馮忘憂，姜東伯，徐 盈，李 佳，楊 紅*

1.空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安710032；2.空軍軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，陜西 西安710032

腫瘤的發(fā)生往往由多種因素驅(qū)動(dòng)，導(dǎo)致其高度的復(fù)雜性和異質(zhì)性[1]。 傳統(tǒng)的癌癥治療模式，包括放射療法、化學(xué)藥物治療或靶向治療，其療效較為有限[2]。免疫檢查點(diǎn)抑制劑（immune checkpoint inhibitors,ICIs）作為一種癌癥免疫療法，改變了癌癥晚期患者的治療方式，這是癌癥治療史上的一場(chǎng)革命[3]。 單一的免疫療法對(duì)某些腫瘤患者的治療效果仍有限，研究表明，傳統(tǒng)的治療方法可以影響腫瘤微環(huán)境（tumor micro environment, TME），與ICIs 聯(lián)合使用具有協(xié)同作用[2]。 中醫(yī)學(xué)是我國(guó)傳承數(shù)千年的醫(yī)學(xué)，受到越來(lái)越多人的重視，研究表明，中醫(yī)藥可以通過重塑免疫細(xì)胞平衡及調(diào)節(jié)免疫檢查點(diǎn)等方式殺傷腫瘤細(xì)胞[4]。 因此，中醫(yī)藥以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)與免疫治療相輔相成[4]。TME是腫瘤細(xì)胞與宿主免疫系統(tǒng)相互作用的主要部位[5]。 越來(lái)越多的研究表明，免疫抑制性細(xì)胞高浸潤(rùn)是免疫治療的主要障礙[6]，與不良預(yù)后和ICIs耐藥性相關(guān)[2]。 相反，免疫激活的特點(diǎn)是高促炎免疫物質(zhì)浸潤(rùn)，這往往預(yù)示著良好的免疫治療效果[7]。 TME是中醫(yī)腫瘤辨證論治的物質(zhì)基礎(chǔ)，治療實(shí)質(zhì)就是重塑TME。 因此，探索TME 可以成為中醫(yī)現(xiàn)代化之路的切入點(diǎn)。例如，研究表明，中藥可以調(diào)控程序性死亡蛋白-1（programmed cell death protein-1, PD-1）/程序性死亡蛋白配體-1（programmed death ligand-1,PD-L1）免疫通路及相關(guān)細(xì)胞因子水平抑制胃癌進(jìn)展[8]。因此，尋找可能影響TME 組分的關(guān)鍵基因至關(guān)重要，可以為免疫治療新時(shí)代中西醫(yī)結(jié)合治療腫瘤提供支撐，也為中醫(yī)藥的作用機(jī)制提供理論基礎(chǔ)和參考方向[8]。近年來(lái)，轉(zhuǎn)錄組學(xué)和高通量測(cè)序的發(fā)展導(dǎo)致越來(lái)越多的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)基因被發(fā)現(xiàn)[9]。 這使得可以在泛癌中分析任何與腫瘤相關(guān)的基因，并檢查其與臨床預(yù)后以及對(duì)免疫微環(huán)境的影響。

睪丸蛋白聚糖2（sparc/osteonectin, cwcvandkazallike domains proteoglycan 2, SPOCK2）是基質(zhì)細(xì)胞蛋白家族的一員，在卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的生長(zhǎng)中起著重要作用[10-11]。此外，研究表明，SPOCK2 在肺癌中的表達(dá)與免疫浸潤(rùn)有關(guān)，表明SPOCK2 在腫瘤免疫調(diào)節(jié)中具有重要影響[12]，同時(shí)說(shuō)明SPOCK2 在不同的癌癥中具有不同的功能。目前尚無(wú)SPOCK2 與免疫微環(huán)境相關(guān)性的泛癌分析。 本研究利用癌癥基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas, TCGA）、臨床蛋白質(zhì)組學(xué)腫瘤分析聯(lián)盟（Clinical Proteomic Tumor Analysis Consortium, CPTAC）數(shù)據(jù)庫(kù)及人類蛋白質(zhì)圖譜（Human Protein Atlas, HPA）數(shù)據(jù)庫(kù)中的腫瘤圖譜對(duì)SPOCK2 在泛癌中的預(yù)后和免疫治療的價(jià)值進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)收集

從癌癥基因組學(xué)數(shù)據(jù)分析平臺(tái)下載來(lái)自TCGA、基因型組織表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)的泛癌數(shù)據(jù)集，為去除測(cè)序深度和基因長(zhǎng)度等測(cè)序數(shù)據(jù)的技術(shù)偏差，該數(shù)據(jù)集已經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化處理，即將數(shù)據(jù)后臺(tái)沒有處理的原始表達(dá)量轉(zhuǎn)變?yōu)槊壳€(gè)堿基的轉(zhuǎn)錄每百萬(wàn)映射讀取的RNA 測(cè)序片段，進(jìn)一步從中提取SPOCK2 在各個(gè)樣本中的表達(dá)數(shù)據(jù)和相關(guān)臨床數(shù)據(jù)。此外，從既往發(fā)表在《細(xì)胞》雜志上的TCGA 預(yù)后研究中獲取高質(zhì)量的預(yù)后數(shù)據(jù)集，并排除樣本量＜3 的癌癥類型。

1.2 主要試劑

RNA 提取試劑盒（北京聚合美生物科技有限公司，批號(hào)：MF036-01），反轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京聚合美生物科技有限公司，批號(hào)：MF166-plus-01），2X 實(shí)時(shí)定量PCR 預(yù)混液（北京聚合美生物科技有限公司，批號(hào)：MF015-505）。

1.3 檢測(cè)SPOCK2 的差異表達(dá)

使用基因表達(dá)譜交互分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA2.0）和腫瘤免疫評(píng)估資源庫(kù)（Tumor Immune Estimation Resource,TIMER 2.0）評(píng)估SPOCK2 信使RNA 的表達(dá)[13]。 此外，利用GEPIA2.0 的“病理分期”模塊，獲得了TCGA 腫瘤不同病理階段（Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期）SPOCK2 的表達(dá)情況。 最后利用CPTAC 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)SPOCK2 在蛋白水平的表達(dá)進(jìn)行評(píng)估，且利用HPA 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)部分腫瘤中的差異表達(dá)結(jié)果進(jìn)行初步驗(yàn)證。

1.4 生存分析

采用Kaplan-Meier 方法分析TCGA 隊(duì)列患者的生存期和無(wú)進(jìn)展間隔期（progression-free interval,PFI）。

1.5 基于SPOCK2 相關(guān)基因的基因富集分析

基于仙桃平臺(tái)，篩選出與SPOCK2 共表達(dá)的基因，并使用京都基因與基因組百科全書（Kyoto Ency lopaedia of Genes and Genomes, KEGG）富集工具[14]進(jìn)行分析，以獲取SPOCK2 在各種癌癥中的潛在機(jī)制。

1.6 免疫浸潤(rùn)分析

基于桑格數(shù)據(jù)分析[15]平臺(tái)，并通過TIMER2.0、CIBERSORT 算法平臺(tái)和微環(huán)境細(xì)胞群計(jì)數(shù)器（Microenvironment Cell Populations-counter, MCPcounter）等評(píng)估SPOCK2 與腫瘤中免疫浸潤(rùn)水平的相關(guān)性。TIMER2.0 數(shù)據(jù)庫(kù)可以分析TCGA 數(shù)據(jù)集，其中包含B 淋巴細(xì)胞、CD8+T 淋巴細(xì)胞、CD4+T 淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。 CIBERSORT 使用基因表達(dá)譜定義復(fù)雜組織中的細(xì)胞組成。 MCPcounter 根據(jù)基因表達(dá)矩陣，計(jì)算每個(gè)樣本中8種免疫細(xì)胞和2 種基質(zhì)細(xì)胞的絕對(duì)豐度分?jǐn)?shù)。 根據(jù)每種TCGA 腫瘤類型的中間值將患者分為SPOCK2 高表達(dá)組和低表達(dá)組，以比較免疫細(xì)胞浸潤(rùn)程度。

1.7 免疫組織化學(xué)分析

利用HPA 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取肝細(xì)胞性肝癌（liver hepatocellular carcinoma, LIHC）、甲狀腺癌（thyroid carcinoma,THCA）、皮膚黑色素瘤（skin cutaneous melanoma,SKCM）、卵巢漿液性囊腺癌（ovarian serous cystadenoma, OV）腫瘤組織與相應(yīng)的正常組織中SPOCK2表達(dá)的免疫組化結(jié)果。

1.8 熒光定量PCR 反應(yīng)

按照RNA 提取試劑盒的操作手冊(cè)提取人卵巢正常組織和腫瘤組織的RNA，將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 后配制PCR 反應(yīng)體系共20 μL，反應(yīng)過程：95 ℃1 min，40 個(gè)循環(huán)：95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s，72 ℃45 s，35 ℃30 s，95 ℃1 min，60 ℃15 s，98 ℃5 s。SPOCK2 正向序列：5'-ATGGAGGACGAGCAATGGCT-3'，反向序列：5'-TGGGTCGGACGAGGGAAC-3'；βactin 正向序列：5'-ACTCTTCCAGCCTTCCTTCC-3'，反向序列：5'-TCTCCTTCTGCATCCTGTCG-3'。 讀取FAM 熒光值。 各樣本以β-actin 為內(nèi)參計(jì)算SPOCK2的表達(dá)量。β-actin 引物由上海生工生物工程股份有限公司提供，SPOCK2 引物由北京擎科生物科技股份有限公司提供。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

基于student's 檢驗(yàn)兩組之間的差異。 P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SPOCK2 的表達(dá)在多種腫瘤組織和正常組織中有顯著差異

SPOCK2 在腦低級(jí)別膠質(zhì)瘤（brain lower grade glioma, LGG）、子宮內(nèi)膜癌（uterine corpus endometrial carcinoma, UCEC）、乳腺癌（breast carcinoma,BRCA）、食管癌（esophageal carcinoma, ESCA）、胃腺癌（stomach adenocarcinoma, STAD）、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（head and neck squamous cell carcinoma, HNSC）、LIHC、THCA、SKCM、OV、胰腺腺癌（pancreatic adenocarcinoma, PAAD）、子宮癌肉瘤（uterine carcino sarcoma, UCS）、嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤（pheochromocytoma and paraganglioma, PCPG）和膽管細(xì)胞癌（cholangiocarcinoma, CHOL）14 種腫瘤表達(dá)較高。在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma multiforme, GBM）、肺腺癌（lung adenocarcinoma, LUAD）、腎乳頭狀細(xì)胞癌（kidney renal papillary cell carcinoma, KIRP）、結(jié)腸腺癌（colon adenocarcinoma, COAD）、腎透明細(xì)胞癌（kidney renal clear cell carcinoma, KIRC）、肺鱗狀細(xì)胞癌（lung squamous cell carcinoma, LUSC）、直腸腺癌（rectum adenocarcinoma, READ）、睪丸生殖細(xì)胞瘤（testicular germ cell tumors, TGCT）、急性淋巴細(xì)胞性白血?。╝cute lymphoblastic leukemia, ALL）、急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）、腎上腺皮質(zhì)癌（adrenocortical carcinoma, ACC）和腎嫌色細(xì)胞癌（kidney chromophobe, KICH）12 種腫瘤中表達(dá)較低，詳見圖1A。 通過GEPIA2.0 進(jìn)一步驗(yàn)證了其中6 個(gè)腫瘤的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)除胸腺癌（thymoma,THYM）外，其余5 種腫瘤的結(jié)果均與圖1A 一致，詳見圖1B。使用GEPIA2.0 發(fā)現(xiàn)SPOCK2 在THYM中高表達(dá)，圖1A 數(shù)據(jù)所得結(jié)果不包含THYM。使用“病理分期”模塊進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)在SKCM、THCA、STAD 和KICH 4 種腫瘤中，SPOCK2 的表達(dá)在較高的分期顯著升高，詳見圖1C。 此外，HNSC、OV、KIRC、PAAD、GBM 和LUAD 中腫瘤細(xì)胞與正常組織的SPOCK2 蛋白水平有顯著差異，詳見圖1D。 以上結(jié)果說(shuō)明在基因水平和蛋白表達(dá)水平上，SPOCK2基因在多種腫瘤類型的腫瘤組織中的表達(dá)與在正常組織中的表達(dá)有顯著差異。 這一發(fā)現(xiàn)也表明，SPOCK2基因在表達(dá)上調(diào)和下調(diào)腫瘤中的功能有差異。

圖1 SPOCK2 在泛癌腫瘤組織與正常組織中的差異表達(dá)分析

2.2 SPOCK2 高表達(dá)在大多數(shù)癌癥中與良好的預(yù)后相關(guān)

根據(jù)SPOCK2 表達(dá)水平將病例分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，并使用TCGA 數(shù)據(jù)集檢驗(yàn)其在不同腫瘤類型中的預(yù)后意義。 從Kaplan-Meier 總生存分析結(jié)果來(lái)看，SPOCK2 是OV 患者的危險(xiǎn)因素（P=0.007），是BRCA（P=0.003）、THCA（P=0.021）、口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）（P=0.028）、HNSC（P<0.001）、PAAD（P=0.025）、SKCM（P<0.001）患者的保護(hù)因素，詳見圖2A。 PFI 分析結(jié)果顯示，SPOCK2 是前列腺癌（prostate adenocarcinoma, PRAD）患 者 的 危 險(xiǎn) 因 素（P=0.005），是HNSC（P<0.001）、SKCM（P=0.001）、BRCA（P=0.005）、CHOL（P=0.002）、LIHC（P=0.032）和LGG（P=0.001）患者的保護(hù)因素。詳見圖2B。

圖2 SPOCK2 表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

2.3 KEGG 富集分析發(fā)現(xiàn)SPOCK2 參與免疫相關(guān)的通路

使用富集分析方法探討SPOCK2 在PAAD、HNSC、LIHC、LUAD、SKCM、LAML、BRCA、PRAD 和OSCC 9種腫瘤中的功能及其相關(guān)通路。 選取每種腫瘤中與SPOCK2 呈正相關(guān)的前300 個(gè)基因。 KEGG 分析的結(jié)果表明SPOCK2 與T 細(xì)胞、T 輔助細(xì)胞的激活和分化、趨化因子信號(hào)通路、T 細(xì)胞受體信號(hào)通路、細(xì)胞因子受體活性、T 細(xì)胞受體復(fù)合物、淋巴細(xì)胞分化和抗原受體介導(dǎo)的信號(hào)通路有關(guān)，詳見圖3。 T 細(xì)胞活化是免疫反應(yīng)的核心，是抗腫瘤作用的關(guān)鍵。 因此，SPOCK2 參與了這些腫瘤中T 細(xì)胞的激活和分化，是其對(duì)某些腫瘤具有保護(hù)作用的重要原因。 這些途徑都與免疫反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)過程有關(guān)，表明SPOCK2可以調(diào)節(jié)腫瘤免疫微環(huán)境。

圖3 SPOCK2 相關(guān)基因的KEGG 富集分析

2.4 SPOCK2 表達(dá)水平與免疫浸潤(rùn)水平相關(guān)

進(jìn)一步分析SPOCK2 與免疫細(xì)胞的相關(guān)性以明確其免疫學(xué)功能。 TIMER2.0 算法分析結(jié)果顯示，在大多數(shù)腫瘤中，SPOCK2 與B 淋巴細(xì)胞、CD4+T 淋巴細(xì)胞、CD8+T 淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞浸潤(rùn)呈正相關(guān)，詳見圖4A，這與MCPcounter 數(shù)據(jù)庫(kù)得到的結(jié)果相對(duì)一致，詳見圖4B。 雖然，MCPcounter 數(shù)據(jù)庫(kù)算法比TIMER2.0 評(píng)估更多的免疫細(xì)胞類型，但仍發(fā)現(xiàn)SPOCK2 對(duì)一些癌癥的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)水平影響較小，包括OV、CHOL、ACC、THCA、間皮瘤、LGG、PCPG、GBM、THYM 和UCS，低免疫浸潤(rùn)提示預(yù)后不良。 因此，SPOCK2 可作為OV、UCS、ACC 預(yù)后不良的生物學(xué)標(biāo)志物。 利用CIBERSORT 數(shù)據(jù)庫(kù)的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)據(jù)共獲得34種腫瘤類型的22 種免疫細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分，詳見圖4C。22 種免疫細(xì)胞包括漿細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，以及各種類型的B 淋巴細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞、自然殺傷性細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和肥大細(xì)胞。 結(jié)果表明，SPOCK2 與靜息B 淋巴細(xì)胞、CD8+T 淋巴細(xì)胞、CD4+T 淋巴細(xì)胞、M1 型巨噬細(xì)胞呈正相關(guān)，而與靜息自然殺傷細(xì)胞、M0 型和M2型巨噬細(xì)胞、靜息肥大細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)。

圖4 免疫細(xì)胞浸潤(rùn)分析

2.5 SPOCK2 在多種腫瘤類型中與免疫檢查點(diǎn)相關(guān)基因具有相關(guān)性

目前，阻斷免疫檢查點(diǎn)是免疫療法的主要手段，而免疫微環(huán)境是影響腫瘤免疫治療的重要因素。 因此進(jìn)一步探討SPOCK2 是否具有調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境的作用，且是否與免疫檢查點(diǎn)相關(guān)的基因具有相關(guān)性是有必要的。 本文評(píng)估了SPOCK2 與五類免疫途徑的相關(guān)性，包括趨化因子、受體、主要組織相容性復(fù)合體標(biāo)記基因的表達(dá)、免疫抑制因子和免疫刺激因子[16]，詳見圖5A。 SPOCK2 的表達(dá)與趨化因子CCL2、CCL4、CCL5 和CCL7 及其受體CCR2、CCR4、CCR5和CCR7 呈正相關(guān)。 進(jìn)一步提取SPOCK2 和包括抑制性和刺激性兩類免疫檢查點(diǎn)通路在內(nèi)的60 個(gè)基因，詳見圖5B。 分析發(fā)現(xiàn)，SPOCK2 在大多數(shù)腫瘤類型中與衰竭T 細(xì)胞標(biāo)記基因、免疫激活基因和癌癥免疫抑制基因、T 細(xì)胞免疫球蛋白免疫受體酪氨酸抑制基序結(jié)構(gòu)、細(xì)胞程序性死亡蛋白1（programmed cell death 1, PDCD1）、淋巴細(xì)胞活化基因-3、細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4（cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4, CTLA4）、表面抗原分化簇274 等與免疫治療相關(guān)的基因具有正相關(guān)性。 結(jié)果表明，SPOCK2 在TME 中起著至關(guān)重要的作用。

圖5 SPOCK2 與免疫調(diào)節(jié)、免疫檢查點(diǎn)基因的相關(guān)性

2.6 免疫組織化學(xué)分析

從HPA 數(shù) 據(jù) 庫(kù)LIHC、THCA、SKCM 和OV 腫瘤組織及其相應(yīng)的正常組織中SPOCK2 的免疫組織化學(xué)結(jié)果，詳見圖6。這些結(jié)果支持TCGA 的發(fā)現(xiàn)，即SPOCK2 在LIHC、THCA、SKCM 和OV 組織中的表達(dá)高于正常組織。

圖6 免疫組織化學(xué)分析SPOCK2 在不同腫瘤組織與正常組織的差異表達(dá)

2.7 熒光定量PCR 分析

以上結(jié)果均基于數(shù)據(jù)庫(kù)得到，為了進(jìn)一步驗(yàn)證SPOCK2 在正常組織和癌癥組織的表達(dá)差異，選取正常卵巢上皮組織和OV 組織為代表，經(jīng)過熒光定量PCR 分析可以發(fā)現(xiàn)，OV 組織中SPOCK2 mRNA 的表達(dá)水平確實(shí)高于正常卵巢上皮組織，與GEPIA2.0和HPA數(shù)據(jù)庫(kù)得到的結(jié)果一致，詳見圖7。

圖7 熒光定量PCR 驗(yàn)證SPOCK2 mRNA 在OV組織中的表達(dá)水平（n=3）

3 討論

隨著對(duì)腫瘤生物學(xué)和免疫學(xué)的探索，過去十年ICIs 在腫瘤的臨床治療中取得了重大進(jìn)展[17]。 由于腫瘤特性極度復(fù)雜，免疫治療也存在有效人群比例低、產(chǎn)生耐藥性、過度進(jìn)展等問題。 只有大約20%的患者可以從ICI 單藥治療中獲益。 近年來(lái)中醫(yī)藥輔助免疫治療在腫瘤治療中展現(xiàn)出強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì)，兩者相輔相承。中醫(yī)認(rèn)為扶正祛邪法是治療腫瘤的關(guān)鍵，通過調(diào)整陰陽(yáng)、扶助正氣使機(jī)體達(dá)到平衡狀態(tài)，使患者能夠帶瘤生存。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中免疫治療從免疫逃逸機(jī)制出發(fā)，研發(fā)出的ICIs 大大改善腫瘤治療效果，這種利用患者自身免疫功能殺傷腫瘤的治療理念，與中醫(yī)扶正抑瘤的理念具有異曲同工之妙[18]。 但無(wú)論是傳統(tǒng)中醫(yī)還是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)都注重個(gè)體化治療，因此，尋找新的生物標(biāo)志物對(duì)幫助臨床醫(yī)生預(yù)測(cè)癌癥的預(yù)后和中西醫(yī)聯(lián)合免疫治療效果至關(guān)重要。SPOCK2 在某些腫瘤中可作為幫助診斷的生物標(biāo)記物。 本研究對(duì)SPOCK2 在泛癌中的預(yù)后和免疫治療價(jià)值進(jìn)行了系統(tǒng)的分析。

SPOCK2 在14 種腫瘤中高表達(dá)，在12 種腫瘤低表達(dá)。 HPA 數(shù)據(jù)庫(kù)的免疫組織化學(xué)結(jié)果也顯示在LIHC、THCA、SKCM 和OV 中SPOCK2 的表達(dá)高于正常組織。 且SPOCK2 在大多數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的癌癥中是保護(hù)因素，但僅在OV 中是危險(xiǎn)因素。之前的研究發(fā)現(xiàn)在OV 中，隨著hsa-miR-363-3p-SPOCK2軸的促進(jìn)，SPOCK2 被下調(diào)，它可以調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架，阻斷OV 的分期進(jìn)展[11]，這與本次研究結(jié)果一致。 此外，SPOCK2 的表達(dá)與臨床分期相關(guān)，提示SPOCK2 在 指 導(dǎo)SKCM、THCA、STAD、KICH 4 種腫瘤不同分期患者的治療方面具有臨床意義。

KEGG 分析發(fā)現(xiàn)SPOCK2 與T 細(xì)胞和輔助T 細(xì)胞的激活和分化有顯著相關(guān)。 輔助性T 細(xì)胞和功能性T 細(xì)胞都在免疫微環(huán)境中發(fā)揮重要作用。 且在大多數(shù)癌癥中，SPOCK2 的表達(dá)與發(fā)揮主要免疫功能的免疫細(xì)胞也密切相關(guān)，包括B 淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T 淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞、NK 細(xì)胞、免疫檢查點(diǎn)和免疫調(diào)節(jié)相關(guān)基因。 這些結(jié)果表明，SPOCK2 在調(diào)節(jié)TME 中起著至關(guān)重要的作用。

對(duì) 于BRCA、THCA、HNSC、PAAD 和SKCM 來(lái)說(shuō)，SPOCK2 高表達(dá)與其瘤內(nèi)高免疫浸潤(rùn)水平相關(guān)，這也解釋了SPOCK2 在這些腫瘤中起保護(hù)作用的現(xiàn)象。 相反，SPOCK2 是OV 和PRAD 的危險(xiǎn)因素，雖然該基因在腫瘤中高表達(dá)，但其免疫浸潤(rùn)水平較低。這種情況表明，在免疫抑制的情況下，SPOCK2 的功能受到限制。影響腫瘤微環(huán)境的因素很多。例如，腫瘤浸潤(rùn)的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞可以誘導(dǎo)免疫抑制微環(huán)境，這是腫瘤免疫治療成功的主要障礙[19]。因此，當(dāng)其他抑制因子在免疫微環(huán)境中占據(jù)優(yōu)勢(shì)時(shí)，SPOCK2 的免疫激活功能可能受到限制。

此外，SPOCK2 與PDCD1 和CTLA4 基 因在多種腫瘤里呈正相關(guān)，例如在SKCM，READ，LUSC 等腫瘤中，且PD-1 抑制劑和CTLA4 抑制劑均已在臨床廣泛應(yīng)用，尤其在SKCM 及LUSC 等實(shí)體腫瘤中治療效果明顯，表明SPOCK2 可以作為一種生物標(biāo)志物來(lái)指導(dǎo)免疫治療藥物的使用。 本文初步分析了SPOCK2 在泛癌中的作用，發(fā)現(xiàn)SPOCK2 與調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境的刺激分子及抑制分子相關(guān)，具有調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境的作用。因此，在某些腫瘤中，可預(yù)測(cè)免疫治療敏感性。當(dāng)然，這還需要更深入的研究去驗(yàn)證。綜上所述，本文評(píng)估了SPOCK2 在癌癥中預(yù)后和免疫治療反應(yīng)預(yù)測(cè)的作用，并發(fā)現(xiàn)其在不同的癌癥中發(fā)揮不同的功能。 該研究為SPOCK2 在惡性腫瘤中的應(yīng)用提供了一個(gè)新的角度，這有助于科學(xué)家尋找更好的治療癌癥患者的方法，也可為中醫(yī)藥作用靶點(diǎn)以及分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究提供參考方向。