王詩(shī)睿 李露婧 羅童勻 程 楠
(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),北京 100083)
當(dāng)前,國(guó)民生活水平的提升使人們對(duì)于食品安全問(wèn)題越發(fā)重視[1]。目前,我國(guó)食品安全檢測(cè)的主要依據(jù)是食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[2],其中化學(xué)法主要根據(jù)食品組成成分的化學(xué)性質(zhì)對(duì)食品質(zhì)量及安全進(jìn)行檢測(cè)評(píng)價(jià)[3],技術(shù)成熟、應(yīng)用廣泛[4],但檢測(cè)效率較低,對(duì)試驗(yàn)環(huán)境和儀器要求較高,且有一定的毒害;儀器分析一般基于物質(zhì)性質(zhì),利用專業(yè)的儀器進(jìn)行鑒定,具有便捷、準(zhǔn)確的特點(diǎn)[5],可用于食品成分分析、添加劑和農(nóng)藥殘留檢測(cè)等[6],但對(duì)儀器依賴程度高,檢測(cè)效率有待提升。近年也發(fā)展了許多新興的食品安全檢測(cè)技術(shù),如紙基微型分析系統(tǒng)[7],包括紙層析法、化學(xué)試紙、側(cè)流層析試紙條、紙基微流控分析裝置和合成生物學(xué)紙等,利用紙基表面識(shí)別元件與靶標(biāo)分子的識(shí)別反應(yīng),將分析物的濃度轉(zhuǎn)化為光學(xué)、電化學(xué)或其他信號(hào)進(jìn)行定性、半定量或定量檢測(cè)[8-9],雖具有簡(jiǎn)單便攜、成本較低優(yōu)勢(shì),但存在靈敏度較低、易受污染、穩(wěn)定性較差等局限。
近年,DNA 介導(dǎo)的金屬納米材料因其易于合成與修飾、穩(wěn)定性高、生物相容性好、具有較高的靈敏度和選擇性等特性,成為應(yīng)用于生物傳感器的理想信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件,是研究的一大熱點(diǎn)[10]。常見(jiàn)可調(diào)控金屬材料包括Ag、Au、Pb、Pd、Cu、Se 以及Au-Ag、Pd-Au 合金和金屬氧化物等[11],其中金納米顆粒(gold nanoparticles,AuNPs)是研究較多的DNA 修飾納米材料,也是較穩(wěn)定的金屬納米粒子之一,具有獨(dú)特的理化性質(zhì)和優(yōu)異的生物相容性等固有性質(zhì)[12],性能優(yōu)良,能夠以高靈敏度和選擇性對(duì)超微量樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)原位分析[13],在構(gòu)建傳感器方面有較多優(yōu)秀的研究成果[14]。DNA 介導(dǎo)金納米材料已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于包括食品的重金屬、致病菌、農(nóng)藥、獸藥殘留檢測(cè)及生物毒素在內(nèi)的食品安全檢測(cè)領(lǐng)域[15],且相關(guān)研究仍在不斷深入,力圖開發(fā)出更多有效的生物傳感器用于食品安全評(píng)估檢測(cè)。本研究綜述了DNA 調(diào)控金納米探針的機(jī)理、性質(zhì)及其在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展,分析了不足與挑戰(zhàn)并進(jìn)行展望,以期為其在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用提供理論參考。
納米顆粒(nanoparticles,NPs)的性質(zhì)與功能多取決于其形狀和表面結(jié)構(gòu)[16-17]。如何精確、可重復(fù)地調(diào)控納米材料結(jié)構(gòu),控制其在生物傳感器中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)能力,是決定檢測(cè)性能的關(guān)鍵。與物理、電化學(xué)和直接化學(xué)合成等方法相比,種子介導(dǎo)生長(zhǎng)是一種簡(jiǎn)單、有效地調(diào)控納米結(jié)構(gòu)的方法[18]。在種子介導(dǎo)生長(zhǎng)過(guò)程中,首先是確定納米晶體成核和生長(zhǎng)位點(diǎn),后配體作為覆蓋劑指導(dǎo)納米晶體生長(zhǎng)。
配體可以吸附到NPs 的特定表面,從而影響前驅(qū)體的還原和擴(kuò)散效率以及膠體的穩(wěn)定性[19-20],因此,可通過(guò)調(diào)整種子介導(dǎo)生長(zhǎng)過(guò)程中的覆蓋劑來(lái)調(diào)控納米結(jié)構(gòu)的大小、形狀和生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特性。如Presnova 等[21]利用生物素標(biāo)記的DNA 與固定在微陣列上的捕獲寡核苷酸探針雜交,通過(guò)羥胺還原四氯金酸優(yōu)化了種子介導(dǎo)的AuNPs,得到的AuNPs 的平均尺寸是之前的4倍,經(jīng)過(guò)優(yōu)化的AuNPs 未來(lái)有望結(jié)合儀器和比色檢測(cè),進(jìn)一步應(yīng)用到其他基于膜的核酸檢測(cè)技術(shù)中。隨著技術(shù)逐漸成熟,對(duì)AuNPs 的調(diào)控也有更大可能性,如Affi等[22]利用飛秒激光器合成了尺寸和形狀可調(diào)控的AuNPs(直徑從7.30改變至27.2 nm),該技術(shù)是NPs開發(fā)的一大突破,其中采用環(huán)保還原合成方式替代強(qiáng)還原劑也是未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)。
在種子介導(dǎo)生長(zhǎng)過(guò)程中,常見(jiàn)的覆蓋劑有亞硫酸鹽、檸檬酸鹽和表面活性劑(如十六烷基三甲基溴化銨等),已被用于合成納米材料[23-25],但這些覆蓋劑官能團(tuán)數(shù)量及調(diào)控能力有限。近年研究發(fā)現(xiàn),DNA 分子具有很大的作為覆蓋劑的潛力。
DNA 分子作為主要的遺傳學(xué)物質(zhì),由兩條脫氧核苷酸鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu),外側(cè)的五碳糖和磷酸具強(qiáng)親水性,內(nèi)側(cè)的堿基對(duì)以氫鍵固定,使DNA 分子具有高度特異性的互補(bǔ)配對(duì)能力;DNA 具有高度的結(jié)構(gòu)可編程性、良好的生物相容性等特點(diǎn)[26-27],可調(diào)控各結(jié)合靶點(diǎn)的電荷、大小、疏水性和結(jié)合方式,應(yīng)用前景廣闊;DNA 還具有熱敏感性,溫度高于DNA 的解鏈溫度時(shí),氫鍵被破壞,雙鏈解開,因此DNA 在納米材料自驅(qū)動(dòng)組裝領(lǐng)域有一定應(yīng)用潛力[28]。
在后來(lái)的研究中,常用修飾后的DNA 分子作為覆蓋劑合成金納米材料。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),硫醇化DNA 較未修飾DNA 在序列通用性、吸附極性控制和吸附穩(wěn)定性等方面更加優(yōu)良[29];吸附親和力大小表現(xiàn)為硫醇>硫代磷酸酯(phosphorothioate,PS)>腺嘌呤>胸腺嘧啶,因此PS DNA 對(duì)序列的依賴性較小。Yin 等[30]研究開發(fā)了一種高階DNA 納米結(jié)構(gòu)-硫醇化寡核苷酸鏈(SHDNA-AuNPs)修飾球形AuNPs 作為“電源板”,與作為“插頭”的各種攜帶互補(bǔ)單鏈DNA 的DNA 納米結(jié)構(gòu)相連接,這種SH-DNA-AuNPs 介導(dǎo)的插件組裝技術(shù)為DNA 納米材料自組裝提供了新的可能,未來(lái)在納米材料的個(gè)性化合成上有很大發(fā)展空間。
DNA 介導(dǎo)種子生長(zhǎng)的一般過(guò)程包括3 個(gè)步驟:首先,將預(yù)制好的種子引入生長(zhǎng)溶液,加入DNA 吸附在種子表面,降低表面能,并作為金屬生長(zhǎng)的模板;其次,加入還原劑將金屬離子前體轉(zhuǎn)化為原子;最后,金屬原子選擇性地沉積在種子的某些區(qū)域,產(chǎn)生不同的形態(tài)[31]。
1.3.1 DNA 和金納米材料作用 DNA 鏈雜交反應(yīng)是DNA-納米技術(shù)的基礎(chǔ)。DNA 分子的4 種堿基分別為腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T),不同的核苷酸之間依靠磷酸二酯鍵進(jìn)行共價(jià)連接,兩條DNA 單鏈依靠堿基對(duì)之間的氫鍵等弱相互作用力而反向結(jié)合。在熱力學(xué)驅(qū)動(dòng)下,兩條互補(bǔ)的單鏈DNA 分子在適宜條件下能夠通過(guò)氫鍵、范德華力和靜電力互相作用發(fā)生自發(fā)雜交,人為對(duì)DNA 序列進(jìn)行編程可以控制DNA 的鏈雜交反應(yīng)。其中,堿基相互作用為主要作用力,電荷相互作用力保證了膠體穩(wěn)定性[32]。
1.3.2 還原和生長(zhǎng) DNA 吸附到金屬表面后,可加入檸檬酸鹽、抗壞血酸等還原劑,將金屬離子前體還原為原子,可通過(guò)還原劑的濃度或反應(yīng)活性來(lái)控制金屬生長(zhǎng),以避免在溶液中重新形成其他金屬NPs。
在DNA 介導(dǎo)金納米的研究發(fā)展過(guò)程中,還原生長(zhǎng)的形狀也逐漸可控、多變(圖1)。2008 年,DNA 首次被用作表面配體,通過(guò)硫代DNA 介導(dǎo)AuNPs 作為模板來(lái)介導(dǎo)高穩(wěn)定性金納米花顆粒的形成[33-34]。2011 年,劉洪林等[35]將合成的4- 二甲基氨基毗吡啶(dimethylaminopyridine,DMAP)包覆的AuNPs 靜電自組裝到長(zhǎng)鏈的λ-DNA 上形成網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu),制備了均勻、一致、具有高密度納米間隙熱點(diǎn)的活性基底。2012年,已有研究通過(guò)靶向定位目標(biāo)組織或細(xì)胞,在納米探針結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上進(jìn)行改造,加入治療基團(tuán),形成診斷治療型納米探針,其中包括金納米星[36-37]。2016 年,Satyavolu 等[38]篩選了4 個(gè)同源寡核苷酸序列A10、G10、C10、T10,用于使用Pd 立方晶種合成Pd-Au 核殼結(jié)構(gòu)。A10 產(chǎn)生了菱形八面體形狀,C10 產(chǎn)生了立方八面體形狀,而G10 和T10 分別促進(jìn)了起伏結(jié)構(gòu)和核框架結(jié)構(gòu)。2017 年,Ma 等[39]首先利用DNA 分子組裝成金納米棒二聚體,成功利用上轉(zhuǎn)換納米粒子包圍的金納米棒二聚體之間的表面增強(qiáng)拉曼散射信號(hào),實(shí)現(xiàn)了活細(xì)胞中microRNA-21 的定量、原位成像檢測(cè)。2021 年,Hu 等[40]設(shè)計(jì)了一種用于高靈敏度蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物檢測(cè)的創(chuàng)新型適配體表面增強(qiáng)拉曼光譜(surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS)生物傳感器,其中包含SERS標(biāo)簽(報(bào)告標(biāo)記的Au納米橋納米間隙顆粒,Au NNPs)和新型磁性捕獲基質(zhì)(Ag 包被的FeO-AuNPs,Ag MNPs)。
圖1 DNA介導(dǎo)金納米材料生長(zhǎng)形狀發(fā)展Fig.1 Growth shape development of DNA-mediatedgold nanomaterials
研究證明,不同還原劑對(duì)吸附的DNA 分子親和力不同。Ding等[41]的試驗(yàn)對(duì)4種不同還原劑:檸檬酸鹽、葡萄糖、抗壞血酸鹽和4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸制備的AuNPs 進(jìn)行比對(duì),通過(guò)觀察在520~530 nm 的表面等離激元峰吸光度相同時(shí)吸附DNA 的情況,發(fā)現(xiàn)檸檬酸鹽-AuNPs 對(duì)吸附的DNA 親和力、靈敏度更高。影響還原劑性質(zhì)的還有很多外在因素,如老化時(shí)間、溫度等,經(jīng)過(guò)6 個(gè)月的老化,檸檬酸鹽-AuNPs 膠體穩(wěn)定性、DNA 吸附效率、靈敏度均大幅度下降,且不耐高溫。
DNA 介導(dǎo)的金納米材料結(jié)構(gòu)識(shí)別特性增強(qiáng)。這是由于合成的膠體具有穩(wěn)定性,使DNA 的功能得以保留,最終獲得的納米粒子具有特定的識(shí)別能力,可以放大信號(hào),特異性識(shí)別目標(biāo),高度有序的金納米結(jié)構(gòu)也使其在生物傳感器中應(yīng)用廣泛。如Cheng等[42]對(duì)金電極上的CD63 適體修飾了DNA 四面體,被用作外泌體特異性捕獲的識(shí)別元件。部分互補(bǔ)的DNA 探針充當(dāng)連接捕獲的外泌體和3個(gè)DNA-AuNPs 信號(hào)探針的橋梁,形成了類似三葉草的結(jié)構(gòu),從而解決其他AuNPs 聚集引起的識(shí)別和敏感性問(wèn)題。當(dāng)系統(tǒng)中存在癌性外泌體時(shí),來(lái)自DNA-AuNPs 納米復(fù)合材料的亞甲基藍(lán)分子在電極表面的大量積累,導(dǎo)致強(qiáng)烈的電流信號(hào),檢測(cè)限為1.0×103~1.0×108個(gè)·μL-1。
2.2.1 局域表面等離子體共振 由于金屬粒子表面的自由電子在特定波長(zhǎng)的光下共振,金屬納米粒子如AuNPs 和AgNPs 等均表現(xiàn)出局域表面等離子體共振(localized surface plasmon resonance,LSPR)。LSPR 對(duì)金屬NPs的大小、形狀和介電環(huán)境都很敏感,但在某些區(qū)域難以精確調(diào)諧LSPR 峰。在光通信或激光調(diào)制等許多應(yīng)用中,金納米棒(gold nanorods,AuNR)必須與透明固體(例如聚合物、玻璃或晶體)結(jié)合。但Huang等[43]研究制備了在光通信窗口中具有縱向LSPR(LLSPR)波長(zhǎng)(1 450 nm)的0.23 mg AuNR 分散甲基硅樹脂,并由此發(fā)現(xiàn)AuNR-有機(jī)硅復(fù)合材料的高熱穩(wěn)定性(250 ℃煅燒10 h 后,樣品L-LSPR 峰保持在1 380 nm以上;非線性吸收系數(shù)被測(cè)量為-11.71 cm GW-1)優(yōu)于許多非線性材料,具有很大應(yīng)用前景。
2.2.2 表面增強(qiáng)拉曼光譜 SERS是生物分子檢測(cè)的常用技術(shù)。金屬粗糙表面或金屬NPs交界處的“熱點(diǎn)”區(qū)域的強(qiáng)電磁場(chǎng)導(dǎo)致信號(hào)增強(qiáng)。DNA介導(dǎo)的方法可以合成具有粗糙表面或顆粒間納米縫隙、具有納米結(jié)的不同納米材料,具有增強(qiáng)的SERS特性,靈敏度增加,適用于各種檢測(cè)目標(biāo)的生物傳感。各種等離子體之間的耦合對(duì)于SERS 的特性增強(qiáng)至關(guān)重要。Pillanagrovi等[44]研究開發(fā)了在共振金納米孔徑(resonant gold nanoapertures,NA)中組裝AuNPs的方式,使耦合介導(dǎo)的近場(chǎng)增強(qiáng),并通過(guò)4-巰基苯甲酸(4-mercaphobenzoic acid,4-MBA)評(píng)估AuNP-NA 基板的SERS 潛力,發(fā)現(xiàn)與裸NA 模板相比,SERS 強(qiáng)度可提高10 倍,對(duì)于未來(lái)實(shí)現(xiàn)可調(diào)共振的低成本、高效等離子體基板具有很大啟發(fā)。
DNA 修飾的NPs 表面被DNA 生物分子功能化,這些分子與表面蛋白具有高親和力,因此具有更高的生物相容性,使修飾后的NPs 具有高效的細(xì)胞粘附能力和生物傳感、成像的特性。AuNR 在光動(dòng)力或光熱癌癥治療中的應(yīng)用已得到廣泛研究,但其聲敏特性相關(guān)研究較少。利用此特性,研究人員設(shè)計(jì)了多種DNA 介導(dǎo)的智能納米遞送系統(tǒng)來(lái)增強(qiáng)抗癌藥物的腫瘤靶向性,如Gu 等[45]設(shè)計(jì)的納米顆粒系統(tǒng),由負(fù)載阿霉素(doxorubicin,DOX)的金納米顆粒(<30 nm)和四面體DNA 納米結(jié)構(gòu)(<25 nm)組成,隨著深入腫瘤過(guò)程中環(huán)境pH 值變化,系統(tǒng)結(jié)構(gòu)編程性變化至10~20 nm,可深度滲透到腫瘤核心,從而實(shí)現(xiàn)良好的抗腫瘤功效和生物相容性,為開發(fā)用于抗癌治療的智能納米系統(tǒng)提供了新方向。
部分金屬NPs(如Au、Ag、Pd 和Pt)具有優(yōu)異的酶樣催化活性,這類NPs 被稱為納米酶。納米酶的催化活性受形態(tài)影響,難以精確控制。通過(guò)DNA 介導(dǎo)可調(diào)整納米材料的催化效率和選擇性,使其靈敏度增強(qiáng),在生物傳感、比色分析中具有更加廣泛的應(yīng)用前景。Khalil 等[46]研究表明,金納米棒(AuNRs)的催化效率很大程度上取決于縱橫比;改變HNO3濃度,AuNRs 的縱橫比從2.3增至4.6,后在生長(zhǎng)溶液中增至5.4;測(cè)試表明,對(duì)于相同的金含量,無(wú)論總表面積如何,具有較大高能側(cè)表面積的納米棒催化效果更明顯。
由于DNA 具有分子識(shí)別功能,DNA 適配體可以特異性結(jié)合各種分子,如蛋白質(zhì)、有機(jī)染料、金屬離子和小分子等,用于食品中生物和非生物類對(duì)象的檢測(cè)具有極大的優(yōu)勢(shì)。納米材料的DNA 定向形狀會(huì)影響其光學(xué)和催化性能[47],例如,同時(shí)改變各向異性AuNRs的縱橫比和尺寸,可用于在很寬的范圍內(nèi)調(diào)整其局部表面等離子體共振(localized surface plasmon resonance,LSPR)[48],或在納米間隙之間或納米內(nèi)部具有增強(qiáng)局部電磁場(chǎng)的DNA 修飾納米材料表現(xiàn)出增強(qiáng)的SERS 信號(hào)[49-50]。根據(jù)量子力學(xué)中的波粒二象性理論,量子點(diǎn)是納米級(jí)晶體材料,其性質(zhì)介于塊狀材料和離散原子之間。量子點(diǎn)的許多基本性質(zhì)取決于納米范圍內(nèi)材料的尺寸和晶體結(jié)構(gòu)[51],量子點(diǎn)尺寸的變化會(huì)改變其峰值發(fā)射的顏色。這些零微納米結(jié)構(gòu)可以分別通過(guò)納米尺度上從小到大尺寸的變化,發(fā)出從藍(lán)色到紅色的可見(jiàn)光[52]。因此,該種基于分子相互作用的多功能技術(shù)多以比色法或電化學(xué)法為基礎(chǔ),與LSPR[53]和SERS[54-56]原理結(jié)合,開發(fā)生物傳感器用于食品安全評(píng)估檢測(cè)。與傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)相比,DNA 功能化的金屬和金屬氧化物納米粒子具有高精度、高特異性、微智能、低成本等優(yōu)勢(shì)[57],有廣泛的應(yīng)用前景。
3.2.1 生物類對(duì)象 食品檢測(cè)的生物類對(duì)象主要是微生物,包括沙門氏菌、李斯特菌、大腸桿菌等。細(xì)菌的多種表面相互作用和功能在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、宿主感染和菌落形成中起著重要作用[58],為DNA修飾納米材料用于檢測(cè)識(shí)別提供了機(jī)會(huì)。Zhang 等[59]首次報(bào)道了以大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為靶菌的SERS 平臺(tái),用于在萬(wàn)古霉素和核酸適體雙重識(shí)別的基礎(chǔ)上同時(shí)檢測(cè)兩種致病菌。該雙識(shí)別平臺(tái)將萬(wàn)古霉素修飾的Fe3O4@Au 磁性納米粒子(Fe3O4@Au-Van MNPs)用于廣譜識(shí)別和高效細(xì)菌富集,以及適配體功能化的SERS標(biāo)簽,用于對(duì)真實(shí)標(biāo)本中的目標(biāo)細(xì)菌進(jìn)行特異性和靈敏的定量。Lu等[60]探索了一種DNA編程策略,即合成具有優(yōu)異催化和抗菌活性的各向異性啞鈴狀A(yù)u-Pt納米顆粒,可用于大腸桿菌O157∶H7 的根除和檢測(cè),在95 min 內(nèi)具有強(qiáng)大的療效,并提供出色的線性檢測(cè)(10~107CFU·mL-1),檢測(cè)限為2 CFU·mL-1。Madkour等[61]開發(fā)了一種基于AuNPs的比色法用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌SPA基因,檢測(cè)原理如圖2-A所示。物理化學(xué)分析結(jié)果表明,Au-Ns 的正確制備具有-13.42 mV 的Zeta電位和6~11 nm的粒徑范圍。此外,Au-Ns顯示出100% 的特異性,檢測(cè)限(detection limit,DL)為6 fg·μL-1,該方法在臨床與實(shí)驗(yàn)室研究中得到廣泛應(yīng)用。
圖2 金納米在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用Fig.2 Application of gold nanoparticles in food safety detection
3.2.2 非生物類對(duì)象 對(duì)于食品檢測(cè)的非生物類對(duì)象而言,主要是農(nóng)藥[62-63]、重金屬離子[64-65]、有害毒素[66-68]等。對(duì)于這些檢測(cè)對(duì)象,傳統(tǒng)檢測(cè)方法有氣相色譜法、高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography,HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gaschromatography-mass spectrometry,GC-MS)等。上述方法雖具有良好的靈敏度和選擇性,但其應(yīng)用存在一些缺點(diǎn),如樣品預(yù)處理方法復(fù)雜、高度依賴專業(yè)操作人員、耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)和設(shè)備昂貴。因此,DNA 介導(dǎo)金納米材料的應(yīng)用為非生物檢測(cè)技術(shù)發(fā)展提供了新的可能性。
3.2.2.1 農(nóng)藥 農(nóng)藥作為農(nóng)產(chǎn)品的保護(hù)傘在預(yù)防病蟲害方面發(fā)揮著重要作用[69],但農(nóng)藥的不當(dāng)使用會(huì)引發(fā)害蟲抗性、非目標(biāo)毒性、持久性殘留等問(wèn)題,進(jìn)入人體后可能造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷[70]。DNA 介導(dǎo)的金納米結(jié)構(gòu)可控且多樣,將其應(yīng)用于農(nóng)藥檢測(cè)后,所設(shè)計(jì)的結(jié)構(gòu)不僅可以降低空間位阻,檢測(cè)的靈敏度與效率均可得到一定提高。如Yang 等[71]與Li 等[72]將四面體DNA 金納米結(jié)構(gòu)(Au-TDN)應(yīng)用于構(gòu)建電化學(xué)適體傳感器來(lái)檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥,以甲基對(duì)硫磷為例,檢測(cè)限分別可達(dá)3 pg·mL-1(信躁比S/N=3)、0.7 pg·mL-1,這為未來(lái)開發(fā)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)裝置奠定了基礎(chǔ)。Shi等[73]開發(fā)了一種基于AuNPs@MWCNTs 和Au@AgNPs 的電化學(xué)適體傳感器,用于檢測(cè)農(nóng)藥丙溴磷(profenofos,PFF),該方案中的Au@AgNPs 起催化劑的作用,加速過(guò)氧化氫的分解,提高了電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的效率,從而實(shí)現(xiàn)了輸出信號(hào)的二次放大,檢測(cè)的線性范圍為100~1×109fg·mL-1,檢測(cè)限為5.32 fg·mL-1。
3.2.2.2 重金屬離子與有害毒素 重金屬離子和有害毒素一般通過(guò)食物鏈系統(tǒng)在動(dòng)物和人體內(nèi)累積,可能嚴(yán)重?fù)p害黏液組織、腸道、骨骼、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、腎臟和生殖系統(tǒng)。重金屬離子具有產(chǎn)生高反應(yīng)活性的化學(xué)實(shí)體的能力,例如產(chǎn)生一些可以引起脂質(zhì)過(guò)氧化、DNA 損傷、蛋白質(zhì)巰基氧化和其他作用的自由基[74]。Liu等[75]開發(fā)了一種基于雜交DNA-AuNPs水凝膠薄膜的比色生物傳感系統(tǒng),通過(guò)引入Pb2+或UO22+的依賴性脫氧核糖核酸酶序列,應(yīng)用于Pb2+的比色檢測(cè),其中DNA 酶結(jié)構(gòu)的離子選擇性激活觸發(fā)DNA-AuNPs水凝膠膜的降解和AuNPs 作為靈敏比色信號(hào)讀數(shù)的釋放,Pb2+的檢測(cè)限為2.6 nmol·L-1。該方法附著在便攜式玻璃基板上的響應(yīng)式水凝膠膜生物傳感系統(tǒng),也促進(jìn)了生物傳感系統(tǒng)的長(zhǎng)期存儲(chǔ),在未來(lái)對(duì)其他物質(zhì)的實(shí)際快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)應(yīng)用中可能具有巨大的潛力。為了使生物傳感器滿足便攜式應(yīng)用和長(zhǎng)期儲(chǔ)存的要求,Contreras-trigo 等[76]為檢測(cè)牛飼料中的AFB1,開發(fā)了一種基于AuNPs 的適體傳感器(圖2-B),可以用乙腈作為含AFB1飼料的萃取劑,首次允許從粗提取物中直接比色檢測(cè)AFB1(檢測(cè)限為5 μg·kg-1)。
本研究綜述了近年DNA 修飾金納米材料的研究進(jìn)展,包括合成機(jī)理、性質(zhì)變化及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用。DNA 介導(dǎo)的合成方法既方便又省時(shí),還可以對(duì)NPs 的結(jié)構(gòu)和形態(tài)進(jìn)行一定調(diào)控。所制備的NPs 具有優(yōu)異的物理化學(xué)性能,包括生物識(shí)別功能、催化活性以及光學(xué)特性SERS 和LSPR 性能,因此可以應(yīng)用于食品安全領(lǐng)域進(jìn)行生物或非生物靶標(biāo)的檢測(cè)。
盡管目前DNA 介導(dǎo)金納米的技術(shù)進(jìn)展較為可觀,但仍有不足。首先,截至目前,大多數(shù)研究只關(guān)注DNA 與單金屬的相互作用,多納米顆粒的開發(fā)情況較少,應(yīng)進(jìn)一步了解位點(diǎn)連接可能性與各位點(diǎn)連接后的相互影響效果,以滿足個(gè)性化金納米材料的設(shè)計(jì)與預(yù)測(cè)需求;另外,以往的研究大多集中在DNA 修飾NPs的制備和性質(zhì)上,仍需進(jìn)一步探索、優(yōu)化合成方法,減少副產(chǎn)物產(chǎn)生,使其在食品安全檢測(cè)中得到更廣泛應(yīng)用;同時(shí),NPs 在體內(nèi)外均具有遺傳毒性,在調(diào)控結(jié)構(gòu)與應(yīng)用的過(guò)程可能會(huì)由于與環(huán)境或生物結(jié)構(gòu)的相互作用而改變其毒性[77],因此,未來(lái)將NPs應(yīng)用于食品檢測(cè)時(shí),應(yīng)進(jìn)一步關(guān)注其結(jié)構(gòu)與性質(zhì),并重視對(duì)其毒性的檢測(cè)和劑量的限制。