李俊明 李 婕

（漢中潤(rùn)泰來(lái)生物科技有限公司，陜西 城固 723212）

羊肚菌Morchellaspp.是羊肚菌科、羊肚菌屬真菌[1]，目前我國(guó)常用來(lái)人工仿野生大田栽培的品種，根據(jù)分子分類(lèi)的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)地位而定主要有三個(gè)種系：六妹、七妹、梯凌，其中，國(guó)內(nèi)各地分布的這三個(gè)品系均為黑色尖頂小羊肚菌，也是目前出口比較認(rèn)可的羊肚菌品系。

目前，國(guó)內(nèi)栽培羊肚菌主要以黑麥、小麥等基質(zhì)培養(yǎng)固體菌種，液體菌種還處于研究階段，大田生產(chǎn)的實(shí)際應(yīng)用未見(jiàn)報(bào)道。羊肚菌菌絲體喜濕，好氧，液體菌種具有活力強(qiáng)、培養(yǎng)周期短、播種方便均勻、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

以小麥為主要基質(zhì)栽培羊肚菌固體菌種，要消耗大量小麥，形成羊肚菌生產(chǎn)與人競(jìng)糧的局面，不利于羊肚菌生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展。為此筆者進(jìn)行羊肚菌液體菌種應(yīng)用試驗(yàn)，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）供試菌株：供試菌株為G10，屬于發(fā)育學(xué)分類(lèi)的第七個(gè)黑色羊肚菌類(lèi)群種Morchella eximia[2]，其子囊果尖頂、個(gè)大、肉厚、菌柄基部較細(xì)，幼菇色黑，成菇柄白、個(gè)大、頂尖。

為了使G10菌株適應(yīng)漢中地區(qū)，采用80 W 紫外光干涉誘變，藍(lán)光、冷熱刺激菌核再分離技術(shù)馴化，經(jīng)馴化后G10在平板和試管培養(yǎng)基上菌核更加密集和旺盛（圖1），避免了基因缺失造成減產(chǎn)和同核體扭結(jié)，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性和抗逆性大大提高，對(duì)液體菌種的適應(yīng)性也更強(qiáng)（誘變方法另文介紹）。

圖1 誘變后G10菌株菌核爬壁力增強(qiáng)

（2）培養(yǎng)基配方：固體麥粒菌種配方為小麥65%，雜木屑17%，谷殼10%，玉米粉5%，石灰2%，石膏1%。液體發(fā)酵液配方（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為玉米粉10%，麩皮5%，磷酸二氫鉀0.2%，加水1 L。底料配方為谷殼90%，雜木屑10%，石灰2%。加水?dāng)嚢瑁琢虾?0%，pH 10。營(yíng)養(yǎng)袋的配方為小麥65%，谷殼10%，青鋼木木屑20%，玉米粉2%，棉籽殼1%，石灰2%。

（3）使用設(shè)備：全自動(dòng)多工位磁動(dòng)力發(fā)酵器，一檔速度，約220 r/min，最大通氣量，磁場(chǎng)800 KA/m。磁化率300 KA/m。不設(shè)靜置全程攪拌108 h。

負(fù)壓全自動(dòng)滅菌柜，壓力0.07～0.010 MPa，設(shè)定時(shí)長(zhǎng)8 h自動(dòng)關(guān)機(jī)、冷卻，料出鍋。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 制備菌種

1.2.1.1 固體麥粒菌種制備

小麥提前浸水泡脹，自然氣溫浸泡24 h，將木屑、谷殼、玉米粉、石灰、石膏干料倒入拌料機(jī)中先攪拌5 min，然后加水調(diào)至培養(yǎng)料含水量65%，再將浸泡好的小麥倒入拌好的粉末料中攪拌均勻，此時(shí)培養(yǎng)料的含水量因浸泡的小麥水分高，會(huì)提高至75%～80%，握料于掌心使勁捏可見(jiàn)有水滴下，此水分為最佳。采用15 cm×30 cm 的塑料袋裝料滅菌，常壓滅菌鍋滅菌12 h，高壓鍋滅菌3 h，試驗(yàn)采用負(fù)壓滅菌柜殺菌8 h，確保麥粒養(yǎng)分不被破壞。然后，料袋出鍋冷卻，接種。培養(yǎng)7 d 羊肚菌菌絲體即長(zhǎng)滿袋，此時(shí)一定注意培養(yǎng)室通風(fēng)低溫，待菌種袋上層菌絲體開(kāi)始轉(zhuǎn)變?yōu)楹稚珪r(shí)即可，確保固體菌種菌齡在15 d內(nèi)（最具活力時(shí)）播種。

1.2.1.2 液體菌種培養(yǎng)

球磨機(jī)打碎玉米粉、麩皮，按配方稱(chēng)取物料倒入發(fā)酵罐，再倒入水，通常20 L 的發(fā)酵罐加入2 kg玉米粉，1 kg 的麩皮粉末，0.04 kg 的磷酸二氫鉀，加水20 L，滅菌備用。無(wú)菌條件下直接接入4 cm 長(zhǎng)試管斜面菌種（無(wú)需接入發(fā)酵種子液或搖瓶液，因?yàn)檠蚨蔷木z體活力極強(qiáng)，在發(fā)酵液液面靜置培養(yǎng)8 h 可以長(zhǎng)1.5 cm 直徑的一塊菌絲團(tuán)），開(kāi)始攪拌培養(yǎng)，36 h 后當(dāng)發(fā)酵罐內(nèi)出現(xiàn)大量絮狀物時(shí)，降溫至13 ℃，低溫活化培養(yǎng)，108 h 后大量碎米狀菌絲球形成時(shí)，則可播種（圖2）。

圖2 發(fā)酵6 d成熟的20 L液體菌種

1.2.2 大田整畦、施肥

試驗(yàn)選擇沙壤土質(zhì)的撂荒地，地中有約600 hm2，試驗(yàn)田0.27 hm2，液體菌種、固體麥粒菌種各播種50%面積。11 月15 日開(kāi)始犁地耙田，開(kāi)畦寬1.2 m，長(zhǎng)20 m，每畦開(kāi)30 cm 寬，15 cm 深的溝，兩畦邊上插竹竿，搭設(shè)遮陽(yáng)網(wǎng)，整個(gè)試驗(yàn)播種地搭建平棚（簡(jiǎn)易棚）遮陽(yáng)。整畦后撒史丹利復(fù)合肥25 kg/667 m2，有機(jī)肥50 kg/667 m2。然后淺翻畦土，整平播種。

1.2.3 播種

1.2.3.1 撒底料及噴灑液體菌種

先在畦上用釘耙開(kāi)三條10 cm 寬，5 cm 深的淺槽（圖4），然后均勻撒一層底料在淺槽中作為液體菌種的黏著劑、保濕劑，再將液體菌種倒入農(nóng)用噴霧器內(nèi)（圖3），均勻噴灑在整個(gè)畦面（圖4），再用釘耙耙土覆蓋底料，土層要薄，以能看到少許底料為宜。液體菌種用量為48 m2播20 L。最后蓋黑膜，再立小拱棚，蓋白膜，保濕保溫發(fā)菌。

圖3 液體菌種倒入農(nóng)用噴霧器

圖4 底料上噴播液體菌種

圖5 播種液體菌種的畦面成熟羊肚菌子實(shí)體

圖6 播種液體菌種羊肚菌出菇狀態(tài)

1.2.3.2 播種固體菌種

同樣用釘耙在畦面開(kāi)三條溝。在平整的地邊用篷布鋪地，將固體麥粒菌種置于其上揉碎，然后，按125 kg/667 m2用種量，拌灑2%的磷酸二氫鉀水溶液，將揉碎的菌種拌濕拌勻后撒播于畦面的三條淺溝內(nèi)，用釘耙刨平畦面，土淺蓋菌種，再澆水保濕，蓋上打孔的黑色地膜，最后立弓棚，蓋白色地膜保溫發(fā)菌。兩種用種方式后續(xù)管理同步同法。

1.2.4 擺放外源營(yíng)養(yǎng)袋

營(yíng)養(yǎng)袋滅菌后，在袋側(cè)開(kāi)6 cm×4 cm 的長(zhǎng)方形口，將開(kāi)口對(duì)準(zhǔn)撒播底料的畦面，一畦放三排，每隔20 cm放置一袋。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種菌種播種后菌絲生長(zhǎng)觀察結(jié)果

2023年1月10日觀察播種液體菌種開(kāi)始有菌絲體蔓延生長(zhǎng)到割口后的營(yíng)養(yǎng)袋內(nèi)，但畦面卻看不到菌絲體、菌霜，顯微觀察營(yíng)養(yǎng)袋料，是羊肚菌菌絲體吃料生長(zhǎng)無(wú)疑。而播種固體菌種的畦面三條淺溝的覆土表面有生長(zhǎng)非常旺盛的菌絲體，且形成大量菌霜，出現(xiàn)兩種不同羊肚菌菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)。

截至2023年2月19日灑出菇水時(shí)，雖然播種液體菌種畦面能見(jiàn)到少量菌絲體，但仍未形成菌霜，然而畦面下6 cm 土層處有大量菌絲體，人行道及兩邊竹竿立柱間的土層下都有菌絲體生長(zhǎng)?？梢?jiàn)播種液體菌種土層內(nèi)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)旺盛，但為何畦面不出現(xiàn)菌絲體和菌霜，原因不明。

2.2 出菇結(jié)果

菌絲生長(zhǎng)觀察表明，播種液體菌種畦面無(wú)菌絲也不產(chǎn)生菌霜，但是，噴出菇水（2023 年2 月19 日）后（3月5日）畦面上出現(xiàn)大量黑芝麻樣物體，放大鏡下（10倍）可以觀察到密集的羊肚菌幼菇頂部，3～5 d即破土長(zhǎng)出黑灰色、柄棕灰色的羊肚菌幼菇，有別于常規(guī)羊肚菌生長(zhǎng)發(fā)育周期。

2023 年漢中氣候多變，不利羊肚菌生長(zhǎng)，當(dāng)年羊肚菌絕收面積很大，試驗(yàn)采用G10 誘變株無(wú)論是播種固體麥粒菌種還是液體菌種卻正常出菇，折算產(chǎn)量為播種固體菌種產(chǎn)量達(dá)600 kg/667 m2，播種液體菌種為400 kg/667 m2，采用固體麥粒菌種產(chǎn)量遠(yuǎn)高于液體菌種，其原因可能為固體麥粒菌種營(yíng)養(yǎng)豐富。

2.3 用種成本

大田栽培羊肚菌根據(jù)大田的土質(zhì)，固體麥粒菌種一般用菌種量125～150 kg/667 m2，液體菌種用種量280 L/667 m2。固體麥粒菌種的成本4 元/kg，每667 m2用種成本為500～600 元，而液體菌種成本僅為14元/20 L。

2.4 兩種類(lèi)型菌種栽培羊肚菌效益

試驗(yàn)結(jié)果采用固體麥粒菌種羊肚菌產(chǎn)量為600 kg/667 m2，鮮菇價(jià)格50元/kg計(jì)，產(chǎn)值30 000元，采用液體菌種羊肚菌產(chǎn)量400 kg/667 m2，鮮菇價(jià)格50 元/kg 計(jì)，產(chǎn)值20 000 元。采用兩種菌種栽培羊肚菌的投工、田地租賃費(fèi)、搭棚材料、塑料薄膜等基本一致，因此，采用固體麥粒菌種生產(chǎn)效益還是高于液體菌種。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，大田栽培羊肚菌采用液體菌種能正常出菇，且節(jié)省小麥用量，但其產(chǎn)量顯著低于傳統(tǒng)固體麥粒菌種。

液體菌種具有不怕水、活力強(qiáng)的生物學(xué)特性，對(duì)栽培羊肚菌有天然優(yōu)勢(shì)。目前，液體菌種大田栽培羊肚菌未見(jiàn)報(bào)道，對(duì)其研究處于起步階段，栽培模式設(shè)計(jì)尚不成熟，且存在一系列未攻克的技術(shù)難點(diǎn)。

試驗(yàn)為液體菌種應(yīng)用于大田栽培羊肚菌提供了參考。同時(shí)存在較多改進(jìn)之處，底料調(diào)配中碳源的添補(bǔ)、底料配方的營(yíng)養(yǎng)安全以及如何通過(guò)調(diào)控土壤碳氮比提高產(chǎn)量等都需進(jìn)一步探索研究。

[本文編輯] 王嘉萱