率顯著高于其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度組合，因此，M5 最適合華之秀1 號(hào)基因型花藥培養(yǎng)。艷椒425 在5 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度下出胚率以M9 最高，達(dá)3.33%，且顯著高于其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度組合；成苗率以M7 和M9 最高，達(dá)1.67%，顯著高于其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度組合。因此，M7 和M9 最適合艷椒425 基因型花藥培養(yǎng)。線椒一號(hào)在5種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度下的出胚率和成苗率均以M9 最高，且顯著高于其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑質(zhì)量濃度組合，分別為20.00%和10.54%。因此，M9 最適合線椒一號(hào)基因型花藥培養(yǎng)。

表7 不同質(zhì)量濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)效率的影響Tab.7 Effects of different mass concentrations of plant growth regulator combination on anther culture of pepper %

綜上分析可見，辣椒花藥培養(yǎng)中不同基因型最適植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比不同，參試的5 個(gè)辣椒基因型3 個(gè)在M5（1.000 mg/L 2，4-D+1.50 mg/L KT）上花藥培養(yǎng)效率最高，最高出胚率和成苗率分別為63.33%和23.88%；2 個(gè)在M9（0.001 mg/L 2，4-D+0.05 mg/L KT）上花藥培養(yǎng)效率最高，最高出胚率和成苗率分別為20.00%和10.54%。

2.5 再生植株倍性鑒定

參試14 個(gè)基因型，共誘導(dǎo)出胚1 095 個(gè)，成苗383 株，經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定后，單倍體（圖1B）279株、二倍體（圖1C）87株、三倍體（圖1D）2株、四倍體（圖1E）2株、混倍體（單倍體與二倍體，圖1F）1株和非整倍體12 株，在再生植株群體中占比分別為72.85%、22.72%、0.52%、0.52%、0.26%和3.13%。

圖1 流式細(xì)胞儀測(cè)定辣椒花藥培養(yǎng)再生植株DNA含量分布結(jié)果Fig.1 Distribution of DNA content in pepper anther regenerated plants determined by flow cytometry

3 結(jié)論與討論

近年來有研究表明，在花藥培養(yǎng)中麥芽糖比蔗糖更益于胚狀體發(fā)生[27-28]。本研究比較了不同質(zhì)量濃度麥芽糖和蔗糖碳源組合對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)的影響，參試5個(gè)基因型在20 g/L麥芽糖和10 g/L蔗糖合并作碳源情況下花藥培養(yǎng)效率較高，最高出胚率和成苗率分別為9.43%和3.85%。且合并碳源的花藥培養(yǎng)效率普遍高于單獨(dú)蔗糖作碳源的效率，適合較廣泛的辣椒基因型花藥培養(yǎng)，這與張芳等[29]的研究結(jié)論相同，而趙激等[5]研究表明，在辣椒花藥培養(yǎng)中麥芽糖優(yōu)于蔗糖，且最高出胚率僅為1.28%，而未研究2種糖類合并作為碳源時(shí)的表現(xiàn)?；旌咸荚幢葐我惶荚葱Ч玫脑蚩赡苁且?yàn)榛旌咸荚丛谂哒T導(dǎo)過程中滿足了不同發(fā)育階段糖類代謝的不同需求。本研究中未涉及單獨(dú)麥芽糖碳源時(shí)辣椒花藥培養(yǎng)的表現(xiàn)，有待進(jìn)一步探索。

植物花藥培養(yǎng)過程中會(huì)產(chǎn)生有毒物質(zhì)，進(jìn)而降低胚發(fā)生率或產(chǎn)生畸形胚?；钚蕴靠晌脚囵B(yǎng)基中的有害物質(zhì)和培養(yǎng)過程中釋放的酚醌類物質(zhì)及蔗糖在高壓滅菌時(shí)產(chǎn)生的5-羥甲基糠醛等，同時(shí)也吸附生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、Fe-EDTA、維生素B6、葉酸和煙酸等其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此，在植物組織培養(yǎng)中活性炭經(jīng)常用于防褐變和胚誘導(dǎo)等[30]。本研究表明，辣椒花藥培養(yǎng)中不加活性炭無胚狀體形成，僅形成愈傷組織，2 g/L 活性炭最適辣椒花藥培養(yǎng)，參試基因型最高出胚率為9.43%，最高成苗率為3.85%。這與張紅肖等[31]和劉獨(dú)臣[32]的研究結(jié)論相同。而王仲慧等[9]和李怡斐等[33]認(rèn)為，4 g/L 活性炭最適辣椒花藥培養(yǎng)，且王仲慧等[9]研究中最高出胚率和成苗率分別為31.76%和20.27%；劉娜[34]研究表明，6 g/L 活性炭出胚率最高，但最高出胚率僅為2.5%。造成這些差異可能有以下原因：參試基因型不同會(huì)造成出胚率差異較大，各自研究中采用的基本培養(yǎng)基和試劑級(jí)別不同。劉仁祥等[35]研究表明，活性炭對(duì)花藥培養(yǎng)的促進(jìn)作用受培養(yǎng)基中大量元素、微量元素平衡程度影響，其試劑級(jí)別不同對(duì)花藥培養(yǎng)出胚率影響亦不同。因此，采用的基本培養(yǎng)基不同和試劑級(jí)別不同也會(huì)導(dǎo)致活性炭最適濃度亦不同。

有研究表明，AgNO3能明顯降低花藥褐化，保持花藥新鮮，促進(jìn)胚狀體形成與發(fā)育[36]。本研究表明，當(dāng)加入6 mg/L AgNO3時(shí)辣椒花藥培養(yǎng)效率最高，參試基因型出胚率和成苗率最高分別為29.63%和15.20%。這與劉娜[34]研究結(jié)論相同；而李怡斐等[33]認(rèn)為加入4 mg/L AgNO3最好，出胚率最高為22.70%；王仲慧等[9]認(rèn)為加入50 μmol/L（≈8.49 mg/L）AgNO3可提高胚狀體誘導(dǎo)率，最高出胚率和成苗率分別為10.00%和3.33%。造成這些差異的原因可能與其研究中參試基因型不同和AgNO3梯度設(shè)置過大有關(guān)。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是影響花藥培養(yǎng)效率的重要因素，不同種類及其濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)辣椒花藥培養(yǎng)產(chǎn)生影響不同，適當(dāng)?shù)呐浔扔兄谂郀铙w的形成。本研究表明，不同基因型最適植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比不同。參試5個(gè)基因型中有3個(gè)在M5（1.000 mg/L 2，4-D+1.50 mg/L KT）上花藥培養(yǎng)效率最高，出胚率最高為63.33%，成苗率最高為23.88%；2 個(gè)在M9（0.001 mg/L 2，4-D + 0.05 mg/L KT）上花藥培養(yǎng)效率最高，出胚率最高為20.00%，成苗率最高為10.54%。即在辣椒花藥培養(yǎng)中，無論高濃度2，4-D與高濃度KT 組合或低濃度2，4-D 與低濃度KT 組合均可高效誘導(dǎo)花藥出胚，只是2 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比不同和適用基因型不同。這與前人研究結(jié)果類似，如黃亞杰等[13]研究表明，MS 培養(yǎng)基加入0.005 mg/L 2，4-D 和0.05 mg/L KT 出 胚 率 最 高 達(dá)3.3%；陳曉等[14]研究表明，0.1 mg/L 2，4-D 和0.1 mg/L KT 組合誘導(dǎo)辣椒花藥出胚率最高為9.76%；而劉獨(dú)臣[32]研究表明，0.25 mg/L 2，4-D 和0.5 mg/L KT 組合出胚率最高達(dá)20%，且高濃度2，4-D 和KT 組合不僅可促進(jìn)出胚率較高的基因型較快出胚，同時(shí)刺激低濃度2，4-D 和KT 組合時(shí)不出胚的基因型出胚，但胚不易成苗。而本研究中畸形胚率并未呈現(xiàn)出與2，4-D 和KT 濃度相關(guān)的規(guī)律。另外，前人研究中 許 多 學(xué) 者[9，16-17]采 用0.5 mg/L NAA 和1.0 mg/L KT組合，出胚率最高達(dá)31.76%[9]，而本研究中同時(shí)采用了3 種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（M6：0.200 mg/L 2，4-D、0.2 mg/L NAA 和1.00 mg/L KT），2 個(gè)基因型（艷椒808 和華之秀1 號(hào)）花藥培養(yǎng)效率較高，其中，華之秀1號(hào)出胚率和成苗率分別高達(dá)49.76%和20.15%，這說明2，4-D 和NAA 共同與KT 組合較單獨(dú)NAA與KT 組合也許更有利于辣椒花藥胚誘導(dǎo)，這有待利用相同基因型進(jìn)一步探索比較。

本研究利用DNA 流式細(xì)胞儀鑒定了383 個(gè)再生株系的植株倍性，其中單倍體279株、二倍體87株，在再生植株群體中占比分別為72.85%、22.72%。這與前人研究中的占比非常相似，如付文婷等[26]的研究中，單倍體和二倍體株系在再生株系中占比分別為66.70%和20.00%；而陳斌等[19]研究認(rèn)為，單倍體和二倍體株系分別占70.91%和25.45%。這說明在辣椒花藥培養(yǎng)再生植株群體中，通常單倍體占比約70%，二倍體占比20%～25%。本研究還發(fā)現(xiàn)，同一花藥誘導(dǎo)出的再生植株倍性通常一致。

綜上所述，本研究表明，在辣椒花藥培養(yǎng)中，不同基因型所需蔗糖和麥芽糖比例略有不同，20 g/L麥芽糖和10 g/L蔗糖合并作碳源適合較廣泛的辣椒基因型花藥培養(yǎng)；活性炭顯著促進(jìn)了辣椒胚狀體的形成，2 g/L 活性炭最適宜辣椒花藥培養(yǎng)；AgNO3有助于辣椒胚狀體的形成，加入6 mg/L AgNO3時(shí)辣椒花藥培養(yǎng)效率最高；辣椒花藥培養(yǎng)中不同基因型最適植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比不同，其中1.000 mg/L 2，4-D+1.50 mg/L KT（M5）和0.001 mg/L 2，4-D+0.05 mg/L KT（M9）2 個(gè)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合適宜較多的辣椒基因型花藥培養(yǎng)，只是適用基因型不同。利用DNA 流式細(xì)胞儀鑒定了383 個(gè)再生株系的植株倍性，發(fā)現(xiàn)279 株單倍體、87 株二倍體、2 株三倍體、2株四倍體、1 株混倍體（單倍體與二倍體）和12株非整倍體，其中單倍體和二倍體在再生植株群體中占比分別為72.85%、22.72%。