王強(qiáng)

長(zhǎng)春市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林長(zhǎng)春 130000

結(jié)核病是危害公共衛(wèi)生健康安全的疾病，及早診斷對(duì)于疾病傳播的預(yù)防具有積極作用，臨床診斷結(jié)核病的方式，主要以實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)為主，該種檢查方式需較長(zhǎng)時(shí)間才能得出結(jié)果，具有檢驗(yàn)效率低、不能夠?qū)嵤┐髷?shù)據(jù)篩查、診斷效果欠佳的特點(diǎn)[1]。隨著各種結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群檢測(cè)方法的不斷涌現(xiàn)，包括涂片法、固體培養(yǎng)法、恒溫?cái)U(kuò)增法等，選擇適合不同實(shí)驗(yàn)室條件、準(zhǔn)確度高、性價(jià)比高的一種檢測(cè)方式十分必要，實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行診斷技術(shù)選擇時(shí)，需要綜合考慮實(shí)驗(yàn)室條件、時(shí)效性、試劑成本、操作依從性等，選擇最適合的結(jié)核病診斷技術(shù)[2]。熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction,PCR）法可以對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群實(shí)際狀態(tài)進(jìn)行有效鑒別，具有較高的靈敏度和特異度，對(duì)于臨床診斷和治療，具有更科學(xué)的指導(dǎo)意義[3]。基于此，本文選取2022年3月—2023年5月在長(zhǎng)春市傳染病醫(yī)院治療的118例疑似結(jié)核患者進(jìn)行研究，探討熒光定PCR方法對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的檢驗(yàn)效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在本院診治的118例疑似結(jié)核患者作為研究對(duì)象，男60例，女58例；年齡20～68歲，平均（41.17±7.26）歲。共計(jì)156份臨床樣本。本研究的開(kāi)展已經(jīng)獲取醫(yī)學(xué)倫理相關(guān)組織的審批，患者已了解本研究實(shí)施過(guò)程和目的，簽訂了同意協(xié)議。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲患者；②資料沒(méi)有缺失情況患者；③配合良好，能夠完成本研究患者；④無(wú)精神疾病史患者；⑤無(wú)智力障礙，可正常溝通患者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①未留取標(biāo)本患者；②痰標(biāo)本劑量不足2 mL患者；③標(biāo)本屬于唾液痰患者；④近1個(gè)月內(nèi)進(jìn)行抗結(jié)核治療超過(guò)2周患者；⑤中途退出研究患者。

1.3 方法

實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)：將樣本進(jìn)行前處理，之后放于改良羅氏培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

熒光定量PCR檢測(cè)法：將樣本進(jìn)行離心處理，取沉淀后滅活，再于室溫下進(jìn)行離心處理，之后加入結(jié)核桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑增強(qiáng)液于樣本，經(jīng)提取儀提取核酸。加入TB-DNA提取液于待測(cè)樣本和陰陽(yáng)對(duì)照品，分裝于8聯(lián)管孔上SLAN-96SPCR擴(kuò)增。儀器PCR反應(yīng)程序：先通過(guò)50℃UNG處理，維持2 min，再利用95℃UNG酶失活，預(yù)變性10 min，再Touchdown循環(huán)程序10個(gè)，PCR循環(huán)程序45個(gè)，再按照標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)CT值進(jìn)行計(jì)算。所用儀器分別為SLAN-96S核酸擴(kuò)增儀，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)儀BD BACTECMGMT960，培養(yǎng)管批號(hào)為國(guó)械準(zhǔn)進(jìn)20142405711，結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢驗(yàn)劑批號(hào)為20112601。

1.4 觀察指標(biāo)

對(duì)患者檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行觀察分析，以實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)為金標(biāo)準(zhǔn)，分析熒光定量PCR法的檢驗(yàn)準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度。準(zhǔn)確度=（真陰例數(shù)+真陽(yáng)例數(shù)）/總例數(shù)×100%；特異度=真陰例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽(yáng)例數(shù)）×100%；靈敏度=真陽(yáng)例數(shù)/（真陽(yáng)例數(shù)+假陰例數(shù)）×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（n）和率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在118例疑似結(jié)核患者中，共計(jì)156份臨床樣本。156份臨床樣本經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)檢查確診患者104份，占比66.67%，熒光定量PCR法陽(yáng)性檢出率為64.10%（100份），和實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)檢查結(jié)果相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；臨床樣本熒光定量PCR法檢測(cè)的準(zhǔn)確度、特異度、靈敏度分別為97.44%、100.00%、96.15%，見(jiàn)表1、表2。

表1 兩種方法陽(yáng)性檢出率比較

表2 熒光定量PCR法診斷結(jié)果（n）

3 討論

結(jié)核病為傳染性疾病，全球人口流動(dòng)性提升，導(dǎo)致結(jié)核病發(fā)病率隨之提高，我國(guó)是結(jié)核病高發(fā)國(guó)家，活動(dòng)性肺結(jié)核患者人數(shù)占據(jù)全球第二，且傳染性肺結(jié)核患者人數(shù)較多，防治結(jié)核病為我國(guó)臨床研究的重點(diǎn)[4-5]。自抗結(jié)核病治療方案使用之后，耐藥、耐多藥結(jié)核病發(fā)生率逐漸提高，且存在雙重感染（人類免疫缺陷病毒以及結(jié)核分歧桿菌）風(fēng)險(xiǎn)，加之全球人口流動(dòng)性的增強(qiáng)，導(dǎo)致結(jié)核病發(fā)生率逐漸提升，在歐美國(guó)家也發(fā)生了反彈情況。世界衛(wèi)生報(bào)告組織調(diào)查表明，世界上感染結(jié)核桿菌的人數(shù)＞20億，其中活動(dòng)性肺結(jié)核患者人數(shù)多于2 000萬(wàn)，每年新增該疾病患者的人數(shù)多于300萬(wàn)，而我國(guó)屬于結(jié)核病高發(fā)國(guó)家，其中活動(dòng)性肺結(jié)核患者人數(shù)居于世界第二，據(jù)我國(guó)流行病調(diào)查結(jié)果表明，我國(guó)活動(dòng)性肺結(jié)核患者數(shù)量多于600萬(wàn)，傳染性肺結(jié)核患者數(shù)量在200萬(wàn)之上，因此防治結(jié)核病成為醫(yī)學(xué)研究重要課題[6-7]。

結(jié)核病檢測(cè)方法主要包括直接涂片鏡檢、病原學(xué)培養(yǎng)，其中，涂片鏡檢以萋-納氏抗酸染色法為主，該種檢測(cè)方式簡(jiǎn)單易操作，無(wú)需特殊設(shè)備，是該疾病病原檢查最基礎(chǔ)的方法，但此種方法具有較低的敏感性；而病原學(xué)診斷中，細(xì)菌培養(yǎng)法為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但該種檢驗(yàn)方式檢驗(yàn)用時(shí)久，易延誤疾病治療的最佳時(shí)機(jī)，且會(huì)導(dǎo)致疾病傳播，其最大的問(wèn)題即結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)周期長(zhǎng)[8-9]。除上述兩種檢測(cè)方法外，單克隆抗體也能夠檢出結(jié)核分歧桿菌特異抗原，進(jìn)而達(dá)到診斷目的，但該種檢測(cè)方式對(duì)于痰液、胸腹水標(biāo)本的檢測(cè)效果并不理想，假陽(yáng)性、假陰性率較高，診斷結(jié)果并不可靠。為提升結(jié)核病診斷結(jié)果，需采取更加有效的檢驗(yàn)方式。

熒光定量PCR法是一種常見(jiàn)的檢驗(yàn)方式，檢驗(yàn)?zāi)Ｊ綖闆Q定定量、相對(duì)定量，前者通過(guò)已知標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本量，后者通過(guò)靶序列對(duì)于另一組參照序列變化信息計(jì)量。熒光定量PCR方法目前已被臨床醫(yī)學(xué)廣泛使用，對(duì)于（人類免疫缺陷病毒、人類皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒以及結(jié)核桿菌等病原體檢測(cè)均具有良好檢驗(yàn)效果[10]。在多種病原體的診斷中，均能夠使用PCR技術(shù)，如結(jié)核桿菌、布魯氏菌，且相關(guān)研究證實(shí)，使用PCR方法診斷結(jié)核性腦炎，可獲取結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)法和直接涂片法所無(wú)法比擬的敏感度[11-12]。熒光定量PCR技術(shù)指的是PCR反應(yīng)體系內(nèi)加入熒光基團(tuán)，通過(guò)熒光信號(hào)累積，對(duì)整個(gè)PCR進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，最終利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板，該項(xiàng)技術(shù)將定時(shí)定量PCR儀、實(shí)時(shí)熒光定量試劑、通用電腦以及自動(dòng)分析軟件結(jié)合起來(lái)，形成了PCR-DNA、RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)[13]。傳統(tǒng)PCR技術(shù)不能準(zhǔn)確定量，操作當(dāng)中容易受到污染，存在較高的假陽(yáng)性率，應(yīng)用受限，因此準(zhǔn)確定量PCR產(chǎn)物是PCR技術(shù)的重要發(fā)展方向。熒光定量PCR技術(shù)采用全封閉反應(yīng)，可以避免污染問(wèn)題產(chǎn)生，且該種方法特異度和靈敏度更高，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)控能夠更加精準(zhǔn)地定量檢測(cè)，從而為疾病監(jiān)測(cè)提供參考[14]。王純?nèi)A等[15]研究中，熒光定量PCR檢測(cè)肺內(nèi)樣本檢測(cè)中靈敏度與特異度分別為97.8%、97.5%，其數(shù)據(jù)均具有較高的檢測(cè)準(zhǔn)確性；本研究中，臨床樣本熒光定量PCR法檢測(cè)的靈敏度、特異度分別為96.15%、100.00%；本研究臨床樣本熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)果與其研究具有一致性，說(shuō)明其檢測(cè)方式具有較高的準(zhǔn)確度，由此可見(jiàn)熒光定量PCR方法存在良好的檢測(cè)效果，可以提升臨床診斷準(zhǔn)確率，利于患者疾病的有效治療，對(duì)患者治療和預(yù)后均具有積極意義。

綜上所述，熒光定量PCR方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群，可獲取較高的靈敏度和特異度，其檢驗(yàn)準(zhǔn)確度與實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)結(jié)果相當(dāng)，利于患者盡早治療，改善預(yù)后。