楊沛霖

隨著全國各地牛養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模的不斷擴大，養(yǎng)牛數(shù)量越來越多，各種傳染性疾病發(fā)病率也呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。布魯氏桿菌病是牛養(yǎng)殖業(yè)中較為常見的疫病之一，也是一種人畜共患病，具有較強的傳染性與危害性，已被我國列為二類動物性傳染病。該病一旦暴發(fā)流行，則會長期潛伏在養(yǎng)殖場內(nèi)難以凈化，當(dāng)前尚無特效藥可以治療，很容易給養(yǎng)殖戶造成不可挽回的經(jīng)濟損失。因此，如何對牛布魯氏桿菌病進行有效凈化并做好預(yù)防控制工作顯得尤為重要。

一、牛布魯氏桿菌病原及流行特點

1、病原學(xué)特征

布魯氏桿菌病由布魯氏桿菌感染所致，其菌屬眾多，當(dāng)前已知的就有19 個生物型、6 個種類，該病菌主要寄生在細(xì)胞內(nèi)，侵襲力與傳播力均較強，主要侵害宿主淋巴系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)。布魯氏桿菌外觀呈球桿、球型或短桿狀，其中牛屬菌多呈短桿狀，長度為0.5～1.3μm，寬度約為0.4μm，未長有鞭毛、莢膜和芽孢等結(jié)構(gòu)，為革蘭式染色陰性菌，涂片鏡檢多呈單個排布。該病菌在外界環(huán)境中適應(yīng)能力極強，陽光直射條件下可存活4h，但難耐濕熱環(huán)境，在60℃溫度條件下30min 即被滅活，70℃溫度條件下5min 即被滅活，100℃熱水中會被立即滅活，普通的消毒劑均可將其殺滅。

2、流行病學(xué)

人類與多種動物均易感染布魯氏桿菌病，其中，以牛、羊、豬等易感性最強，母畜比公畜更易感，成年動物比幼齡動物更易感，發(fā)病率也更高。布魯氏桿菌病在一年四季均可發(fā)生，尤以春、夏季高發(fā)。牛養(yǎng)殖場內(nèi)患病牛與帶菌牛是該病主要的傳染源，公牛感染后期的精液、尿液、糞便中會攜帶大量病菌，患病的妊娠母牛生產(chǎn)或流產(chǎn)后，其乳汁、胎衣、胎盤羊水、惡露等分泌物中攜帶有大量致病菌，對產(chǎn)房周邊環(huán)境造成污染，健康牛接觸后染病。通常情況下，患有該病的妊娠母羊在流產(chǎn)后的3 年內(nèi)，其陰道分泌物中仍帶有布魯氏桿菌。呼吸道、生殖道、消化道等是該病主要的感染途徑，也可通過破損的皮膚或黏膜等傳染該病。

二、臨床癥狀及病理變化

1、臨床癥狀

布魯氏桿菌病多呈地方性流行，牛只染病后通常會有15～180d 的潛伏期，大部分為隱性感染。不同年齡段牛感染該病后其臨床表現(xiàn)也有所不同，具有繁殖能力的成年牛是該病侵染的主要群體，患病后臨床表現(xiàn)較明顯，而未達到繁殖階段的犢牛感染該病后一般不會表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀。新疫區(qū)的病牛多為急性經(jīng)過，老疫區(qū)病牛呈慢性經(jīng)過，但在妊娠牛群中多呈爆發(fā)性流行。種公牛染病后，陰莖紅腫、脹痛，常引發(fā)睪丸炎、附睪炎、睪丸壞死、滑膜囊炎、關(guān)節(jié)炎等癥狀。母牛染病后多在妊娠5～8 個月時突然流產(chǎn)，產(chǎn)出死胎、僵尸胎，部分產(chǎn)出弱胎，犢牛多在前期夭折。流產(chǎn)后出現(xiàn)胎衣不下、生殖道感染等癥狀，陰道持續(xù)流出氣味惡臭的紅褐色分泌物，后期多引發(fā)子宮炎癥。老疫區(qū)內(nèi)妊娠母牛染病后通常不會流產(chǎn)，但會出現(xiàn)乳房炎、子宮內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎等癥狀，且伴有屢配不孕、胎衣不下、局部腫脹等情況。

2、病理變化

解剖病死公牛與母牛，常見睪丸、附睪、前列腺、子宮等處存在膿腫，胎盤存在病變，呈淡黃色膠胨樣浸潤，表面粘連有大量膿性和絮狀分泌物，胎膜層厚度增加，且存在出血點。子宮粘膜、絨毛膜間積蓄大量濃塊和淡灰色污濁滲出物。少數(shù)胎兒皮下滲出血性液體，胸腔與腹腔中存在紅色積液，有自溶性變化。淋巴結(jié)腫大，呈彌漫性顆粒性淋巴結(jié)炎，顏色變黃且質(zhì)地變硬，脾臟腫脹，存在壞死灶。

三、檢測方法

1、虎紅平板凝集試驗（RBPT）

虎紅平板凝集試驗是最常用的布魯氏桿菌病實驗室檢測方法之一。無菌采集病?；蛞伤聘腥九５难海毯蠓蛛x出血清作為被檢材料。使用蠟筆在事先準(zhǔn)備好的一塊玻璃板上均勻劃出邊長4cm 的方形小格，使用規(guī)格為0.2mL 的吸管在每1 方格內(nèi)加入0.03mL 被檢血清，然后滴入0.03mL 的虎紅平板抗原，使用無菌細(xì)竹簽將其攪拌混勻。若4min 內(nèi)觀察到凝集現(xiàn)象則判斷為陽性，未出現(xiàn)凝集則判斷為陰性。

2、全乳環(huán)狀試驗（MRT）

用溫水將患病母牛乳房清洗干凈，并用潔凈紗布擦干，將乳汁擠在無菌器皿中，取1mL 乳樣放入滅菌凝集試驗管內(nèi)，滴入50μL 四氮唑抗原后搖晃均勻，放置于38℃溫水中培養(yǎng)60min，若觀察到乳柱上層乳脂存在紅色環(huán)帶，則可判斷為布魯氏桿菌。該方法是當(dāng)前檢測牛布魯氏桿菌病的主要方法之一，操作簡便，出結(jié)果迅速，但易受隱性乳房炎影響出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，可配合其他檢測技術(shù)，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3、PCR 檢測技術(shù)

PCR 檢測技術(shù)即為生物鏈聚合酶鏈反應(yīng)，是在現(xiàn)代生物分子學(xué)理論基礎(chǔ)上準(zhǔn)確檢測致病原的核酸物質(zhì)，陽性結(jié)果即可確診為布魯氏桿菌感染。該檢測技術(shù)僅需采集病牛分泌物等樣品即可完成檢測，具有較高的靈敏度與準(zhǔn)確性，是當(dāng)前實驗室診斷中較為先進且使用頻率最高的檢測技術(shù)，但該檢測技術(shù)成本較高，對儀器設(shè)備、操作人員技術(shù)的要求較高，基層部門需根據(jù)自身條件選擇性采用。

4、試管凝集試驗（SAT）

無菌采集病牛血液并制取血清，按照1∶100（含1000IU/mL）的比例進行稀釋，若出現(xiàn)“+ +”凝集現(xiàn)象，則可確診為陽性；若將牛血清按照1∶50（含50IU/mL）的比例稀釋，出現(xiàn)“+ +”凝集現(xiàn)象，可判定為可疑反應(yīng)。結(jié)果為可疑反應(yīng)的牛只，需經(jīng)3～4 周重新采血檢測，若檢測結(jié)果仍為可疑反應(yīng)，則可判定為陽性病牛。

四、凈化措施

1、采血檢測

整個養(yǎng)殖場的牛均需進行無菌采血，并按要求保存。樣品由樣品管理員統(tǒng)一接收，填寫《接收樣品登記表》和《檢測業(yè)務(wù)委托協(xié)議》，并檢查樣品符合性，之后將血液樣本按照順序進行唯一性編號記錄，送入實驗室進行血清分離。接樣人員、實驗室工作人員均需穿著工作服，帶好口罩與手套，做好個人防護工作，同時也可避免樣品被污染。實驗前后要對實驗室進行全面消毒，采集的血清樣本可用RBPT 檢測進行初篩，采用SAT 復(fù)檢，整個實驗過程應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進行，操作流程嚴(yán)格按照《動物布魯氏桿菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646-2018）進行，盡量減少氣溶膠產(chǎn)生量。檢測結(jié)束后，工作人員應(yīng)脫掉1 次性防護服、手套、口罩、鞋套等裝入高壓滅菌袋中，用75%酒精或0.5%新潔爾滅徹底消毒雙手，最后用流動水沖洗干凈，面部可用消毒巾擦拭。將用過的血清管、檢測玻璃板、移液器吸頭、防護用品等進行高壓消毒后進行焚燒或深埋等無害化處理，并做好廢棄物處理或移交記錄。

2、分區(qū)凈化

根據(jù)實驗室檢測結(jié)果，將牛場合理劃分為控制區(qū)牛群、未控制牛群和凈化群，將健康牛、疑似牛與陽性牛分離開來，便于對牛群進行科學(xué)管理，提高牛養(yǎng)殖場布魯氏桿菌病的凈化效率。

3、陽性牛的處理措施

養(yǎng)殖場不可采用抽檢方式，應(yīng)確保100%的檢測率，檢測結(jié)果連續(xù)2 次均為陰性的為凈化牛群。若檢測結(jié)果為陽性，應(yīng)立即上報給畜牧獸醫(yī)主管部門，并對病牛進行撲殺與無害化處理，禁止消毒處理后流入市場危害人類健康。主管部門按照規(guī)定劃分出疫區(qū)與疫病威脅區(qū)，及時封鎖疫區(qū)，并禁止一切外來動物入內(nèi)，進出疫區(qū)、疫點的車輛需經(jīng)過嚴(yán)格的消毒。病牛圈舍、運動場等區(qū)域，可交替使用1%消毒靈、10%石灰乳、20%漂白粉全面消毒，2 次/d。料槽、飲水器等可用0.01%新潔爾滅或1‰高錳酸鉀溶液消毒，1 次/d，并用清水沖洗干凈、晾干后使用，牛群皮毛可用0.3%過氧乙酸或0.1%新潔爾滅消毒，1 次/3d。被病牛污染的飼料、飲水、排泄物，以及陽性妊娠牛流產(chǎn)后產(chǎn)出的胎兒、胎衣、惡露污染物等均需進行焚燒或深埋等無害化處理。深埋污染物時，挖坑深度盡量高出地下水位1.5cm 以上，坑的底部做好防滲、防漏處理，坑底部撒鋪1 層厚約5cm 的生石灰消毒，避免布魯氏桿菌的擴散蔓延。發(fā)病牛場在徹底消毒后需要經(jīng)過3 個月的空場自然凈化期才能引進牛只飼養(yǎng)。

4、可疑牛群處理措施

對于檢測結(jié)果呈可疑反應(yīng)的牛群，應(yīng)立即進行隔離飼養(yǎng)，限制其活動范圍，并利用實驗室診斷方法進行復(fù)測，若仍判定為可疑牛群，則可將其歸類為陽性病牛，并給予對應(yīng)措施處理。若經(jīng)復(fù)檢，結(jié)果轉(zhuǎn)為陰性，則可將其隔離飼養(yǎng)30d 后再次復(fù)檢，結(jié)果仍為陰性的可放入健康牛群飼養(yǎng)。對于出現(xiàn)流產(chǎn)情況的母牛，應(yīng)立即隔離飼養(yǎng)，并將母牛胎兒、羊水送檢，篩查布魯氏桿菌病。確診陽性的母牛，應(yīng)將其與犢牛隔離飼養(yǎng)，并于犢牛5～9 月齡時進行布魯氏桿菌病檢測，結(jié)果呈陰性的方可進行疫苗接種。

5、常規(guī)檢測

養(yǎng)殖場需要制定符合本場的生物安全體系，尤其是規(guī)模化養(yǎng)牛場，不要過度依賴優(yōu)良品種母牛群，堅持自繁自育，盡量避免從外場引進種牛。本場自繁自養(yǎng)牛群應(yīng)在每年春秋兩季分別進行1 次全面布魯氏桿菌病檢測，并按照檢測結(jié)果實施分區(qū)管理。一旦本場內(nèi)檢出陽性病牛，則需增加檢測頻率，堅持每1 個月檢測1 次，連檢3 個月，直至剩余牛只檢測結(jié)果均為陰性方可恢復(fù)每年2 次檢測制度。確需從外引種的，要按照規(guī)定做好檢驗檢疫工作，確保引種地?zé)o布魯氏桿菌病發(fā)生，引進的牛只需在距離本場100m 以外的地方隔離飼養(yǎng)45d 左右，期間進行2 次布氏桿菌病檢測篩查，結(jié)果全部為陰性且無其他異常后進行帶體消毒、常規(guī)疫苗接種后才能放入本場飼養(yǎng)。飼養(yǎng)滿1 年后按照自繁自養(yǎng)牛群的檢測方法進行常規(guī)檢測。

五、綜合防控

1、加大檢疫力度

目前，我國相關(guān)部門多次修改動物傳染性疾病防治技術(shù)規(guī)范，重新規(guī)定了牛布魯氏桿菌病相關(guān)防控流程及防治技術(shù)要求，尤其是養(yǎng)殖場引進外來種牛時，必須開具相關(guān)證明以確保該種牛來自非疫區(qū)，并要在裝卸過程中對其進行嚴(yán)格的檢驗，各方面合格后方能開展運輸工作。調(diào)運方面，需嚴(yán)格遵守疫病低風(fēng)險區(qū)向高風(fēng)險區(qū)調(diào)運，同等風(fēng)險區(qū)相互調(diào)運的放入原則及相關(guān)要求。調(diào)運過程中，各區(qū)域動物防疫監(jiān)督機構(gòu)要及時對種牛運輸途中的檢疫合格證進行查詢，避免病?；驇ЬＴ谶\輸過程中進行疫病傳播。對于規(guī)模相對較大的牛養(yǎng)殖場，當(dāng)?shù)貦z疫部門要做好每個季節(jié)的檢疫工作，并加強檢驗檢疫工作人員的專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)力度，提高檢疫隊伍整體素質(zhì)水平及檢疫工作的規(guī)范性。在牛布魯氏桿菌病高發(fā)期，或周邊區(qū)域發(fā)生布魯氏桿菌病傳染情況的，需適當(dāng)增加檢疫頻率，對傳染風(fēng)險較大的養(yǎng)殖場進行多次疫病檢測，及時調(diào)查、記錄、分析養(yǎng)殖場牛群的來源、數(shù)量、規(guī)模以及飼養(yǎng)結(jié)構(gòu)等，全面掌握該疾病的地方流行情況，為疫病防控奠定基礎(chǔ)。

2、定期接種疫苗

養(yǎng)殖場要在基層獸醫(yī)及防疫人員的指導(dǎo)下，科學(xué)制定適合本場的免疫接種計劃，每年定期為牛群接種布魯氏桿菌病疫苗。疫苗免疫雖不能徹底消除牛布魯氏桿菌病，但能有效減少該疾病的暴發(fā)與流行，相關(guān)研究表明，牛群接種布魯氏桿菌活疫苗后能起到75%的保護作用?，F(xiàn)階段，市場上用于預(yù)防牛布魯氏桿菌病的疫苗包括羊型布魯氏菌M5 和豬型布魯氏菌S2 兩種。用法用量上，M5 為皮下注射250 億活菌/頭，S2 為肌肉注射500 億活菌/頭。免疫接種時間盡量安排在配種前30～60d，妊娠母牛禁止接種，同時避免與口蹄疫疫苗同時接種，防止產(chǎn)生免疫抑制現(xiàn)象。獸醫(yī)防疫人員要熟練掌握疫苗保存、運輸及使用方法，規(guī)范免疫接種手法，確保免疫成功。同時，管理人員應(yīng)做好接種牛標(biāo)記與免疫接種記錄工作，避免重復(fù)接種。

3、加強飼養(yǎng)管理

加強日常飼養(yǎng)管理，保持圈舍干凈衛(wèi)生，可有效提高牛群生存質(zhì)量，降低布魯氏桿菌病發(fā)生概率。養(yǎng)殖人員要定期清理圈舍內(nèi)的糞便、尿液等污物，避免其堆積發(fā)酵滋生病菌與寄生蟲。將清理出來的糞便運往特定處理區(qū)堆積發(fā)酵，并噴灑廣譜滅蟲劑與消毒劑，滅殺糞便中的寄生蟲卵及各種病原微生物。合理安排養(yǎng)殖密度，避免活動空間過小惡化牛群生存環(huán)境。高溫季節(jié)注意防暑降溫，寒冷季節(jié)注意防寒保暖，并根據(jù)牛生長發(fā)育的各個階段對營養(yǎng)的需求規(guī)律科學(xué)配比飼料營養(yǎng)，確保飼料中蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分均衡，提高牛群體質(zhì)，增強抗病能力。禁止飼喂發(fā)霉變質(zhì)的飼料，控制飲用水質(zhì)量，確保飲食、飲水安全。另外，犬、鼠、蚊、蠅、蜱蟲等均是牛布魯氏桿菌病的傳播媒介，會導(dǎo)致該疾病的傳播擴散，因此，養(yǎng)殖場內(nèi)禁止養(yǎng)犬，并需定期開展滅鼠、滅蚊蠅、滅蜱蟲工作，切斷布魯氏桿菌病的傳播途徑。

4、做好消毒管理

做好養(yǎng)殖場消毒管理是防控牛布魯氏桿菌病傳播蔓延的重要措施之一。因此，養(yǎng)殖場要構(gòu)建完善的消毒制度。定期使用84消毒液稀釋劑或2%～4%氫氧化鈉溶液對圈舍、運動場進行全面消殺，1 次/7d，確保消毒密度。金屬設(shè)施可用熏蒸、火焰等方式消毒。養(yǎng)殖場出入口處可設(shè)立氫氧化鈉消毒池，來往車輛、周邊環(huán)境等可采用2%燒堿進行消毒。對于硬化地面要確保完全浸濕消毒，而非硬化地面、土地浸透程度應(yīng)不少于3cm。嚴(yán)格按照診療基礎(chǔ)操作規(guī)范對醫(yī)療器械進行徹底消毒，避免發(fā)生交叉感染，降低牛布魯氏桿菌病的傳染幾率。

5、人員防護與管理

對于經(jīng)常接觸牛群及管理設(shè)施的工作人員，必須嚴(yán)格按照疫病防控要求做好個人防護。在診斷、治療、助產(chǎn)等特殊工作場景下，工作人員要穿戴好防護服，佩戴好1 次性橡膠手套、醫(yī)療口罩和防護眼鏡等。在參與疫病診療與防控過程中，工作人員不可中途飲水、吃東西，待工作完畢徹底消毒后再進食。若工作人員存在皮膚破損情況，應(yīng)盡量避免與病牛直接接觸，以防經(jīng)皮膚與黏膜感染布魯氏桿菌病。對于經(jīng)常接觸病牛的工作人員，必須定期進行個人健康體檢，一旦檢查出布魯氏桿菌感染，要及時調(diào)離崗位接受治療，完全康復(fù)后再返回崗位。

總之，牛布魯氏桿菌病是一種危害性極強的傳染病，該病的傳播與流行不僅會給牛養(yǎng)殖業(yè)造成較大的經(jīng)濟損失，且會給人類的生命安全造成威脅。因此，做好該疾病的凈化與防控工作對提高牛養(yǎng)殖場的經(jīng)濟效益、保障人類生命安全具有重要意義。相關(guān)部門與牛養(yǎng)殖戶應(yīng)深入了解布魯氏桿菌病基礎(chǔ)知識點，掌握該疾病的凈化程序，采取綜合性防控措施，促進牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。