朱彥賓，巴桑旺堆，尼 瑪，索朗曲吉，馬金英，旦增曲珍，平措占堆，周 雨

（西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，拉薩 850009）

微生物（細(xì)菌或真菌）發(fā)酵的有酶活性蛋白質(zhì)產(chǎn)物，是綠色、安全的新型飼料添加劑。酶制劑能夠有效促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料利用率和降低排泄廢物中氮、磷的排泄量，因此在畜禽生產(chǎn)中被廣泛使用［1］。高精料飼喂會(huì)影響家畜纖維素酶的活性［2-4］。添加外源性酶制劑能夠顯著改善牛瘤胃降解纖維素的能力，提高飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和畜禽的吸收能力［5，6］。纖維素酶和反芻復(fù)合酶均可以改善反芻動(dòng)物瘤胃微生物區(qū)系，對(duì)提高植物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率和利用率具有積極意義。本研究分別以纖維素酶和反芻復(fù)合酶作為酶制劑進(jìn)行奶牛飼喂試驗(yàn)，考察不同添加比例酶制劑對(duì)高原地區(qū)奶牛的生長(zhǎng)性能和生化指標(biāo)的影響，以期為飼用酶制劑在高原奶牛的臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

拉薩市凈土產(chǎn)業(yè)投資開發(fā)集團(tuán)有限公司城關(guān)區(qū)奶牛場(chǎng)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物選擇及分組

選擇正常、健康無(wú)病、初始體重相近、組間差異不顯著的荷斯坦奶牛（高原奶牛）32 頭，衛(wèi)生、防疫措施按牛場(chǎng)常規(guī)程序進(jìn)行，奶牛自由飲水。

1.2.1 纖維素酶試驗(yàn) 采用單因素對(duì)比試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將16 頭高原奶牛隨機(jī)分為4 組，分別為對(duì)照組（CK）、纖維素酶低劑量組（T1，纖維素酶添加濃度為5 g/kg）、纖維素酶中劑量組（T2，纖維素酶添加濃度為10 g/kg）、纖維素酶高劑量組（T3，纖維素酶添加濃度為15 g/kg）。每組試驗(yàn)重復(fù)4次，試驗(yàn)期共52 d，其中預(yù)試期為7 d，正式期為45 d。

1.2.2 反芻復(fù)合酶試驗(yàn) 采用單因素對(duì)比試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將16 頭高原奶牛隨機(jī)分為4 組，分別為對(duì)照組（CK1）、反芻復(fù)合酶低劑量組（F1，反芻復(fù)合酶添加濃度為10 g/kg）、反芻復(fù)合酶中劑量組（F2，反芻復(fù)合酶添加濃度為20 g/kg）、反芻復(fù)合酶高劑量組（F3，反芻復(fù)合酶添加濃度為30 g/kg）。每組試驗(yàn)重復(fù)4次，試驗(yàn)期共52 d，其中預(yù)試期為7 d，正式期為45 d。

1.3 樣品采集

飼喂前每頭奶牛靜脈采血10 mL，分別裝入2 個(gè)10 mL 的離心管中（預(yù)先用去離子水處理），常溫下迅速離心，吸取上清液以獲得血清，血清分裝存于2.5 mL 的離心管中，置于-20 ℃冰箱保存。

1.4 試驗(yàn)試劑與儀器

1.4.1 試驗(yàn)試劑 葡萄糖、鄰甲苯胺、膽固醇、濃硫酸（含量為98%，化學(xué)純）、濃磷酸（含量為87%，化學(xué)純）等，均購(gòu)于上海尚寶生物科技有限公司。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：1.00 g 優(yōu)級(jí)純葡萄糖溶于1 000 mL蒸餾水中搖勻，制成濃度為1.00 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

鄰甲苯胺試劑的配制：稱取硫脲1.5 g 溶于750 mL 冰醋酸中，加鄰甲苯胺150 mL 及飽和硼酸40 mL，混勻后加冰醋酸至1 000 mL，得到鄰甲苯胺試劑。

膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液的配制：稱取80 mg 膽固醇溶于無(wú)水乙醇，定容至100 mL，配制成標(biāo)準(zhǔn)貯存液。標(biāo)準(zhǔn)貯存液用無(wú)水乙醇稀釋10 倍，得到膽固醇標(biāo)淮溶液。

膽固醇顯色劑的配制：稱取六水三氯化鐵2.5 g，溶于濃磷酸內(nèi)，定容至100 mL，貯存于棕色瓶中，配成鐵貯存液。取鐵貯存液8 mL，加濃硫酸至100 mL，得到膽固醇顯色劑（室溫保存6～8 周）。

1.4.2 主要儀器HWS-24 型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、752N 型紫外分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）、F-T120 型乳品分析儀（丹麥福斯有限公司）等。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 血糖的測(cè)定取3 支干凈試管分別標(biāo)記為空白、標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)定管。分別依次加入蒸餾水、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和高原奶牛血清各0.1 mL，然后加入鄰甲苯胺試劑5.0 mL，混合均勻后置沸水中加熱15 min，冷水冷卻，在波長(zhǎng)630 nm 處用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。每100 mL 血清中的葡萄糖的濃度計(jì)算式如下。

1.5.2 血脂的測(cè)定 取3 支干凈試管分別標(biāo)記為空白、標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)定管。在標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管中分別加入膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液和血清各0.2 mL，再在3 支試管中分別加入1.0 mL 的濃硫酸，混合均勻后置沸水中加熱10 min，冷水冷卻，各管分別加入4.0 mL 顯色劑，用玻璃棒充分?jǐn)噭?。室溫靜置20 min，在波長(zhǎng)525 nm處進(jìn)行測(cè)定。每100 mL 血清中的血清總脂含量計(jì)算式如下。

1.5.3 乳中尿素氮的測(cè)定 采用丹麥乳品分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 27.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s法多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加纖維素酶制劑對(duì)高原奶牛生產(chǎn)性能和生化指標(biāo)的影響

由表1 可知，在高原奶牛基礎(chǔ)日糧中添加纖維素酶后，T1 至T3 產(chǎn)奶量均高于CK，且T2 產(chǎn)奶量顯著高于CK（P＜0.05），產(chǎn)奶量提高了5.2%。分析乳脂率發(fā)現(xiàn)，T1 乳脂率顯著高于其他處理（P＜0.05）。添加不同劑量的纖維素酶后，T1 至T3 乳蛋白率均顯著提高（P＜0.05），但乳中干物質(zhì)不同處理間差異不顯著（P≥0.05）。與CK 相比，T2 乳中尿素氮含量顯著提高（P＜0.05），T1 至T3 血糖濃度均提高，其中，T2 血糖濃度顯著高于CK（P＜0.05）。T1 血脂含量與CK 差異顯著（P＜0.05），T1 至T3 膽固醇含量均顯著高于CK（P＜0.05），且T2 含量最高。總體而言，添加纖維素酶提高了高原奶牛的產(chǎn)奶量，牛乳中的乳脂率、乳蛋白率、乳中干物質(zhì)以及奶牛的血糖、血脂及膽固醇有變化。

表1 纖維素酶對(duì)高原奶牛生產(chǎn)性能和生化指標(biāo)的影響

2.2 添加反芻復(fù)合酶制劑對(duì)高原奶牛生產(chǎn)性能和生化指標(biāo)的影響

由表2 可知，F(xiàn)1 至F3 產(chǎn)奶量均顯著高于CK1，說(shuō)明在高原奶牛基礎(chǔ)日糧中添加反芻復(fù)合酶，可以顯著提高產(chǎn)奶量，其中，F(xiàn)2 產(chǎn)奶量最高（P＜0.05），比CK1 提高了6.4%。分析乳脂率發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)1 乳脂率顯著提高（P＜0.05）；分析乳蛋白率發(fā)現(xiàn)，與CK1 相比，僅F1 乳蛋白率顯著提高（P＜0.05），其他試驗(yàn)組無(wú)顯著變化；試驗(yàn)各組乳中干物質(zhì)與CK1 之間差異均不顯著（P≥0.05）；分析乳中尿素氮發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)1、F3 顯著低于CK1（P＜0.05），而F2 則高于CK1，但差異不顯著（P≥0.05）；F2 血糖濃度顯著高于CK1（P＜0.05），F(xiàn)1 血脂與CK1 差異顯著（P＜0.05），F(xiàn)2 血液膽固醇含量顯著低于CK1（P＜0.05）?？傮w而言，添加反芻復(fù)合酶制劑提高了高原奶牛的產(chǎn)奶量，牛乳中的乳脂率、乳蛋白率、乳中干物質(zhì)以及奶牛的血糖、血脂及膽固醇有變化。

表2 反芻復(fù)合酶對(duì)高原奶牛生產(chǎn)性能和生化指標(biāo)的影響

3 小結(jié)與討論

基礎(chǔ)日糧中添加纖維素酶或反芻復(fù)合酶，均可以提高高原奶牛的產(chǎn)奶量，并對(duì)乳成分有一定影響。

3.1 日糧中添加纖維素酶和反芻復(fù)合酶對(duì)高原奶牛生產(chǎn)性能的影響

3.1.1 纖維素酶和反芻復(fù)合酶對(duì)高原奶牛產(chǎn)奶量的影響 奶牛的產(chǎn)奶量不僅受飼養(yǎng)模式影響，還與奶牛品種、健康狀況、飼養(yǎng)環(huán)境和生產(chǎn)周期等多方面因素相關(guān)［7］。在高海拔地區(qū)，環(huán)境是影響奶牛產(chǎn)奶量的關(guān)鍵因素。外源性纖維分解酶產(chǎn)品可以提高泌乳早期至中期奶牛的產(chǎn)奶效率［8，9］。陳雅坤等［10］在奶牛日糧中添加不同水平的復(fù)合酶制劑探究其對(duì)瘤胃發(fā)酵及奶牛生產(chǎn)性能的影響，發(fā)現(xiàn)復(fù)合酶制劑能夠有效提高瘤胃發(fā)酵效率，從而提高其生產(chǎn)性能，與本研究的不論是添加纖維素酶還是反芻復(fù)合酶，奶牛的產(chǎn)奶量均提高的結(jié)論一致。其原因可能是纖維素酶和反芻復(fù)合酶分解粗飼料中的纖維素、半纖維素，使飼料內(nèi)部更多的植物細(xì)胞釋放出來(lái)，加強(qiáng)奶牛對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收［11］。

3.1.2 纖維素酶和反芻復(fù)合酶對(duì)牛乳中的乳脂率、乳蛋白率、乳中干物質(zhì)和乳中尿素氮的影響 謝小峰等［12］發(fā)現(xiàn)日糧中添加復(fù)合酶制劑對(duì)奶牛乳蛋白率基本無(wú)顯著影響，與本研究所得結(jié)果基本一致。本研究表明，在高原奶牛的飼料中添加纖維素酶和反芻復(fù)合酶，對(duì)牛乳中的乳蛋白率、乳中干物質(zhì)和乳脂率及乳中尿素氮有影響。但添加后產(chǎn)奶量有所提高，因此總?cè)橹⑷榈鞍?、乳中干物質(zhì)和乳中尿素氮的產(chǎn)量均增加［13］。

3.2 纖維素酶和反芻復(fù)合酶對(duì)高原奶牛血糖、血脂和膽固醇含量的影響

動(dòng)物血清中的葡萄糖含量是其機(jī)體對(duì)糖的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)的指標(biāo)，正常機(jī)體血清中的葡萄糖含量為恒定值［14］。在高原奶牛的基礎(chǔ)日糧中添加纖維素酶和反芻復(fù)合酶，奶牛的血糖、血脂和膽固醇含量在試驗(yàn)前后均有變化?？梢?jiàn)動(dòng)物會(huì)通過(guò)代謝途徑來(lái)維持體內(nèi)環(huán)境的平衡，即使外界環(huán)境發(fā)生變化，體內(nèi)環(huán)境也會(huì)維持平衡狀態(tài)。平衡狀態(tài)被打破，可能意味著機(jī)體將會(huì)發(fā)生病變或者其他不正常的生理現(xiàn)象，從而影響動(dòng)物正常的生長(zhǎng)和生產(chǎn)［6］。