田 金,張喜紅,宋曉霞,鄭 巖,馬 莉

(鄭州人民醫(yī)院,河南 鄭州450053)

卵巢子宮內(nèi)膜異位癥(ovarian endometriosis,OEjavascript:void(0);)是由遺傳、環(huán)境、免疫功能等多種因素導(dǎo)致的婦科疾病,病因至今尚未明確,患者以繼發(fā)性痛經(jīng)為主要臨床特征,對女性的身心健康造成嚴(yán)重影響[1]。子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性卵巢癌(endometriosis associated ovarian cancer,EAOC)為OE惡變轉(zhuǎn)化而來,是一種特殊的卵巢癌,惡性程度較卵巢癌更低,但是EAOC也會影響女性正常的排卵過程,甚至?xí)斐刹辉衃2-3]。有研究指出,Wnt/β-catenin信號通路可以控制細(xì)胞生長發(fā)育,在多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用,但在EAOC中的作用機制尚不明確,猜測與Wnt/β-catenin通路蛋白的表達有關(guān)[4]。Wnt/β-catenin信號通路蛋白中,β-catenin為Wnt/β-catenin信號通路的開關(guān),基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteihase-9,MMP-9)能降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜,促進腫瘤侵襲[5-6]。本研究通過分析β-catenin和MMP-9在EAOC組織中的表達,旨在為EAOC的早期診療提供理論研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年10月至2018年10月在鄭州人民醫(yī)院就診的46例EAOC患者為研究對象,設(shè)為EAOC組,患者年齡23～69歲,平均(47.63±7.38)歲;FIGO分期[7]:Ⅰ期10例,Ⅱ期19例,Ⅲ期14例,Ⅳ期3例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合EAOC診斷標(biāo)準(zhǔn)[8],且經(jīng)病理學(xué)確診;(2)年齡18周歲以上。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)前3個月使用激素治療;(2)合并其他惡性腫瘤;(3)放置宮內(nèi)節(jié)育器;(4)子宮肌瘤;(5)妊娠或哺乳期婦女;(6)內(nèi)分泌或生殖道疾病;(7)子宮肌瘤剔除術(shù)史或剖宮產(chǎn);(8)精神類疾病。另取同期入院的34例OE患者為OE組,患者年齡23～67歲,平均(46.29±7.43)歲。兩組患者的基礎(chǔ)資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》要求,所有患者或者家屬知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

采集兩組患者的病變組織,使用免疫組化染色,觀察β-catenin和MMP-9在組織中的表達情況。β-catenin和MMP-9陽性為細(xì)胞質(zhì)或胞核中可以看到棕黃色顆粒,隨機取10個視野,用光鏡觀察,根據(jù)著色程度和陽性細(xì)胞百分比判定結(jié)果:著色程度,3分(棕黃色)、2分(中度黃色)、1分(淡黃色)、0分(陰性);陽性細(xì)胞百分比,3分(>50%)、2分(10%～50%)、1分(≤10%);著色程度和陽性細(xì)胞百分比得分的乘積為總分,總分≥3分為陽性,反之為陰性[3]。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)比較兩組患者組織中β-catenin和MMP-9表達水平;(2)分析EAOC組織中β-catenin和MMP-9表達水平與臨床病理特征的關(guān)系;(3)對患者進行長達36個月的隨訪,通過電話等形式了解患者的生存狀況,分析不同β-catenin和MMP-9表達水平與EAOC患者預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者組織中β-catenin和MMP-9表達水平比較

EAOC組β-catenin陽性表達率為63.04%,高于OE組的23.53%,MMP-9陽性表達率為69.57%,高于OE組的44.12%(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者組織中β-catenin和MMP-9表達水平比較(例,%)

2.2 EAOC組織中β-catenin和MMP-9表達水平與臨床病理特征的關(guān)系

β-catenin的陽性表達率在不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、鉑敏感性的EAOC組織中比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);MMP-9的陽性表達率在不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期EAOC組織中比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 EAOC組織中β-catenin和MMP-9表達水平與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 不同β-catenin和MMP-9表達水平與EAOC患者預(yù)后的關(guān)系

對46例EAOC患者進行隨訪,隨訪36個月,以患者EAOC復(fù)發(fā)死亡為觀察終點,死亡20例,3年總生存率是56.52%(26/46)。β-catenin陰、陽性患者3年生存率分別是68.97%(20/29)、35.29%(6/17),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.945,P=0.026),見圖1。MMP-9陰、陽性患者3年生存率分別是68.75%(22/32)、28.57%(4/14),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.398,P=0.011),見圖2。

圖1 不同β-catenin表達EAOC患者生存曲線圖

圖2 不同MMP-9表達EAOC患者生存曲線圖

3 討論

OE患者子宮內(nèi)膜組織生長異常,侵犯到卵巢,該病雖為良性病變,但同樣具有浸潤、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等特征[9]。有研究顯示,OE會有1.3%～1.9%的機率發(fā)生惡變[10]。但是,在臨床實際中,由于種種原因,病理醫(yī)師在確診患者為OE后,可能會忽視癌細(xì)胞取代OE病灶的影響,OE惡變真實的發(fā)生率會更高[11]。EAOC即OE惡變,患者發(fā)病年齡和病變期比其他類型的卵巢癌更早[12]。Wnt/β-catenin信號通路在多種惡性腫瘤中扮演重要角色,高俊彥[13]研究發(fā)現(xiàn),miR-139-5p的過度表達,能調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號通路,降低卵巢癌細(xì)胞的活性,從而削弱癌細(xì)胞增殖和遷徙的能力,抑制卵巢癌的進展。李委佳等[14]同樣發(fā)現(xiàn),NDRG4通過對Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)節(jié)作用,降低卵巢癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。但是,Wnt/β-catenin信號通路是否參與OE惡變尚未明確,了解Wnt/β-catenin信號通路與OE惡變的關(guān)系,有助于設(shè)計作用靶點的藥物,通過對Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)節(jié),起到抑制癌細(xì)胞增殖的作用,延長患者生存期。

β-catenin是Wnt/β-catenin信號通路的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,主要位于細(xì)胞膜,其水平的表達能反映該信號通路的激活狀態(tài),β-catenin為陽性表達,Wnt/β-catenin信號通路開啟,反之關(guān)閉[15]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),EAOC組β-catenin陽性表達率為63.04%,高于OE組的23.53%(P<0.05),提示β-catenin陽性表達水平的升高,可以促進OE惡變?yōu)镋AOC。在β-catenin參與OE惡變的過程中,Wnt/β-catenin信號通路可能發(fā)揮重要作用,β-catenin的陽性表達激活Wnt/β-catenin信號通路,通過調(diào)控上游Wnt、Frizzled和下游信號靶基因MMP-9 mRNA,促進癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。β-catenin的陽性表達率在不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、鉑敏感性的EAOC組織中比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),說明β-catenin水平的陽性表達可以誘導(dǎo)EAOC組織分化,促進癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲。此外,β-catenin在鉑耐藥EAOC組織中表達更高,提示β-catenin還與EAOC患者鉑耐藥的發(fā)生有關(guān),這對于臨床研究鉑耐藥的機制,以及避免鉑耐藥的藥物研制具有重要意義。

MMP-9為Wnt/β-catenin信號通路的下游靶基因,也是MMPs家族重要的蛋白水解酶,可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的大部分成分以及基底膜,為腫瘤的侵襲創(chuàng)造條件,因此,MMP-9的異常表達可以反映腫瘤侵襲的程度[16]。本研究中,MMP-9陽性表達率為69.57%,高于OE組的44.12%(P<0.05),證實MMP-9能參與OE惡變過程,且發(fā)揮著重要作用。MMP-9與EAOC組織的臨床病理特征分析顯示,MMP-9的陽性表達率在不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期EAOC組織中比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),說明MMP-9參與EAOC的進展,其水平的陽性表達可以刺激EAOC癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲。MMP-9的陽性表達破壞了腺體基底膜,可以促進EAOC癌細(xì)胞向周圍結(jié)締組織和腹膜侵襲,此外MMP-9還可以促進血管內(nèi)皮生長因子的表達,刺激血管的生成,有助于癌細(xì)胞增殖。

生存曲線顯示,β-catenin陰、陽性患者3年生存率分別是68.97%(20/29)、35.29%(6/17),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.945,P=0.026),MMP-9陰、陽性患者3年生存率分別是68.75%(22/32)、28.57%(4/14),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.398,P=0.011),說明β-catenin和MMP-9可以評估EAOC患者的預(yù)后,其水平的陽性表達表示預(yù)后不良。通過抑制β-catenin和MMP-9水平的陽性表達,阻斷Wnt/β-catenin信號通路,有可能阻止OE惡變。

綜上所述,Wnt/β-catenin信號通路與OE惡變密切相關(guān),β-catenin激活通絡(luò),促進下游靶基因MMP-9的表達,參與OE惡變過程,β-catenin和MMP-9這兩個指標(biāo)可以作為OE惡變的潛在檢測指標(biāo),其水平的陽性表達提示EAOC患者預(yù)后不良。