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        紅景天苷對(duì)肺炎支原體感染大鼠肺組織損傷的干預(yù)作用

        2023-11-23 15:10:56戚婷婷趙靜婷
        湖北畜牧獸醫(yī) 2023年10期
        關(guān)鍵詞:紅景天肺泡炎性

        戚婷婷,鄭 怡,趙靜婷

        (1.蚌埠市中醫(yī)醫(yī)院,安徽 蚌埠 233000;2.安陽(yáng)市人民醫(yī)院,河南 安陽(yáng) 455000)

        肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,MP)缺乏細(xì)胞壁,可以和呼吸道纖維上皮毛細(xì)胞結(jié)合,快速增殖,然后引起肺炎支原體肺炎(MPP)[1-3]。MP 感染以毛細(xì)支氣管炎和間質(zhì)性肺炎病理變化為主[4]。臨床治療MP 感染的藥物耐藥性較差,臨床療效不佳,會(huì)產(chǎn)生腸胃不適等副作用[5]。比如使用羅紅霉素、阿奇霉素等抗生素治療MP 時(shí),其發(fā)病率并未下降,因此在選擇用藥時(shí)要合理,及時(shí)注意畜禽的患病狀態(tài)[6]。TNF-α、IL-6、IL-10 等細(xì)胞因子在MP 感染過(guò)程中起著舉足輕重的作用[7-9],并可促使炎性反應(yīng)擴(kuò)大化。紅景天苷(Salidroside,SAL)是從藏藥紅景天中提取的活性成分,具有提高免疫力及抗炎等功效,但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究[10]。Lan 等[11]研究發(fā)現(xiàn)紅景天苷對(duì)膿毒癥引起的肺組織損傷有顯著的治療作用。Qi 等[12]通過(guò)研究紅景天苷對(duì)LPS 誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的影響,發(fā)現(xiàn)紅景天苷可顯著減少炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn),降低血清TNF-α 和IL-6 水平。李風(fēng)峰等[13]的研究發(fā)現(xiàn),低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠經(jīng)紅景天苷干預(yù)治療后,肺組織病理?yè)p傷得到改善,肺組織中炎性因子TNF-α 和IL-6 蛋白水平下降。因此,本試驗(yàn)建立大鼠MP 模型,研究紅景天苷對(duì)大鼠肺組織損傷的影響,為臨床上紅景天苷治療重癥肺炎的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和分組

        選擇36 只30 日齡、體重(150±10)g 的健康大鼠。隨機(jī)分為3 組,即對(duì)照組(注射生理鹽水)、模型組(前5 d 鼻腔內(nèi)接種50 μL 1×1010CCU/L 菌液,每天1 次,)和紅景天苷干預(yù)組(前5 d 鼻腔內(nèi)接種50 μL 1×1010CCU/L 菌液,每天1 次,第6 天腹腔注射等容積40 mg/kg 的紅景天苷),試驗(yàn)周期6 d。飼養(yǎng)溫度21~27 ℃,濕度40%~70%,自由攝食和飲水。

        1.2 主要儀器與試劑

        微量電子天平(型號(hào)AE260),購(gòu)自Deltalange 公司;OLYMPUS 光學(xué)顯微鏡(型號(hào)CX41),購(gòu)自日本奧林巴斯株式會(huì)社;RM2135 切片機(jī)(型號(hào)Leica),購(gòu)自上海精學(xué)科學(xué)儀器有限公司;IL-10、IL-6、TNF-α 含量檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自武漢艾美捷科技有限公司。

        1.3 肺組織干/濕比檢測(cè)

        使用電子天平稱量大鼠右前葉肺組織的濕重,烘箱內(nèi)烘干后再次稱量大鼠肺組織的干重。計(jì)算出肺干/濕比(肺干重/肺濕重×100),將肺組織固定于10%的中性福爾馬林及液氮中。

        1.4 ELISA 試驗(yàn)檢測(cè)紅景天苷對(duì)肺炎大鼠相關(guān)炎癥因子水平的影響

        取各組大鼠2 mL 尾部靜脈血,離心取上清液,并按照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)IL-6、IL-10 和TNF-α 水平。

        1.5 HE 染色觀察各組大鼠肺組織病理形態(tài)

        取各組大鼠肺組織于多聚甲醛溶液中固定24 h。隨后取肺組織石蠟組織,將固定好的大鼠肺組織從福爾馬林固定液中取出,經(jīng)過(guò)梯度脫水、水楊酸甲酯透明后,置于65 ℃烘箱內(nèi)浸蠟、包埋、制作石蠟切片(切片、展片、撈片、烘片);之后經(jīng)脫蠟、復(fù)水、染色、脫水、透明等過(guò)程制作HE 染色切片,并將封好的切片用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察、拍照。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析,試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,其中,P<0.05 表示差異顯著。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 各組大鼠肺組織干/濕比比較

        由表1 可知,與對(duì)照組比較,模型組大鼠肺組織干/濕比顯著升高(P<0.05)。與模型組比較,紅景天苷干預(yù)組大鼠肺組織干/濕比顯著降低(P<0.05)。對(duì)照組與紅景天苷干預(yù)組相比差異不顯著(P>0.05)。

        表1 各組大鼠肺干/濕比比較(n=12)

        2.2 紅景天苷對(duì)肺炎大鼠炎癥水平的影響

        TNF-α、IL-6、IL-10 等細(xì)胞因子在MP 感染過(guò)程發(fā)揮重要作用,并可促使炎性反應(yīng)擴(kuò)大。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)三者含量發(fā)現(xiàn),各組大鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-10、TNF-α 含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由表2 可知,與對(duì)照組比較,模型組大鼠肺泡灌洗液中IL-6、IL-10、TNF-α含量均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較,紅景天苷干預(yù)組中IL-6、IL-10、TNF-α 含量均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        表2 各組血清IL-6、IL-10、TNF-α 水平比較(單位:ng/L)

        2.3 大鼠肺組織病理學(xué)變化

        HE 染色觀察發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組大鼠相比,模型組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)破壞,肺間質(zhì)破壞嚴(yán)重,并可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),支氣管周圍肺泡間隔可見(jiàn)纖維增生,間隔增寬。紅景天苷干預(yù)組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)相對(duì)完整,全肺組織肺泡腔無(wú)滲出現(xiàn)象(圖1)。

        圖1 各組大鼠肺組織病理學(xué)觀察(HE 染色,×100)

        3 小結(jié)與討論

        紅景天苷是紅景天全草或根莖提取的主要生物活性成分,研究表明紅景天苷具有抗炎、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)等功效,因此被廣泛應(yīng)用于中藥和保健品領(lǐng)域[10]。李風(fēng)峰等[13]的研究發(fā)現(xiàn),紅景天苷具有抑制炎癥的功能,對(duì)大鼠肺臟組織炎癥有改善作用。此外,紅景天苷還可以改善哮喘小鼠的肺功能和降低炎性因子水平。吳明亮等[14]的研究發(fā)現(xiàn),哮喘小鼠經(jīng)過(guò)紅景天苷處理以后,肺組織損傷程度明顯改善,肺組織中炎性因子水平降低。在癌癥治療方面,紅景天苷可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散,誘導(dǎo)其凋亡,同時(shí)還可以增強(qiáng)放療和化療的效果,減少放療和化療的副作用。在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療方面,紅景天苷可以保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)免受損傷,改善認(rèn)知和行為功能,緩解老年癡呆癥的癥狀。除了治療肺炎和癌癥等疾病外,紅景天苷還可以提高機(jī)體免疫力,增強(qiáng)機(jī)體抵抗力,預(yù)防感冒和其他疾病的發(fā)生??傊?,紅景天苷作為一種天然的活性物質(zhì),具有廣泛的藥理作用和臨床應(yīng)用前景,未來(lái)還有望在更多領(lǐng)域得到應(yīng)用[10,14]。MP 是介于細(xì)菌和病毒之間的最小病原微生物[15],是引起人類支原體肺炎的病原體,感染后會(huì)對(duì)肺外器官造成嚴(yán)重?fù)p害,但具體致病機(jī)理尚不清楚。研究紅景天苷對(duì)治療MP 感染具有重要意義。本研究初步發(fā)現(xiàn)感染MP 后大鼠體重下降,同時(shí)感染后大鼠肺干/濕比升高,表明MP 感染會(huì)對(duì)大鼠肺組織有相應(yīng)的損傷。

        本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),感染MP 的大鼠肺干/濕比明顯上升,可能是由于MP 大鼠肺臟有滲出物和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)所導(dǎo)致,經(jīng)過(guò)紅景天苷干預(yù)后肺干/濕比降低,表明紅景天苷能有效改善肺炎大鼠的肺功能。此外,給予紅景天苷治療后的肺炎大鼠的病理形態(tài)有所改善,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯降低,全肺組織肺泡腔無(wú)滲出現(xiàn)象。李俊梅等[16]、尹延鳳等[17]的研究發(fā)現(xiàn),過(guò)度炎性反應(yīng)在MP 感染中起著重要的作用,而調(diào)節(jié)血清細(xì)胞炎癥因子水平可以減少炎癥的發(fā)生,減輕機(jī)體的免疫損傷。白細(xì)胞介素-6 是與免疫應(yīng)答密切相關(guān)的炎癥因子,也是判斷感染炎癥損傷程度的指標(biāo)之一[18]。本研究結(jié)果顯示,感染MP 大鼠血清IL-6 水平上調(diào),但經(jīng)40 mg/kg 紅景天苷腹腔注射后,血清IL-6 水平下調(diào)。白細(xì)胞介素10 是一種負(fù)性調(diào)節(jié)因子,主要機(jī)制是調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等的分化、增殖[19]。本研究結(jié)果顯示,感染MP 后,大鼠血清IL-10 水平提高,但對(duì)MP 感染大鼠用40 mg/kg 紅景天苷腹腔注射治療后,血清IL-10 水平降低。TNF-α 是評(píng)價(jià)炎癥的關(guān)鍵炎性介質(zhì)[20]。本研究結(jié)果表明,感染MP 后,大鼠血清TNF-α 水平顯著升高,經(jīng)40 mg/kg 紅景天苷作用后,大鼠血清TNF-α 水平下降,但影響機(jī)理還需進(jìn)一步研究證明。由此可見(jiàn),MP 感染可影響炎性細(xì)胞因子水平,從而引發(fā)機(jī)體炎癥反應(yīng)。

        綜上,紅景天苷可能是治療重癥肺炎的有效藥物,對(duì)重癥肺炎的大鼠血?dú)庵笜?biāo)有改善作用,并對(duì)大鼠肺炎相關(guān)炎癥因子的升高有抑制作用,對(duì)肺組織炎癥介質(zhì)的釋放和炎性細(xì)胞數(shù)量有降低作用,為臨床應(yīng)用紅景天苷治療重癥肺炎提供了相關(guān)理論依據(jù)。

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