田 慧，陳光宇，瞿昊宇，何 群，謝夢洲*

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410208；2.湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)心肺病證辨證與藥膳食療重點研究室，湖南 長沙410208

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease, COPD）是由炎癥和氣道重塑引起的持續(xù)氣流阻塞，病程長，預(yù)后差。 除呼吸系統(tǒng)癥狀外，COPD還會繼發(fā)性造成全身性損害，包括營養(yǎng)不良、骨骼肌病變、骨質(zhì)疏松、心血管疾病、全身炎癥反應(yīng)等[1]。 世界衛(wèi)生組織公布COPD 是第四大死亡原因，并估計到2030 年將上升到第三位[2]。COPD 屬于中醫(yī)學(xué)“肺脹”“喘證”等范疇，中醫(yī)治療常用中藥湯劑、中成藥、針灸等方法。 近年來藥食同源產(chǎn)品在相關(guān)政策的支持下，在市場上得到了大力推廣。相較于傳統(tǒng)湯劑口感差、難以堅持長期服用、患者依從性低、難以兼顧患者的營養(yǎng)補(bǔ)充等方面的不足，藥食同源功能性食品主要采用藥食兩用的中藥，在中醫(yī)學(xué)、營養(yǎng)學(xué)、藥劑學(xué)等多學(xué)科理論的指導(dǎo)下，與谷物、果蔬等食材一同經(jīng)過工藝優(yōu)化制作而成，既具有防病保健的作用，又符合食品色香味俱全的屬性。

針對COPD 長期病程中出現(xiàn)的營養(yǎng)不良所提出的營養(yǎng)支持療法是近些年研究的熱點[3]。 益氣平喘豆乳粉是由湖南省藥食同源功能性食品工程中心研發(fā)的一款針對COPD 的藥食同源功能性食品，中藥部分基于補(bǔ)益脾肺、化痰平喘的治法組方，輔料為豆乳粉和鴨肉蛋白肽粉。 本研究采用UPLC-Q-TOFMS 結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討益氣平喘豆乳粉的中藥部分干預(yù)COPD 的潛在藥效機(jī)制，并建立COPD 小鼠模型，采用ELISA、RT-PCR 等技術(shù)驗證益氣平喘豆乳粉干預(yù)COPD 的靶點及作用機(jī)制，旨在闡明益氣平喘豆乳粉可有效輔助改善COPD 的臨床病情，為功能性食品的工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

超高效液相色譜儀-四級桿-飛行時間質(zhì)譜儀（美國ABSCIEXDISTRIBUTION 公司）；自制煙熏箱（80 cm×70 cm×60 cm）；Galileo 38355 切片機(jī)（意大利DIAPATH 公司）；BIOBASE BT-1/B 攤片機(jī)（山東博科醫(yī)療器械有限公司）；iMaik 酶標(biāo)儀（伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品上海有限公司）；Light Cycler 480 實時熒光定量PCR 系統(tǒng)（上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司）；N-3010 10L 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（日本東京理化）；SCIENTZ-10N 冷凍干燥機(jī)（寧波新芝生物科技股份公司）；ZWL-PAI-10 超純水機(jī)（湖南中沃水務(wù)環(huán)?？萍迹籋TP-312型300g-0.01g-電子天平（上?；ǔ彪娖鳎?；TGL18W高速冷凍離心機(jī)（長沙英泰儀器有限公司）。

1.2 主要試劑與藥物

益氣平喘豆乳粉由湖南省藥食同源工程中心提供（含藥量為1.25 g/mL）；紅塔山香煙（焦油量：11 mg/支；煙氣煙堿量：1.1 mg/支；煙氣CO 量：11 mg/支）由紅塔煙草有限責(zé)任公司提供；脂多糖、DEPC 水由廣州碩譜生物科技有限公司提供；醋酸地塞米松（批號：LB2185） 由浙江仙據(jù)制藥股份有限公司提供；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（批號：05238502）由蘇州近岸蛋白質(zhì)科技股份有限公司提供；超純總RNA 提取試劑盒（批號：20220613）由杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司提供；小鼠IL-6、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor, TNF-α）ELISA 試劑盒（批號202211、202210）北京普利萊基因技術(shù)有限公司提供；PCR 引物設(shè)計由上海生工生物公司提供。

1.3 動物

36 只8 周齡SPF 級C57BL/6 雄性小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心訂購。 動物實驗許可證號：SCXK（湘）2019-0004，質(zhì)量合格證號：430727221101566954，于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心SPF 級動物鼠房、室溫（22±2） ℃、相對濕度65%～75%環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d 后開始進(jìn)行實驗。實驗期間自由飲水、攝食，飼料為普通飼料。 本實驗經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會審查通過（倫理審批編號：LLBH-202207070001）。

2 方法

2.1 UPLC-Q-TOF-MS 分析檢測藥物化學(xué)成分

2.1.1 UPLC-Q-TOF-MS 分析條件 色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（ACQUITY UPLC@BEH C18型色譜柱，1.7 μm，2.1 mm×100 mm）；以甲醇為流動相A，以0.1%甲酸水溶液為流動相B；柱溫35 ℃；流速0.3 mL/min；梯度洗脫：0～10 min，10%A；10～40 min，10%→100% A；40～45 min，100% A；45～47.5 min，100%→10% A；47.5～60 min，10% A。

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源（electrospray ionization, ESI），正、負(fù)離子模式：質(zhì)量掃描范圍100～1000 m/z；噴霧電壓5500 V、-4500 V；霧化氣溫度550 ℃；氣簾氣35 psi；輔助氣、霧化氣50 psi；碰撞能量|CE|=35±15 eV。 TOF/MS 一級預(yù)掃描、TOF/MS/MS 二級掃描離子累積時間分別為100 ms、1150 ms，觸發(fā)二級掃描的方法為信息依賴掃描，條件為多重質(zhì)量虧損、動態(tài)背景扣除，滿足者優(yōu)先進(jìn)行。

2.1.2 供試品溶液制備 空白對照液取質(zhì)譜級甲醇溶液，離心（12 000 r/min，10 min）即得；將各藥材經(jīng)本課題組前期優(yōu)化完成的提取工藝進(jìn)行有效成分提取，提取液經(jīng)減壓濃縮、過濾離心后冷凍干燥為干浸膏粉。 精密稱取中藥復(fù)方干浸膏粉0.1 g 置于10 mL 離心管中，加水至10 mL 刻度，超聲（250 Hz，200 W）60 min，取上清液置于2 mL 離心管中，離心（12 000 r/min）10 min，取上清液置于1.5 mL 進(jìn)樣小瓶中，即得。

2.1.3 質(zhì)譜分析 精密吸取上述空白對照液、中藥復(fù)方供試液各10 μL，注入液質(zhì)聯(lián)用儀，分析各供試液成分。 供試品溶液總離子流色譜圖見圖1。

圖1 總離子流色譜圖

2.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

2.2.1 藥物化學(xué)成分靶點與COPD 疾病相關(guān)靶點的篩選[4]采用UPLC-Q-TOF-MS 分析益氣平喘豆乳粉中藥復(fù)方成分，將化學(xué)成分名輸入PubChem 數(shù)據(jù)庫（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）進(jìn)行規(guī)范，并下載各成分sdf 文件，通過SwissTargetPrediction 數(shù)據(jù)庫（http://www.swisstargetprediction.ch/）搜 索 各 成 分作用靶點。以“COPD”為關(guān)鍵詞在GeneCards 數(shù)據(jù)庫（www.genecards.org/）中檢索COPD 相關(guān)靶點，把成分作用靶點和COPD 相關(guān)靶點輸入Venny 2.1 軟件取交集作用靶點作為益氣平喘豆乳粉中藥復(fù)方干預(yù)COPD 的潛在靶點。

2.2.2 PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與GO、KEGG 分析 為研究靶點之間的相互作用，將篩選出的潛在靶點導(dǎo)入STRING 平臺（https://string-db.org/），設(shè)置蛋白種類為“Homo sapiens”，結(jié)果保存為“.tsv”格式并導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2 軟件，運用其中的插件“Network Analyzer”分析拓?fù)鋮?shù)[5]，以節(jié)點度值（Degree）為標(biāo)準(zhǔn)篩選出關(guān)鍵靶點。 按度值從大到小排序，確定益氣平喘豆乳粉干預(yù)COPD 的核心靶點。 將關(guān)鍵靶點導(dǎo)入DAVID 6.8 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO 和KEGG 通路富集分析，探索益氣平喘豆乳粉干預(yù)COPD 的潛在作用機(jī)制。

2.3 動物實驗驗證

2.3.1 造模、分組及給藥 將36 只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、地塞米松組、高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組6 只。除正常組外，其余5 組進(jìn)行造模。本實驗參照文獻(xiàn)[6]采用鼻滴脂多糖聯(lián)合香煙煙霧建立COPD 模型：制作尺寸為80 cm×70 cm×60 cm的自制熏煙箱，煙箱設(shè)有進(jìn)氣孔和抽氣孔，分別位于煙箱兩上方側(cè)壁，直徑均為10 cm。 造模時，將點燃的8 根香煙放入煙箱中，將模型小鼠放入煙箱，持續(xù)暴露于煙霧中，15 min 中重新點燃8 支香煙放入煙箱，約15 min 后待煙霧散盡，休息30 min，重復(fù)上述操作。造模第1 天和第15 天將模型小鼠經(jīng)鼻滴入脂多糖（50 μL/只，1 mg/mL），正常組小鼠滴入無菌生理鹽水，當(dāng)日不再進(jìn)行熏煙操作，造模操作持續(xù)60 d。 造模第31 天開始每天上午給藥，下午造模，共給藥30 d，具體給藥量見表1。

表1 動物實驗分組及灌胃量（n=6）

2.3.2 動物取材及樣本處理[7]末次給藥后禁食12 h不禁水。 各組小鼠眼眶取血，室溫靜置2 h 待血液分層后，4 ℃、2 000 r/min 離心10 min，離心半徑8 cm，吸取上層血清于離心管中，-80 ℃冰箱保存。對頸部皮膚消毒脫毛后行縱切口，暴露小鼠氣管，將無菌留置針插入氣管，無菌縫合線打結(jié)固定，由注射器向內(nèi)注入1 mL 生理鹽水，緩慢回抽BALF，重復(fù)3 次（1 mL生理鹽水約回收0.6 mL 灌洗液）后注入無菌EP 管于冰上保存，取材完成后1 500 r/min 離心15 min，取上清于-80 ℃冰箱保存待測。收集完BALF 后，打開胸腔剪下肺組織，于生理鹽水中浸洗后，左肺組織放入無菌EP 管中于-80 ℃冰箱中保存；右肺組織放入多聚甲醛固定液中室溫保存待用。 肺組織剝離完成后取小鼠腹股溝白色脂肪及背脊部棕色脂肪于組織固定液待測。

2.3.3 肺組織、脂肪組織病理學(xué)觀察 將固定好的右肺組織和脂肪組織脫水后進(jìn)行浸蠟包埋，將包埋好的蠟塊固定于切片機(jī)上切成薄片后烘干。 用二甲苯脫去切片中的石蠟，對切片脫蠟后進(jìn)行染色、脫水、透明、封片。 將切片做好標(biāo)記后鏡下觀察。

2.3.4 ELISA 檢測小鼠血清及BALF 中TNF-α、IL-6 水平 嚴(yán)格按試劑盒操作檢測血清及BALF 上清液中TNF-α、IL-6 水平。

2.3.5 RT-PCR 檢測小鼠肺組織中TNF-α、ICAM-1、SELE mRNA 相對表達(dá)水平 按試劑盒說明書從小鼠肺組織中提取總RNA，參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行PCR 反應(yīng)，以GAPDH為內(nèi)參，引物序列見表2。 RT-PCR 結(jié)果分析采用QuantStudioTMDesign＆Analysis Software 3.0 軟件自動生成擴(kuò)增曲線，采用2-△△Ct計算mRNA 的相對表達(dá)水平。

表2 引物序列表

2.4 統(tǒng)計學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 益氣平喘豆乳粉中藥復(fù)方成分識別

益氣平喘豆乳粉中藥復(fù)方供試液在擬定的分析條件下共鑒定出143 個化學(xué)成分，成分鑒定結(jié)果見表3。

表3 益氣平喘豆乳粉中藥復(fù)方中的活性成分

3.2 益氣平喘豆乳粉成分靶點與疾病靶點分析

根據(jù)SwissTargetPrediction 數(shù)據(jù)庫獲得活性成分作用靶點720 個，通過GeneCards 數(shù)據(jù)庫獲取COPD作用靶點共2 062 個，將成分作用靶點與COPD 相關(guān)靶點導(dǎo)入Venny2.1.0 軟件，獲得交集作用靶點297 個，見圖2。

圖2 活性成分靶點與COPD 疾病靶點維恩圖

3.3 PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將篩選出的297 個共有靶點導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫，利用Cytoscape 3.7.2 軟件設(shè)置節(jié)點的大小、顏色隨度值大小變化，構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)圖，根據(jù)靶點的度值從大到小進(jìn)行排序，前3 個靶點分別是：TNF、AKT1、IL-6。 詳見圖3。

圖3 交集靶點PPI 網(wǎng)絡(luò)

3.4 GO 與KEGG 分析

利用DAVID 平臺進(jìn)行GO 富集分析和KEGG富集分析。 依據(jù)P＜0.001 篩選出GO 條目1288 條，其中生物學(xué)過程（biological process, BP）共涉及933個，主要為凋亡負(fù)調(diào)控、蛋白質(zhì)磷酸化、炎癥反應(yīng)、基因表達(dá)的正向調(diào)控等；得到細(xì)胞組成（cell composition, CC）108 個，主要為質(zhì)膜、細(xì)胞外的外來體、等離子體膜等；得到分子功能（molecular function,MF）247 個，主要為酶結(jié)合、蛋白激酶活性、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性等，部分條目（靶點數(shù)≥10），詳見圖4A。KEGG 富集通路顯示共有172 條信號通路，利用微生信平臺（http://www.bioinformatics.com.cn/login/）對結(jié)果進(jìn)行可視化，排名前20 的KEGG 通路氣泡圖見圖4B。 結(jié)果顯示，益氣平喘豆乳粉干預(yù)COPD 主要涉及癌癥通路、化學(xué)致癌作用-受體激活通路、脂質(zhì)與動脈粥樣化、PI3K-Akt 等信號通路。以COPD 通路為例，可以觀察到PPI 網(wǎng)絡(luò)中排名靠前的作用靶點均在此通路中被富集， 例如TNFα、IL-6、CASP 等，見圖5。

圖4 GO 功能富集分析（A）與KEGG 通路富集分析（B）

圖5 COPD 通路示意圖

3.5 動物實驗驗證

3.5.1 益氣平喘豆乳粉對COPD 模型小鼠行為學(xué)及體重影響 實驗期間，正常組小鼠毛發(fā)光亮柔順，飲食正常，與正常組小鼠相比，其他造模小鼠可見毛發(fā)干枯發(fā)黃，易于脫落，弓背蜷縮，活動減弱，各給藥組小鼠用藥后相比模型組小鼠毛發(fā)干枯掉落現(xiàn)象、神情倦怠情況有所好轉(zhuǎn)。

各組小鼠第1 天、造模第30 天、造模第45 天（灌胃第15 天）及造模第60 天（灌胃第30 天）的體質(zhì)量如表4 所示。 本研究通過比較各組在實驗過程中的體質(zhì)量變化量考察益氣平喘豆乳粉對小鼠營養(yǎng)狀態(tài)的影響，每個時期相比上個階段的體質(zhì)量變化量結(jié)果如表5 所示，造模30 d 后正常組體質(zhì)量有明顯增長，其余造模組體質(zhì)量增長緩慢，與正常組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；開始灌胃15 d 后，各組體質(zhì)量變化幅度有所減小，中劑量組與低劑量組的體質(zhì)量增長幅度較大[（1.89±0.46） g，（2.07±0.36） g]（P＜0.05）；灌胃30 d 時，與正常組比較，模型組呈明顯負(fù)增長[（-2.61±0.53） g]（P＜0.01）；與模型組比較，灌胃30 d 后中劑量組和地塞米松組的體質(zhì)量下降量較少（-1.50±0.20 g，-1.57±0.25 g）（P＜0.05）。

表4 益氣平喘豆乳粉對COPD 小鼠體質(zhì)量的影響（g，±s，n=6）

表4 益氣平喘豆乳粉對COPD 小鼠體質(zhì)量的影響（g，±s，n=6）

組別正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組地塞米松組第1 天24.09±0.47 23.82±0.74 23.31±0.59 23.83±0.35 23.12±0.46 22.65±0.61第30 天30.43±0.86 25.78±1.47 25.79±0.54 25.30±0.76 26.45±0.46 25.34±0.64第45 天30.97±0.35 27.13±1.26 26.79±1.01 27.19±1.59 28.52±0.97 25.08±1.07第60 天29.84±0.62 24.52±1.15 25.13±1.33 25.70±1.35 26.22±0.53 23.50±1.00

表5 各組小鼠體質(zhì)量改變量（g，±s，n=6）

表5 各組小鼠體質(zhì)量改變量（g，±s，n=6）

注：與正常組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與地塞米松組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 體質(zhì)量改變量1～30 d 30～45 d 45～60 d正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組地塞米松組6.33±0.93 1.96±1.60**2.48±0.95**1.48±0.97**△3.31±0.73**#2.69±0.72**0.54±0.40 1.35±0.59△1.00±0.34△1.89±0.46*△△2.07±0.36*△△-0.27±0.34#-1.13±0.34-2.61±0.53**△-1.66±0.29-1.50±0.20#-2.30±0.32*-1.57±0.25#

3.5.2 肺組織病理學(xué) 正常組小鼠肺泡組織結(jié)構(gòu)完整，未見明顯炎性細(xì)胞浸潤及出血情況；模型組小鼠可見大量炎性細(xì)胞浸潤，肺泡壁破壞融合出現(xiàn)大量肺大皰，符合COPD 小鼠肺組織病理學(xué)改變；經(jīng)益氣平喘豆乳粉干預(yù)后，肺組織病理學(xué)損傷減輕，炎性細(xì)胞浸潤程度減輕、肺大泡數(shù)量減少，大小較為均勻。 詳見圖6。

圖6 肺組織HE 染色

3.5.3 脂肪組織病理學(xué) HE 染色結(jié)果顯示，相對于正常組，模型組小鼠皮下iWAT 較為松散，脂肪細(xì)胞直徑較大，高、中、低劑量組及地塞米松組白色脂肪組織細(xì)胞變小緊致，具有棕色化趨勢。 模型組小鼠相對于正常組脂肪組織中空泡脂滴增多，高、中、低劑量組及地塞米松組則細(xì)胞分布增多排列緊密，具有較為明顯的棕色細(xì)胞形態(tài)特征。 詳見圖7。

圖7 脂肪組織HE 染色（×400）

3.5.4 益氣平喘豆乳粉對COPD 小鼠炎癥因子表達(dá)的影響 ELISA 結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組血清中TNF-α 和IL-6 的濃度均升高（P＜0.05），BALF中TNF-α 和IL-6 濃度無顯著差異。與模型組相比，高劑量組血清中TNF-α 濃度降低（P＜0.05），中劑量組、低劑量組小鼠血清及BALF 中TNF-α 和IL-6濃度較低（P＞0.05）。 詳見圖8。

圖8 血清和BALF 中TNF-α、IL-6 水平（pg/mL，±s，n=6）

3.5.5 益氣平喘豆乳粉對COPD 小鼠肺組織TNF-α、ICAM-1、SELE mRNA 表達(dá)的影響 與正常組相比，模型組小鼠肺組織SELE mRNA 表達(dá)水平升高（P＜0.05）。 與模型組相比，各用藥組小鼠肺組織SELE mR NA 表達(dá)水平降低（P＜0.05），其中益氣平喘豆乳粉中劑量組小鼠肺組織SELE mRNA 表達(dá)水平最低。 詳見圖9。

圖9 TNF-α、ICAM-1 及SELE mRNA 表達(dá)（±s，n=6）

4 討論

本研究基于UPLC-Q-TOF-MS 對益氣平喘豆乳粉中藥復(fù)方進(jìn)行成分分析，得到143 個中藥復(fù)方中活性成分，PPI 網(wǎng)絡(luò)圖表明益氣平喘豆乳粉中藥復(fù)方主要通過調(diào)節(jié)炎癥通路上的TNF、AKT1、IL-6等靶蛋白表達(dá)，從而抑制炎癥因子表達(dá)和炎癥反應(yīng)、改善氧化應(yīng)激、調(diào)控細(xì)胞凋亡等以延緩COPD 進(jìn)展[8]。富集分析顯示GO 條目1 288 條，KEGG 通路172條，涉及凋亡負(fù)調(diào)控、蛋白質(zhì)磷酸化（protein phosphorylation）、炎癥反應(yīng)、蛋白激酶活性、PI3K-Akt等多個過程和通路，PI3K-Akt 通路的營養(yǎng)感覺失調(diào)隨著年齡增長而發(fā)生，該通路涉及營養(yǎng)可用性信號以調(diào)節(jié)細(xì)胞生長[9]。

有研究表明，TNF-α 可促進(jìn)肺膠原纖維增生，增加細(xì)胞外基質(zhì)分泌，導(dǎo)致肺纖維化病理改變，同時可刺激炎癥因子，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)[10]，是機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答的重要介質(zhì)，在COPD 的疾病發(fā)展進(jìn)程中血清TNF-α 呈升高趨勢[11]。IL-6 被認(rèn)為是一種與年齡相關(guān)的促炎細(xì)胞因子，與負(fù)面健康結(jié)果和死亡率相關(guān)，與慢性炎癥的持續(xù)有關(guān)[12]。 COPD 急性加重患者IL-6 升高，并與COPD 患者肺氣腫的發(fā)展相關(guān)[13-14]。COPD 肺細(xì)胞表現(xiàn)出“衰老相關(guān)分泌表型”，特征是衰老的肺細(xì)胞分泌IL-6、IL-8、單核細(xì)胞趨化蛋白-1等促炎分子進(jìn)一步促進(jìn)COPD 的發(fā)展。 相關(guān)研究[15]表明，IL-6 等細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可對COPD大鼠營養(yǎng)狀態(tài)造成一定影響，大鼠體質(zhì)量明顯降低時，IL-6 水平升高。 與模型組相比，高劑量組小鼠血清中TNF-α 及IL-6 濃度降低差異顯著，中、低劑量組無顯著差異，但濃度均有降低；支氣管灌洗液中TNF-α、IL-6 濃度無顯著差異，說明該藥食同源食品在部分COPD 相關(guān)指標(biāo)上有改善作用，但相對藥物療效較弱。

SELE 可介導(dǎo)白細(xì)胞或單核細(xì)胞于內(nèi)皮細(xì)胞粘附并向炎癥部位積聚[16]，與TNF-α mRNA 共同作為益氣平喘豆乳粉改善COPD 炎癥效果的評估指標(biāo)。此外，營養(yǎng)不良小鼠脂肪組織會呈現(xiàn)空泡脂滴增多現(xiàn)象[17]，高、中、低劑量組在給藥后各組脂肪組織可見空泡脂滴數(shù)量減少，體重降低趨勢減緩。

綜上所述，本研究通過UPLC-Q-TOF-MS 及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的技術(shù)，分析益氣平喘豆乳粉中藥復(fù)方的活性成分、靶點、通路與COPD 的作用關(guān)系，通過動物實驗驗證上述結(jié)果并證明其對COPD 小鼠模型營養(yǎng)狀態(tài)的改善作用，發(fā)現(xiàn)益氣平喘豆乳粉可能通過影響TNF 通路，抑制TNF-α、IL-6 從而改善COPD氣道炎癥及肺部損傷狀態(tài)。 本研究可為益氣平喘豆乳粉的進(jìn)一步研發(fā)和生產(chǎn)提供理論依據(jù)，同時為藥食同源功能性食品的開發(fā)提供參考借鑒。 本研究存在的不足主要是由于設(shè)備原因缺乏肺功能指標(biāo)的檢測，以及未明確益氣平喘豆乳粉改善營養(yǎng)不良的機(jī)制，組別之間存在顯著差異結(jié)果較少；未明確益氣平喘豆乳粉與純食材輔料相比是否具有同等營養(yǎng)價值或發(fā)揮更優(yōu)作用。