張 寧,佘 桐,李 旭,王遵寶,韓永剛,李 宏

(1.陜西省漢中市漢臺區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣中心,陜西 漢中 723000;2.陜西省漢中市動物疫病預(yù)防控制中心;3.陜西省留壩縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣中心;4.新疆天康生物股份有限公司;5.陜西省畜牧技術(shù)推廣總站)

豬瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起豬的一種高致死性和接觸性傳染病。當(dāng)豬群感染豬瘟病毒以后,自身免疫機(jī)能受到嚴(yán)重破壞,隨之繼發(fā)各種細(xì)菌、病毒性疾病。該病的發(fā)生嚴(yán)重影響著生豬的生長,危害生豬的健康,對養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前市場上豬瘟疫苗種類繁多,其中豬瘟C株活疫苗是目前使用最多的疫苗品種,其具有抗原全面、成本低、免疫保護(hù)率高,且可誘發(fā)細(xì)胞免疫的優(yōu)點,對我國豬瘟防控起到了重要的歷史作用。但由于難以完全阻斷繁育豬群中豬瘟病毒的垂直傳播和水平傳播,致使豬群豬瘟持續(xù)帶毒和免疫耐受現(xiàn)象層出不窮,并導(dǎo)致豬瘟野毒在我國長期存在,一直未被徹底凈化。而豬瘟E2亞單位疫苗相比于傳統(tǒng)的豬瘟C株活疫苗可區(qū)分疫苗毒和野毒感染,為豬瘟凈化提供新的思路。為做好豬瘟防控實現(xiàn)全面凈化,準(zhǔn)確了解豬瘟病毒E2亞單位疫苗與傳統(tǒng)豬瘟C株弱毒疫苗(脾淋源)對育肥豬免疫后的免疫效果及生產(chǎn)成績影響。

本試驗選取了漢中某代養(yǎng)豬場一批外購保育豬分別免疫接種該兩種疫苗,通過臨床觀察和ELISA試劑盒評估該豬群生長狀況和豬瘟抗體水平,為豬場篩選疫苗,節(jié)本增收,提高生產(chǎn)效益提供了參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及疫苗

28～35日齡已免疫過豬瘟活疫苗(脾淋源)的保育豬;豬瘟E2基因工程亞單位疫苗;豬瘟C株活疫苗(脾淋源)。

1.2 主要試劑及儀器設(shè)備

IDEXX豬瘟病毒抗體檢測試劑盒(美國,Cat NO.99-43220);sunrise酶標(biāo)儀;8道微量移液槍(比克曼),離心機(jī)。

1.3 試驗方法

1.3.1 免疫程序 選擇陜西省漢中市某規(guī)?；B(yǎng)殖場進(jìn)行代養(yǎng)的外購自河南省濮陽市的一批已接種過豬瘟活疫苗的斷奶仔豬,將所有仔豬分為A、B、C三組,A、B組隨機(jī)選取體重相近的育肥豬不少于800頭;C組選留體重相近的育肥豬60頭。于45日齡時,對A組免疫E2亞單位疫苗,2 mL/頭;對B組免疫豬瘟活疫苗(脾淋源),60日齡加強(qiáng)免疫一次,2頭份/次;C組為對照組未進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

1.3.2 臨床觀察 通過稱重、拍照等方法觀察記錄該批育肥豬免疫前后生長發(fā)育、精神狀態(tài)及發(fā)病狀況。統(tǒng)計、分析該批育肥豬的成活率、料肉比和日增重等,用于綜合評價不同豬瘟疫苗對外購育肥豬生產(chǎn)成績的改善作用。

1.3.3 采血及豬瘟病毒抗體檢測 在100日齡時,進(jìn)行前腔靜脈采血,每組采集10～15份,每份2～4 mL,分離血清后用豬瘟病毒抗體檢測試劑盒進(jìn)行檢測,操作步驟見說明書,對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析抗體陽性率、阻斷率和離散度。

1.3.4 判斷標(biāo)準(zhǔn) 在450 nm處讀取每個樣品的OD值,當(dāng)陰性對照OD值>0.5且陽性對照阻斷率>50%時,試驗成立。樣品阻斷率=(陰性對照平均OD450值-樣品OD450)/陰性對照平均 OD450×100%。計算每個樣品的阻斷率,若阻斷率%≤30為陰性(無豬瘟抗體存在),30<阻斷率%<40為可疑,阻斷率%≥40為陽性。

1.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,計算各組數(shù)據(jù)的差異。

2 試驗結(jié)果

2.1 免疫后豬群健康狀態(tài)和生長指標(biāo)監(jiān)測記錄

臨床觀察為免疫豬瘟E2亞單位疫苗的試驗豬健康狀態(tài)明顯好于免疫豬瘟活疫苗的豬,表現(xiàn)為體表光滑、呈粉紅色,生長良好;而免疫豬瘟活疫苗的豬在免疫后一定階段內(nèi)被毛粗糙,皮膚蒼白,此后恢復(fù)。由表1可知,免疫E2亞單位疫苗的豬的成活率較免疫豬瘟活疫苗的豬的成活率提高了5.9個百分點,日增重提高16.3 g,料肉比低于免疫豬瘟活疫苗的豬。

表1 試驗豬群生長情況監(jiān)測結(jié)果

2.2 豬瘟抗體檢測結(jié)果

在育肥豬100日齡時,分別從A、B、C三組抽取10、15、12份血液樣品。檢測結(jié)果如圖1所示,A組(E2亞單位疫苗)、B組(豬瘟活疫苗)和C組(未免疫)抗體陽性率分別為100%、80%、16.7%;抗體平均阻斷率分別為86.5%、53.3%、27.4%;離散度分別為10.4%、19.0%、26.7%。表明免疫豬瘟E2亞單位疫苗組的抗體效價明顯高于免疫豬瘟活疫苗組,且離散度較低,抗體整齊度較高。

圖1 A、B、C三組育肥豬豬瘟抗體檢測結(jié)果

2.3 豬瘟E2亞單位疫苗和豬瘟活疫苗間檢測結(jié)果對比分析

由表2可知,C組(對照組)和A、B組之間差異極顯著(P<0.01),A組和B組之間差異極顯著(P<0.001)。

表2 豬瘟E2亞單位疫苗和豬瘟活苗間檢測結(jié)果對比分析

3 討論與小結(jié)

疫苗的種類是影響免疫效果的主要因素,選擇優(yōu)質(zhì)的疫苗加上合理的免疫程序?qū)τ谪i場的防疫起到關(guān)鍵性作用。一般來說,對于育肥豬的豬瘟免疫程序為28～35日齡進(jìn)行首次免疫,間隔一個月加強(qiáng)免疫一次。為考慮到母源抗體的干擾在對仔豬免疫前需檢測其母源抗體水平,從而確定仔豬的最佳首免日齡。有研究表明母豬免疫一次豬瘟E2亞單位疫苗就可有效提高豬瘟血清抗體阻斷率及抗體的整齊度,有助于確定仔豬首免日齡,有效減少了母源抗體干擾。

本試驗中,A、B、C三組試驗豬在試驗前已免疫過一次豬瘟活疫苗,B組相比于C組多進(jìn)行了豬瘟活疫苗的兩次加強(qiáng)免疫,經(jīng)T檢驗可知C組(對照組)和B組之間差異極顯著(P<0.01),說明豬瘟活疫苗須加強(qiáng)免疫以后才能產(chǎn)生較好的保護(hù)力,只免疫一針達(dá)不到對豬群的免疫保護(hù)作用,與之前研究一致。疫苗免疫是動物疫病防控的有效手段,但在動物強(qiáng)制免疫過程中,常因注射疫苗出現(xiàn)免疫應(yīng)激反應(yīng),表現(xiàn)為厭食、代謝紊亂、過敏、生長緩慢,嚴(yán)重者會導(dǎo)致死亡,造成經(jīng)濟(jì)損失。本研究結(jié)果表明E2基因亞單位疫苗只需免疫一針便可達(dá)到較強(qiáng)的免疫保護(hù)作用直至豬群出欄,有助于減少因免疫應(yīng)激而對養(yǎng)殖場帶來經(jīng)濟(jì)損失,從而提升生產(chǎn)成績。影響豬瘟免疫效果的因素除了免疫程序、疫苗本身的質(zhì)量外還有豬的免疫抑制。近年來,隨著規(guī)?；B(yǎng)豬發(fā)展,豬病感染的形勢越來越復(fù)雜,多數(shù)豬病發(fā)生感染都是由兩種或兩種以上的病原體引起的混合感染?；旌细腥驹黾恿素i只的發(fā)病率和死亡率,加大了臨床上對疫病的防控難度,給養(yǎng)殖戶造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)和豬圓環(huán)病毒病2型(PCV2)均屬于免疫抑制性疾病,該兩種疫病均可顯著抑制豬瘟疫苗的免疫效果,從而加大豬場對豬瘟的防控壓力。劉武剛等人研究發(fā)現(xiàn)E2亞單位疫苗可以突破免疫抑制的影響,免受豬藍(lán)耳病及圓環(huán)病毒病感染的干擾,穩(wěn)定的提高豬瘟抗體水平,使個體得到有效保護(hù),防止了豬瘟免疫失敗。

本研究通過臨床觀察和抗體檢測結(jié)果分析可知兩種疫苗均能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體,且E2亞單位疫苗產(chǎn)生的豬瘟抗體水平保護(hù)率(100%)高于豬瘟活疫苗(80%),均高于我國農(nóng)業(yè)部動物疾病強(qiáng)制免疫計劃中豬群70.0%的合格率要求,說明兩種豬瘟疫苗均能提高免疫豬的豬瘟抗體水平,使育肥豬獲得良好的保護(hù)力,但E2亞單位疫苗相比于豬瘟活疫苗的免疫效果更好,免疫豬群后具有較高的抗體陽性率和抗體平均阻斷率,降低了離散度。對豬場而言,選擇穩(wěn)定、較高的豬瘟抗體水平有利于提高豬群有效保護(hù),提高生產(chǎn)成績。高保護(hù)力高的E2亞單位疫苗能提高了育肥豬的成活率和日增重,并獲得了較低的料肉比。

綜上分析,該育肥豬群中豬瘟E2亞單位疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于豬瘟活疫苗(脾淋源),且有助于改善育肥豬的生產(chǎn)成績、并降低料肉比,是豬場育肥豬群進(jìn)行豬瘟免疫時可優(yōu)先選擇的疫苗種類。