彭麗琪,姚昆鵬,蔡虎志,張小琴,朱智顯,劉越美,陳青揚(yáng),陳新宇

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長沙 410007)

高脂血癥(Hyperlipidemia,HPL)是血漿中的甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)以及低密度脂蛋白(LDL)含量過高或高密度脂蛋白(HDL)含量過低的代謝性疾病[1]。隨著人類生活質(zhì)量不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)的改變,HPL患病率逐年上升,并呈現(xiàn)出患病群體年輕化的趨勢(shì)。據(jù)統(tǒng)計(jì),我國成年HPL患者人數(shù)約占1/3,城市患病率明顯高于農(nóng)村[2]。常用他汀類藥物具有修復(fù)血管、抗炎、營養(yǎng)神經(jīng)等作用,但也存在風(fēng)險(xiǎn),如升高轉(zhuǎn)氨酶、溶解橫紋肌、誘發(fā)白內(nèi)障、加劇胰島素抵抗等[3-4]。長期HPL易誘發(fā)冠心病、腦卒中等主要心腦血管事件,嚴(yán)重影響人類健康。因此,加強(qiáng)對(duì)HPL的預(yù)防和治療,尋找長期使用、副作用小、能有效控制血脂的藥物,便成為當(dāng)務(wù)之急。中醫(yī)藥具有多維度、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的作用特征,療效較之于他汀類藥物更加安全、可靠。深入探索低毒、高效、價(jià)廉的治療HPL的療法是目前亟待解決的臨床問題。

通絡(luò)化濁丸(原名降脂通絡(luò)方)是陳新宇教授總結(jié)長期臨床經(jīng)驗(yàn)所研制的湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑,由丹參、西洋參、茯苓、三七、薏苡仁、山楂、川芎、決明子組成,具有降脂化濁、活血通絡(luò)、行氣散瘀之效。在前期的基礎(chǔ)研究[5]中,發(fā)現(xiàn)通絡(luò)化濁丸能夠上調(diào)TC轉(zhuǎn)運(yùn)過程的關(guān)鍵蛋白ABCA1、apoA-1和 LCAT的表達(dá),從而調(diào)控成熟HDL-C的形成。但是,由于通絡(luò)化濁丸成分復(fù)雜,對(duì)其有效的藥物組成和作用機(jī)制尚未形成科學(xué)的認(rèn)識(shí),制約在臨床上的應(yīng)用和推廣。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)具備良好的綜合性和系統(tǒng)性,為復(fù)雜中藥防治疾病、降低中藥毒性、藥物再利用等方面的研究開辟新的途徑[6]。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對(duì)接技術(shù),對(duì)通絡(luò)化濁丸防治HPL的有效成分和主要靶標(biāo)進(jìn)行初步探索,以期能為HPL的防治、新藥研發(fā)及闡述中藥作用機(jī)制的科學(xué)內(nèi)涵等提供參考。

1 材料與方法

1.1 通絡(luò)化濁丸活性成分及靶點(diǎn)的檢索

通過TCMSP(https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php)數(shù)據(jù)庫檢索中藥活性成分及其靶點(diǎn)(篩選標(biāo)準(zhǔn)為“OB≥30%,DL≥0.18”)。利用UniProt(https://www.uniprot.org/)數(shù)據(jù)庫將靶點(diǎn)命名轉(zhuǎn)換為基因符號(hào),創(chuàng)建“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”數(shù)據(jù)集。

1.2 HPL疾病靶點(diǎn)的篩選

通過TTD(http://db.idrblab.net/ttd/)、DrugBank(https://www.drugbank.com/)、GeneCards(https://www.genecards.org/)、OMIM(https://omim.org/)、PharmGkb(https://www.pharmgkb.org/)數(shù)據(jù)庫篩選HPL疾病靶點(diǎn)。

1.3 “藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的繪制

將中藥靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集,繪制韋恩圖。導(dǎo)入篩選好的藥物、成分以及靶標(biāo)蛋白,借助Cytoscape_v3.8.2軟件構(gòu)建“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋱D。

1.4 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING(https://cn.string-db.org/)數(shù)據(jù)庫,構(gòu)建PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)。運(yùn)用Cytoscape軟件中的CytoNCA插件計(jì)算節(jié)點(diǎn)BC、CC、DC、EC、LAC、NC數(shù)值。每次篩選均選擇每項(xiàng)數(shù)值大于中位值的節(jié)點(diǎn),最終確定PPI網(wǎng)絡(luò)中的核心靶點(diǎn)。利用MCODE插件分析PPI網(wǎng)絡(luò)的核心模塊,將核心靶標(biāo)蛋白的關(guān)系進(jìn)行可視化處理。

1.5 GO富集和KEGG通路分析

利用R語言編輯腳本文件,對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行生物功能富集分析。選取GO功能中分子功能(MF)、生物過程(BP)、細(xì)胞組成(CC)排名前10的結(jié)果和KEGG通路富集中排名前30的結(jié)果,并以氣泡圖的形式直觀地展示。

1.6 分子對(duì)接

從“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)中篩選出Degree值排名前10的靶點(diǎn)。依據(jù)小分子配體與靶點(diǎn)之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系將二者配對(duì),進(jìn)行計(jì)算機(jī)模擬對(duì)接以驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)的結(jié)果。利用PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫查找配體2D結(jié)構(gòu),再借助ChemBio3D軟件轉(zhuǎn)化為“最小自由能”優(yōu)化后的3D結(jié)構(gòu)。通過PDB(https://www.pdbus.org/)數(shù)據(jù)庫搜索靶點(diǎn)的3D結(jié)構(gòu)。利用PyMOL和AutoDock軟件將靶點(diǎn)和小分子配體轉(zhuǎn)化為“pdbqt”格式后進(jìn)行模擬計(jì)算,運(yùn)用PyMOL軟件確定分子間氫鍵、對(duì)接位點(diǎn)及氫鍵長度,選擇結(jié)合能低的對(duì)接構(gòu)象進(jìn)行可視化。利用微生信(http://www.bioinformatics.com.cn)平臺(tái)繪制分子對(duì)接結(jié)合能熱圖。

2 結(jié)果

2.1 通絡(luò)化濁丸活性成分和靶點(diǎn)

根據(jù)設(shè)定的篩選條件,共檢索出100種有效活性成分。通過UniProt數(shù)據(jù)庫對(duì)8味中藥藥物靶點(diǎn)進(jìn)行了規(guī)范化的篩選,最終獲得244個(gè)靶標(biāo)蛋白,見表1。

表1 通絡(luò)化濁丸治療HPL的活性成分及作用靶點(diǎn)

2.2 通絡(luò)化濁丸治療HPL的作用靶點(diǎn)

依據(jù)5個(gè)疾病數(shù)據(jù)庫的檢索結(jié)果,匯總?cè)ブ睾蟮玫?08個(gè)HPL疾病靶點(diǎn)。利用在線工具Venny 2.1.0將藥物靶點(diǎn)和HPL疾病靶點(diǎn)進(jìn)行韋恩分析。兩者取交集后得到68個(gè)共同靶點(diǎn),即為通絡(luò)化濁丸治療HPL的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。

2.3 “藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

將中藥、活性成分和交集靶點(diǎn)按照節(jié)點(diǎn)屬性進(jìn)行分類,并將其導(dǎo)入Cytoscape_v3.8.2軟件,建立“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。經(jīng)計(jì)算,網(wǎng)絡(luò)圖中共有158個(gè)節(jié)點(diǎn)和433條邊,其中,節(jié)點(diǎn)大小與其Degree值成正比,節(jié)點(diǎn)間的連線代表相互作用關(guān)系。淡紫色節(jié)點(diǎn)代表通絡(luò)化濁丸中包含的6種有效活性成分,淺綠色節(jié)點(diǎn)代表通絡(luò)化濁丸治療HPL的68個(gè)潛在作用靶點(diǎn),粉色節(jié)點(diǎn)代表復(fù)方中的8味中草藥,見圖1。

圖1 “藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)分析

設(shè)定篩選條件為“Minimum Required Interaction Score>0.40”,繪制交集靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)。經(jīng)計(jì)算,PPI網(wǎng)絡(luò)有68個(gè)節(jié)點(diǎn)和712條邊,平均節(jié)點(diǎn)度為20.9,平均局部集聚系數(shù)為0.654,見圖2。經(jīng)兩輪拓?fù)浞治龊蟮玫絇PI網(wǎng)絡(luò)中的10個(gè)核心靶點(diǎn),即VEGFA、IL1B、MMP9、EGFR、CCL2、EGF、ICAM1、IL6、SERPINE1、TNF。第一輪篩選得到23個(gè)核心靶點(diǎn)。第二輪篩選得到10個(gè)核心靶點(diǎn),核心靶點(diǎn)關(guān)系見圖3。運(yùn)用STRING數(shù)據(jù)庫對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行可視化處理。靶點(diǎn)的顏色、大小與其度值數(shù)值的大小成正相關(guān)。靶點(diǎn)的顏色越深,度值越大,說明發(fā)揮的作用越大。

圖3 核心靶點(diǎn)關(guān)系

2.5 GO和KEGG富集分析

根據(jù)-LogP值和Count值進(jìn)行排序,分別取GO功能和KEGG富集結(jié)果前30個(gè)條目繪制氣泡圖。生物功能富集分析結(jié)果見圖4、圖5。圖中用GeneRatio表示該GO功能或KEGG通路富集的基因數(shù)量,用氣泡顏色代表其顯著性高低。在“P<0.05”的篩選條件下,GO功能富集分析得到1 799個(gè)條目(其中BP條目1 666個(gè),CC條目30個(gè),MF條目103個(gè)),KEGG通路富集分析得到105個(gè)條目。

圖4 GO功能分析

由圖可知,BP涉及脂多糖的反應(yīng)、細(xì)菌來源分子的反應(yīng)、類固醇激素反應(yīng)、活性氧代謝過程、營養(yǎng)水平反應(yīng)等。CC與膜筏、膜微結(jié)構(gòu)域、質(zhì)膜筏、小窩、神經(jīng)元細(xì)胞膜等密切相關(guān)。MF包括核受體的活動(dòng)、配體激活的轉(zhuǎn)錄因子活性、受體配體活動(dòng)、信號(hào)受體激活物活性、類固醇激素受體活性等。關(guān)鍵靶點(diǎn)富集在糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、化學(xué)致癌-受體活化、TNF信號(hào)通路等。脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化(NO.hsa05417)信號(hào)通路上存在較多的富集靶點(diǎn)基因,這可能是通絡(luò)化濁丸治療HPL的重要作用機(jī)制。圖6中白色代表信號(hào)通路中的正?；?紅色代表通絡(luò)化濁丸在HPL防治中的功能基因。

圖6 功能基因在信號(hào)通路上的分布

2.6 分子對(duì)接

選取VEGFA、IL1B、MMP9、EGFR、CCL2、EGF、ICAM1、IL6、SERPINE1、TNF作為模擬對(duì)接靶點(diǎn)。結(jié)合“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的從屬關(guān)系,獲得6個(gè)對(duì)應(yīng)的配體:蘆薈大黃素、槲皮素、人參皂苷Rh2、丹參酮、山柰酚和隱丹參酮。將篩選出的前10個(gè)潛在靶點(diǎn)和6個(gè)小分子配體通過PyMOL和AutoDock軟件進(jìn)行對(duì)接驗(yàn)證。結(jié)合能的高低與對(duì)接構(gòu)象的穩(wěn)定性成反比,能量越低,表明小分子配體和靶點(diǎn)蛋白的結(jié)合效果越好[7]。結(jié)果顯示,小分子配體與核心靶點(diǎn)最低結(jié)合能均<-5.0kcal·mol-1,可認(rèn)為結(jié)合活性較強(qiáng),篩選結(jié)果可靠。6種關(guān)鍵活性成分與10個(gè)核心靶點(diǎn)的結(jié)合活性均優(yōu)于內(nèi)源性配體,說明關(guān)鍵活性成分對(duì)核心靶點(diǎn)有良好的選擇性和穩(wěn)定性。靶標(biāo)蛋白與關(guān)鍵活性成分、內(nèi)源性配體的結(jié)合能見表2、圖7,分子對(duì)接結(jié)果見圖8。

圖7 分子對(duì)接結(jié)合能熱圖

注:A.TNF與丹參酮;B.SERPINE1與人參皂苷Rh2;C.VEGFA與人參皂苷Rh2;D.EGFR與丹參酮;E.IL1B與丹參酮;F.MMP9與山柰酚;G.CCL2與人參皂苷Rh2;H.IL6與丹參酮。

表2 分子對(duì)接結(jié)合能 (kcal·mol-1)

圖8中藍(lán)色代表小分子配體,綠色代表靶點(diǎn)蛋白,黃色虛線代表分子間氫鍵。由圖8所示,小分子配體主要通過氫鍵作用和靶點(diǎn)蛋白發(fā)生相互作用,體現(xiàn)出較強(qiáng)的結(jié)合能力。TNF與丹參酮在TYR-151、TYR-119處形成氫鍵。SERPINE1與人參皂苷Rh2在TYR-210、THR-267、THR-211、GLU-212處形成氫鍵。VEGFA與人參皂苷Rh2在GLU-64、LYS-107、ASP-63、ASN-62、CYS-61、GLY-59、SER-50、LEU-32。EGFR與丹參酮在MET-793處形成氫鍵。IL1B與丹參酮在SER-125處形成氫鍵。MMP9與山柰酚在GLU-47、ARG-51、TYR-52、THR-96、ASP-182處形成氫鍵。CCL2與人參皂苷Rh2在TYR-28、ARG-30、THR-10處形成氫鍵。IL6與丹參酮在GLN-76處形成氫鍵。

3 討論

高脂血癥為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病名稱,在古代典籍中尚未提及。雖然中醫(yī)典籍中未曾明確提出脂質(zhì)的概念,但是《黃帝內(nèi)經(jīng)》中有關(guān)于“膏”“脂”的論述與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中提出的“血脂”類似[8]?！鹅`樞·五癃津液別》云:“五谷之津液和合而為膏者,內(nèi)滲于骨空,補(bǔ)益腦髓,而下流于陰股?！备嘀从谒染?隨津液運(yùn)行流動(dòng)于周身,具有維持體溫、儲(chǔ)存能量、保護(hù)臟器等重要作用。在病理情況下,各種致病因素直接或間接影響臟腑,機(jī)體氣血津液運(yùn)行失調(diào),膏脂代謝紊亂,形成痰濁、瘀血等病理產(chǎn)物,壅塞脈道而成本病[9]。高脂血癥為本虛標(biāo)實(shí)之候,以痰濕、瘀血為本,以脾、腎虧虛為標(biāo),病位在血脈,治宜健脾除濕、理氣活血、祛痰化瘀。通絡(luò)化濁丸由8味中藥組成,方中丹參、三七、川芎活血化瘀,共為君藥;山楂、決明子為臣藥,協(xié)同發(fā)揮消食導(dǎo)滯、降脂化濁之效;配合佐藥茯苓、薏苡仁健脾滲濕,使藥西洋參補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱生津。數(shù)藥合用,故能復(fù)其氣機(jī)以升清,降其凝脂以化濁,通其經(jīng)絡(luò)以生新。

經(jīng)臨床與科學(xué)研究證實(shí),通絡(luò)化濁丸具有降低血脂含量、減輕脂肪肝、減少心腦血管不良事件發(fā)生的作用,其組成合理,配伍嚴(yán)謹(jǐn),療效確切。丹參、山楂提取液可顯著降低血清膽固醇、甘油三酯、LDL-C含量,進(jìn)而降低HPL患者肝臟質(zhì)量[10]。有關(guān)研究[11]指出,復(fù)方三七護(hù)脈湯具有良好的降壓、降脂功效,在治療高血壓伴血管性動(dòng)脈硬化方面療效顯著。山楂、決明子提取液具有抑制HMGCR基因表達(dá)、降低血脂、減輕肝組織脂肪變性的作用[12]。此外,茯苓被證實(shí)能夠作用于HPL內(nèi)源性產(chǎn)物生成和代謝途徑,有效調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂[13]。氣血并治方(含川芎)能顯著降低TC、LDL-C、TG含量,在脂質(zhì)代謝、血小板聚集、活化分子表達(dá)等方面發(fā)揮出重要作用[14]。降脂方主要由薏苡仁、山楂、丹參、決明子等組成,具有健脾補(bǔ)腎、清熱祛濕的功效[15]。相關(guān)研究表明,西洋參提取液能減少膽固醇的合成,并能有效控制動(dòng)脈粥樣硬化[16]。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)通絡(luò)化濁丸防治HPL的有效組分進(jìn)行初步篩選,得到6種活性成分:槲皮素,蘆薈大黃素,人參皂苷Rh2,丹參酮,山柰酚,隱丹參酮。槲皮素能降低成脂基因的表達(dá)水平,可抑制腸內(nèi)膽固醇的吸收,減少氧化應(yīng)激[17]。蘆薈大黃素能選擇性地抑制前蛋白轉(zhuǎn)化酶-枯草素9/LDL受體途徑,從而降低膽固醇含量[18]。有關(guān)研究顯示,人參皂苷Rh2可降低血漿IL-6含量,并可抑制TIMP-1、VEGFA的表達(dá),從而發(fā)揮防治動(dòng)脈粥樣硬化的作用[19]。丹參酮IIA具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化、抗炎等作用,能有效減少肝臟脂質(zhì)沉積[20]。山柰酚能抑制PKB和提高過氧化物酶體增殖劑活化受體,從而起到降TG的作用[21]。隱丹參酮可通過激活腺苷酸激活蛋白激酶AMPK來改善胰島素敏感性,進(jìn)而調(diào)控體內(nèi)脂類代謝異常[22]。綜上,通絡(luò)化濁丸可能通過這些活性成分表現(xiàn)出防治HPL的作用,包括抑制脂質(zhì)吸收、抗氧化應(yīng)激反應(yīng)、抗動(dòng)脈硬化、抗炎等,體現(xiàn)出通絡(luò)化濁丸所含活性成分治療HPL的有效性和多樣性。

蛋白互作網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鼋Y(jié)果顯示,通絡(luò)化濁丸與HPL關(guān)聯(lián)密切的核心靶點(diǎn)有VEGFA、IL1B、MMP9、EGFR、CCL2、ICAM1、EGF、SERPINE1、TNF、IL6。VEGFA通過調(diào)節(jié)LDL-C、HDL-C,導(dǎo)致炎癥細(xì)胞浸潤,并誘導(dǎo)新生血管生成,從而加速動(dòng)脈粥樣硬化的損害[23]。IL6通過影響TC、LDL-C、HDL-C的含量,增加血液黏滯度,在炎癥反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化、血栓形成中起著關(guān)鍵作用[24]。研究表明,IL1B在高膽固醇血癥的脂肪變性及肝纖維化中扮演重要角色[25]。MMP9是HPL患者早期動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)重要血清學(xué)指標(biāo),MMP9的表達(dá)水平與頸動(dòng)脈中膜厚度有顯著的相關(guān)性[26]。EGFR抑制劑可明顯降低血清LDL、TCH、TG的含量,并能明顯減輕肥胖引起的心肌損傷[27]。有關(guān)研究顯示,CCL2在不同類型肝損傷中表達(dá)增高,并可能參與肝組織的炎癥反應(yīng),對(duì)HPL的發(fā)生和肝脂肪變性有重要影響[28]。ICAM-1基因活化后,可使單核細(xì)胞聚集并遷移至血管內(nèi)皮細(xì)胞,并能增強(qiáng)炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、動(dòng)脈硬化及血栓形成[29]。SERPINE1是一種普遍存在于糖-脂代謝疾病中的生物標(biāo)志物,參與脂肪和能量代謝。有關(guān)研究指出,TNF-α是一種非特異性免疫調(diào)節(jié)劑,可以直接或間接地影響脂肪細(xì)胞內(nèi)脂類物質(zhì)的合成及降解[30]。綜合以上研究發(fā)現(xiàn),通絡(luò)化濁丸在防治HPL中具有抗氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)、抗動(dòng)脈粥樣硬化、減少血栓形成等多重作用。

通過GO功能和KEGG富集分析,本研究發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵靶點(diǎn)在HPL相關(guān)的生物功能和信號(hào)途徑上表現(xiàn)出明顯的富集。通絡(luò)化濁丸治療HPL的作用機(jī)制主要包括糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、化學(xué)致癌-受體活化、TNF信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路等。AGE-RAGE信號(hào)通路在調(diào)節(jié)糖尿病血管重塑中起著重要作用,可以通過AGE受體的傳遞而誘導(dǎo)血糖、血脂和血壓的增高,從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化[31]。大量研究顯示,流體剪切應(yīng)力能夠通過調(diào)控基因表型,影響血管內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)與功能,進(jìn)而抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成[32]。有關(guān)研究指出,TNF信號(hào)通路的下調(diào)可以抑制糖尿病性視網(wǎng)膜病變所致的血管炎癥反應(yīng),并能抑制脂肪細(xì)胞miRNA的轉(zhuǎn)錄[33-34]。HIF-1α不僅可以通過上調(diào)VEGF的表達(dá)來促進(jìn)血管新生,還能通過調(diào)節(jié)CXCL1的表達(dá)來增加脂質(zhì)在局部的蓄積,從而提高脂質(zhì)含量[35-36]。據(jù)此,通絡(luò)化濁丸具有抗炎、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的作用,并通過抑制血管新生來防止HPL的發(fā)生。

本研究在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法的基礎(chǔ)上,初步確定通絡(luò)化濁丸治療HPL的主要活性成分及核心靶點(diǎn),并進(jìn)一步證實(shí)其在HPL的治療中具有多組分、多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn)。通過計(jì)算機(jī)模擬分子對(duì)接,證明通絡(luò)化濁丸的主要活性成分與核心靶標(biāo)之間具有較強(qiáng)的結(jié)合活性,為進(jìn)一步的動(dòng)物及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。