史梁，常全文，朱瑋國，李娜，李麗娟，趙騰飛，李永

作者單位：1菏澤市第三人民醫(yī)院（菏澤市精神衛(wèi)生中心）精神科，山東 菏澤274009；2河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院精神衛(wèi)生中心，河北 石家莊050000

精神分裂癥（schizophrenia，sch）是一種嚴(yán)重的精神障礙性疾病，常發(fā)生于青年或壯年時期，病情反復(fù)，具有較高的復(fù)發(fā)率及致殘率，常需要終身治療，目前對sch確切的發(fā)生機(jī)制尚不清楚，研究認(rèn)為神經(jīng)發(fā)育障礙是其病理機(jī)制之一［1-2］。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在參與調(diào)節(jié)神經(jīng)發(fā)育、神經(jīng)可塑性等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要作用［3］。長鏈非編碼RNA核富集轉(zhuǎn)錄本1（lncRNA NEAT1）是lncRNA之一，研究顯示lncRNA NEAT1可通過調(diào)控靶基因表達(dá)，參與阿爾茨海默病、帕金森病等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理過程［4-5］。Katsel等［6］研究顯示，lncRNA NEAT1在sch病人多個皮質(zhì)區(qū)低表達(dá)，其機(jī)制可能與NEAT1參與調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞功能有關(guān)。目前l(fā)ncRNA NEAT1在sch臨床中的研究較少，本研究探討sch病人外周血lncRNA NEAT1表達(dá)及與精神癥狀和認(rèn)知功能的相關(guān)性，為sch的病理機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年6月至2022年3月菏澤市第三人民醫(yī)院及河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院精神科收治的sch病人73例作為觀察對象（sch組），其中男41例，女32例，年齡范圍23～58歲，年齡（46.60±10.30）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合國際疾病分類第10版（ICD-10）中診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］；②病人均為首次發(fā)病且未使用抗精神類疾病藥物；③病人或其監(jiān)護(hù)人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有強(qiáng)迫癥、抑郁癥、人格障礙等其他精神疾??；②腦外傷、腦血管疾病、精神疾病或嚴(yán)重軀體疾??；③有自殺或自殘傾向；④乙醇或藥物成癮者；⑤妊娠期或哺乳期婦女。另選取同期在這兩家醫(yī)院體檢人員（無精神病障礙史及無精神疾病家族史）68例作為對照組，其中男38例，女30例，年齡范圍24～60歲，年齡（45.10±9.70）歲。本研究經(jīng)菏澤市第三人民醫(yī)院及河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批號201952604）。

1.2 研究方法

1.2.1 lncRNA NEAT1水平檢測 采集病人空腹靜脈血5 mL，采用密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），Trizol試劑（MT0011，百奧萊博）提取PBMC中總RNA，取1μg RNA按照TaqMan mocrroRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（MT0006，百奧萊博）說明反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA，采用實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）法檢測lncRNA NEAT1表達(dá)，按照TaqMan探針熒光定量PCR試劑盒（WK063，百奧萊博）說明書在PCR儀（ABI7900，Applied Biosystems）上進(jìn)行擴(kuò)增，總反應(yīng)體系25 μL，共40個循環(huán)，lncRNA NEAT1及內(nèi)參甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）的引物購自上海生工生物工程有限公司，其中l(wèi)ncRNA NEAT1正向引物序列5'-GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT-3'，反向引物序列5'-CCTCATCCCTCCCAGTACCA-3'；GAPDH正向引物序列5'-CCAGGTGGTCTCCTCTGA-3'，反向引物序列5'-GCTGTAGCCAAATCGTTGT-3'。反應(yīng)結(jié)束后，以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算lncRNA NEAT1表達(dá)水平。

1.2.2 精神癥狀與認(rèn)知功能評估 采用陽性與陰性癥狀量表（positive and negative symptom scale，PANSS）對病人精神狀態(tài)進(jìn)行評估，PANSS包含陽性癥狀、陰性癥狀和一般精神病理3個分量表，評分越高，癥狀越重。采用蒙特利爾認(rèn)知評估量表（montreal cognitive assessment，MoCA）對病人認(rèn)知功能進(jìn)行評分，共包含7個評分項目，MoCA≥26分表示認(rèn)知功能正常，MoCA＜26分表示認(rèn)知功能障礙。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料符合正態(tài)分布用表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料采用例表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；Spearman法分析sch病人外周血lncRNA NEAT1表達(dá)與PANSS評分、MoCA評分的相關(guān)性，采用受試者操作特征（ROC）曲線分析外周血lncRNA NEAT1水平對sch的診斷價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 sch組與對照組性別、年齡、身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、受教育年限及居住地等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 精神分裂癥（sch）73例與體檢人員（無精神病障礙史及無精神疾病家族史）68例一般資料比較

2.2 sch病人外周血lncRNA NEAT1表達(dá)水平及診斷價值 對照組、sch組病人外周血lncRNA NEAT1表達(dá)水平分別為1.05±0.21、0.73±0.15，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=10.47，P＜0.001），lncRNA NEAT1診斷sch的ROC曲線下面積為0.82，截斷值為0.89，靈敏度為79.45%，特異度為73.93%，見圖1。

圖1 長鏈非編碼RNA核富集轉(zhuǎn)錄本1（lncRNA NEAT1）對精神分裂癥（sch）的診斷價值

2.3 sch病人PANSS量表評分及認(rèn)知功能 sch病人PANSS量表總評分為（79.10±8.70）分，其中陽性癥狀、陰性癥狀、精神病理癥狀分別為（25.30±3.20）分、（23.10±3.50）分、（30.70±6.50）分；sch病人MoCA評分為（20.60±6.32）分，較對照組（28.10±1.60）分顯著降低（t=9.50，P＜0.001）。

2.4 lncRNA NEAT1與sch病人臨床癥狀相關(guān)性分析顯示，lncRNA NEAT1與PANSS量表陰性癥狀評分和總分呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），lncRNA NEAT1與MoCA評分的執(zhí)行能力、注意力、延遲記憶和總分呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），見表2。

表2 lncRNA NEAT1與sch病人臨床癥狀相關(guān)性

3 討論

sch常伴有感知、思維、情感、行為異常以及精神活動的不協(xié)調(diào)，還伴有明顯的認(rèn)知功能受損，嚴(yán)重影響病人正常生活［8］。目前對sch的診斷主要以精神癥狀作為判定，存在主觀性，因此研究sch發(fā)病機(jī)制，尋找診斷標(biāo)志物，對sch的診療具有重要意義［9］。

lncRNA多位于細(xì)胞核內(nèi)，在腦組織中表達(dá)廣泛，報道顯示，sch病人腦組織與外周血中l(wèi)ncRNA異常表達(dá)，與sch病人的精神癥狀有關(guān)，如NONHSAT021545、NONHSAT041499在sch病人PBMC中表達(dá)水平升高，與sch的陰性癥狀、陽性癥狀評分有關(guān)［10］。lncRNA NEAT1是lncRNA之一，參與調(diào)節(jié)神經(jīng)發(fā)生、腦發(fā)育、神經(jīng)可塑性等許多神經(jīng)特異性過程，在癲癇、多發(fā)性硬化癥、帕金森病等疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用［11-12］。研究顯示，lncRNA NEAT1可靶向抑制微RNA-29b-3p的表達(dá)，抑制Toll樣受體4/核因子κB信號通路，降低癲癇模型海馬神經(jīng)元的凋亡［13］。另有研究顯示，lncRNA NEAT1在未治療的sch病人外周血中表達(dá)水平顯著降低，在經(jīng)過治療的sch病人外周血中表達(dá)水平顯著升高，且與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義［14］。本研究結(jié)果顯示，lncRNA NEAT1在sch病人外周血中表達(dá)水平降低，與先前報道一致，提示lncRNA NEAT1可能與sch發(fā)病有關(guān)，ROC曲線分析顯示，lncRNA NEAT1對sch有一定診斷價值，但lncRNA NEAT1在sch中的作用機(jī)制尚不清楚，lncRNA NEAT1診斷sch的實(shí)用性與有效性仍需更深入地研究。

lncRNA可通過對基因的選擇性剪接，調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能，lncRNA可通過調(diào)控細(xì)胞凋亡與自噬、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等過程影響腦神經(jīng)功能，參與重度抑郁癥、阿爾茨海默病等精神疾病的發(fā)展［15-16］。在sch中，lncRNA可調(diào)控與sch相關(guān)的基因表達(dá)、介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)與影響大腦結(jié)構(gòu)和神經(jīng)突觸可塑性［17-18］。研究顯示，LncRNA-AC006129.1通過DNA甲基化介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子Capicua下調(diào)在精神分裂癥中重新激活細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3表達(dá)，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)［19］。lncRNA NEAT1可競爭性結(jié)合微RNA-339-5p并上調(diào)同源框A1表達(dá)，抑制缺氧缺血條件下神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，在保護(hù)腦損傷方面發(fā)揮一定作用［20］。此外，lncRNA NEAT1還可促進(jìn)Toll樣受體2通路激活，促進(jìn)白細(xì)胞介素6、趨化因子CC基序配體2等炎性因子釋放，參與免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)炎癥性疾病的發(fā)展［21］。以上研究表明lncRNA NEAT1對神經(jīng)免疫炎癥反應(yīng)起著重要作用，且大量研究也表明，免疫炎癥反應(yīng)參與sch的發(fā)生發(fā)展，因此，本研究推測lncRNA NEAT1可能通過免疫炎癥反應(yīng)影響sch的臨床癥狀。相關(guān)研究表明：免疫炎性反應(yīng)與sch的陰性癥狀和認(rèn)知功能密切相關(guān)［22］。本研究結(jié)果顯示：lncRNA NEAT1與PANSS量表陰性癥狀評分和總分呈負(fù)相關(guān)，與MoCA評分的執(zhí)行能力、注意力、延遲記憶和總分呈負(fù)相關(guān)，提示lncRNA NEAT1表達(dá)水平與sch病人的疾病嚴(yán)重程度與認(rèn)知功能損傷相關(guān)，證實(shí)lncRNA NEAT1可能通過調(diào)節(jié)免疫炎性反應(yīng)參與sch的發(fā)生發(fā)展。但本研究臨床樣本量較少，后期將擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步觀察lncRNA NEAT1表達(dá)變化與臨床癥狀之間的相關(guān)性。

綜上所述，lncRNA NEAT1在sch病人外周血中表達(dá)水平降低，與sch病人精神癥狀和認(rèn)知功能有關(guān)，可能參與sch的發(fā)生發(fā)展。由于研究臨床資料少，lncRNA NEAT1與sch發(fā)生發(fā)展的具體作用機(jī)制尚未明確，需結(jié)合動物模型做進(jìn)一步研究。