劉欣桐,金 鵬,張紅梅,李 寧,劉倩倩,陳玉丙*

(1．南方醫(yī)科大學深圳醫(yī)院 臨床檢驗醫(yī)學中心,廣東 深圳518000;2.吉林大學第二醫(yī)院 腫瘤放療科,吉林 長春130041;3.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 科學研究中心,吉林 長春130033)

肺癌是最常見癌癥,也是癌癥死亡的首要原因。發(fā)生局域轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移后5年生存率只有27.4%和4.2%,早期診斷對提高非小細胞肺癌(NSCLC)患者生存率十分重要[1]。低劑量CT檢查是成熟的早期篩查方法,然而有其局限性,如高假陽性率導致的額外有創(chuàng)檢查或手術(shù)[2],進行篩查受到的電離輻射有增加癌癥的風險[3]。

近年來,基于各類生物標志物的研究發(fā)展迅速,在早期肺癌篩查、肺內(nèi)結(jié)節(jié)良惡性判斷以及評估肺癌預(yù)后中占有重要地位。腫瘤相關(guān)抗原(TAAs)因其特殊的免疫原性,在腫瘤發(fā)生的早期階段可被免疫系統(tǒng)識別并產(chǎn)生自身抗體[4],這使得自身抗體有望成為腫瘤早期篩查的潛在生物標記物,在多種惡性腫瘤的研究中已顯示出早期診斷的價值[5-9]。本研究選取腫瘤相關(guān)抗原LAMR1和ENO1,應(yīng)用其肽抗原檢測并對比NSCLC患者和健康者之間相應(yīng)自身抗體水平的差異,并進一步探究在早期NSCLC中的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 基本信息

本研究收集了2014年9月至2016年12月于吉林大學第二醫(yī)院新診斷的未經(jīng)任何治療的220例非小細胞肺癌患者血清為肺癌組,均有明確的病理診斷和分期。同時收集了性別、年齡相匹配的220例健康體檢者的血清為對照組,見表1。

表1 入組人員基本信息表

1.2 ELISA檢測自身抗體

應(yīng)用免疫信息學數(shù)據(jù)庫(IMGT 數(shù)據(jù)庫、IMGT/HLA 數(shù)據(jù)庫、T 細胞表位查詢和預(yù)測數(shù)據(jù)庫、HLA 表位結(jié)合預(yù)測工具)和免疫學軟件設(shè)計并用固相合成法合成肽抗原(hAgs)。將重組抗原稀釋至10 μg/ml,每孔加樣100 μl,4℃過夜。棄去孔中液體,加洗液每孔200 μl,洗滌3次;將血清樣品、陰性對照品(BSA分析液)和質(zhì)控樣品(200名健康者的混合血漿樣品)在BSA緩沖液中1∶100稀釋,室溫(18～22℃) 下孵育1.5 h;洗滌3次后添加1∶20 000 倍稀釋的過氧化物酶標記的羊抗人IgG抗體,每孔加樣100 μl,室溫下孵育1 h;洗滌3次后,每孔加TMB顯色液100 μl,避光溫孵育20 min;每孔加50 μl終止液,孔中反應(yīng)液由藍色變?yōu)辄S色;5 min內(nèi)使用酶標儀在450 nm處測定各孔吸光度。所有檢測樣本均設(shè)置雙復(fù)孔,取雙復(fù)孔的平均OD值作為結(jié)果,使用特異結(jié)合指數(shù)(SBI)表示血漿中的抗體水平:SBI=(OD hAg-OD NC)/(OD cAg-OD NC)。cAg為基于山羊α-乳清蛋白蛋白質(zhì)序列設(shè)計的對照抗原,該蛋白質(zhì)序列不含任何類似于源自其人配對物序列的HLA-II表位,NC為陰性對照。

1.3 統(tǒng)計學分析

單項運動本身所具有的魅力足以吸引大眾的參與，形形色色的項目匯聚在一起時反而會顯得雜亂無章，凸顯不出小鎮(zhèn)的特色。聚焦于自身優(yōu)勢，把一個項目做到極致，讓大眾在體驗中真正感受到這項運動的韻味，培養(yǎng)運動鍛煉的興趣，這便是體育特色小鎮(zhèn)建造宗旨的關(guān)鍵所在。

2 結(jié)果

2.1 LAMR1、ENO1自身抗體在NSCLC組和健康對照組中的水平

NSCLC患者血清中LAMR1、ENO1自身抗體水平均高于健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義,P<0.05(表2)。

表2 NSCLC組和健康對照組血清中自身抗體的水平

2.2 LAMR1、ENO1自身抗體的檢測用于早期NSCLC篩查

近年來,許多學者研究了TAAs的自身抗體在肺癌檢測中的應(yīng)用。CHERNEVA的研究顯示α-crystallin自身抗體在癌癥患者組敏感性為62%,特異性為72%,并可有效區(qū)分有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[10]。Ma通過檢測215例NSCLC患者血清中Survivin自身抗體水平發(fā)現(xiàn)NSCLC中Survivin自身抗體陽性率為19.5%,特異性88.9%,與CEA聯(lián)合檢測后陽性率提高[11]。本研究應(yīng)用TAAs肽抗原檢測結(jié)果顯示NSCLC患者血清中LAMR1、ENO1自身抗體表達水平顯著上調(diào)(P<0.05)。

易文芝[5]對益生菌發(fā)酵技術(shù)進行研究，發(fā)現(xiàn)菌株在37℃進行培養(yǎng)時，可以得到較高活菌數(shù)。張巖等人[6]研究發(fā)現(xiàn)乳酸乳桿菌在4℃的條件下進行保存可以得到最佳活菌數(shù)，對延長乳酸乳桿菌活力提供了有力的支持。李志成等人[7]研究發(fā)現(xiàn)不同發(fā)酵溫度下所制得的凍干發(fā)酵劑活菌數(shù)均有很大不同，其中于30℃條件下進行發(fā)酵所制得的凍干發(fā)酵劑的活菌數(shù)最高。

表3 早期NSCLC患者血清中自身抗體水平

表4 LAMR1、ENO1自身抗體及其聯(lián)合檢測在早期NSCLC中的診斷性能

3 討論

128例早期(Ⅰ和Ⅱ期)NSCLC患者血清中的LAMR1、ENO1自身抗體水平與健康對照組對比,顯著上調(diào),P<0.05(表3)。LAMR1、ENO1肽抗原對早期NSCLC檢測的敏感性分別為70.3%(95%CI:61.5～77.9)、59.4%(95%CI:50.3～67.9),特異性分別為65.9%(95%CI:59.2～72.1)、81.8%(95%CI:75.9～86.6)。經(jīng)分析,對早期NSCLC 的LAMR1、ENO1自身抗體聯(lián)合檢測,敏感性和特異性分別為75.8% (95%CI:67.3～82.7)、58.2% (95%CI:51.3～64.7),聯(lián)合檢測的敏感性高于單獨檢測(表4)。

生態(tài)清潔小流域建設(shè)是統(tǒng)籌水利、市政、環(huán)保、林業(yè)、交通、國土等多部門的綜合性公益事業(yè)，是跨水利工程、環(huán)境科學、農(nóng)學、林學、生態(tài)學等多學科的艱巨任務(wù)。強化部門聯(lián)動工作機制、推動宏觀與微觀領(lǐng)域科學研究，是落實和發(fā)展生態(tài)清潔小流域建設(shè)的必備條件，也將不斷推動北運河流域水土資源的可持續(xù)利用、經(jīng)濟社會的可持續(xù)發(fā)展和生態(tài)環(huán)境的可持續(xù)維護。

在閩商的共識里，“七匹狼”不止是一個著名的服裝品牌，更象征著一個奮斗者的團體。因此，完全可以把它作為閩商團隊協(xié)作精神的集中寫照：狼是一種機靈敏捷、兇狠強悍的動物，它既善于單兵作戰(zhàn)，更長于群體攻擊。閩商正如狼一樣有著敏銳的市場嗅覺和商業(yè)意識，有著悍勇拼搏的膽略與技能，既具備個人單打獨斗的素質(zhì)，又講求團隊協(xié)作，展示出一種同舟共濟、團結(jié)合作的精神。

自身抗體在血液中持續(xù)存在并且相對穩(wěn)定,TAAs出現(xiàn)后,在TAAs能夠被檢測到之前它們即表現(xiàn)出相應(yīng)的有效生物學擴增,在第一臨床癥狀出現(xiàn)之前的能夠被CT篩查到的5年前,自身抗體便可被檢測到[12]。

YAO等[13]研究發(fā)現(xiàn)DKK1自身抗體與NSCLC高度相關(guān),ROC分析示自身抗體的靈敏度為62%,特異性為84%,檢測I期NSCLC的敏感性為64.3%。本研究中LAMR1、ENO1肽抗原對早期NSCLC檢測的敏感性分別為70.3%、59.4%,特異性分別為65.9%、81.8%。這表明在腫瘤發(fā)生的早期階段,人體免疫系統(tǒng)識別腫瘤抗原,進行非常有效的生物學擴增產(chǎn)生自身抗體[14],使得TAAs的自身抗體具有作為早期篩查的潛能。

腫瘤的生物學行為十分復(fù)雜,是一個涉及多基因、多通路變化的結(jié)果[15],使用單一TAAs的自身抗體檢測腫瘤的發(fā)生具有局限性,應(yīng)用聯(lián)合檢測可以使診斷的敏感性增加。MEGLIORINO等[16]使用ELISA檢測乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、食管癌等多種腫瘤患者c-myc、p53和survivin的自身抗體,敏感性分別為12.3%、11.5%和8.4%。將3種自身抗體聯(lián)合檢測時,敏感性增加至27.3%。本研究將LAMR1、ENO1自身抗體聯(lián)合檢測早期NSCLC,敏感性增加至75.8%。

綜上,本研究選取腫瘤相關(guān)抗原LAMR1、ENO1,應(yīng)用其肽抗原檢測NSCLC患者自身抗體,在一定程度上解決了應(yīng)用完整抗原[17-18]檢測自身抗體敏感性低的難題,也顯示出一定的早期診斷性能。但針對的NSCLC腫瘤相關(guān)抗原種類較多,篩選合理的抗原類別和組合是該類研究的難點。