呂宏偉,賀亞媚,唐艷強(qiáng),李思明,范志勇

(1.漢中職業(yè)技術(shù)學(xué)院,陜西 漢中723000;2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;3.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所)

據(jù)資料顯示,我國(guó)2017年人均雞蛋占有量約為18.77 kg/年,消費(fèi)總量達(dá)到世界雞蛋消費(fèi)量的40%,雞蛋已成為我國(guó)居民飲食結(jié)構(gòu)中不可缺少的組成部分。隨著人們對(duì)于健康生活的關(guān)注,消費(fèi)者對(duì)雞蛋品質(zhì)提出了更高要求,尋求健康綠色的養(yǎng)殖技術(shù)、應(yīng)用無(wú)抗飼料是蛋雞養(yǎng)殖發(fā)展的重要出路。中草藥因具有藥食同源的屬性,不僅可有效提高動(dòng)物的抗逆能力和生產(chǎn)性能,還可調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、有效改善肉蛋品質(zhì),逐漸在畜禽養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中被廣泛推廣。余干烏骨雞因產(chǎn)于江西省余干縣而得名,屬藥蛋兼用的地方品種,具有抗病力強(qiáng)、耗料量低、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高等特點(diǎn),但由于其產(chǎn)蛋性能不足,制約了余干烏骨雞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。鑒此,本試驗(yàn)以余干烏骨雞為試驗(yàn)對(duì)象,研究黃芪、大棗和杜仲干燥提煉而成的芪棗提取物對(duì)產(chǎn)蛋高峰期余干烏骨雞蛋品質(zhì)、脂質(zhì)代謝和血清抗氧化力的影響,并對(duì)其雞蛋膽固醇含量及相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)行評(píng)估,為余干烏骨雞的規(guī)?；⑸唐坊B(yǎng)殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)芪棗提取物添加水平(0、100、200、400 mg/kg),設(shè)計(jì)4個(gè)飼糧處理,選擇同一雞舍、產(chǎn)蛋率相近、體重相近、體況良好的240日齡的余干烏骨雞120只隨機(jī)分入4個(gè)飼糧處理,每個(gè)處理組6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)5只雞,對(duì)照組飼喂參考《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)配置的基礎(chǔ)飼糧,表1。試驗(yàn)期56 d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ)) %

1.2 試驗(yàn)材料

飼糧:由江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供。芪棗提取物:由黃芪、大棗和杜仲按照3∶2∶1的比例配比,經(jīng)干燥和提煉而成,經(jīng)檢測(cè),總黃酮含量1.84 mg/kg、粗多糖63.27 mg/kg、總皂苷7.24 mg/kg。主要試劑:膽固醇試劑盒(A111-1-1/南京建成)、Trizol試劑盒(美國(guó)Invitrogen公司);反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司)。

主要儀器:蛋形指數(shù)測(cè)定儀(以色列NFN 385)、數(shù)顯型游標(biāo)卡尺、蛋殼強(qiáng)度分析儀(以色列ORKA)、多功能蛋品質(zhì)檢測(cè)儀、蛋黃分離器、羅氏比色扇、熒光燈。低溫離心機(jī)(5430 R Eppendorf);全自動(dòng)生化分析儀(BS-200,邁瑞醫(yī)療國(guó)際股份有限公司)。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 蛋品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定 收集實(shí)驗(yàn)?zāi)┢谧詈笕斓牡?每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選5個(gè)進(jìn)行蛋品質(zhì)檢測(cè)。使用的儀器:多功能蛋品質(zhì)分析儀(EA-01,ORKA/以色列),蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀(EFR-01,ORKA/以色列),游標(biāo)卡尺,羅氏比色扇。

1.3.2 血清中脂肪代謝指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí),每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1只雞空腹進(jìn)行翅靜脈采血5 mL,傾斜采血管,靜置30 min后,于3 000 r/min離心10 min,吸取上清液1.0～1.5 mL,注入1.5 mL離心管中,血清膽固醇(TC)、TG、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量等用全自動(dòng)生化分析儀(BS-200,邁瑞醫(yī)療國(guó)際股份有限公司)測(cè)定。

1.3.3 蛋黃膽固醇含量測(cè)定 蛋品質(zhì)測(cè)完后分離蛋黃稱重,按重量(g)∶體積(mL)=1∶9比例,加入9倍體積的酒精稀釋,機(jī)械勻漿,用離心機(jī)2 500 r/min離心10 min,取上清液,再用膽固醇試劑盒(A111-1-1)測(cè)定蛋黃膽固醇含量。

1.3.4 組織中膽固醇代謝相關(guān)基因表達(dá)指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí),每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3只雞進(jìn)行肝臟和卵巢組織采集,并放進(jìn)液氮罐中保存。按照Trizol試劑盒(美國(guó)Invitrogen公司)的操作方法分別提取肝臟和卵巢組織的總RNA,再按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa)操作方法將mRNA反轉(zhuǎn)錄cDNA,內(nèi)參為甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH),用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法測(cè)定蛋雞肝臟中3-羥-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGR)和卵巢中極低密度脂蛋白受體(VLDLR)基因表達(dá)水平。引物序列見(jiàn)表2。

表2 引物序列

1.3.5 血清抗氧化指標(biāo)測(cè)定 測(cè)定試驗(yàn)結(jié)束時(shí)用相應(yīng)試劑盒測(cè)定(南京建成生物工程研究所)蛋雞血清中的超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)、總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA),以上測(cè)定均嚴(yán)格按照試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行。

1.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析 數(shù)據(jù)用Excel完成處理后,采用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)及線性(linear)與二次(quadratic)回歸分析,若組間差異顯著,則采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較,以P<0.05為差異顯著。試驗(yàn)結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知,余干烏骨雞蛋殼黃度隨芪棗提取物水平的增加呈線性增加(P<0.05),哈氏單位、蛋黃指數(shù)和蛋殼紅度呈二次曲線變化(P<0.05),其他蛋品質(zhì)指標(biāo)各組差異不顯著(P>0.05)。

表3 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞蛋品質(zhì)的影響

2.2 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞脂質(zhì)代謝的影響

由表4可知,芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞血清的甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的影響不顯著,但在添加量為200 mg/kg時(shí)提高了高密度脂蛋白膽固醇含量,降低了低密度脂蛋白含量(P>0.05)。

表4 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞脂質(zhì)代謝的影響

2.3 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞蛋黃膽固醇含量的影響

由圖1可知,芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞蛋黃膽固醇含量有降低趨勢(shì),但差異不顯著(P>0.05)。

圖1 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞蛋黃膽固醇含量的影響(mg/kg)

2.4 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞膽固醇代謝的影響

如圖2(A)所示,余干烏骨雞卵巢中VLDLR基因表達(dá)水平隨芪棗提取物添加水平的增加呈二次曲線變化(P<0.05)。

圖2 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞膽固醇代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響(mg/kg)

如圖2(B)所示,余干烏骨雞肝臟中HMGR基因表達(dá)水平隨芪棗提取物添加水平的增加呈二次曲線變化(P<0.05)。

2.5 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知,余干烏骨雞血清中CAT、T-AOC和MDA含量隨芪棗提取物水平的增加呈二次曲線變化(P<0.05)。

表5 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞蛋品質(zhì)的影響

蛋品質(zhì)主要通過(guò)蛋重、哈氏單位、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋殼顏色和蛋黃顏色等指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)。哈氏單位和蛋黃指數(shù)都是用來(lái)衡量蛋的新鮮程度的重要指標(biāo),靳淑委研究表明,飼糧中添加500、1 000和2 000 mg/kg的黃芪提取物可以顯著提高京粉1號(hào)蛋雞的產(chǎn)蛋率和蛋黃比,且劑量越高效果越好,張恒瑞研究表明,飼糧中添加4 g/kg大棗多糖能顯著提高烏雞雞蛋蛋形指數(shù)、平均蛋重、蛋白高度和蛋殼厚度。劉青翠的研究表明杜仲葉提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期的蛋品質(zhì)無(wú)影響。本例驗(yàn)中,添加200 mg/kg芪棗提取物組余干烏骨雞的哈氏單位和蛋黃指數(shù)顯著增加,與以上三種提取物單獨(dú)使用相比,芪棗提取物的添加劑量小,但卻起到了更好的效果,這與唐日益研究的復(fù)方中草藥添加劑的作用相似,說(shuō)明了植物提取物聯(lián)用的具有使用劑量小,功能全面的優(yōu)勢(shì),推測(cè)不用的提取物之間存在協(xié)同作用。

蛋殼顏色受子宮中腺體分泌和色素沉積的影響,蛋殼色素的主要原料是原卟啉-Ⅸ,它是血紅蛋白的分解產(chǎn)物或輸卵管粘膜層被破壞的紅細(xì)胞,紅細(xì)胞被肝臟和脾臟等處的巨噬細(xì)胞吞噬和破壞后,釋放出殘余物質(zhì),其中血紅蛋白被分解為珠蛋白、膽綠素和鐵,膽綠素被血液運(yùn)送至肝臟生成葡萄糖醛酸膽綠素,葡萄糖醛酸被運(yùn)送至子宮儲(chǔ)存起來(lái),在蛋殼形成的最后階段沉積到蛋殼中。本研究中,余干烏骨雞蛋殼黃度隨芪棗提取物水平的增加呈線性增加,蛋殼紅度呈二次曲線變化。研究表明,膽綠素具有抗氧化性,有清除機(jī)體自由基的作用,所以蛋殼的形成與蛋雞機(jī)體抗氧化水平存在很大關(guān)聯(lián)性,當(dāng)?shù)半u發(fā)生氧化應(yīng)激時(shí),機(jī)體的膽綠素大量參與抗氧化作用,從而使參與蛋殼合成的膽綠素大大減少,而飼糧中添加芪棗提取物具有抗氧化作用,可以減少了氧化應(yīng)激對(duì)蛋雞機(jī)體內(nèi)膽綠素的消耗,使合成蛋殼的膽綠素增多,蛋殼的顏色深度也就增加了。還有研究表明,雌激素、孕酮和某些前列腺素等多種激素參與了蛋殼色素的合成。因此本試驗(yàn)中芪棗提取物可能影響了蛋雞某些激素的合成,從而改善了蛋殼的顏色。

3.2 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞脂質(zhì)代謝的影響

血清甘油三酯是血脂的成分之一,隨著飲食和年齡的變化而不斷改變,可以作為間接選擇蛋中膽固醇含量的指標(biāo)。膽固醇是細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育中的必需物質(zhì),但血清中膽固醇含量過(guò)高時(shí)便會(huì)產(chǎn)生不良影響,低密度脂蛋白含量過(guò)高會(huì)加速動(dòng)脈粥樣硬化病變的進(jìn)程,使血斑不穩(wěn)定,出現(xiàn)血栓,增大心肌梗塞的風(fēng)險(xiǎn),而高密度脂蛋白清除血中膽固醇,能抗動(dòng)脈粥樣硬化,降低冠心病風(fēng)險(xiǎn),被稱作“好膽固醇”。本試驗(yàn)研究表明,飼糧中添加芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞血清中的甘油三酯和膽固醇各項(xiàng)指標(biāo)影響不明顯,但在添加量為200mg/kg時(shí)提高了高密度脂蛋白膽固醇含量,降低了低密度脂蛋白含量。楊秋霞研究表明,飼糧中添加50～150 mg/kg黃芪多糖能夠降低蛋雞血清中TG和TC的含量,調(diào)節(jié)蛋雞的脂質(zhì)代謝。而有研究發(fā)現(xiàn)添加0.5 %杜仲葉粉的飼糧能提高蛋雞血清高密度脂蛋白濃度,降低總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白濃度,對(duì)蛋雞的脂質(zhì)代謝具有積極影響,這與本試驗(yàn)結(jié)果一致,說(shuō)明芪棗提取物有改善余干烏骨雞脂質(zhì)代謝的作用。

3.3 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞蛋黃膽固醇含量的影響

蛋雞機(jī)體能從食物中攝取的膽固醇極少,基本上都是由自身的肝臟和卵巢合成,蛋雞每天能合成300 mg膽固醇,大部分會(huì)沉積在蛋黃中,因此降低蛋黃膽固醇含量,可以很好地預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。劉青翠研究表明,飼糧中添加300 mg/kg杜仲葉提取物可降低蛋黃膽固醇含量。本試驗(yàn)研究表明,芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞蛋黃膽固醇含量無(wú)顯著影響,但是從圖中可以看出蛋黃膽固醇含量有隨著芪棗提取物水平的增加而降低的趨勢(shì),說(shuō)明芪棗提取物有降低蛋黃膽固醇含量的作用,但由于本試驗(yàn)中的添加量過(guò)低,因此不能達(dá)到明顯的效果。

3.4 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞膽固醇代謝的影響

HMGR是膽固醇合成過(guò)程的限速酶,決定合成反應(yīng)的快慢。肝臟中的膽固醇大多以游離的形式存在,進(jìn)入血液需要與載脂蛋白裝配成極低密度脂蛋白。當(dāng)極低密度脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到卵巢的卵母細(xì)胞,經(jīng)過(guò)受體介質(zhì)的胞吞作用,到達(dá)卵母細(xì)胞當(dāng)中形成蛋黃。HMGR和VLDLR基因的表達(dá)會(huì)促進(jìn)蛋黃中膽固醇含量的沉積。本試驗(yàn)研究表明,余干烏骨雞卵巢中VLDLR基因和肝臟中HMGR基因表達(dá)水平隨芪棗提取物添加水平的增加呈現(xiàn)出先降低再增加變化,說(shuō)明在一定范圍內(nèi),芪棗提取物對(duì)蛋雞的膽固醇代謝能夠起到作用。王志祥研究表明,黃芪提取物能降低肉雞體內(nèi)膽固醇的含量,與機(jī)體減少肝臟向肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇的作用有關(guān)。

3.5 芪棗提取物對(duì)余干烏骨雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

蛋雞產(chǎn)蛋高峰期易發(fā)生氧化應(yīng)激,不僅影響自身機(jī)體健康,也會(huì)導(dǎo)致卵巢衰退,進(jìn)而使產(chǎn)蛋率降低。抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)在保護(hù)蛋雞細(xì)胞結(jié)構(gòu)免受老化引起的活性氧(ROS)的危害方面起著至關(guān)重要的作用。丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物,其水平高低與氧化應(yīng)激的狀態(tài)正相關(guān)。較多試驗(yàn)表明,飼料中添加杜仲葉提取物,能顯著降低產(chǎn)蛋后期蛋雞的破軟蛋率和死淘率和血清中丙二醛的含量,提高超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶的活性,使機(jī)體的抗氧化能力增強(qiáng),延緩蛋雞產(chǎn)蛋后期卵巢的衰老速度,減緩產(chǎn)蛋曲線下滑速度。本試驗(yàn)中,芪棗提取物能顯著提高蛋雞血清總抗氧化力,降低丙二醛含量,這與前人的研究一致,也印證了本試驗(yàn)中蛋殼顏色色素沉積的機(jī)制。

4 結(jié)論

芪棗提取物能夠提高余干烏骨雞的抗氧化能力,并通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、膽固醇代謝和抑制HMGR、VLDLR基因表達(dá)水平來(lái)調(diào)控蛋黃膽固醇的含量,其中200 mg/kg芪棗提取物效果最好。