樊世萌 劉戀 歐陽(yáng)敬禹 劉浩 尤祥宇 李玲玲 蘇江濤

[摘 要]用表面分子印跡技術(shù)，以氨基化磁性納米顆粒為核，以馬尿酸（HA）為模板分子、甲基丙烯酸（MAA）為功能單體、偶氮二異丁腈（AIBN）為引發(fā)劑、乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）為交聯(lián)劑，制備核殼型馬尿酸磁性分子印跡聚合物（HA-MMIPs）。通過(guò)電鏡對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，并通過(guò)動(dòng)力學(xué)吸附、等溫吸附、比較HA-MMIPs與人血清白蛋白（HSA）對(duì)HA的吸附等實(shí)驗(yàn)，對(duì)其性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，HA-MMIPs對(duì)HA具有較好的吸附量和印跡效率，在吸附HA上表現(xiàn)出對(duì)HSA的明顯優(yōu)勢(shì)。HA五輪吸附-洗脫的循環(huán)實(shí)驗(yàn)表明，HA-MMIPs具有很好的重復(fù)再利用能力。這項(xiàng)研究證明HA-MMIPs對(duì)馬尿酸分子具有良好的分離與吸附能力，對(duì)于尿毒癥患者體內(nèi)馬尿酸分子的分離與吸附可能存在潛在的優(yōu)勢(shì)。

[關(guān)鍵詞]馬尿酸；尿毒癥毒素；分子印跡；人血清白蛋白

[中圖分類號(hào)]TB383.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

尿毒癥毒素是一類腎衰竭期間在血液或組織中蓄積，對(duì)機(jī)體的正常生理具有負(fù)面影響的物質(zhì)^[1]。馬尿酸（Hippuric Acid， HA）是這類物質(zhì)中的一種，在健康個(gè)體中，HA濃度低于5 mg/L，但在終末期腎病患者中可增加至247±112 mg/L^[2]。HA在血液中的積累，可抑制肌肉對(duì)葡萄糖的利用，引起尿毒癥患者的肌肉無(wú)力，并可抑制腎臟的有機(jī)陰離子分泌和血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)。HA是蛋白結(jié)合性毒素，大多數(shù)血液凈化方式對(duì)此類物質(zhì)的清除效果較差。有研究表明，通過(guò)血液透析清除HA的比例僅為64%^[3]。另外，HA是苯甲酸的甘氨酸結(jié)合物，而苯甲酸主要由腸道菌群代謝芳香族氨基酸產(chǎn)生，也可直接作為食品和飲料的防腐劑。機(jī)體內(nèi)苯甲酸的大部分（約90%）主要與甘氨酸結(jié)合形成馬尿酸，其余的則與葡萄糖醛酸結(jié)合形成1-苯甲酰葡萄醛酸^[4]。因此，針對(duì)HA的分離技術(shù)或樣品前處理技術(shù)，不論在血液凈化領(lǐng)域或在食品飲料分析檢測(cè)領(lǐng)域中都具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymers，MIPs）是用于提取目標(biāo)分子的選擇性吸附劑，基本上模擬了生物分子識(shí)別過(guò)程中發(fā)生的“鎖和鑰匙”結(jié)合機(jī)制。模板分子（目標(biāo)分子）與功能單體相互作用形成絡(luò)合物，在聚合反應(yīng)中被三維聚合物網(wǎng)絡(luò)包裹；聚合反應(yīng)結(jié)束后洗脫模板，留下特定的定制識(shí)別位點(diǎn)，由此方法制備的MIPs能夠根據(jù)獨(dú)特的大小、化學(xué)功能和立體結(jié)構(gòu)識(shí)別目標(biāo)分子^[4]。MIPs的物理、化學(xué)條件穩(wěn)定，對(duì)樣品環(huán)境的適應(yīng)性很廣。與無(wú)模板制備的分子非印跡聚合物（NIPs）相比，MIPs表現(xiàn)出高選擇性和高吸附效率。MIPs目前被廣泛用于色譜、微萃取和傳感等分析應(yīng)用中^[5]。磁性MIPs（Magnetic molecularly imprinted polymers，MMIPs）是MIPs和磁性納米顆粒（Nanoparticles，MNPs）技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物，兼顧MIPs的特點(diǎn)和MNPs固有的高比表面積、優(yōu)良的磁學(xué)性質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)^[6]，在對(duì)樣品中目標(biāo)分子的識(shí)別和分離方面更具效率和優(yōu)勢(shì)。本文利用表面分子印跡技術(shù)，以氨基化磁性納米顆粒為核，以HA為模板，制備一種馬尿酸磁性分子印跡聚合物（HA-MMIPs）。該方法簡(jiǎn)易可行、條件溫和。除常規(guī)表征與吸附性能分析外，還將HA-MMIPs與人血清白蛋白（HSA）對(duì)HA的吸附性能進(jìn)行了比較，考察HA-MMIPs應(yīng)用于血液凈化領(lǐng)域去除尿毒癥毒素分子的潛力。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 主要試劑

馬尿酸（HA）、人血清白蛋白（HSA）購(gòu)于Sigma-Aldrich貿(mào)易有限公司；六水氯化鐵（FeCl₃·6H₂O）、無(wú)水乙酸鈉（NaAc）、1，6-己二胺、一縮二乙二醇、乙腈、甲醇、無(wú)水乙醇、乙酸等購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司（分析純）；甲基丙烯酸（MAA）、偶氮二異丁腈（AIBN）、乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）購(gòu)于上海阿拉丁生化科技股份有限公司（分析純）。甲醇、乙酸銨購(gòu)于Sigma-Aldrich貿(mào)易有限公司（色譜級(jí)）。實(shí)驗(yàn)用水均為去離子水。

1.2 主要儀器

Ultimate3000高效液相色譜儀，F(xiàn)EI TF20透射電鏡（美國(guó)，賽默飛世爾科技公司）；NANO-ITC等溫滴定微量熱儀（美國(guó)，TA儀器）。

1.3 HA-MMIPs和MNIPs的合成

制備馬尿酸磁性分子印跡聚合物（HA-MMIPs）的流程如圖1所示。

1.3.1 Fe₃O₄@NH₂的制備 參照文獻(xiàn)[7]，將3.0 g FeCl₃·6H₂O、12 g NaAc加入90 mL一縮二乙二醇，攪拌至完全溶解后加入19.5 g 1，6-己二胺，繼續(xù)攪拌至溶液澄清，轉(zhuǎn)移溶液至聚四氟乙烯內(nèi)襯置入高壓反應(yīng)釜中200 ℃反應(yīng)6 h，產(chǎn)物用無(wú)水乙醇、去離子水各洗滌3次，真空干燥得到氨基化磁性納米顆粒（Fe₃O₄@NH₂）。

1.3.2 HA-MMIPs的制備 將0.14 g HA、400 μL MAA冰浴超聲溶于50 mL乙腈，4 ℃孵育過(guò)夜。后加入0.1 g超聲分散的Fe₃O₄@NH₂、80 mg AIBN、1mL EGDMA，通N₂除氧，N₂保護(hù)下 60 ℃反應(yīng)2 h。反應(yīng)結(jié)束后，產(chǎn)物用去離子水、甲醇乙酸（9：1）洗脫液、甲醇各洗滌3次，直至上清液無(wú)HA檢出，冷凍干燥得到馬尿酸磁性分子印跡聚合物（HA-MMIPs）。作為對(duì)照，按相同方法無(wú)模板制備磁性分子非印跡聚合物（MNIPs）。

1.4 TEM表征

使用FEI TF20透射電鏡觀察Fe₃O₄@NH₂或HA-MMIPs的形貌。將適量的納米材料分散于乙醇中，涂在碳涂層銅網(wǎng)格上晾干待測(cè)。

1.5 吸附實(shí)驗(yàn)

1.5.1 動(dòng)力學(xué)吸附實(shí)驗(yàn) 稱取2 mg HA-MMIPs或MNIPs若干份于離心管內(nèi)，各加入2 mL 100 μg/mL HA水溶液，超聲混勻后，室溫下將其置于恒溫振蕩器中振蕩吸附。在不同時(shí)間磁力分離HA-MMIPs（或MNIPs），對(duì)上清液HPLC分析，分析峰面積，計(jì)算上清液中HA濃度，按式（1）計(jì)算HA-MMIPs（或MNIPs）對(duì)HA的吸附量Q。

Q =（C₀-C）·V/m ???（1）

其中，Q為HA-MMIPs（MNIPs或HSA）對(duì)HA的吸附量，μg/mg；C₀為吸附前HA濃度，μg/mL；C為吸附后HA濃度，μg/mL；V為HA溶液體積，mL；m為HA-MMIPs（MNIPs或HSA）質(zhì)量，mg。

1.5.2 等溫吸附實(shí)驗(yàn) 稱取2 mg HA-MMIPs或MNIPs若干份于離心管內(nèi)，各加入2 mL不同濃度的HA水溶液，超聲混勻后，室溫下將其置于恒溫振蕩器中振蕩吸附2 h。吸附完成后，磁力分離HA-MMIPs（或MNIPs），對(duì)上清液HPLC分析，分析峰面積，計(jì)算上清液中HA濃度，按式（1）計(jì)算HA-MMIPs（或MNIPs）對(duì)HA的吸附量Q。

1.5.3 HSA對(duì)HA的吸附實(shí)驗(yàn) 稱取2 mg HA-MMIPs若干份于離心管內(nèi)，各加入2 mL 100 μg/mL（或200 μg/mL）HA水溶液超聲混勻后，加入8 mg HSA，完全溶解后在室溫下將其置于恒溫振蕩器中振蕩吸附2 h。吸附完成后磁力分離HA-MMIPs，上清液經(jīng)超濾濃縮管（Thermo Scientific^TMPierce濃縮管，10 000 MWCO）離心過(guò)濾，對(duì)濾過(guò)液HPLC分析，分析峰面積，計(jì)算濾過(guò)液中HA濃度，按式（1）計(jì)算HSA對(duì)HA的吸附量Q。

1.5.4 液相色譜條件 色譜柱為PALPAK Type R （φ4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相為V（甲醇）∶V（0.02 M乙酸銨）=15∶85；流速1.0 mL/min；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)228 nm；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

1.6ITC實(shí)驗(yàn)

采用納瓦級(jí)等溫滴定微量熱儀，樣品池體積為1 mL，注射器體積250 μL。將1 mL 4 mg/mL HSA溶液注入樣品池，250 μL 1 mg/mL HA溶液裝入注射器，恒溫至37℃，待基線穩(wěn)定后滴定，每次滴定體積為10 μL，間隔時(shí)間為600 s。

在相同條件下以HA溶液滴定純水作為空白。滴定完成后獲得微量熱曲線，數(shù)據(jù)處理后得到焓變（ΔH）、熵變（ΔS）和解離常數(shù)（K_d）等熱力學(xué)參數(shù)。

1.7 HA-MMIPs的重復(fù)使用

稱取2 mg HA-MMIPs或MNIPs若干份于離心管內(nèi)，各加入2 mL 200 μg/mL HA溶液，超聲混勻后，室溫下將其置于恒溫振蕩器中振蕩吸附2 h。磁力分離HA-MMIPs（或MNIPs），獲取上清液待測(cè)。采用上述1.3中的洗滌方法對(duì)磁力分離的HA-MMIPs（或MNIPs）進(jìn)行洗滌，直至上清液無(wú)HA檢出，冷凍干燥、回收。將回收的HA-MMIPs或MNIPs，循環(huán)重復(fù)以上吸附、洗滌實(shí)驗(yàn)4次，將每次完成吸附實(shí)驗(yàn)后的上清液（共5份），進(jìn)行HPLC分析，分析峰面積，計(jì)算上清液中HA濃度，按式（1）計(jì)算HA-MMIPs（或MNIPs）對(duì)HA的吸附量Q。

2 結(jié)果與討論

2.1 印跡條件對(duì)HA-MMIPs吸附效果的影響

在MIPs的制備中，功能單體與模板之間相互作用力越強(qiáng)，越有利于MIPs選擇性識(shí)別位點(diǎn)的形成；MAA是最常用的非共價(jià)型MIPs的功能單體之一^[8]，既可以作為氫鍵的供體，也可以作為氫鍵的受體。丙烯酸基MIPs主要通過(guò)自由基聚合制備。通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)，我們對(duì)聚合反應(yīng)中使用的溶劑及HA、MAA、Fe₃O₄@NH₂等的配比進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)溶劑為乙腈，HA：MAA：Fe₃O₄@NH₂的比例為0.14 g：400 μL：0.1 g，且HA與MAA經(jīng)過(guò)4 ℃孵育過(guò)夜，印跡聚合物對(duì)HA的吸附效果最好。推測(cè)HA與MAA經(jīng)過(guò)4 ℃孵育過(guò)夜，有利于二者間產(chǎn)生氫鍵。在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步對(duì)分子印跡的聚合時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，分別制備聚合時(shí)間為1、1.5、2、3、6、12、18 h的印跡聚合物，并評(píng)價(jià)其對(duì)HA的吸附能力（吸附條件同動(dòng)力學(xué)吸附實(shí)驗(yàn)，吸附時(shí)間為2 h）。由圖2可知，HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量Q隨聚合時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)先增后減的趨勢(shì)（聚合時(shí)間為30 min時(shí)，聚合物產(chǎn)量極少，故無(wú)數(shù)據(jù)列出），且在聚合時(shí)間為2 h時(shí)Q值最大。作為對(duì)照，磁性分子非印跡聚合物（MNIPs）對(duì)HA的吸附隨聚合時(shí)間的變化不大，且明顯低于HA-MMIPs對(duì)HA的吸附。計(jì)算聚合時(shí)間為2 h時(shí)HA-MMIPs印跡因子IF（Q_MMIPs/Q_MNIPs）約為3。由此，得出最優(yōu)的聚合時(shí)間為2 h。分析可能原因：聚合時(shí)間過(guò)短時(shí)印跡腔未完全形成，聚合時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)則表面印跡層較厚，HA進(jìn)入印跡腔受阻，導(dǎo)致吸附量減少。

2.2 TEM表征分析

如圖3所示，F(xiàn)e₃O₄@NH₂和HA-MMIPs分散度均較好且尺寸均一。利用Nanomeasure軟件對(duì)聚合物的粒徑進(jìn)行分析，F(xiàn)e₃O₄@NH₂的平均粒徑約為20 nm，HA-MMIPs的平均粒徑約為23 nm。HA-MMIPs的粒徑比Fe₃O₄@NH₂的粒徑僅略有增加，提示分子印跡聚合物已包覆且包覆層比較薄。

2.3 HA-MMIPs吸附動(dòng)力學(xué)

動(dòng)力學(xué)吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示：HA-MMIPs和MNIPs在0～2 h間對(duì)HA的吸附量均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，但是二者的增變模式有很大區(qū)別；HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量在15 min～1.5 h間有個(gè)快速增加的過(guò)程，在1.5～2 h間增加略放緩；MNIPs對(duì)HA的吸附量在15 min～2 h間始終保持較慢的增加。當(dāng)吸附時(shí)間大于2 h后，HA-MMIPs和MNIPs對(duì)HA的吸附曲線都趨于平緩。HA-MMIPs對(duì)HA早期吸附量的增加速率明顯高于MNIPs，且HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量始終遠(yuǎn)大于MNIPs，說(shuō)明含印跡腔的HA-MMIPs相比MNIPs對(duì)HA具有更強(qiáng)的親和力，這是由于HA-MMIPs印跡腔內(nèi)的空間、尺寸、化學(xué)鍵等共同作用、對(duì)HA進(jìn)行特異性識(shí)別的結(jié)果。“定制”的印跡腔能夠更多更快地吸附HA分子，這與不含印跡腔的MNIPs對(duì)HA的非特異性吸附完全不同。當(dāng)HA-MMIPs印跡腔逐漸被HA占據(jù)飽和后，HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量不再隨著時(shí)間延長(zhǎng)而發(fā)生明顯變化。

為進(jìn)一步研究吸附過(guò)程的速率控制和傳質(zhì)機(jī)理，將一級(jí)（準(zhǔn)一級(jí)）、二級(jí)（準(zhǔn)二級(jí)）等動(dòng)力學(xué)吸附模型用于評(píng)價(jià)HA-MMIPs對(duì)HA的吸附特性^[9]。根據(jù)擬合數(shù)據(jù)對(duì)比，圖4數(shù)據(jù)更符合Lagergren（拉格爾格倫）準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附模型（圖5）。Lagergren準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附模型的方程式為

Q = Q_t（1 - exp（-k_f·t）） ???（2）

其中：Q為HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量，Q_t表示HA-MMIPs對(duì)HA的平衡吸附量，k_f表示一級(jí)吸附速率常數(shù)，t為吸附時(shí)間，h。由圖5可知，準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型計(jì)算的Q_t值（≈ 47.7μg/mg）與實(shí)驗(yàn)測(cè)出的Q_t值（≈ 44.8 μg/mg）吻合較好。Lagergren準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附模型表明，影響HA-MMIPs對(duì)HA吸附量Q值的最主要變量是時(shí)間。

2.4 HA-MMIPs的等溫吸附曲線

如圖6所示，HA-MMIPs和MNIPs的等溫吸附曲線略有不同。HA-MMIPs對(duì)HA的等溫吸附曲線大概有3種特征；HA濃度為0 ～ 140 μg/mL時(shí)，HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量隨HA濃度增加而快速增加；HA濃度為140 ～ 200 μg/mL時(shí)，HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量隨HA濃度增加而增速放緩；HA濃度大于200 μg/mL時(shí)，HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量隨HA濃度增加而無(wú)明顯變化，說(shuō)明吸附趨于飽和，對(duì)HA最大吸附量超過(guò)95 μg/mg。對(duì)于MNIPs，HA濃度為0 ～ 140 μg/mL時(shí)，MNIPs對(duì)HA的吸附量隨HA濃度增加而快速增加；HA濃度大于140 μg/mL時(shí)，MNIPs對(duì)HA的吸附量無(wú)隨HA濃度增加而明顯變化，吸附趨于飽和。相同HA濃度下，MNIPs的吸附量遠(yuǎn)小于HA-MMIPs，這是由于HA-MMIPs對(duì)HA的特異性吸附，擁有印跡空穴的HA-MMIPs能吸附更多的HA。

2.5 HA-MMIPs和HSA對(duì)HA的吸附比較

由圖7可知，相同吸附條件下，HA濃度為100 μg/mL時(shí)，HA-MMIPs對(duì)于HA的吸附量略大于HSA對(duì)于HA的吸附量；HA濃度為200 μg/mL時(shí)，HA-MMIPs對(duì)于HA的吸附量遠(yuǎn)大于HSA對(duì)于HA的吸附量。從圖6HA-MMIPs的等溫吸附曲線可以看出：當(dāng)HA濃度大于200 μg/mL，HA-MMIPs對(duì)HA的吸附趨于飽和；在HA 200 μg/mL濃度下，HA-MMIPs對(duì)HA的吸附量相比HSA很有優(yōu)勢(shì)。

等溫滴定微量熱（ITC）技術(shù)能夠原位、在線、靈敏地監(jiān)測(cè)生物分子結(jié)合過(guò)程中產(chǎn)生的微熱變化，以此獲得其平衡解離常數(shù)K_d、摩爾結(jié)合焓ΔH、摩爾結(jié)合熵ΔS等熱力學(xué)參數(shù)。在37 ℃下HA滴定HSA，圖8a每一峰值表示每次滴定產(chǎn)生的熱變化補(bǔ)償，圖8b為每次滴定產(chǎn)生的熱效應(yīng)與滴定和被滴定分子的摩爾比作圖得到一條結(jié)合曲線。由圖中數(shù)據(jù)可知，HA與HSA結(jié)合的焓變化為負(fù)值，表明結(jié)合過(guò)程都是放熱的。根據(jù)作圖后的結(jié)合曲線測(cè)算，HA與HSA的平衡解離常數(shù)為5.283×10^-4M，該數(shù)值和已有文獻(xiàn)報(bào)道的相應(yīng)值很接近^[2]。另?yè)?jù)文獻(xiàn)報(bào)道，蛋白結(jié)合性毒素^[1]如硫酸吲哚酚（Indoxyl sulfate， IS）、硫酸對(duì)甲酚（p-cresyl sulphate， PCS）、對(duì)甲酚（p-cresol， PC）、吲哚乙酸（indole-3-acetic acid，IAA）等與HSA非共價(jià)結(jié)合，親和力多處于中低等親和力范圍^[10-13]；HA與HSA的親和力值在眾多蛋白結(jié)合性毒素與HSA的親和力值中處于中等水平。

大多數(shù)血液凈化方式對(duì)蛋白結(jié)合性毒素的清除效果較差^[1，14]。由于分子印跡聚合物的材料特性及ITC儀器使用限制，雖然無(wú)法直接應(yīng)用ITC技術(shù)對(duì)HA與HA-MMIPs之間的親和力進(jìn)行測(cè)算，但結(jié)合圖6、圖7與圖8能夠得出，HA-MMIPs對(duì)HA有著比HSA對(duì)HA更強(qiáng)的吸附能力。這說(shuō)明，HA-MMIPs有進(jìn)一步應(yīng)用于血液凈化領(lǐng)域的潛力。臨床研究表明^[14]，在血液凈化透析液中加入一定濃度的HSA（如濃度為20 %），透析過(guò)程中血液一側(cè)部分毒素可與所結(jié)合的HSA解離、穿過(guò)透析膜，依靠膜兩側(cè)濃度梯度差配位結(jié)合于透析液一側(cè)的HSA。Mitzner等^[15]認(rèn)為，毒素解離并跨膜趨向移動(dòng)，是由于透析液一側(cè)的HSA始終具有大量的未結(jié)合位點(diǎn)?；诖?，可以大膽假設(shè)：如果把透析液一側(cè)中的HSA替換成與毒素親和力高很多的高分子聚合物材料，那么在透析過(guò)程中毒素跨膜趨向移動(dòng)的作用將會(huì)更加顯著。

2.6 HA-MMIPs的可重復(fù)使用性

洗脫掉所結(jié)合的分子后的HA-MMIPs可以被回收并重復(fù)使用。對(duì)HA連續(xù)進(jìn)行5個(gè)吸附-洗脫循環(huán)實(shí)驗(yàn)，考察印跡聚合物的穩(wěn)定性及吸附能力（圖9），數(shù)據(jù)表明，HA-MMIPs性質(zhì)很穩(wěn)定，經(jīng)5次吸附—洗脫循環(huán)后，HA-MMIPs在第5次循環(huán)實(shí)驗(yàn)中對(duì)HA的吸附量仍可達(dá)首次吸附量的92.8%。

3 結(jié)論

1）以氨基修飾的磁性納米顆粒為核，結(jié)合表面分子印跡技術(shù)，建立了一種制備核殼型馬尿酸磁性分子印跡聚合物的方法。所制備的磁性分子印跡聚合物HA-MMIPs對(duì)HA最大吸附量大于95 mg/g，相應(yīng)的印跡因子約為3，說(shuō)明具有較大的吸附量和較好的印跡效果。

2）研究其吸附動(dòng)力學(xué)曲線發(fā)現(xiàn)，HA-MMIPs對(duì)HA的吸附在2 h基本達(dá)到平衡。

3）比較HSA對(duì)HA的吸附等實(shí)驗(yàn)，HA-MMIPs在吸附HA上表現(xiàn)出對(duì)HSA的明顯優(yōu)勢(shì)，說(shuō)明HA-MMIPs有進(jìn)一步應(yīng)用于血液凈化領(lǐng)域的潛力。

4）HA-MMIPs具有良好的可重復(fù)利用性，印跡聚合物經(jīng)過(guò)了5次吸附-洗脫循環(huán)，依舊表現(xiàn)出對(duì)HA良好的吸附能力。

5）HA-MMIPs在各個(gè)實(shí)驗(yàn)中以磁分離技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離目的，具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，提示其具有應(yīng)用于復(fù)雜樣品的潛力。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，HA-MMIPs有希望作為潛在的選擇性吸附材料運(yùn)用于血液凈化領(lǐng)域，分離和吸附尿毒癥患者血液內(nèi)高濃度的HA。

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Preparation for Core-shell Magnetic Molecularly Imprinted

Polymers Using Hippuric Acid Template

FAN Shimeng， LIU Lian， OUYANG Jingyu， LIU Hao， YOU Xiangyu， LI Lingling， SU Jiangtao

（1 School of Biological Engineering and Food， Hubei Univ. of Tech.， Wuhan 430068， China;

2 Medical School ， Wuhan Univ. of Arts and Science， Wuhan 430345， China）

Abstract：Using surface molecular imprinting technology， aminated magnetic nanoparticles as the core， hippuric acid （HA） as the template molecule， methacrylic acid （MAA） as the functional monomer， azobisisobutyronitrile （AIBN） as the initiator， and ethyl acetate Glycol dimethacrylate （EGDMA） was used as a crosslinking agent to prepare core-shell hippuric acid magnetic molecularly imprinted polymers （HA-MMIPs）. Its structure was characterized by electron microscopy， and its performance was evaluated by experiments such as kinetic adsorption， isothermal adsorption， and comparison of HA-MMIPs and HSA's adsorption of HA. The results show that HA-MMIPs have better adsorption capacity for HA， better imprinting efficiency， and show obvious advantages over HSA in adsorbing HA; through at least five rounds of adsorption-elution cycle experiments on HA， it is shown that HA- MMIPs have a good ability to reuse. This study proves that HA-MMIPs have good separation and adsorption ability to hippuric acid， and may have potential advantages for the separation and adsorption of hippuric acid in uremia patients.

Keywords：Hippuric acid; uremic toxin; molecular imprinting; human serum albumin

[責(zé)任編校：張 眾]