楊麗楓，王 科，杜 卓，郭耀賓，魏鐵錚

（1.通遼市林業(yè)和草原局 森林公園管護(hù)中心，內(nèi)蒙古 通遼 028000； 2.中國科學(xué)院微生物研究所真菌學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100101； 3.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽 110866）

漏斗傘屬（Infundibulicybe Harmaja）是Harmaja[1]基于杯傘屬的漏斗杯傘[Clitocybe gibba (Pers.)P. Kumm.]為模式種建立的，目前隸屬于擔(dān)子菌門、蘑菇綱、蘑菇目、未定科，是一類具有漏斗形菌蓋、長延生菌褶和水滴形光滑擔(dān)孢子的腐生傘菌[1]。該屬真菌廣泛分布于北半球溫帶及亞熱帶地區(qū)[1-5]。

戴芳瀾[6]報道了產(chǎn)自我國的肉色杯傘[C.geotropa(Bull.) Quél.]和膜質(zhì)杯傘[C. infundibuliformisvar. membranacea(Vahl) Massee]這兩個種，分別為肉色漏斗傘[I. geotropa(Bull.) Harmaja]和漏斗傘[I. gibba(Pers.) Harmaja]的異名，是漏斗傘屬種類在我國最早的報道。趙琪等[7]報道了產(chǎn)于我國四川的紅褐漏斗傘（I. rufaQ. Zhao, K.D. Hyde,J.K. Liu & Y.J. Hao），是我國的第一個漏斗傘屬新種。劉虹等[8]基于產(chǎn)自山西的模式發(fā)表了又一新種——紅銀盤漏斗傘（I. hongyinpanL. Fan & H.Liu）。徐濟(jì)責(zé)等[9]發(fā)表了產(chǎn)自我國東北地區(qū)的粗糙漏斗傘 （I. trachysporaJ.Z. Xu, J.C. Qin & Yu Li）。He 和Yang[10]報道了我國分布的雙孢漏斗傘（I. bisporaZ.M. He & Zhu L. Yang） 和橢孢漏斗傘（I. ellipsosporaZ.M. He & Zhu L. Yang）兩個新種，以及另外5 個漏斗傘屬種類。此外，臧穆和夏榆[11]報道了阿爾泰漏斗傘[I. altaica(Singer) Harmaja]。魏鐵錚等[12]也報道了我國的堿紫漏斗傘[I.alkaliviolascens(Bellù) Bellù]。

在對內(nèi)蒙古東部地區(qū)大型真菌調(diào)查的過程中，發(fā)現(xiàn)漏斗傘屬種類5 種，其中雙孢漏斗傘、紅銀盤漏斗傘和細(xì)鱗漏斗傘為內(nèi)蒙古新記錄種。本文對這5 種漏斗傘屬真菌予以描述和討論。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本收集與形態(tài)鑒定

標(biāo)本采自內(nèi)蒙東部地區(qū)，同時針對中國科學(xué)院微生物所菌物標(biāo)本館（HMAS）館藏的產(chǎn)自內(nèi)蒙古自治區(qū)的漏斗傘屬標(biāo)本進(jìn)行整理和重新觀察鑒定。依據(jù)標(biāo)本野外照片和采集記錄信息，觀察和整理標(biāo)本的宏觀特征。借助光學(xué)顯微鏡，主要觀察干標(biāo)本的擔(dān)孢子、菌蓋表皮等重要的顯微特征。用手術(shù)刀片切取各部分組織，浸沒在5%的KOH 溶液，置于1000 倍顯微鏡下觀察。參照漏斗傘屬各相關(guān)物種的核心形態(tài)分類文獻(xiàn)的描述，對標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)分類鑒定。

1.2 DNA 提取、ITS 序列擴(kuò)增和測序

運(yùn)用CTAB 法[21]提取干標(biāo)本DNA。使用PCR儀，以提取物為模板，選擇ITS5（5′-ggaagtaaaagtcgtaacaagg-3′）/ITS4（5′-tcctccgcttattgatatgc-3′）[13]為擴(kuò)增引物，對其ITS 片段進(jìn)行擴(kuò)增。PCR 產(chǎn)物由擎科生物有限公司測序。參照和對比已發(fā)表文獻(xiàn)中各相關(guān)物種的可靠的ITS 序列（相關(guān)序列的NCBI 登錄號見表1），使用MEGA-X(V10.2.6)[14]，基于最大似然性分析法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，通過1000 次重復(fù)的序列回歸遞進(jìn)（Bootstrap）得到分枝支持率。

表1 用于漏斗傘屬系統(tǒng)發(fā)育分析的ITS 序列

2 結(jié)果

2.1 分子系統(tǒng)發(fā)育分析

本研究獲得源自內(nèi)蒙古自治區(qū)漏斗傘屬5 個種14 份標(biāo)本的ITS 序列。從GenBank（https://www.ncbi.nlm.nih.gov） 下載了上述物種及其近緣種的可靠的ITS 序列19 條，作為系統(tǒng)發(fā)育分析的參照序列。以肉色香蘑[Lepista irina(Fr.) H.E. Bigelow]的2 條ITS 序列作為外群。全部35 條ITS 序列組成矩陣，通過手工比對進(jìn)行排序后，采用MEGA-X 進(jìn)行最大相似性分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。用于系統(tǒng)發(fā)育分析的各物種ITS 序列及相關(guān)信息見表1.

經(jīng)手工比對和排序的矩陣的每條ITS 序列有882 個堿基（包含缺失的堿基位點(diǎn)），最大相似性系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果見圖1。從系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出，本文報道的內(nèi)蒙古自治區(qū)分布的漏斗傘屬種類所在分支都具有較高的支持率。根據(jù)分子系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果，結(jié)合形態(tài)分類研究，將本文所研究的漏斗屬標(biāo)本鑒定為堿紫漏斗傘、雙孢漏斗傘、漏斗傘、紅銀盤漏斗傘和細(xì)鱗漏斗傘 [I. squamulosa(Pers.)Harmaja]等5 個種，其中雙孢漏斗傘、紅銀盤漏斗傘和細(xì)鱗漏斗傘3 個種為內(nèi)蒙古自治區(qū)首次報道。

2.2 分類學(xué)

堿紫漏斗傘

Infundibulicybe alkaliviolascens(Bellù) Bellù,Bresadoliana 1(2): 6 (2012)

菌蓋直徑3-4.5cm，初期平展，中央有較淺的凹陷，成熟后漏斗狀，邊緣有時成波狀；表面褐黃色、淺褐色至黃褐色，中央有時略深，有放射狀條紋，濕潤時有時輕微水浸狀，變干后有輕微裂紋。菌褶寬至3mm，長延生，近白色至奶油色，間距近，不等長，有時有分岔和橫脈，邊緣平滑。菌柄3-5×0.3-0.5cm，中生，近圓柱形，基部有時膨大，與菌蓋同色或略淺，纖維質(zhì)，有絲光，有縱向細(xì)條紋；實(shí)心至松軟。菌肉白色至污白色，薄，肉質(zhì)，松軟；氣味有菌香味，味道淡。擔(dān)孢子印近白色。遇KOH 溶液（20%）菌蓋和菌柄表面紫色。擔(dān)孢子7-9.5×3.5-5 μm，近橢圓形至水滴狀，無色，薄壁，表面光滑。擔(dān)子22-30×5-7μm，棒狀，無色至近無色，薄壁，有4個擔(dān)孢子梗。囊狀體未見。子實(shí)層菌髓規(guī)則，菌絲直徑3-10μm，近圓柱形，無色，薄壁。菌蓋表皮單層，菌絲直徑5-10μm，平伏，有淺黃褐色至淺褐色的內(nèi)含物，索狀聯(lián)合常見。

研究標(biāo)本：內(nèi)蒙古：克什克騰旗，黃崗梁自然保護(hù)區(qū)，43°33′32.07″N，117°37′21.12″E，海拔1743 m，白樺林，2018 年9 月3 日，魏鐵錚、彭澤文、莊劍云和劉鐵志，8670，HMAS 279979。

圖2 內(nèi)蒙古自治區(qū)漏斗傘屬

堿紫漏斗傘的典型特征是子實(shí)體表面遇KOH溶液變紫色。這個種與常見的漏斗傘宏觀形態(tài)很相似，但其擔(dān)孢子長度可達(dá)9.5μm，而漏斗菇的擔(dān)孢子長度體內(nèi)過程小于6μm。從系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果來看，堿紫漏斗傘與I. kotanensisM. Ishaq, Fiaz& A.N. Khalid 有較近的親緣關(guān)系，二者宏觀形態(tài)也較為相似，但后者的擔(dān)孢子3.8-6.7×2.6-3.6μm（Ishaq et al. 2019），顯然小于堿紫漏斗傘的擔(dān)孢子。

雙孢漏斗傘

Infundibulicybe bisporaZ.M. He & Zhu L.Yang, Mycologia 115: 702 (2023)

菌蓋直徑3-6cm，初期平展，中央有凹陷，后凹陷加深，成熟呈漏斗形，有時邊緣呈波曲狀；表面中央淺褐色，周圍略顯褐色至淺黃褐色，邊緣顏色淺，不黏，光滑，濕潤時呈輕微水浸狀，邊緣有時有放射狀的溝紋。菌褶寬至3mm，長延生，近白色至奶油色，間距近，不等長，邊緣平滑。菌柄3-6.5×0.3-0.8cm，中生，近圓柱形，基部有時略有增粗；表面不黏，有微小纖維狀絨毛，濕潤時輕微水浸狀，有細(xì)小縱向條紋，有時有絲光；近白色、奶油色至略顯褐色；中央松軟，纖維狀。菌肉薄，近白色至污白色，肉質(zhì)，松軟；氣味不顯著，味道淡。擔(dān)孢子印近白色至奶油色。擔(dān)孢子4-6×3-4.5μm，近橢圓形至水滴形，無色，薄壁，表面光滑，稀少。擔(dān)子16-24×4.5-6.0 μm，棒狀，無色至半透明，薄壁，多數(shù)有2 個孢子梗，少數(shù)4 個孢子梗。囊狀體未見。子實(shí)層菌髓規(guī)則，菌絲直徑3-10μm。菌蓋表皮單層，菌絲直徑4-10μm，近圓柱形，平伏，內(nèi)含淺褐色色素。索狀聯(lián)合常見。

研究標(biāo)本：內(nèi)蒙古：克什克騰旗，白音敖包自然保護(hù)區(qū)，43°31′09.58″N，117°11′03.23″E，海拔1315 m，沙地云杉林，2018 年9 月4 日，8778，HMAS 255506；魏鐵錚、彭澤文、莊劍云和劉鐵志，8782，HMAS 290092；8791，HMAS 255508；43°30′51.16″N，117°10′45.80″E，海拔1342m，沙地云杉林，2018年9 月4 日，魏鐵錚、 彭澤文、 莊劍云和劉鐵志，8826，HMAS 290112。

雙孢漏斗傘的典型特征是擔(dān)子通常具有2 個擔(dān)孢子梗，僅少數(shù)情況下有4 個擔(dān)孢子梗。He &Yang（2023）描述這個種的菌蓋黃褐色至紅褐色，擔(dān)孢子大小為6-11.5×4-6μm。本研究發(fā)現(xiàn)的標(biāo)本菌蓋顏色較淺，呈輕微水浸狀，推測是由于浸水造成的脫色。另外，本研究標(biāo)本的子實(shí)體不成熟，擔(dān)孢子數(shù)量稀少且較小。這個種在宏觀形態(tài)和系統(tǒng)發(fā)育上與漏斗傘、紅銀盤漏斗傘和大孢漏斗傘（Infundibulicybe macrosporaM. Ali, J. Khan, Niazi & Khalid）等種類相近。然而，雙孢漏斗傘的擔(dān)孢子明顯比漏斗傘和紅銀盤漏斗傘的擔(dān)孢子大，而大孢漏斗傘的擔(dān)孢子可達(dá)10-13×6.2-9μm （Ali et al. 2020），明顯大于雙孢漏斗傘的擔(dān)孢子。

菌蓋直徑3-7cm，初期淺漏斗狀，成熟后漏斗狀，邊緣有時成波狀；表面奶油色、淺黃褐色，淺褐色至黃褐色，中央有時略深，邊緣有放射狀條紋，濕潤時有時輕微水浸狀，變干后有有時有輕微裂紋。菌褶寬至3mm，長延生，近白色至奶油色，間距近，不等長，有時有分岔和橫脈，邊緣平滑。菌柄3-5×0.3-0.5cm，中生，近圓柱形，基部有時膨大，近白色至與菌蓋同色或略淺，纖維質(zhì)，有絲光，有縱向細(xì)條紋；實(shí)心、松軟至中空。菌肉白色至污白色，薄，肉質(zhì)，松軟；氣味有菌香味，味道淡。擔(dān)孢子印近白色。擔(dān)孢子4.5-7×3.5-4.5μm，近橢圓形至水滴形，無色，薄壁，表面光滑。擔(dān)子23-27×5-7μm，棒狀，無色至近無色，薄壁，有4 個擔(dān)孢子梗。囊狀體未見。子實(shí)層菌髓規(guī)則，菌絲直徑4-15μm，近圓柱形，無色，薄壁。菌蓋表皮單層，菌絲直徑3-8μm，平伏，有略顯褐色的內(nèi)含物，索狀聯(lián)合常見。

研究標(biāo)本：內(nèi)蒙古：克什克騰旗，黃崗梁自然保護(hù)區(qū)，43°31′23.06″N，117°34′07.47″E，海拔1280m，落葉松、白樺和柳屬混交林，2018 年9 月2 日，魏鐵錚、彭澤文、莊劍云和劉鐵志，8603，HMAS 279938；117°32′12.53″N，43°32′44.29″E，海拔1673m，白樺林，2018 年9 月3 日，魏鐵錚、彭澤文、莊劍云和劉鐵 志，8722，HMAS 255494；8728，HMAS 290061；8744，290068；巴林右旗，賽罕烏拉保護(hù)區(qū)，正溝，44°13′05.99″N，118°44′23.74″E，海拔1168m，白樺、黑樺和山楊闊葉林，2018 年9 月7 日，彭澤文、莊劍云和劉鐵志，31，HMAS 290169。

漏斗傘的菌蓋和菌柄的顏色變化很大，可以從奶油色至紅褐色。He & Yang（2023）的系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果表明目前界定的漏斗傘為復(fù)合種，存在5個進(jìn)化分支，其中在我國分布的漏斗傘存在3 個進(jìn)化分支。本研究的所依據(jù)的序列與產(chǎn)自北美的漏斗傘的序列也存在一定差異。這個種與大孢漏斗傘有較近的親緣關(guān)系，但后者的擔(dān)孢子明顯大于漏斗傘的擔(dān)孢子。

紅銀盤漏斗傘

Infundibulicybe hongyinpanShanxi Univ. J.,Nat. Sci., Edit. 2019(1): 277 (2018)

菌蓋直徑6.5-11cm，成熟后漏斗狀，邊緣有時呈波狀，有時開裂；表面肉褐色至褐色，有時因潮濕而褪色成淺褐色至黃褐色，邊緣有輕微放射狀條紋。菌褶寬至3mm，長延生，近白色至奶油色，間距近，不等長，邊緣平滑。菌柄3-5×0.3-0.5cm，中生，近圓柱形，基部有時膨大，與菌蓋同色或略淺，纖維質(zhì)，有絲光，有縱向細(xì)條紋；實(shí)心、松軟至中空。菌肉白色至污白色，薄，肉質(zhì)，松軟；氣味不顯著，味道淡。擔(dān)孢子印近白色。擔(dān)孢子6-8×4.5-6μm，近球形至水滴形，無色，薄壁，表面光滑。擔(dān)子28-38×5-8μm，棒狀，無色至近無色，薄壁，有4 個擔(dān)孢子梗。囊狀體未見。子實(shí)層菌髓規(guī)則，菌絲直徑4.0-15μm，近圓柱形，略膨大，無色，薄壁。菌蓋表皮單層，菌絲直徑3-8μm，平伏，有淺黃褐色至淺褐色內(nèi)含物，索狀聯(lián)合常見。

研究標(biāo)本：內(nèi)蒙古：克什克騰旗，黃崗梁自然保護(hù)區(qū)，117°32′12.53″N，43°32′44.29″E，海拔1673m，白樺林，2018 年9 月3 日，魏鐵錚、彭澤文、莊劍云和劉鐵志，8708，HMAS 255493；8743，HMAS 255499。

紅銀盤漏斗傘的典型特征是有較大的子實(shí)體，菌蓋通常為較深的褐色，擔(dān)孢子近球形至水滴形。這個種在形態(tài)和系統(tǒng)發(fā)育上與I. geotropa(Bull.)Harmaja 的較為接近，二者都有近球形的擔(dān)孢子，但后者菌蓋的顏色通常較前者淺。本研究發(fā)現(xiàn)受環(huán)境條件影響，這個種不同個體的菌蓋顏色可以存在很大的顏色差異，因此，其準(zhǔn)確鑒定主要基于分子系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果。

細(xì)鱗漏斗傘

Infundibulicybe squamulosa(Pers.) Harmaja,Annales Botanici Fennici 40 (3): 217 (2003)

菌蓋直徑3-6.5cm，初期平展且中央凹陷，后凹陷加深，成熟后寬漏斗形至漏斗形，邊緣通常呈波曲狀，有時開裂；表面黃褐色、紅褐色至褐色，中央與四周顏色差異不明顯，不黏，光滑至有纖維狀絨毛，成熟后有細(xì)微纖維狀小鱗片，濕潤時呈輕微水浸狀，邊緣有放射狀的條紋。菌褶寬至4mm，長延生，近白色至奶油色，間距近，右二分叉，邊緣平滑。菌柄3-5.5×0.3-0.7cm，中生，近圓柱形，基部有時略有增粗；表面淺褐色、紅褐色至褐色，不黏，有微小纖維狀絨毛，有細(xì)小縱向條紋，有時有絲光濕潤時輕微水浸狀；中央松軟至空心，纖維狀。菌肉薄，近白色至污白色，肉質(zhì)，松軟；氣味不顯著，味道淡。擔(dān)孢子印近白色至奶油色。擔(dān)孢子6.0-10×3.5-4.5μm，近橢圓形至長橢圓形，無色，薄壁，表面光滑。擔(dān)子16-22×5.0-6.0μm，棒狀，無色至半透明，薄壁，有4 個孢子梗。囊狀體未見。子實(shí)層菌髓規(guī)則，菌絲直徑4-10μm。菌蓋表皮單層，菌絲直徑3-10μm，近圓柱形，有時略膨大，平伏，內(nèi)含淺褐色色素。索狀聯(lián)合常見。

研究標(biāo)本：內(nèi)蒙古：克什克騰旗，白音敖包自然保護(hù)區(qū)，43°31′09.58″N，117°11′03.23″E，海拔1315 m，沙地云杉林，2018 年9 月4 日，魏鐵錚、彭澤文、莊 劍 云 和 劉 鐵 志，8762，HMAS 255505；8765，HMAS 290079；8795，HMAS 255510；43°30′51.16″N，117°10′45.80″E，海拔1342m，沙地云杉林，2018年9 月4 日，魏鐵錚、 彭澤文、 莊劍云和劉鐵志，8804，HMAS 255512。

細(xì)鱗漏斗傘的典型特征是菌蓋表面黃褐色、紅褐色至褐色，有纖維狀小鱗片。在系統(tǒng)發(fā)育上，這個種與漏斗傘和大孢漏斗傘有較近的親緣關(guān)系，但后二者菌蓋都缺乏顯著的纖維狀小鱗片。He 和Yang[10]在報道我國漏斗傘屬真菌時，引證了一份產(chǎn)自云南的細(xì)鱗漏斗傘的標(biāo)本 （ZMHe74） 及其ITS 序列（OP964651），但未提供形態(tài)描述及其他相關(guān)信息。本文提供了這個種的形態(tài)特征。

3 討論

漏斗傘屬種類在形態(tài)上的變化范圍較大，給這個屬物種的形態(tài)鑒定造成很大困難。同一物種的菌蓋顏色易受子實(shí)體含水量和環(huán)境濕度的影響，不同采集物，甚至不同個體之間可能存在很大的色差，在鑒定時，需要結(jié)合其他形態(tài)特征，加以仔細(xì)甄別。另外，子實(shí)體的發(fā)育狀態(tài)，尤其是擔(dān)孢子的成熟度，也影響著這個屬的準(zhǔn)確鑒定。此外，基于ITS 序列比對和系統(tǒng)發(fā)育分析的分子鑒定可以有效地區(qū)分大多數(shù)漏斗傘屬種類，為相似種的區(qū)分和解決復(fù)合種等分類問題提供了有效手段。與我國西南地區(qū)等主要林區(qū)相比，內(nèi)蒙古和華北地區(qū)的漏斗傘屬真菌的資源調(diào)查和分類研究相對薄弱。隨著研究的不斷深入，可以預(yù)見本地區(qū)將有更多的該屬真菌種類被發(fā)現(xiàn)。