彭明沙,黎 爽,周 翼,黃世貴,舒子龍,彭 洪

(川北醫(yī)學(xué)院附屬南充市中心醫(yī)院,四川 南充637000)

結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一[1]。CRC的標(biāo)準(zhǔn)化治療方案包括手術(shù)切除、化療和放療,雖然CRC患者總發(fā)病率和病死率正在下降,然而其5年生存率依然低于預(yù)期,因?yàn)椴糠只颊叽_診時已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[2]。因此揭示CRC發(fā)生、發(fā)展背后的潛在作用機(jī)制,尋找新的診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物及治療靶點(diǎn),就顯得尤為重要。Kruppel樣因子5(Kruppel-like factor 5,KLF5)是一種含有三個鋅指DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子,廣泛表達(dá)于各種組織,在腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、遷移、分化和血管生成方面發(fā)揮著重要作用[3-4]。既往研究[5-6]發(fā)現(xiàn),KLF5在CRC中高表達(dá),可促進(jìn)CRC細(xì)胞的增殖并與結(jié)直腸癌化療耐藥密切相關(guān)。然而KLF5在CRC中發(fā)揮促癌作用的具體機(jī)制尚不明確。糖基化修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,影響蛋白質(zhì)的功能并調(diào)控細(xì)胞信號傳導(dǎo),從而調(diào)節(jié)各種生物學(xué)效應(yīng)[7]。氧連接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)糖基化修飾具體表現(xiàn)為僅在蛋白質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸殘基上加成一個單糖,這種蛋白加工方式能快速、可逆地添加及移除,并與磷酸化修飾競爭性修飾,迅速調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的活性和穩(wěn)定性。O-GlcNAc糖基化修飾幾乎參與了各種細(xì)胞代謝途徑和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在腫瘤和糖尿病等多種疾病中起著非常重要的調(diào)節(jié)作用[8-9]。但是O-GlcNAc糖基化修飾與CRC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系卻報(bào)道較少。本研究探討KLF5通過正調(diào)控細(xì)胞周期素D1(Cyclin D1,CCDN1)促進(jìn)CRC細(xì)胞增殖和細(xì)胞進(jìn)入G1期,以及OGT通過O-GlcNAc糖基化修飾穩(wěn)定KLF5并上調(diào)CCND1表達(dá)參與CRC發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制,以期為CRC的治療提供新的作用靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞 FHC(批號:BFN607201253)、SW620(批號:TCHu101)、SW480(批號:TCHu172)和DLD-1(批號:TCHu134)細(xì)胞株購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫。FHC和DLD-1在含有10% FBS的1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。SW620和SW480在Leibovitz’s L-15培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱溫度為37 ℃,并含有5% CO2。

1.2 主要試劑 1640培養(yǎng)基和L-15培養(yǎng)基(批號:61870036、MD06)購自Gibco公司;Lipofectamine 3000(批號:L3000-001)購自Invitrogen公司;CCK8試劑(批號:CK04)購自Dojindo公司;RNAprep試劑盒(批號:DP441)購自Tiangen公司;HiScript Ⅲ RT Super Mix(批號:R333-01)購自Vazyme公司;SYBR Green(批號:Q111-02)購自Vazyme公司;蛋白酶抑制劑 Cocktail(批號:HY-K0010)購自MCE公司;KLF5抗體(批號:ab137676)購自Abcam公司;山羊抗兔IgG(批號:ab150077)購自Abcam公司;O-GlcNAc一抗(批號:MAB16475)購自Abnova公司。

1.3 生物信息學(xué)分析 通過GEPIA2數(shù)據(jù)庫(http://gepia2.cancer-pku.cn/#index)分析CRC組織中KLF5表達(dá),通過UALCAN portal數(shù)據(jù)庫(http://ualcan.path.uab.edu/analysis-prot.html)分析CRC組織中OGT表達(dá),并通過UALCAN分析CRC組織中OGT和KLF5蛋白的表達(dá)水平。使用GEPIA2數(shù)據(jù)庫分析OGT與KLF5以及KLF5與CCND1表達(dá)的相關(guān)性。通過TRRUST數(shù)據(jù)庫(https://www.grnpedia.org/trrust/)分析KLF5可能的靶基因,進(jìn)一步通過JASPAR網(wǎng)站查詢CCND1啟動子區(qū)與轉(zhuǎn)錄因子KLF5可能的結(jié)合位點(diǎn)。通過YinOYang-1.2(https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?YinOYang-1.2)和GlyGen 數(shù)據(jù)庫(https://www.glygen.org/)分析KLF5蛋白上可能的O-GlcNAc糖基化位點(diǎn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染:由Gene Pharma(中國上海)合成并構(gòu)建KLF5 siRNA,CCND1過表達(dá)載體(OE-CCND1)和KLF5過表達(dá)載體(OE-KLF5),用Lipofectamine 3000將其轉(zhuǎn)染到CRC細(xì)胞中。KLF5 siRNA序列為5’-GCAGAGAUGCUCCAGAAUUTT-3’。

1.4.2 CCK-8實(shí)驗(yàn):將處理好的細(xì)胞以3×103個/孔的密度接種于96孔板。在24、48、72 h加入CCK-8溶液(10 μl/孔),孵育2 h后在450 nm處測量每個孔的吸光度。分析KLF5對SW620細(xì)胞增殖的影響時分為陰性對照組、空白對照組(不進(jìn)行處理)和KLF5 siRNA組(轉(zhuǎn)染KLF5 siRNA);分析過表達(dá)CCND1對SW620細(xì)胞增殖的影響時分為陰性對照組、空白對照組(不進(jìn)行處理)、KLF5 siRNA組(轉(zhuǎn)染KLF5 siRNA)和KLF5 siRNA+CCND1過表達(dá)組(同時轉(zhuǎn)染KLF5 siRNA和OE-CCND1)。

1.4.3 實(shí)時熒光定量 PCR (RT-qPCR) 實(shí)驗(yàn):收集處理好的細(xì)胞,使用RNAprep試劑盒提取總RNA。使用HiScript Ⅲ RT Super Mix將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用SYBR Green分析目標(biāo)mRNA的相對表達(dá)水平。各組mRNA的相對表達(dá)水平通過2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算。KLF5正向引物序列為5’-CCTGGTCCAGACAAGATGTGA-3’,反向引物序列為5’-GAACTGGTCTACGACTGAGGC-3’。CCND1正向引物序列為5’-TTCCTGTCCTACTACCGC-3’,反向引物序列為5’-CTCCTCCTCTTCCTCCTC-3’。 分析OGT對SW620細(xì)胞CCND1表達(dá)的影響時分為空白對照組(不進(jìn)行處理)、陰性對照組、OGT抑制組(轉(zhuǎn)染OGT siRNA)和OGT抑制+ KLF5過表達(dá)組(同時轉(zhuǎn)染OGT siRNA和OE-KLF5)。

1.4.4 蛋白免疫印跡(Western blot)實(shí)驗(yàn):收集處理好的細(xì)胞(密度為80%),加入蛋白酶抑制劑Cocktail和RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白。使用BCA蛋白質(zhì)測定試劑盒定量分析蛋白濃度。分離蛋白質(zhì)并轉(zhuǎn)移至PVDF膜。室溫下用KLF5抗體孵育膜1 h,再用山羊抗兔IgG在室溫下孵育2 h。使用ECL化學(xué)發(fā)光劑對膜進(jìn)行可視化,蛋白質(zhì)在凝膠成像儀(Bio-Rad)上進(jìn)行顯影。

1.4.5 免疫熒光實(shí)驗(yàn):處理好的細(xì)胞接種在培養(yǎng)皿上,使用4%多聚甲醛固定20 min后加入含Triton X-100(0.5%)的PBS滲透5 min,再加入含3% BSA的PBS液封閉1 h。將細(xì)胞與O-GlcNAc一抗在4 ℃下孵育過夜。然后加入FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG(2 μg/ml)在37 ℃下與細(xì)胞孵育1 h,然后用DAPI與細(xì)胞室溫孵育5 min。使用FV-10 ASW 1.7 Viewer圖像分析軟件處理圖片,使用共聚焦激光掃描顯微鏡FV-3000分析熒光。

1.4.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期:將處理好的細(xì)胞以1×105個/孔的密度接種在24孔板中。孵育24 h后,移除培養(yǎng)基并用新鮮培養(yǎng)基替換,48 h收獲細(xì)胞并重新懸浮在PBS緩沖液中。用碘化丙啶(PI)對細(xì)胞進(jìn)行染色。分析G0/G1期、S期和G2/M期的細(xì)胞百分比。分析KLF5對SW620細(xì)胞周期的影響時分為陰性對照組、空白對照組(不進(jìn)行處理)和KLF5 siRNA組(轉(zhuǎn)染KLF5 siRNA);分析過表達(dá)CCND1對SW620細(xì)胞周期的影響時分為陰性對照組、空白對照組(不進(jìn)行處理)、KLF5 siRNA組(轉(zhuǎn)染KLF5 siRNA)和KLF5 siRNA+CCND1過表達(dá)組(同時轉(zhuǎn)染KLF5 siRNA和OE-CCND1)。

1.4.7 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn):CRC細(xì)胞在24孔板中培養(yǎng),將熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-CCND1或熒光素酶報(bào)告基因缺失突變載體pGL3-CCND1-DM與pCMV-Myc-KLF5過表達(dá)載體或pCMV-Myc質(zhì)粒及內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染至細(xì)胞,設(shè)定熒光素酶報(bào)告基因載體、pCMV-Myc-KLF5過表達(dá)載體與內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK轉(zhuǎn)染比例為50∶50∶1。孵育48 h后,使用Dual Luciferase Reporter Assay System測量熒光素酶活性。

2 結(jié) 果

2.1 各細(xì)胞中KLF5 mRNA表達(dá)情況 GEPIA2和UALCAN portal數(shù)據(jù)庫顯示,KLF5 mRNA和蛋白在CRC中均為高表達(dá)。RT-qPCR結(jié)果顯示,FHC、SW620、SW480和DLD-1細(xì)胞中KLF5 mRNA相對表達(dá)量依次為0.997±0.055、1.843±0.061、2.070±0.046和1.553±0.112。與正常結(jié)直腸黏膜細(xì)胞株FHC比較,SW620、SW480和DLD-1細(xì)胞株中KLF5 mRNA相對表達(dá)量明顯增高(均P<0.05)。既往研究[5]發(fā)現(xiàn)KLF5在SW620細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá),所以后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇SW620細(xì)胞。

2.2 KLF5對SW620細(xì)胞增殖的影響 見圖1。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與陰性對照組和空白對照組比較,KLF5 siRNA組細(xì)胞增殖活性明顯降低(P<0.05)。

注:與KLF5 siRNA組比較,*P<0.05

2.3 KLF5對SW620細(xì)胞周期的影響 見圖2。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示,與空白對照組和陰性對照組相比,KLF5 siRNA組G1期細(xì)胞比例明顯增高(P<0.05)。

注:與KLF5 siRNA組比較,*P<0.05

2.4 KLF5靶基因篩選及熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果 通過TRRUST數(shù)據(jù)庫分析KLF5可能的靶基因,發(fā)現(xiàn)CCND1是KLF5可能的靶基因,并且KLF5可正調(diào)控CCND1表達(dá)。進(jìn)一步通過JASPAR網(wǎng)站查詢CCND1啟動子區(qū)與轉(zhuǎn)錄因子KLF5可能的結(jié)合位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)兩者有多個結(jié)合位點(diǎn)。因?yàn)樵u分越高,兩者結(jié)合的可能性越大,所以后續(xù)實(shí)驗(yàn)我們選擇評分最高的結(jié)合位點(diǎn)“CCCCCGCCCC”進(jìn)行研究。為進(jìn)一步驗(yàn)證KLF5對CCND1基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用及作用位點(diǎn),本研究分別合成了熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-CCND1與熒光素酶報(bào)告基因缺失突變載體pGL3-CCND1-DM。將pGL3-CCND1或pGL3-CCND1-DM與pCMV-Myc-KLF5過表達(dá)載體及內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染至SW620細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48 h后測定熒光素酶活性。結(jié)果顯示,與共轉(zhuǎn)染pCMV-Myc空載體對照組比較,過表達(dá)KLF5可以上調(diào)CCND1熒光素酶報(bào)告基因活性(1.001±0.05與1.856±0.092,t=-12.455,P=0.000)。將KLF5結(jié)合位點(diǎn)“CCCCCGCCCC”缺失后,CCND1熒光素酶報(bào)告基因活性降低(1.856±0.092與1.340±0.086,t=7.118,P=0.002),說明KLF5能夠通過結(jié)合“CCCCCGCCCC”促進(jìn)CCND1表達(dá)。

2.5 KLF5對SW620細(xì)胞CCND1表達(dá)的影響 通過RT-qPCR分析KLF5對CCND1表達(dá)的調(diào)控作用,結(jié)果表明與空白對照組(1.001±0.080)和陰性對照組(1.040±0.098)比較,KLF5 siRNA組CCND1表達(dá)水平(0.615±0.023)明顯降低(t=7.939、7.275,P=0.001、0.002),證實(shí)KLF5可正調(diào)控CCND1表達(dá)。

2.6 過表達(dá)CCND1對SW620細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響 見圖3。與KLF5 siRNA組比較,KLF5 siRNA+CCND1過表達(dá)組細(xì)胞增殖水平增高,細(xì)胞G1期比例降低(均P<0.05)。

注:與KLF5 siRNA組比較,*P<0.05

2.7 OGT對SW620細(xì)胞O-GlcNAc和KLF5蛋白表達(dá)的影響 見圖4、5。YinOYang-1.2和GlyGen數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果表明KLF5蛋白Thr159位點(diǎn)進(jìn)行O-GlcNAc糖基化修飾可能性最大。UALCAN數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果表明OGT mRNA和蛋白在CRC組織中的表達(dá)水平較癌旁正常組織明顯增高(均P<0.05)。GEPIA2數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果提示OGT和KLF5表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.15,P=0.0051)。為進(jìn)一步觀察OGT對SW620細(xì)胞O-GlcNAc和KLF5蛋白表達(dá)的影響,設(shè)立空白對照組、陰性對照組和OGT抑制(添加20 μmol/L OSMI-1)組,處理48 h后Western blot檢測KLF5蛋白表達(dá),免疫熒光化學(xué)觀察O-GlcNAc糖基化蛋白表達(dá),結(jié)果表明OGT抑制組O-GlcNAc糖基化蛋白水平和KLF5蛋白水平均明顯降低(均P<0.05)。

圖4 OGT對SW620細(xì)胞KLF5蛋白表達(dá)的影響

圖5 OGT對O-GlcNAc糖基化蛋白水平的影響(免疫熒光染色,×200)

2.8 O-GlcNAc糖基化修飾對KLF5蛋白穩(wěn)定性的影響 見圖6。蛋白質(zhì)半衰期指蛋白降解為原有一半所需的時間,是衡量蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的關(guān)鍵參數(shù),蛋白質(zhì)半衰期越短蛋白質(zhì)穩(wěn)定性越低。主要采用可有效抑制蛋白質(zhì)合成的放線菌酮(CHX)處理細(xì)胞并每隔一段時間檢測蛋白含量以得到半衰期。本研究分DMSO組和OSMI-1組,分別用DMSO和OSMI-1處理SW620細(xì)胞,OSMI-1處理48 h后用50 μm的放線菌酮處理1、2、4、6、8 h并檢測KLF5蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明OSMI-1處理后,KLF5在CHX處理4 h后蛋白達(dá)到半衰期,而OSMI-1未處理的SW620細(xì)胞在放線菌酮處理8 h后KLF5蛋白才基本達(dá)到半衰期。

圖6 O-GlcNAc糖基化修飾對KLF5蛋白穩(wěn)定性的影響

2.9 OGT對SW620細(xì)胞CCND1表達(dá)的影響 與空白對照組(1.003±0.043)和陰性對照組(1.051±0.109)比較,OGT抑制組中CCND1表達(dá)(0.593±0.024)明顯降低(t=7.094、14.476,P=0.002、0.000),但是與OGT抑制組比較,OGT抑制+ KLF5過表達(dá)組CCND1表達(dá)(0.737±0.051)則增高(t=4.399,P=0.012)。

3 討 論

CRC是全球常見的惡性腫瘤之一。研究[10]表明,細(xì)胞周期失調(diào)在CRC的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。然而CRC進(jìn)展過程中的具體分子作用機(jī)制和關(guān)鍵通路之間的調(diào)控關(guān)系尚不明確,因此對于促進(jìn)CRC增殖和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

KLF5是一種干細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子,在腫瘤細(xì)胞增殖、存活、凋亡和化療藥物敏感性方面發(fā)揮著重要作用[11]。通過生物信息學(xué)分析我們發(fā)現(xiàn)KLF5 mRNA和蛋白在CRC中均為高表達(dá),同時KLF5在CRC細(xì)胞株中的表達(dá)水平也明顯增高,并且KLF5可促進(jìn)CRC SW620細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化,證實(shí)KLF5在CRC中扮演著癌基因的角色。通過TRRUST數(shù)據(jù)庫我們篩選了KLF5可能的靶基因,發(fā)現(xiàn)KLF5可正調(diào)控CCND1的表達(dá),通過JASPAR網(wǎng)站發(fā)現(xiàn)CCND1啟動子區(qū)與轉(zhuǎn)錄因子KLF5有多個結(jié)合位點(diǎn)。CCND1屬于高度保守的細(xì)胞周期家族,在多種惡性腫瘤中高表達(dá),包括CRC[12-13]。CCND1可結(jié)合并激活 G1期特有的周期蛋白依賴性激酶CDK4,從而推動細(xì)胞周期由G1期進(jìn)入S期并促進(jìn)細(xì)胞增殖[14]。熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,KLF5可與CCND1靶向結(jié)合,并且抑制KLF5的表達(dá)后可明顯下調(diào)CCND1的表達(dá)水平,表明KLF5與CCND1屬于正調(diào)控關(guān)系。進(jìn)一步的拯救實(shí)驗(yàn)表明,與空白對照組和陰性對照組比較,KLF5 siRNA組SW620細(xì)胞增殖活性降低,G1期比例明顯增高,但是和KLF5 siRNA組相比KLF5 siRNA+CCND1過表達(dá)組SW620細(xì)胞增殖活性和G1期比例有所降低,說明過表達(dá)CCND1可逆轉(zhuǎn)沉默KLF5對CRC細(xì)胞增殖活性的抑制和細(xì)胞周期G1期的阻滯作用,證實(shí)KLF5通過上調(diào)CCND1增強(qiáng)細(xì)胞增殖活性及促進(jìn)細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化。

為探尋調(diào)控KLF5蛋白表達(dá)的上游機(jī)制,我們通過YinOYang-1.2和GlyGen數(shù)據(jù)庫對KLF5蛋白上可能的O-GlcNAc糖基化位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測,發(fā)現(xiàn)KLF5蛋白Thr159位點(diǎn)進(jìn)行O-GlcNAc糖基化修飾可能性最大。O-GlcNAc糖基化修飾異常是腫瘤細(xì)胞新的重要特征之一,O-GlcNAc糖基化修飾作為一種營養(yǎng)感受器,能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞代謝進(jìn)行調(diào)控并影響腫瘤細(xì)胞的增殖[15-16]。O-GlcNAc糖基化修飾由O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶(OGT)負(fù)責(zé)催化,O-GlcNAc水解酶負(fù)責(zé)水解[17]。OGT通過O-GlcNAc糖基化修飾相關(guān)蛋白質(zhì)從而參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、細(xì)胞分化及蛋白質(zhì)的翻譯和降解等[18]。既往研究[19]發(fā)現(xiàn),OGT在多種惡性腫瘤中高表達(dá)并導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞相關(guān)蛋白O-GlcNAc糖基化水平明顯增高。并且O-GlcNAc糖基化與磷酸化及泛素化存在競爭和依賴共存的關(guān)系,因此O-GlcNAc糖基化與泛素化的競爭關(guān)系使得O-GlcNAc糖基化修飾可增強(qiáng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性[20-21]。通過生物信息學(xué)分析我們發(fā)現(xiàn)CRC組織中OGT mRNA和蛋白的表達(dá)水平均明顯增高,并且OGT和KLF5的表達(dá)呈正相關(guān)。不僅如此,抑制OGT表達(dá)后O-GlcNAc糖基化蛋白水平和KLF5蛋白水平均明顯降低,因此推斷O-GlcNAc糖基化可能影響KLF5蛋白的穩(wěn)定性。本研究進(jìn)一步檢測了KLF5蛋白的半衰期,結(jié)果發(fā)現(xiàn)抑制OGT表達(dá)后KLF5蛋白在4 h時達(dá)到半衰期,而未抑制OGT表達(dá)的SW620細(xì)胞KLF5蛋白在8 h達(dá)到半衰期,說明抑制OGT表達(dá)使得O-GlcNAc糖基化水平降低,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)KLF5蛋白的穩(wěn)定性降低,KLF5蛋白的表達(dá)水平也明顯降低。最后,拯救實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明OGT抑制組中CCND1表達(dá)水平較空白對照組和陰性對照組明顯降低,但是與OGT抑制組相比,OGT抑制組+KLF5過表達(dá)組中CCND1表達(dá)水平則有所增高,說明過表達(dá)KLF5可逆轉(zhuǎn)抑制OGT對CCND1表達(dá)的下調(diào)作用,證實(shí)OGT通過O-GlcNAc糖基化修飾上調(diào)KLF5表達(dá)并促進(jìn)CCND1表達(dá)。

綜上所述,KLF5可正調(diào)控CCND1轉(zhuǎn)錄,CCND1過表達(dá)可促進(jìn)CRC細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化,而OGT通過O-GlcNAc糖基化修飾上調(diào)KLF5表達(dá)并最終增強(qiáng)CCND1表達(dá)水平,從而參與CRC發(fā)生、發(fā)展。本研究為CRC的發(fā)病提供了新的見解,并為CRC的防治提供了新的作用靶點(diǎn),但是還需要更深入的體內(nèi)和體外研究對本結(jié)論進(jìn)行驗(yàn)證。