劉禹含 盧 瑤 孫陳磊 朱小米 馬衛(wèi)興*

(1. 江蘇海洋大學(xué) 藥學(xué)院,江蘇 連云港 222005; 2. 江蘇海洋大學(xué) 生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)學(xué)院,江蘇 連云港 222005)

安乃近是一種解熱退燒藥,其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示。目前安乃近制劑只有片劑1種,其常用測(cè)定方法是直接碘量法[1],需要使用淀粉指示劑,而淀粉指示劑夏天特別容易變質(zhì),而且碘標(biāo)準(zhǔn)液易揮發(fā),每次使用前需要標(biāo)定。其他測(cè)定方法有碘酸鉀永停滴定法[2]、電化學(xué)測(cè)定法[3]、共振瑞利散射光譜[4]、吸收光譜法[5]、近紅外光譜法[6]、反熒光猝滅法[7]和高效液相色譜法[8]。試鈦靈是一種配位型顯色試劑,也叫鈦鐵試劑,其化學(xué)名稱是鄰苯二酚-3,5-二磺酸鈉,它不能與亞鐵離子發(fā)生配位顯色反應(yīng),但能與三價(jià)鐵離子發(fā)生配位顯色反應(yīng)形成綠色配合物,可用于鐵離子的分光光度測(cè)定[9],也可用于硫普羅寧[10]和抗壞血酸[11]的測(cè)定,但未見(jiàn)用于安乃近的測(cè)定。眾所周知,三價(jià)鐵離子能將碘離子氧化為三碘負(fù)離子,而三碘負(fù)離子能氧化安乃近[1],顯然三價(jià)鐵離子能氧化安乃近,因此利用三價(jià)鐵離子能氧化安乃近產(chǎn)生二價(jià)鐵離子,剩余三價(jià)鐵離子與試鈦靈形成綠色配合物的原理,本研究提出試鈦靈-鐵(Ⅲ)配合物褪色分光光度法測(cè)定安乃近含量的新方法,成功地測(cè)定了安乃近片劑的含量,與直接碘量法所測(cè)結(jié)果一致。本方法與直接碘量法相比,所用試劑穩(wěn)定,且操作方便、快速。

圖1 安乃近分子結(jié)構(gòu)Fig. 1 Molecular structure of analgin

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

分光光度計(jì),722型,上海第三分析儀器廠。

準(zhǔn)確稱取安乃近標(biāo)準(zhǔn)品0.500 0 g,用體積比為1∶1的乙醇和0.01 mol·L-1鹽酸溶液溶解并定容至1 L,搖勻可得濃度為500 μg·mL-1的安乃近標(biāo)準(zhǔn)溶液。用鐵銨礬按照常法配制濃度為232 μg·mL-1的Fe3+溶液;0.5%(質(zhì)量體積比)的試鈦靈溶液;由0.1 mol·L-1鄰苯二甲酸氫鉀溶液與0.1 mol·L-1鹽酸調(diào)配而成的pH為2.60的Clark-lubs緩沖溶液。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

取50 mL容量瓶,加入適量安乃近標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品溶液,依次準(zhǔn)確加入Fe3+溶液、試鈦靈溶液和pH 2.6的Clark-lubs緩沖溶液,隨后用水定容至刻度線并搖勻。5 min后,以空白液作參比,用1 cm比色皿在660 nm處測(cè)試測(cè)定液吸光度下降的絕對(duì)值A(chǔ)。

1.3 實(shí)驗(yàn)原理

利用三價(jià)鐵離子與安乃近在水溶液中發(fā)生氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生二價(jià)鐵離子、硫酸氫鈉、甲醛、4-甲氨基安替比林和氫離子,反應(yīng)如圖2所示。

圖2 三價(jià)鐵離子與安乃近的氧化還原反應(yīng)Fig. 2 Oxidation-reduction reaction of analgin with Fe3+

氧化還原反應(yīng)后剩余的三價(jià)鐵離子與試鈦靈發(fā)生配位顯色反應(yīng)形成綠色配合物,反應(yīng)如圖3所示。

圖3 三價(jià)鐵離子與試鈦靈的配位顯色反應(yīng)Fig. 3 Chromogenic reaction of Fe3+ with tiron

依據(jù)上述前后氧化還原反應(yīng)和配位顯色反應(yīng),設(shè)計(jì)可見(jiàn)分光光度法測(cè)定安乃近含量的新方法。

2 結(jié)果與討論

2.1 測(cè)試波長(zhǎng)的選擇

按照1.2配制測(cè)定液和空白液。以水作參照比,均在550～780 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定兩溶液的吸收光譜,如圖4所示。最大吸收波長(zhǎng)均在660 nm處,故選擇660 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。由于安乃近的加入使測(cè)定液的吸光度(曲線2)小于空白液(曲線1),顯然是褪色反應(yīng),因褪色造成的吸光度下降絕對(duì)值如曲線3所示。

1:空白液 2:原測(cè)定液 3:加入安乃近后的測(cè)定液圖4 樣品的吸收光譜Fig. 4 Absorption spectra of samples

2.2 緩沖溶液用量

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Clark-lubs緩沖溶液的pH在1.80～3.50時(shí),體系的靈敏度高(圖5),當(dāng)選用pH 2.60的Clark-lubs緩沖溶液用量大于2.00 mL時(shí)可保證體系pH值位于此區(qū)間,此時(shí)體系吸光度最大且平坦恒定,故選擇5.00 mL pH 2.60的Clark-lubs緩沖溶液用于控制體系的pH值。

圖5 pH對(duì)樣品吸光度的影響Fig. 5 Effect of pH on absorption of samples

2.3 Fe3+溶液用量影響

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),對(duì)于500 μg·mL-1的安乃近來(lái)說(shuō),Fe3+溶液用量大于2.00 mL時(shí)體系吸光度最大且穩(wěn)定(圖6)。當(dāng)Fe3+用量小于2 mL時(shí),Fe3+不足以完全氧化安乃近,生成的綠色配合物太少導(dǎo)致不能完全顯色。因此選用2.50 mL 232 μg·mL-1的Fe3+溶液作為安乃近的氧化劑。

圖6 Fe3+用量對(duì)樣品吸光度的影響Fig. 6 Effect of volume of Fe3+ on absorption of samples

圖7 試鈦靈用量的影響Fig. 7 Effect of volume of tiron

2.4 試鈦靈用量影響

在50 mL體積中,對(duì)于500 μg·mL-1的安乃近和2.50 mL Fe3+溶液,0.5%試鈦靈用量在3.00～8.00 mL時(shí),體系吸光度最大且穩(wěn)定,故選用5.00 mL 0.5%試鈦靈溶液作為Fe3+的顯色劑。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),當(dāng)溶液配好10 min后,體系吸光度最大且在90 min內(nèi)保持不變。故溶液配好10 min之后即可測(cè)定。

2.6 工作曲線

于一組50 mL容量瓶中分別加入不同體積的安乃近標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照1.2操作測(cè)定660 nm處的吸光度,繪制工作曲線(圖8),其工作曲線的回歸方程為A=0.016 1C+0.010 3,相關(guān)系數(shù)R2為0.997 7,安乃近濃度C在2.50～40.00 mg·L-1內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖8 樣品的工作曲線Fig. 8 Working curve of samples

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

按照安乃近處方配制模擬片粉,準(zhǔn)確稱取安乃近片粉適量(相當(dāng)于500 mg安乃近),加入1 L容量瓶中,用蒸餾水定容、搖勻、過(guò)濾,棄初濾液,準(zhǔn)確吸取續(xù)濾液3.00 mL于50 mL容量瓶中,按照1.2測(cè)定操作吸光度(A)并進(jìn)行計(jì)算,11次平行測(cè)定的平均回收率98.95%,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值為2.05%,符合藥物分析要求。

2.8 選擇性實(shí)驗(yàn)

為了確定方法的選擇性,考察了可能存在的干擾組分對(duì)本體系的影響,對(duì)于20 mg·L-1安乃近來(lái)說(shuō),當(dāng)測(cè)定的相對(duì)誤差小于±5%時(shí),共存物質(zhì)的允許量(mg)分別為:硬脂酸鎂(100)、Cl-和Br-(15)、Na+和K+(12)、果糖、乳糖、蔗糖和葡萄糖(10)、Ca2+和Mg2+(6)、Zn2+(5.4)、淀粉和糊精(5.2)、氯苯那敏(2.7)、甲硝唑和替硝唑(2.1)?？箟难岷偷怆x子有強(qiáng)烈干擾,但安乃近片劑中不存在這兩種物質(zhì)。因此本方法具有較好的選擇性。

2.9 片劑測(cè)定

取安乃近片劑10片,準(zhǔn)確稱重,研細(xì),準(zhǔn)確稱取片粉適量(相當(dāng)于500 mg安乃近),加入1 L容量瓶中,用蒸餾水定容、搖勻、過(guò)濾,棄初濾液,準(zhǔn)確吸取續(xù)濾液3.00 mL于50 mL容量瓶中,按照1.2操作測(cè)定吸光度A,根據(jù)工作曲線的回歸方程計(jì)算片劑中安乃近含量,結(jié)果如表1所示,與藥典推薦的碘量法[1]所得結(jié)果一致。

表1 樣品分析結(jié)果(n=11)Tab. 1 Sample analysis results (n=11)

3 結(jié)論

基于安乃近可還原三價(jià)鐵離子,試液中剩余三價(jià)鐵離子與試鈦靈形成綠色配合物的原理,通過(guò)條件優(yōu)化提出了試鈦靈-鐵(Ⅲ)配合物褪色分光光度測(cè)定安乃近含量的新方法,成功地用于安乃近片劑含量測(cè)定。此方法特別適合于批量安乃近片劑樣品的快速檢測(cè)。