王曉琳，張 平，馬 瀟，劉志榮，李冬華

1 甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050； 2 甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州 730050；3 甘肅省藥品監(jiān)督管理局審核查驗(yàn)中心/甘肅省疫苗檢查中心，甘肅 蘭州 730070；4 甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070

苦水玫瑰（Rosa rugosa‘Plena’）主產(chǎn)于甘肅省永登縣苦水鎮(zhèn)，為薔薇科薔薇屬的多年生常綠植物或落葉灌木苦水玫瑰的干燥花蕾，為中國玫瑰和鈍齒薔薇的雜交種，夏初花將開放時(shí)分批采摘，以花朵完整，色紫紅，香氣濃郁者為佳，具有藥食兩用功能［1］?？嗨倒澹陡?、微苦，溫；歸肝、脾經(jīng)；具有理氣活血、順氣和血、活血散瘀、調(diào)經(jīng)止痛、疏肝解郁功效及鎮(zhèn)靜、抗憂郁作用［2］?？嗨倒逶谒幤贰⑹称肥袌鲋芯休^大銷量，雖然產(chǎn)業(yè)規(guī)模大，但至今沒有成型的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，《中華人民共和國藥典》和衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中均未收錄。為充分開發(fā)利用苦水玫瑰資源，挖掘其價(jià)值，課題組考慮從標(biāo)準(zhǔn)制定方面助推苦水玫瑰產(chǎn)業(yè)發(fā)展，通過產(chǎn)地調(diào)研、樣品采收、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)整理、專家評(píng)審等方面形成苦水玫瑰質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

由于一些重金屬元素會(huì)對(duì)人體各器官和系統(tǒng)產(chǎn)生嚴(yán)重危害［3］，目前國內(nèi)外藥典中已將天然藥物中的重金屬鉛（Pb）、鎘（Cd）、汞（Hg）、銅（Cu）及有害元素砷（As）作為重點(diǎn)控制的指標(biāo)，本研究從苦水玫瑰標(biāo)準(zhǔn)制定安全層面出發(fā)，對(duì)苦水玫瑰中所含重金屬及有害元素進(jìn)行測(cè)定分析，從安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估角度對(duì)其上市后的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估，從而提高苦水玫瑰藥食兩用產(chǎn)品的安全性。

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（inductively coupled plasma mass spectrometry，ICP-MS）是國內(nèi)外目前普遍使用的一種痕量元素分析工具；ICP-MS 法可快速同時(shí)或順序測(cè)定多種元素，且具有樣品消耗量小、檢出限低、靈敏度高、干擾性小、線性范圍寬等突出優(yōu)點(diǎn)，作為一種重要的分析測(cè)試手段被廣泛用于科學(xué)技術(shù)研究和高科技產(chǎn)品生產(chǎn)［4-7］。本課題組通過研究建立苦水玫瑰ICP-MS 檢測(cè)方法，測(cè)定20 批甘肅不同產(chǎn)地實(shí)地采集的苦水玫瑰樣品，對(duì)重金屬Pb、Cd、Hg、Cu 及有害元素As 進(jìn)行痕量分析，為苦水玫瑰標(biāo)準(zhǔn)草案的制定提供參考。

1 材料

1.1 儀器 ICPMS-2030 型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（日本島津）；Mettler AE240 電子分析天平（德國梅特勒）；Multiwave 7000 型超級(jí)微波消解制備系統(tǒng)（Anton Paar）；Molecular 摩爾超純水儀（重慶摩爾水處理設(shè)備有限公司）。

1.2 試劑 Pb、Cd、As、Hg、Cu 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為1000 μg/mL，Ge（鍺）、In（銦）、Bi（鉍）單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為1000 μg/mL，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)大米（Fapas T07187QC）均購自國家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心；標(biāo)準(zhǔn)調(diào)諧液（編號(hào)5190-0465），含鈰（Ce）、鈷（Co）、鋰（Li）、鎂（Mg）、鈦（Ti）、釔（Y），質(zhì)量濃度均為1 μg/L（美國Agilent公司）；硝酸（優(yōu)級(jí)純，德國MERCK 公司）；30%過氧化氫（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；將1000 μg/mL 的Ge、In、Bi 混合內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至20 ng/mL 作為內(nèi)標(biāo)溶液。氬氣、氦氣（99.999%，蘭州西聯(lián)化工供應(yīng)站）；水為超純水。

1.3 樣品來源及信息本實(shí)驗(yàn)樣品苦水玫瑰20批均來源于甘肅省境內(nèi)（實(shí)地采集），見表1。

表1 20批苦水玫瑰藥材信息

2 方法與結(jié)果

2.1 ICP-MS 工作條件采用氦氣碰撞反應(yīng)池模式，用標(biāo)準(zhǔn)調(diào)諧溶液（含Li、Co、Y、Ce、Tl、Mg，質(zhì)量濃度1 μg/L）對(duì)儀器條件進(jìn)行調(diào)諧，優(yōu)化其質(zhì)量軸、分辨率、靈敏度、雙電荷、氧化物，將儀器參數(shù)設(shè)置為載氣：氬氣；碰撞氣體：氦氣；等離子體流量：15 L/min；采樣深度：8.00 mm；載氣體積流量：1.0 L/min；霧化器：Barbinton；石英雙通道霧化室；等離子體射頻功率：1.55 KW；碰撞模式：氦氣流量4.5 mL/min；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)數(shù)：30 r/min；分析模式：全定量。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備精密量取適量Pb、Cd、As、Hg、Cu 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2%硝酸溶液稀釋制成質(zhì)量濃度為1 μg/mL 的Pb、Cd、As、Hg、Cu 標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。再精密量取適量標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，用2%硝酸溶液依次稀釋，配制成含Pb、Cd、As 元素質(zhì)量濃度分別為0、2、10、25、50、80 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，Hg 元素質(zhì)量濃度分別為0、1、5、10、25、50 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，Cu 元素質(zhì)量濃度分別為0、5、50、100、200、500 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液（以上標(biāo)準(zhǔn)品溶液均需臨用時(shí)現(xiàn)配）。

2.3 內(nèi)標(biāo)溶液制備分別精密量取適量Ge、In、Bi 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2%硝酸溶液稀釋，配制成質(zhì)量濃度為20 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.4 供試品溶液制備取苦水玫瑰樣品粉末約0.3 g，精密稱定，置玻璃消解罐中，依次加入1 mL 水、2 mL 硝酸、1 mL 過氧化氫，混勻，待無氣泡后，按照操作規(guī)程將玻璃消解罐放置于超級(jí)微波消解系統(tǒng)中，消解功率為1000 W，在20 min 內(nèi)溫度升至250 ℃，250 ℃保持10 min，待微波消解系統(tǒng)冷卻后將其取出，等待蒸汽揮盡后將消解罐內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)入到10 mL 容量瓶中，并用少量水洗滌消解罐，洗液同時(shí)合并于容量瓶中，搖勻，即得供試品溶液。同法制得不含苦水玫瑰樣品的試劑空白溶液。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制在已確定條件下，測(cè)定各元素標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果Pb、Cd、As、Hg、Cu 5 種元素均具良好的線性關(guān)系。以Pb、Cd、As、Hg、Cu元素標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)量值（3 次讀數(shù)的平均值）為縱坐標(biāo)，繪制Pb、Cd、As、Hg、Cu 元素標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各元素線性方程及相關(guān)系數(shù)。見表2。

表2 Pb、Cd、As、Hg、Cu元素的線性關(guān)系、檢出限、定量限

2.6 方法檢出限及定量限連續(xù)測(cè)定12 份試劑空白溶液，計(jì)算測(cè)得信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差。采用基于響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率定義檢出限（DL），即DL=3.3δ/S（δ：響應(yīng)值的偏差；S：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率）。見表2。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)選擇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)大米（Fapas T07187QC）和苦水玫瑰樣品同時(shí)處理測(cè)定數(shù)據(jù)，測(cè)定結(jié)果顯示苦水玫瑰測(cè)定值均在誤差范圍內(nèi)，表明該方法準(zhǔn)確度良好。見表3。

表3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)大米與苦水玫瑰中As、Cd含量（n=3） μg/kg

2.8 精密度試驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、Hg 單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液及內(nèi)標(biāo)溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果顯示精密度RSD 在1.1%～2.5%之間，符合《中華人民共和國藥典》附錄要求。

2.9 測(cè)定方法精密吸取空白溶液、供試品溶液與內(nèi)標(biāo)溶液適量，注入電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中Pb、Cd、As、Hg、Cu 元素含量，202 Hg、208 Pb 以209 Bi 為內(nèi)標(biāo)，114 Cd以115 In為內(nèi)標(biāo)，63 Cu、75 As以74 Ge為內(nèi)標(biāo)，計(jì)算得各元素含量見附表1。

附表1 甘肅不同產(chǎn)地20批苦水玫瑰中Pb、Cd、As、Hg、Cu含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

本研究測(cè)定結(jié)果顯示，甘肅不同產(chǎn)地20 批苦水玫瑰中重金屬含量符合《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》WM/T 2-2004 對(duì)藥材重金屬及有害元素的限量要求［8-13］，Pb、Cd、As、Hg、Cu含量均低于擬定限度：重金屬總量≤20.0 mg/kg；Pb≤5.0 mg/kg；Cd≤0.3 mg/kg；Hg≤0.2 mg/kg；Cu≤20 mg/kg；As≤2.0 mg/kg，含量均在安全范圍內(nèi)。

現(xiàn)行2020 年版《中華人民共和國藥典》收載兩種重金屬及有害元素項(xiàng)目檢查方法：ICP-MS 法和原子吸收法。原子吸收法一次只能測(cè)定一種元素，ICP-MS 法能同時(shí)測(cè)定多種元素，極大地提高了檢驗(yàn)效率，且應(yīng)用前景廣泛。ICP-MS 分析過程中，為了消除待測(cè)元素信號(hào)由于基體效應(yīng)發(fā)生降低或增強(qiáng)情況，應(yīng)選用適當(dāng)內(nèi)標(biāo)元素進(jìn)行校正從而消除基體效應(yīng)。本研究建立的苦水玫瑰中重金屬及有害元素實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)人員對(duì)外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法兩種測(cè)定方法進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示內(nèi)標(biāo)法更能提高測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性［14-17］。

本研究對(duì)苦水玫瑰標(biāo)準(zhǔn)草案［18］的形成提供了重要數(shù)據(jù)支持，對(duì)其重金屬及有害元素含量水平進(jìn)行了真實(shí)反映，相關(guān)數(shù)據(jù)在標(biāo)準(zhǔn)起草說明中予以發(fā)布。本研究方法完善了苦水玫瑰藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為保證苦水玫瑰藥材的有效性和安全性，提高苦水玫瑰藥材質(zhì)量控制水平提供了研究基礎(chǔ)。