戚婷婷，鄭 怡，趙靜婷

（1.蚌埠市中醫(yī)醫(yī)院，安徽 蚌埠 233000；2.安陽市人民醫(yī)院，河南 安陽 455000）

肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）缺乏細(xì)胞壁，可以和呼吸道纖維上皮毛細(xì)胞結(jié)合，快速增殖，然后引起肺炎支原體肺炎（MPP）［1-3］。MP 感染以毛細(xì)支氣管炎和間質(zhì)性肺炎病理變化為主［4］。臨床治療MP 感染的藥物耐藥性較差，臨床療效不佳，會(huì)產(chǎn)生腸胃不適等副作用［5］。比如使用羅紅霉素、阿奇霉素等抗生素治療MP 時(shí)，其發(fā)病率并未下降，因此在選擇用藥時(shí)要合理，及時(shí)注意畜禽的患病狀態(tài)［6］。TNF-α、IL-6、IL-10 等細(xì)胞因子在MP 感染過程中起著舉足輕重的作用［7-9］，并可促使炎性反應(yīng)擴(kuò)大化。紅景天苷（Salidroside，SAL）是從藏藥紅景天中提取的活性成分，具有提高免疫力及抗炎等功效，但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究［10］。Lan 等［11］研究發(fā)現(xiàn)紅景天苷對膿毒癥引起的肺組織損傷有顯著的治療作用。Qi 等［12］通過研究紅景天苷對LPS 誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的影響，發(fā)現(xiàn)紅景天苷可顯著減少炎癥細(xì)胞的浸潤，降低血清TNF-α 和IL-6 水平。李風(fēng)峰等［13］的研究發(fā)現(xiàn)，低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠經(jīng)紅景天苷干預(yù)治療后，肺組織病理損傷得到改善，肺組織中炎性因子TNF-α 和IL-6 蛋白水平下降。因此，本試驗(yàn)建立大鼠MP 模型，研究紅景天苷對大鼠肺組織損傷的影響，為臨床上紅景天苷治療重癥肺炎的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和分組

選擇36 只30 日齡、體重（150±10）g 的健康大鼠。隨機(jī)分為3 組，即對照組（注射生理鹽水）、模型組（前5 d 鼻腔內(nèi)接種50 μL 1×1010CCU/L 菌液，每天1 次，）和紅景天苷干預(yù)組（前5 d 鼻腔內(nèi)接種50 μL 1×1010CCU/L 菌液，每天1 次，第6 天腹腔注射等容積40 mg/kg 的紅景天苷），試驗(yàn)周期6 d。飼養(yǎng)溫度21～27 ℃，濕度40%～70%，自由攝食和飲水。

1.2 主要儀器與試劑

微量電子天平（型號(hào)AE260），購自Deltalange 公司；OLYMPUS 光學(xué)顯微鏡（型號(hào)CX41），購自日本奧林巴斯株式會(huì)社；RM2135 切片機(jī)（型號(hào)Leica），購自上海精學(xué)科學(xué)儀器有限公司；IL-10、IL-6、TNF-α 含量檢測試劑盒均購自武漢艾美捷科技有限公司。

1.3 肺組織干/濕比檢測

使用電子天平稱量大鼠右前葉肺組織的濕重，烘箱內(nèi)烘干后再次稱量大鼠肺組織的干重。計(jì)算出肺干/濕比（肺干重/肺濕重×100），將肺組織固定于10%的中性福爾馬林及液氮中。

1.4 ELISA 試驗(yàn)檢測紅景天苷對肺炎大鼠相關(guān)炎癥因子水平的影響

取各組大鼠2 mL 尾部靜脈血，離心取上清液，并按照試劑盒說明檢測IL-6、IL-10 和TNF-α 水平。

1.5 HE 染色觀察各組大鼠肺組織病理形態(tài)

取各組大鼠肺組織于多聚甲醛溶液中固定24 h。隨后取肺組織石蠟組織，將固定好的大鼠肺組織從福爾馬林固定液中取出，經(jīng)過梯度脫水、水楊酸甲酯透明后，置于65 ℃烘箱內(nèi)浸蠟、包埋、制作石蠟切片（切片、展片、撈片、烘片）；之后經(jīng)脫蠟、復(fù)水、染色、脫水、透明等過程制作HE 染色切片，并將封好的切片用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察、拍照。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，其中，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組大鼠肺組織干/濕比比較

由表1 可知，與對照組比較，模型組大鼠肺組織干/濕比顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，紅景天苷干預(yù)組大鼠肺組織干/濕比顯著降低（P＜0.05）。對照組與紅景天苷干預(yù)組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表1 各組大鼠肺干/濕比比較（n=12）

2.2 紅景天苷對肺炎大鼠炎癥水平的影響

TNF-α、IL-6、IL-10 等細(xì)胞因子在MP 感染過程發(fā)揮重要作用，并可促使炎性反應(yīng)擴(kuò)大。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測三者含量發(fā)現(xiàn)，各組大鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-10、TNF-α 含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由表2 可知，與對照組比較，模型組大鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-10、TNF-α含量均增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，紅景天苷干預(yù)組中IL-6、IL-10、TNF-α 含量均減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各組血清IL-6、IL-10、TNF-α 水平比較（單位：ng/L）

2.3 大鼠肺組織病理學(xué)變化

HE 染色觀察發(fā)現(xiàn)，與對照組大鼠相比，模型組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺間質(zhì)破壞嚴(yán)重，并可見大量淋巴細(xì)胞浸潤，支氣管周圍肺泡間隔可見纖維增生，間隔增寬。紅景天苷干預(yù)組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)相對完整，全肺組織肺泡腔無滲出現(xiàn)象（圖1）。

圖1 各組大鼠肺組織病理學(xué)觀察（HE 染色，×100）

3 小結(jié)與討論

紅景天苷是紅景天全草或根莖提取的主要生物活性成分，研究表明紅景天苷具有抗炎、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)等功效，因此被廣泛應(yīng)用于中藥和保健品領(lǐng)域［10］。李風(fēng)峰等［13］的研究發(fā)現(xiàn)，紅景天苷具有抑制炎癥的功能，對大鼠肺臟組織炎癥有改善作用。此外，紅景天苷還可以改善哮喘小鼠的肺功能和降低炎性因子水平。吳明亮等［14］的研究發(fā)現(xiàn)，哮喘小鼠經(jīng)過紅景天苷處理以后，肺組織損傷程度明顯改善，肺組織中炎性因子水平降低。在癌癥治療方面，紅景天苷可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長和擴(kuò)散，誘導(dǎo)其凋亡，同時(shí)還可以增強(qiáng)放療和化療的效果，減少放療和化療的副作用。在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療方面，紅景天苷可以保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)免受損傷，改善認(rèn)知和行為功能，緩解老年癡呆癥的癥狀。除了治療肺炎和癌癥等疾病外，紅景天苷還可以提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，預(yù)防感冒和其他疾病的發(fā)生?？傊t景天苷作為一種天然的活性物質(zhì)，具有廣泛的藥理作用和臨床應(yīng)用前景，未來還有望在更多領(lǐng)域得到應(yīng)用［10，14］。MP 是介于細(xì)菌和病毒之間的最小病原微生物［15］，是引起人類支原體肺炎的病原體，感染后會(huì)對肺外器官造成嚴(yán)重?fù)p害，但具體致病機(jī)理尚不清楚。研究紅景天苷對治療MP 感染具有重要意義。本研究初步發(fā)現(xiàn)感染MP 后大鼠體重下降，同時(shí)感染后大鼠肺干/濕比升高，表明MP 感染會(huì)對大鼠肺組織有相應(yīng)的損傷。

本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，感染MP 的大鼠肺干/濕比明顯上升，可能是由于MP 大鼠肺臟有滲出物和炎性細(xì)胞浸潤所導(dǎo)致，經(jīng)過紅景天苷干預(yù)后肺干/濕比降低，表明紅景天苷能有效改善肺炎大鼠的肺功能。此外，給予紅景天苷治療后的肺炎大鼠的病理形態(tài)有所改善，炎性細(xì)胞浸潤明顯降低，全肺組織肺泡腔無滲出現(xiàn)象。李俊梅等［16］、尹延鳳等［17］的研究發(fā)現(xiàn)，過度炎性反應(yīng)在MP 感染中起著重要的作用，而調(diào)節(jié)血清細(xì)胞炎癥因子水平可以減少炎癥的發(fā)生，減輕機(jī)體的免疫損傷。白細(xì)胞介素-6 是與免疫應(yīng)答密切相關(guān)的炎癥因子，也是判斷感染炎癥損傷程度的指標(biāo)之一［18］。本研究結(jié)果顯示，感染MP 大鼠血清IL-6 水平上調(diào)，但經(jīng)40 mg/kg 紅景天苷腹腔注射后，血清IL-6 水平下調(diào)。白細(xì)胞介素10 是一種負(fù)性調(diào)節(jié)因子，主要機(jī)制是調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等的分化、增殖［19］。本研究結(jié)果顯示，感染MP 后，大鼠血清IL-10 水平提高，但對MP 感染大鼠用40 mg/kg 紅景天苷腹腔注射治療后，血清IL-10 水平降低。TNF-α 是評價(jià)炎癥的關(guān)鍵炎性介質(zhì)［20］。本研究結(jié)果表明，感染MP 后，大鼠血清TNF-α 水平顯著升高，經(jīng)40 mg/kg 紅景天苷作用后，大鼠血清TNF-α 水平下降，但影響機(jī)理還需進(jìn)一步研究證明。由此可見，MP 感染可影響炎性細(xì)胞因子水平，從而引發(fā)機(jī)體炎癥反應(yīng)。

綜上，紅景天苷可能是治療重癥肺炎的有效藥物，對重癥肺炎的大鼠血?dú)庵笜?biāo)有改善作用，并對大鼠肺炎相關(guān)炎癥因子的升高有抑制作用，對肺組織炎癥介質(zhì)的釋放和炎性細(xì)胞數(shù)量有降低作用，為臨床應(yīng)用紅景天苷治療重癥肺炎提供了相關(guān)理論依據(jù)。