鄧青，程蔚蔚，陳嵐

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南 洛陽(yáng) 471003

胃癌為常見(jiàn)消化道惡性腫瘤，發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，早期癥狀隱匿而被忽視，早期診斷率較低[1-2]。該腫瘤發(fā)病率與死亡率均較高，近年來(lái)發(fā)病趨于年輕化[3]，對(duì)患者生命造成一定威脅，引起臨床高度重視，故尋找高效的的生物學(xué)標(biāo)志物以提高胃癌早期檢出率為臨床研究熱點(diǎn)。隨著免疫學(xué)與分子生物學(xué)發(fā)展，腫瘤標(biāo)志物在惡性腫瘤診斷鑒別、預(yù)后評(píng)估方面發(fā)揮重要作用。S100 鈣結(jié)合蛋白(S100P)為S100 蛋白家族成員，具有典型EF手型結(jié)構(gòu)。研究顯示，S100P在多種腫瘤中異常表達(dá)，且多呈高表達(dá)，與患者預(yù)后有關(guān)[4-5]。磷脂酰肌醇蛋白多糖3(glypican-3，GPC3)為細(xì)胞膜表面蛋白，其氨基端是一種可溶性蛋白，能分泌到外周血液[6]。GPC3 于胚胎期肝臟、腎臟中呈高表達(dá)，在成人正常組織中幾乎無(wú)表達(dá)[7]。既往關(guān)于S100P、GPC3的研究多在肝癌、前列腺癌中，較少研究胃癌。為此，本研究通過(guò)分析S100P、GPC3 在胃癌中的表達(dá)情況，并探究其與病理分級(jí)、增殖與侵襲基因的關(guān)系，旨在為早期診療與預(yù)后評(píng)估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年1月至2022年12月于河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除且經(jīng)病理檢查確診為胃癌的95 例患者作為胃癌組，其中男性51 例，女性44 例；年齡33～76 歲，平均(60.11±8.09)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《胃癌診治難點(diǎn)中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)(2020版)》標(biāo)準(zhǔn)[8]確診為胃癌；(2)術(shù)前無(wú)放化療治療；(3)患者臨床資料完整，且知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；(2)合并其他惡性腫瘤者；(3)術(shù)前病理檢查發(fā)現(xiàn)癌旁組織浸潤(rùn)、侵襲者；(4)術(shù)前接受放化療者；(5)患有免疫與感染性疾病者。同期選取60 例于醫(yī)院體檢的健康人群作為對(duì)照組，其中男性36 例，女性24 例；年齡32～78歲，平均(60.27±7.26)歲。兩組受檢者的性別和年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法 (1)資料收集：收集胃癌組患者的性別、年齡、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(tumor node matastasis，TNM)分期、病情嚴(yán)重程度等臨床病理資料。(2)血清S100P、GPC3檢測(cè)：采集胃癌患者空腹靜脈血，對(duì)照組于體檢時(shí)留血，血標(biāo)本離心后取其血清冷凍保存；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)S100P、GPC3 水平，試劑盒來(lái)源于上海榕珉生物科技中心，操作方式嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求。(3)胃癌組織與癌旁組織增殖與侵襲基因檢測(cè)：術(shù)中取適量癌組織、癌旁組織用生理鹽水沖洗后冷凍保存?zhèn)溆?。檢測(cè)時(shí)取腫瘤標(biāo)本，稱(chēng)取30～50 mg組織加磷酸鹽緩沖液(PBS)后勻漿，用離心機(jī)以12 000 r/min 速度離心20 min，取其上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒檢測(cè)勻漿液中蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)、存活蛋白(survivin)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1 (p21)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)含量，根據(jù)試劑盒測(cè)定勻漿液上清中總蛋白水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；血清S100P、GPC3與組織增殖與侵襲基因的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析；采用Logistic回歸模型分析影響胃癌病理分級(jí)的危險(xiǎn)因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受檢者的血清S100P、GPC3水平比較胃癌組患者的血清S100P 水平明顯低于對(duì)照組，GPC3水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組受檢者的血清S100P、GPC3水平比較(±s)Table 1 Comparison of serum S100P and GPC3 levels between the gastric cancer group and control group(±s)

表1 兩組受檢者的血清S100P、GPC3水平比較(±s)Table 1 Comparison of serum S100P and GPC3 levels between the gastric cancer group and control group(±s)

組別胃癌組對(duì)照組t值P值例數(shù)95 60 S100P(μg/L)11.87±3.49 17.53±4.11 9.174 0.001 GPC3(ng/mL)5.29±1.71 3.31±0.54 8.690 0.001

2.2 胃癌組織和癌旁組織的增殖與侵襲基因表達(dá)水平比較 胃癌組織中的Survivin蛋白含量明顯高于癌旁組織，PTEN、p21、Caspase-3蛋白含量明顯低于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 胃癌組織和癌旁組織的增殖與侵襲基因表達(dá)水平比較(±s,ng/mg)Table 2 Expression of proliferation and invasion genes between gastric cancer tissues and adjacent normal tissues(±s,ng/mg)

表2 胃癌組織和癌旁組織的增殖與侵襲基因表達(dá)水平比較(±s,ng/mg)Table 2 Expression of proliferation and invasion genes between gastric cancer tissues and adjacent normal tissues(±s,ng/mg)

組織胃癌組織癌旁組織t值P值例數(shù)95 95 PTEN 24.17±4.53 38.45±6.19 18.145 0.001 Survivin 77.56±10.35 45.28±7.14 25.022 0.001 p21 30.48±4.57 47.82±7.20 19.818 0.001 Caspase-3 11.36±1.62 18.75±2.46 24.454 0.001

2.3 血清S100P、GPC3 與組織增殖和侵襲基因表達(dá)的相關(guān)性 經(jīng)Pearson 法分析結(jié)果顯示，Survivin蛋白表達(dá)與S100P呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，與GPC3呈正相關(guān)(P＜0.05)，PTEN、p21、Caspase-3 蛋白表達(dá)與S100P呈正相關(guān)(P＜0.05)，與GPC3呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 血清S100P、GPC3與組織增殖和侵襲基因表達(dá)的相關(guān)性Table 3 Correlation between serum S100P, GPC3 and expression of proliferation and invasion genes

2.4 血清S100P、GPC3 表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系 單因素分析結(jié)果顯示，S100P、GPC3 表達(dá)水平與患者性別、年齡無(wú)關(guān)(P＞0.05)，與TNM分期、病情嚴(yán)重程度有關(guān)(P＜0.05)，見(jiàn)表4。

表4 血清S100P、GPC3表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系(±s)Table 4 Relationship between the expression of serum S100P and GPC3 and clinical pathological characteristics(±s)

表4 血清S100P、GPC3表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系(±s)Table 4 Relationship between the expression of serum S100P and GPC3 and clinical pathological characteristics(±s)

病理參數(shù)性別t值0.320 P值0.750 t值1.343分類(lèi)男性女性＜60≥60 I～ⅡⅢ～Ⅳ輕度重度例數(shù)51 44 37 58 44 51 54 41 S100P(μg/L)11.97±3.29 11.75±3.41 11.58±2.94 12.05±3.16 13.89±4.01 10.13±3.21 12.96±3.55 10.43±2.85 GPC3(ng/mL)5.11±1.35 5.50±1.48 5.09±1.19 5.42±1.74 4.44±1.12 6.02±1.73 4.43±1.28 6.42±1.59 P值0.183年齡(歲)0.726 0.470 1.012 0.314 TNM分期5.073 0.001 5.190 0.001病情嚴(yán)重程度3.738 0.001 6.758 0.001

2.5 影響胃癌病理分級(jí)的危險(xiǎn)因素 Logistic回歸分析結(jié)果顯示，S100P、GPC3 表達(dá)水平為胃癌病理分級(jí)的危險(xiǎn)因素(P＜0.05)，見(jiàn)表5。

3 討論

胃癌為我國(guó)常見(jiàn)消化惡性腫瘤，發(fā)病率逐年上升，且具有年輕化趨勢(shì)[9]。該腫瘤發(fā)生機(jī)制尚不明確，胃癌根治術(shù)為胃癌治療主要方式，但術(shù)后患者預(yù)后較差，對(duì)生活質(zhì)量有嚴(yán)重影響[10-11]。早期發(fā)現(xiàn)并及時(shí)干預(yù)能有效改善胃癌患者預(yù)后，故尋找胃癌早期特異性生物標(biāo)志物對(duì)提高患者治療效果具有重要價(jià)值。

S100 家族的成員于多腫瘤中異常表達(dá)，S100P 為其中的新成員，首次提純于胎盤(pán)中[12-13]，經(jīng)多途徑對(duì)腫瘤增殖有加速作用，有助于促進(jìn)血管生成與腫瘤轉(zhuǎn)移。S100P基因定位于染色體的4P16位置，是具有EF手型的鈣結(jié)合蛋白，能結(jié)合鈣離子改變構(gòu)象，可介導(dǎo)蛋白質(zhì)磷酸化、細(xì)胞間連接等功能，參與細(xì)胞異常增生惡變，與腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移預(yù)后等有關(guān)[14]。本研究顯示，胃癌患者S100P水平低于健康人群，提示S100P表達(dá)下降可能與胃癌發(fā)生有關(guān)。該結(jié)果原因?yàn)檎100P表達(dá)下調(diào)可使細(xì)胞間連接、轉(zhuǎn)導(dǎo)鈣離子信號(hào)、蛋白質(zhì)磷酸化等紊亂，對(duì)細(xì)胞正常分化增殖有一定影響，進(jìn)而促進(jìn)胃癌發(fā)生進(jìn)展[5]。GPC3為存在于細(xì)胞膜表面的糖蛋白，在肝、腎等組織胚胎期處于高表達(dá)狀態(tài)，正常情況下在成年人正常組織中幾乎無(wú)表達(dá)。本研究中血清GPC3 于胃癌中表達(dá)較高，提示組織呈陽(yáng)性表達(dá)患者中，血標(biāo)本中有更高概率檢查出一定水平GPC3。該結(jié)果與GPC3分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，該因子可通過(guò)糖基磷脂酰肌醇與細(xì)胞表面附著，于不同剪切位，其N(xiāo)端片段釋放入血而被檢測(cè)出[15-16]。

胃癌浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，其癌細(xì)胞有關(guān)侵襲基因表達(dá)與其侵襲性有關(guān)[17]。細(xì)胞增殖、凋亡為胃癌惡性程度的直接相關(guān)生物行為，過(guò)度增殖、凋亡不足對(duì)病情進(jìn)展具有促進(jìn)作用，增加惡性程度。PTEN與Survivin為調(diào)節(jié)癌細(xì)胞增殖凋亡的重要基因。PTEN基因表達(dá)的蛋白能抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，為重要的抑癌基因，表達(dá)不足會(huì)增加癌細(xì)胞增殖活力。Survivin 為功能最強(qiáng)的凋亡抑制蛋白，能直接抑制凋亡制定分子Caspase-3 激活，對(duì)細(xì)胞凋亡有阻礙作用，并能拮抗p21蛋白對(duì)細(xì)胞周期阻滯效應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞發(fā)展，其過(guò)度表達(dá)能提高腫瘤增殖活力[18]。本研究中胃癌組織survivin 蛋白含量高于癌旁組織，PTEN、p21、Caspase-3蛋白含量低于癌旁組織，提示胃癌患者體內(nèi)增殖、凋亡基因表達(dá)失調(diào)，癌細(xì)胞易進(jìn)展，惡性程度較高。相關(guān)性結(jié)果顯示，Survivin 蛋白表達(dá)與S100P 呈負(fù)相關(guān)，與GPC3呈正相關(guān)，PTEN、p21、Caspase-3蛋白表達(dá)與S100P 呈正相關(guān)，與GPC3 呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明S100P、GPC3 表達(dá)情況能反映癌細(xì)胞侵襲浸潤(rùn)程度，原因可能為缺氧應(yīng)激環(huán)境下S100P、GPC3能提高機(jī)體缺氧誘導(dǎo)因子穩(wěn)定，激活下游的侵襲基因，促進(jìn)腫瘤侵襲。進(jìn)一步分析S100P、GPC3 表達(dá)與患者病理特征關(guān)系，其表達(dá)水平與TNM分期、病情嚴(yán)重程度有關(guān)；Logistic回歸分析顯示，S100P、GPC3 表達(dá)水平為胃癌病理分級(jí)的危險(xiǎn)因素，提示S100P、GPC3 對(duì)評(píng)估胃癌進(jìn)展具有一定價(jià)值。

綜上所述，S100P 在胃癌中表達(dá)下降，GPC3 水平上升，與腫瘤病理分級(jí)、增殖侵襲基因表達(dá)有關(guān)，可作為早期診療胃癌的有效標(biāo)志物。