楊 帆，霍志偉，朱 雯，趙修華

（東北林業(yè)大學(xué)化學(xué)化工與資源利用學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150040）

二氫槲皮素（taxifolin）又名花旗松素，由日本科學(xué)家福井于針葉植物中發(fā)現(xiàn)并提取[1]，作為一種存在于植物界中重要的二氫黃酮醇類化合物，其含有豐富的酚羥基，能夠調(diào)節(jié)人體內(nèi)多種酶的活性，進(jìn)而發(fā)揮不同的生理作用，如抗氧化[2-5]、抗腫瘤[6-8]、抗病毒[9-11]、抗心血管系統(tǒng)疾病、改善毛細(xì)血管微循環(huán)、抗血小板凝聚等作用[12-15]，而且對嬰幼兒無毒無害，對胎兒也不會產(chǎn)生發(fā)育畸形、機體過敏和突變等副作用[16-17]。2021 年4 月15 日，我國正式批準(zhǔn)二氫槲皮素為新資源食品，可以在飲料、酸奶、風(fēng)味發(fā)酵乳、可可制品、巧克力和巧克力制品中直接添加，利于二氫槲皮素及相關(guān)產(chǎn)品在我國食品工業(yè)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用[18]，根據(jù)QY Research 數(shù)據(jù)，據(jù)保守估計二氫槲皮素全球每年需求量在100 噸以上，相關(guān)產(chǎn)品的市場份額達(dá)到百億[19]。

目前，二氫槲皮素的制備工藝主要分為二大類：合成法、提取法，應(yīng)用最多的是提取法，根據(jù)原料和提取方法分類主要有：利用水和乙醇從落葉松中加熱回流提取[20-23]、利用乙醇-水溶液從落葉松中微波提取[24-25]、利用有機溶劑從落葉松中萃取提取[26]、利用丙酮或乙醇從刺玫薔薇中加熱回流提取[27-28]及利用乙醇從黃芪葉中加熱回流提取[29]等。但是與落葉松相比，刺玫薔薇和黃芪葉的資源產(chǎn)量較低，故落葉松是當(dāng)下二氫槲皮素的主要工業(yè)來源。利用單純的水和有機溶劑回流或萃取雖然操作簡便，但生產(chǎn)流程長、效率低下，并且生產(chǎn)中會消耗大量有機溶劑、成本高，容易污染環(huán)境。

與傳統(tǒng)提取方法相比，超高壓提取法具有效率高、耗能低、操作簡便、綠色環(huán)保等優(yōu)點，是當(dāng)前進(jìn)步與發(fā)展都十分快速的一種新式提取方法，這種技術(shù)通過升高壓力破壞細(xì)胞壁，增強細(xì)胞基質(zhì)內(nèi)的活性成分與提取溶劑的接觸，進(jìn)而促進(jìn)活性成分在溶劑中的溶解。在李彥煒[30]的研究中，通過超高壓技術(shù)，在最優(yōu)條件下，實現(xiàn)了對黃精多糖74.14%的提取率。同時，在Su 等[31]的研究中，通過比較超高壓技術(shù)與熱回流等傳統(tǒng)提取方法對黑茶的提取效果，發(fā)現(xiàn)超高壓提取法對黑茶的提取率顯著高于熱回流提取法。膠束提取法通常用于黃酮類等水溶性較差天然產(chǎn)物的分離純化。憑借粒徑小、增溶性、低毒性等優(yōu)點，主要應(yīng)用于醫(yī)藥、環(huán)境等原料的預(yù)處理中。這種方法的機理是：隨著表面活性劑在水中濃度的增加，當(dāng)達(dá)到臨界膠束濃度（CMC），無法繼續(xù)降低溶液的表面張力時，便在水溶液中形成膠束，這種膠束內(nèi)核為疏水環(huán)境，外部為親水基團，可將難溶性的成分包裹在疏水內(nèi)核中，從而對其進(jìn)行增溶，得以提高提取率。此方法對環(huán)境友好、操作簡便、可顯著提高提取率。在Coscueta 等[32]的研究中，通過篩選出具有良好提取性能的Genapol X-080 作為表面活性劑，在一定條件下對大豆異黃酮進(jìn)行提取，提取率得到顯著提高，是相同條件下甲醇的3 倍。

為解決傳統(tǒng)二氫槲皮素生產(chǎn)工藝過程繁瑣、有機溶劑使用量大、生產(chǎn)成本高等問題，本實驗將超高壓提取技術(shù)與膠束提取技術(shù)相結(jié)合，此方法原理為：以水或其他流體作為提取介質(zhì)，通過在短時間內(nèi)對提取原料施加較大的壓強，從而對細(xì)胞壁進(jìn)行破壞，進(jìn)而使所需的活性物質(zhì)從細(xì)胞中得到釋放[33]，再通過溶劑中的膠束對活性物質(zhì)進(jìn)行包裹增溶。與其他技術(shù)相比，此技術(shù)具有耗能低、提取時間短、效率高等優(yōu)點[34]。在張圓圓[35]的研究中，運用超高壓輔助APG1214 膠束提取黃花蒿中的青蒿素，最優(yōu)條件下提取率可達(dá)82.73%～88.08%。當(dāng)前尚未有文獻(xiàn)報道采用超高壓輔助膠束提取技術(shù)對落葉松中二氫槲皮素進(jìn)行提取研究，因此本實驗采用此技術(shù)，以二氫槲皮素溶解度和提取率為指標(biāo)，篩選出最優(yōu)表面活性劑，構(gòu)建水基膠束，選用超高壓輔助提取手段，考察料液比、膠束溶液濃度、提取次數(shù)、提取壓力等因素對二氫槲皮素提取率的影響，確定最優(yōu)提取工藝。并與微波提取、超聲提取、回流提取等不同提取工藝進(jìn)行提取率、能耗和CO2排放量對比評價。以期借助本技術(shù)有效降低提取能耗和污染，提高林業(yè)剩余物的再利用，促進(jìn)二氫槲皮素未來的多領(lǐng)域應(yīng)用，滿足國內(nèi)外市場對其的需求。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

落葉松木質(zhì)部 采樣于黑龍江省牡丹江市靈泰藥業(yè)股份有限公司，產(chǎn)地為黑龍江??；二氫槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品（98%）購買于上海麥克林生物科技股份有限公司；甲醇（色譜純）購于湖北弗頓實業(yè)有限公司；真空密封袋（16 絲）購于河北永賀塑料包裝制品有限公司；篩網(wǎng)（120 目）購于紹興市豪泉篩具廠；無水乙醇（分析純）、乙腈（色譜純）購買于湖北弗頓化學(xué)試劑有限公司；茶皂素（40%）、吐溫-60（分析純）、吐溫-80（分析純）、司班-80（藥用級）、月硅酸鈉（70%）、十二烷基硫酸銨（分析純）、PEG-400（化學(xué)純）、APG-1214（50%）、月桂醇醚硫酸鈉（70%）、十二烷基硫代硫酸鈉（98%）、椰油酰胺丙基甜菜堿（36%）、十二烷基二甲基甜菜堿（30%）、無患子皂苷（60%）均購于上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

L1-400/5 型超高壓設(shè)備 中國天津華泰森淼超高壓制備工程技術(shù)有限公司；Waters-2487 型高效液相色儀 美國沃特世公司；98-1-B 加熱套 天津市泰斯特儀器有限公司；DK-150 超聲儀 深圳市德康電器有限公司；M1-F23P 微波爐 廣東格蘭仕電器有限公司；RE-201D 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 河南華特儀器設(shè)備有限公司；ZKJ-8803 型真空封口機 廣東志高空調(diào)有限公司；FTT-2500T 型粉碎機 東莞市房太電器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 落葉松不同部位二氫槲皮素總含量 稱取一定質(zhì)量落葉松樹根、根須、樹干（地上部分1 m 以下）、鋸末等四個部位的鮮原料、粉碎、烘干，稱量烘干后粉末的質(zhì)量變化，計算含水率公式（1）。采取1.2.3 中的提取方法提取樹根、根須、樹干（地上部分1 m 以下）、鋸末等4 個部位干粉末原料的二氫槲皮素含量。分別計算干重總含量公式（2）、濕重總含量公式（3）：

式中，W 為含水率；Gs 為濕木粉重量（g）；Ggo 為干木粉重量（g）。

式中，M1 為干重總含量；Ggo 為干木粉重量（g）；m 為二氫槲皮素提取量（g）。

式中，M2 為濕重總含量；W 為含水率；M1 為干重總含量。

1.2.2 樹干中二氫槲皮素總含量檢測 取適量落葉松樹干木塊于粉碎機中粉碎，過120 目篩得落葉松木粉，烘干。稱取50 g 木粉于燒瓶中，加入500 mL乙醇，加熱回流1 h，過濾后濾渣中再加入500 mL 乙醇，加熱回流，重復(fù)提取四次。每次取1 mL 提取液進(jìn)行HPLC 檢測，計算4 次提取出的二氫槲皮素的總量。

1.2.3 超高壓輔助膠束提取二氫槲皮素 稱取0.5 g落葉松木粉于密封袋中，并加入一定體積（料液比為1:6～1:14（g/mL））的膠束溶液（茶皂素、吐溫-60、司班-80、十二烷基硫酸銨等13 種表面活性劑，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%～10%），混合均勻后放入超高壓提取設(shè)備中。設(shè)定所需參數(shù)（提取次數(shù)為2～6 次；提取壓力為50～250 MPa；保壓時間為5 min）進(jìn)行二氫槲皮素的提取。

1.2.4 膠束的篩選 本研究對落葉松中二氫槲皮素提取工藝中的膠束溶液進(jìn)行篩選，依據(jù)對二氫槲皮素溶解度高、提取率高、綠色價廉的原則，以茶皂素、吐溫-60、司班-80、月硅酸鈉等13 種表面活性劑作為候選。通過向10 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的不同膠束溶液中分別加入過量二氫槲皮素原藥，室溫攪拌24 h，離心取上清，甲醇稀釋10 倍，過濾進(jìn)行HPLC檢測，測定不同膠束溶液對二氫槲皮素的溶解度。

稱取0.5 g 落葉松木粉，采用超高壓輔助膠束法，在料液比為1:10，提取壓力為150 MPa，提取次數(shù)為2 次，不同膠束濃度為8%，保壓時間為5 min條件下進(jìn)行提取，測定不同膠束對落葉松木粉中二氫槲皮素的提取率。

1.2.5 響應(yīng)面優(yōu)化試驗 基于預(yù)實驗結(jié)果，響應(yīng)面試驗的參數(shù)優(yōu)化范圍為：料液比1:6～1:14（g/mL），提取壓力50～250 MPa，提取次數(shù)2～6 次，茶皂素濃度6%～10%，利用Central-Composite Design（CCD）中心組合設(shè)計，對料液比（X1）、提取壓力（X2）、提取次數(shù)（X3）、茶皂素濃度（X4）各因素進(jìn)行試驗設(shè)計，設(shè)定參數(shù)如表1 所示。

表1 因素水平編碼表Table 1 Factor level coding table

1.2.6 二氫槲皮素提取率的測定 HPLC 法測定二氫槲皮素條件：色譜柱為Diamonsil C18反相柱（250 mm×4.6 mm）；流動相為乙腈:水:醋酸=30:70:0.1（%）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為298 nm；柱溫為28 ℃；進(jìn)樣量為10 μL[36]。

HPLC 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：精確稱取5 mg 二氫槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至10 mL，得到500 μg/mL的二氫槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品母液。采用對半稀釋法，配得500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μg/mL的二氫槲皮素標(biāo)準(zhǔn)液，按照上述方法進(jìn)行測定。計算得到其回歸方程為:Y=27324.2521X-23014.7782，R2=0.9999（X 為標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度（mg/mL），Y 為峰面積），在7.8125×10-3～0.5 mg/mL 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。

通過HPLC 檢測二氫槲皮素提取液濃度，代入以下公式（4）計算提取率。二氫槲皮素提取率公式為：

式中，Y 為提取率（%）；c 為二氫槲皮素的濃度（mg/mL）；V 為提取液體積（mL）；M 為原料木粉中二氫槲皮素總重量（mg）。

1.2.7 與其他提取方法的比較 為評價超高壓輔助膠束提取工藝，實驗選用超聲提取法、微波提取法、回流法、超高壓輔助膠束提取法對落葉松中二氫槲皮素進(jìn)行提取，在理想狀態(tài)無能量損耗條件下比較計算提取率與能耗[37-38]，并根據(jù)目前碳排放數(shù)據(jù)，中國每千瓦時用電綜合的CO2排放量為0.785 kg[39-40]，計算CO2排放并比較。

1.2.7.1 回流法 稱取100 g 落葉松木粉于燒瓶中，按照1:11.5（g/mL）的料液比加入乙醇，置于功率為650 W 的加熱套中，加熱回流1 h。提取完畢后取1 mL 提取液，甲醇稀釋 10 倍，過濾進(jìn)行 HPLC 檢測[37]。

1.2.7.2 超聲提取法 稱取100 g 落葉松木粉于燒瓶中，按照1:11.5（g/mL）的料液比加入乙醇，置于功率為360 W 的超聲提取設(shè)備中，超聲提取30 min。提取完畢后取1 mL 提取液，甲醇稀釋10 倍，過濾進(jìn)行HPLC 檢測[37]。

1.2.7.3 微波提取法 稱取100 g 落葉松木粉于燒瓶中，按照1:11.5（g/mL）的料液比加入乙醇，置于功率為480 W 的微波提取裝置中，微波提取30 min。提取完畢后取1 mL 提取液，甲醇稀釋10 倍，過濾進(jìn)行HPLC 檢測[35]。

1.2.7.4 超高壓輔助膠束提取法 稱取100 g 落葉松木粉于密封袋中，按照1:11.5（g/mL）的料液比加入8%的茶皂素溶液，在提取壓力為157 MPa、保壓時間為5 min 條件下置于超高壓提取裝置中提取3 次。提取完畢后取1 mL 提取液，甲醇稀釋10 倍，過濾進(jìn)行HPLC 檢測[35]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

本研究運用Design-Expert 8.0.6 軟件進(jìn)行實驗設(shè)計以及數(shù)據(jù)處理和結(jié)果分析，并按照優(yōu)化得到的最優(yōu)條件，進(jìn)行3 次重復(fù)實驗驗證。本實驗使用Origin 2019 軟件進(jìn)行圖形繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 二氫槲皮素的總含量

2.1.1 落葉松不同部位二氫槲皮素干濕總含量 如表2 所示，不同部位中二氫槲皮素干重總含量排序為：樹干＞鋸末＞樹根＞根須；濕重總含量為：樹干＞鋸末＞樹根＞根須，二者一致；含水率為：根須＞鋸末＞樹根＞樹干。樹干的干濕重總含量均為最高，故后續(xù)實驗以樹干作為提取原料。

表2 落葉松不同部位二氫槲皮素干濕總含量Table 2 Content of taxifolin in different parts of larch

2.1.2 落葉松樹干二氫槲皮素總含量 以烘干后的落葉松樹干為原料，如表3 所示，乙醇回流法重復(fù)四次，每50 g 原料共提取到1.401 g 二氫槲皮素，故二氫槲皮素總含量為2.802%，后續(xù)實驗中落葉松二氫槲皮素的總含量以乙醇回流法測得的2.802%為準(zhǔn)。

表3 樹干中二氫槲皮素總含量Table 3 Total taxifolin content in tree trunk

2.2 表面活性劑篩選結(jié)果

對比不同表面活性劑對二氫槲皮素提取率和溶解度的影響。由圖1 可知，其中提取率表現(xiàn)最優(yōu)的3 種溶劑為茶皂素、十二烷基二甲基甜菜堿、十二烷基硫酸銨，提取率分別為78.21%、65.45%、63.23%，溶解度分別為2.92、2.16、2.04 mg/mL。一般情況下，溶劑是影響提取效果的關(guān)鍵因素，溶劑對提取成分的溶解度越高，提取效果越好[32]。在膠束溶液中二氫槲皮素溶解度越高代表膠束對其增溶效果越好，使得在超高壓提取過程中，能有更多二氫槲皮素被膠束包合溶解到提取液中，增強提取效果，而茶皂素對二氫槲皮素的增溶效果最好、提取率最高，這可能是由于茶皂素為植物來源的三萜類皂角苷，其在水溶液中形成膠束時的疏水核心為萜類，而二氫槲皮素為植物來源的二氫黃酮醇類化合物，可能與膠束的核心具有較好的相容性[41]，且茶皂素天然無毒、價格相對便宜且來源廣，基于上述原因，確定茶皂素為提取膠束。

圖1 不同表面活性劑對二氫槲皮素提取率和溶解度的影響Fig.1 Effects of different surfactants on the extraction rate and solubility of taxifolin

2.3 響應(yīng)面試驗結(jié)果

如表4 所示，利用Central-Composite Design（CCD）中心組合設(shè)計，研究料液比（X1）、提取壓力（X2）、提取次數(shù)（X3）和茶皂素濃度（X4）對二氫槲皮素提取率（Y）影響。

表4 響應(yīng)面設(shè)計及結(jié)果Table 4 Design and results of CCD design

2.3.1 實驗設(shè)計及結(jié)果擬合 利用Design-Expert 8.0.6 軟件，進(jìn)行多元回歸擬合，得到二氫槲皮素提取率（Y）與料液比（X1），提取壓力（X2），提取次數(shù)（X3），茶皂素濃度（X4）的擬合全變量二次回歸方程模型：Y=84.06+7.06X1-1.13X2-1.10X3+3.12X4-1.03X1X2-0.2098X1X3-0.6260X1X4+0.6286X2X3-0.3602X2X4-0.9915X3X4-4.54X12-2.95X22-4.12X32-4.22X42

方程顯著性檢驗分析結(jié)果如表5 所示，Pr＞F可分析模型與各因素之間的顯著差異，回歸模型的F值為171.60，研究表明：若使模型符合極為顯著標(biāo)準(zhǔn)，則Pr＞F應(yīng)小于0.0001；若使模型符合非常顯著標(biāo)準(zhǔn)，則Pr＞F應(yīng)小于0.01；若使模型符合顯著標(biāo)準(zhǔn)，則Pr＞F應(yīng)小于0.05，因此X1、X2、X3、X4、X12、X22、X32、X42對二氫槲皮素提取率的影響極為顯著，X1X2、X3X4影響非常顯著，X1X4、X2X3影響顯著。此外，得到的模型中R2=0.9838，調(diào)整R2adj=0.9780，Adeq Precision=42.3937，結(jié)果表明，該模型適應(yīng)性好，可信度高，精確度強，適合二氫槲皮素提取實驗的后續(xù)優(yōu)化和預(yù)測。

表5 二氫槲皮素提取率方程的方差與誤差分析Table 5 Analysis of variance and error of taxifolin regression equation

2.3.2 兩因素間的交互作用 研究表明，響應(yīng)曲面坡度明顯，說明因素影響較大[42]。圖2 為不同因素的交互作用對提取率的影響，響應(yīng)面開口向下，提取率隨著各因素參數(shù)的改變而變化，先升高到最大值后下降，呈現(xiàn)顯著的二次拋物關(guān)系。而等高線圖可以直觀地表示兩個變量之間交互作用的顯著程度，等高線越密，則變量對提取效果的影響越大，當(dāng)?shù)雀呔€為橢圓形時表示兩變量的交互作用對提取效果影響明顯[43]。

如圖2（a）所示，當(dāng)提取次數(shù)為3 次，茶皂素濃度為8%時，隨著料液比從1:8 增長到1:12，二氫槲皮素的提取率不斷增加，最高范圍是在提取壓力為157 MPa 左右，且等高線為橢圓形，說明料液比和提取壓力交互作用對提取率影響顯著。如圖2（b）所示，在茶皂素濃度為8%～8.5%，料液比在1:11.5 左右時，二氫槲皮素的提取率最高為85%左右，從等高線可以看出料液比和茶皂素濃度交互作用對提取率影響顯著。

如圖2（c）所示，當(dāng)提取壓力為157 MPa，茶皂素濃度為8%時，料液比在1:11～1:12，提取次數(shù)在3～4 次范圍內(nèi)，二氫槲皮素的提取率最高，料液比和提取次數(shù)的交互作用對二氫槲皮素的提取率影響顯著性較小。如圖2（d）所示，當(dāng)料液比為1:11.5，提取次數(shù)是3 次，茶皂素濃度在8%～8.5%，提取壓力在140～160 MPa 的范圍內(nèi)，二氫槲皮素具有較高的提取率，大約為84%，提取壓力與茶皂素濃度交互作用對提取率影響顯著性較小。

如圖2（e）所示，當(dāng)茶皂素濃度固定為8%，料液比為1:11.5 時，提取壓力在140～160 MPa，提取次數(shù)在3～3.5 的范圍內(nèi)，二氫槲皮素約具有84%的提取率。且從二維等高線可以看出，提取次數(shù)與壓力交互作用對提取率影響顯著。如圖2（f）所示，將料液比固定在1:11.5，提取壓力157 MPa 時，提取次數(shù)在3～4 次間和茶皂素濃度在8%～8.5%間，二氫槲皮素的提取率較高，等高線圖顯示，提取次數(shù)和茶皂素濃度交互作用對提取率影響顯著。

2.3.3 最佳提取條件的驗證 由Design-Expert 8.0.6軟件優(yōu)化出的最優(yōu)條件為：料液比為1:11.535（g/mL），膠束濃度為7.961%，提取次數(shù)為3.1491 次，提取壓力為157.152 MPa。在料液比為1:11.5（g/mL）、提取壓力為157 MPa、膠束濃度為8%、提取次數(shù)為3 次，保壓時間為5 min 的條件下驗證模型的有效性，試驗重復(fù)3 次。結(jié)果顯示，二氫槲皮素的實際提取率為84.35%±1.20%。與預(yù)測的提取率84.98%相近。表明此提取方法在所得模型的擬合下程度較好，重復(fù)性強。

2.4 能耗與提取率的比較

2.4.1 回流法 回流法的能耗主要分為兩部分：從室溫加熱到乙醇沸點的過程，以及維持在沸點的過程。故此方法的能耗為：

式中，E 為耗能（kW·h）；E1為升溫耗能（kW·h）；E2為保溫耗能（kW·h）；P 為功率（W）；t1為升溫時間（s）；t2為保溫提取時間（s）。

因此回流法的能耗為0.325 kW·h，CO2排放量為0.325×0.785=0.255 kg，提取率為71.5%

2.4.2 超聲提取法 超聲提取法的能耗主要分為兩部分：從室溫加熱到50 ℃的過程，以及維持在50 ℃的過程。故此方法的能耗為：

因此超聲提取法的能耗為0.1 kW·h，CO2排放量為0.1×0.785=0.0785 kg，提取率為64.6%

2.4.3 微波提取法 微波提取法的能耗主要分為兩部分：從室溫加熱到70 ℃的過程，以及維持在70 ℃的過程。故此方法的能耗為：

因此微波提取法的能耗為0.107 kW·h，CO2排放量為0.107×0.785＝0.0840 kg，提取率為69.7%

2.4.4 超高壓輔助膠束提取法 由于超高壓提取僅在加壓階段壓縮提取劑消耗能量，而在保壓和卸壓階段不消耗能量，故此方法的能耗為：

式中，S 為受力面積（m2）；P 為壓力（Pa）；l 為缸位移（m）；v 為缸位移速度（m/s）；t 為位移時間（s）。

將儀器參數(shù)：l=0.1，P=1.57×108，S=7.85×10-3代入上述公式，得E=0.1×1.57×108×7.85×10-3×0.5=6.16×104J=0.0171 kW·h

因此超高壓輔助膠束提取的能耗為0.0171 kW·h，CO2排放量為0.0171×0.785＝0.0134 kg，提取率為83.9%

不同提取方法的提取率、能耗和CO2排放量如表6 所示，通過計算：超高壓輔助膠束提取法與超聲提取法相比，節(jié)能82.9%；與微波提取法相比，節(jié)能84.0%；與回流提取相比，節(jié)能94.7%。超高壓輔助膠束提取法能耗和CO2排放量均為最低，所用時間僅為15 min，提取效率也非常優(yōu)異，并且此方法只使用水作為提取溶劑，未采用有毒有害且污染環(huán)境的其他有機溶劑。因此，此方法是一種效率高、無污染、耗能低的提取工藝。

表6 不同提取工藝的能耗Table 6 Energy consumption of different extraction processes

3 結(jié)論

在本研究中，以興安落葉松為原料，測定了落葉松不同部位二氫槲皮素的總含量，并篩選合適的提取膠束，采取超高壓輔助膠束提取技術(shù)提取二氫槲皮素，運用響應(yīng)面分析法進(jìn)行工藝優(yōu)化。其中落葉松樹干部位二氫槲皮素含量最高，干重含量可達(dá)2.802%。選定茶皂素作為提取膠束，最優(yōu)提取工藝條件如下：提取次數(shù)為3 次，茶皂素濃度為8%，料液比為1:11.5（g/mL），提取壓力為157 MPa，保壓時間為5 min，此條件下進(jìn)行3 次重復(fù)實驗，二氫槲皮素實際提取率可達(dá)84.35%±1.20%，同時單位能耗與CO2排放量均顯著低于微波提取、超聲提取、回流提取等提取工藝，分別為1.71×10-4kW·h·g-1和1.34×10-4kg/g，說明超高壓輔助膠束提取技術(shù)對落葉松中二氫槲皮素的提取重復(fù)性強，提取時間短，也可顯著減少能量消耗和污染，為提取二氫槲皮素提供了一種新方法。