孫麗爽 馮艷紅 （錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院超聲科，錦州 121000）

心臟是高血壓損傷的主要靶器官之一，左心室重塑是高血壓造成心臟損傷的重要特征，表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大、膠原異常堆積等，最終造成心力衰竭［1-2］。左心室重塑的分子機(jī)制復(fù)雜且未完全闡明，目前尚缺乏能夠在高血壓發(fā)病過程中逆轉(zhuǎn)左心室重塑的治療手段。絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated-protein kinase，MAPK）家族中的p38MAPK在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮重要生物學(xué)作用，在缺血缺氧、病毒感染、負(fù)荷增加等病理因素刺激下，p38MAPK 的激活通過調(diào)控炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等引起心肌細(xì)胞損傷或肥大、刺激膠原增生及堆積［3-5］。絲裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2（mitogen-activated protein kinase activated protein kinase 2，MK2）是p38MAPK 下游的關(guān)鍵信號(hào)分子，抑制MK2 能夠阻斷p38MAPK 通路激活，在心肌肌球蛋白結(jié)合蛋白C過表達(dá)誘導(dǎo)心肌纖維化的模型小鼠中，抑制MK2 顯著改善了心肌纖維化過程中膠原的堆積，提示MK2 可能在心肌纖維化及膠原異常堆積中起關(guān)鍵作用［6］。為闡明MK2基因在高血壓引起的左心室重塑中的作用，本文以MK2 野生型小鼠及MK2 基因敲除小鼠為研究對(duì)象，通過腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)（constriction of abdominal aorta，AAC）建立高血壓模型，具體觀察MK2 基因在高血壓小鼠左心室重塑中的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 野生型C57BL/6J 小鼠、MK2 基因敲除C57BL/6J 小鼠購自上海南方模式生物科技公司。

1.1.2 主要試劑與儀器 MK2、核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、裂解型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cleaved caspase-3）一抗（Abcam 公司）；HE 染色試劑盒、Masson 染色試劑盒、活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）檢測(cè)試劑盒（上海碧云天公司）；TNF-α、IL-6 檢測(cè)試劑盒（上海西唐公司）；腦型腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP）、血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ）、醛固酮（aldosterone，ALD）、總抗氧化力（total antioxidant capacity，T-AOC）檢測(cè)試劑盒（南京建成研究所）；RNA 分離試劑盒、cDNA 第一鏈合成試劑盒、熒光定量檢測(cè)試劑盒（北京天根公司）。S-Sharp Prospect 型小動(dòng)物超聲儀（SSharp 公司）；正置顯微鏡（Nikon 公司）；熒光定量PCR 儀（ABI公司）；凝膠電泳儀及成像儀（上海天能公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及造模 野生型小鼠隨機(jī)分為MK2+/+組、MK2+/+AAC 組，MK2 基因敲除小鼠隨機(jī)分為MK2-/-組、MK2-/-AAC 組，每 組10 只 小 鼠。MK2+/+AAC 組和MK2-/-AAC 組進(jìn)行AAC 處理，方法如下：腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后，做0.5 cm 的腹正中切口，分離腹主動(dòng)脈，在右腎動(dòng)脈分支上0.5 cm處平行放置7 號(hào)針頭（直徑0.7 mm），用4 號(hào)手術(shù)線將腹主動(dòng)脈與7號(hào)針頭一并結(jié)扎，而后抽去針頭，完成腹主動(dòng)脈縮窄，逐層縫合切口，術(shù)后連續(xù)3 d 肌肉注射青霉素抗感染。MK2+/+組和MK2-/-組進(jìn)行假手術(shù)操作，包括做0.5 cm 的腹正中切口，分離腹主動(dòng)脈并進(jìn)行掛線，但不結(jié)扎。

1.2.2 收縮壓（systolic blood pressure，SBP）檢測(cè)造模前及造模后7 d、14 d、21 d、28 d時(shí)，分別采用無創(chuàng)鼠尾血壓監(jiān)測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)SBP。

1.2.3 心功能的超聲檢測(cè) 造模后28 d 進(jìn)行心功能超聲檢測(cè)，采用小動(dòng)物彩色多普勒超聲儀進(jìn)行檢測(cè)，探頭頻率為40 MHz，取乳頭肌切面，獲得超聲心動(dòng)圖后測(cè)定舒張末期左室前壁厚度（left ventricular anterior wall thickness at end-diastole，LVAWd）、收縮末 期 左 室 前 壁 厚 度（left ventricular anterior wall thickness at end-systole，LVAWs）、舒張末期左室后壁厚度（left ventricular posterior wall thickness at enddiastole，LVPWd）、收縮末期左室后壁厚度（left ventricular posterior wall thickness at end-systole，LVPWs）。

1.2.4 心肌厚度及心臟/體質(zhì)量（HW/BW）的測(cè)定 完成心功能的超聲檢測(cè)后稱量體重，處死小鼠并解剖心臟。生理鹽水沖洗各心腔內(nèi)殘留血液，并用濾紙吸干水分，稱量心臟重量并計(jì)算HW/BW；沿冠狀面在心房和心室的最大面剖開心臟，游標(biāo)卡尺測(cè)量心尖位心肌組織厚度。

1.2.5 心肌HE 染色及Masson 染色 剪取適量左心室心肌組織，4%多聚甲醛固定后制作石蠟切片，分別采用HE 染色試劑盒和Masson 染色試劑盒進(jìn)行染色，顯微鏡下觀察染色情況。Masson 染色下膠原呈藍(lán)色，計(jì)算視野內(nèi)心肌膠原面積及心肌總面積，計(jì)算心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（collagen volume fraction，CVF）。CVF=心肌膠原面積/所測(cè)視野心肌總面積。

1.2.6 血清心室重塑標(biāo)志物的檢測(cè) 處死小鼠前經(jīng)心尖取血約0.5 ml，靜置后自然凝血，3 000 r/min離心10 min 分離血清，試劑盒檢測(cè)BNP、AngⅡ、ALD含量。

1.2.7 心肌中MK2、NF-κB、Cleaved caspase-3 的Western blot 檢測(cè) 剪取適量左心室心肌組織，加入裂解液并勻漿，BCA 法檢測(cè)勻漿液的蛋白濃度，將含有20 μg 蛋白的勻漿液加入聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)，電泳分離不同分子量的蛋白后電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。5%脫脂牛奶室溫封閉硝酸纖維素膜1 h，用MK2（1∶1 000）、NF-κB（1∶1 000）、Cleaved caspase-3（1∶1 000）、β-actin（1∶5 000）一抗4 ℃孵育過夜。次日，用辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（1∶2 000）室溫孵育1 h，最后在凝膠成像系統(tǒng)內(nèi)顯影得到蛋白條帶，并以β-actin 為內(nèi)參，對(duì)MK2、NF-κB、Cleaved caspase-3的蛋白表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。

1.2.8 心肌中心室重塑標(biāo)志物mRNA 表達(dá)水平的PCR 檢測(cè) 剪取適量左心室心肌組織，采用RNA 分離試劑盒提取組織中的RNA，采用cDNA 第一鏈合成試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光定量檢測(cè)試劑盒配制PCR 反應(yīng)體系：cDNA 1 μl、試劑盒內(nèi)反應(yīng)混合液10 μl、正反向引物溶液各0.6 μl，去離子水補(bǔ)足至20 μl。在熒光定量PCR 儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到反應(yīng)的循環(huán)曲線及循環(huán)閾值（Ct），以β-actin 為內(nèi)參，按照2-ΔΔCt法計(jì)算Ⅰ型膠原（Col-Ⅰ）、Col-Ⅲ、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的mRNA 表達(dá)水平。

1.2.9 心肌中炎癥及氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè) 剪取適量左心室心肌組織，加入裂解液并勻漿，勻漿液以4 ℃、12 000 r/min 離心10 min，分離上清后采用BCA 法檢測(cè)蛋白濃度，試劑盒檢測(cè)TNF-α、IL-6、ROS、T-AOC 濃度，計(jì)算每毫克蛋白中TNF-α、IL-6、ROS、T-AOC含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0 軟件錄入數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，以xˉ±s表示，四組間比較采用單因素方差分析、兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組小鼠心肌中MK2 表達(dá)水平比較 與MK2+/+組比較，MK2+/+AAC 組小鼠心肌中MK2 表達(dá)明顯增加（P＜0.05）。MK2-/-組、MK2-/-AAC 組小鼠心肌中不表達(dá)MK2。見圖1。

圖1 四組小鼠心肌中MK2表達(dá)水平比較Fig.1 Comparison of MK2 expression level in myocardium among four groups of mice

2.2 四組小鼠SBP水平比較 造模前，四組小鼠的SBP水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后7 d、14 d、21 d、28 d，與MK2+/+組比較，MK2+/+AAC 組小鼠SBP 水平明顯升高（P＜0.05），MK2-/-組小鼠SBP 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與MK2+/+AAC 組比較，MK2-/-AAC 組小鼠SBP 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2。

圖2 四組小鼠SBP水平比較Fig.2 Comparison of SBP level in among four groups of mice

2.3 四組小鼠心臟超聲指標(biāo)比較 與MK2+/+組比較，MK2+/+AAC 組 小 鼠LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs 水 平 明 顯 升 高（P＜0.05），MK2-/-組 小 鼠LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與MK2+/+AAC 組比較，MK2-/-AAC組小鼠LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs 水平明顯降低（P＜0.05）。見表1。

表1 四組小鼠心臟超聲指標(biāo)比較（±s，n=10）Tab.1 Comparison of cardiac ultrasound indexes among four groups of mice （±s，n=10）

表1 四組小鼠心臟超聲指標(biāo)比較（±s，n=10）Tab.1 Comparison of cardiac ultrasound indexes among four groups of mice （±s，n=10）

Note：Compared with MK2+/+ group，1）P＜0.05；compared with MK2+/+AAC group， 2）P＜0.05.

LVPWs/mm 1.08±0.22 1.89±0.411）1.10±0.16 1.41±0.252）Groups MK2+/+MK2+/+AAC MK2-/-MK2-/-AAC LVAWd/mm 0.81±0.14 1.47±0.211）0.79±0.12 1.15±0.182）LVAWs/mm 0.98±0.17 1.67±0.281）0.94±0.15 1.25±0.212）LVPWd/mm 0.93±0.16 1.57±0.251）0.94±0.22 1.20±0.212）

2.4 四組小鼠心肌厚度及HW/BW 比較 與MK2+/+組比較，MK2+/+AAC組小鼠心肌厚度及HW/BW 均明顯升高（P＜0.05），MK2-/-組小鼠心肌厚度及HW/BW差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與MK2+/+AAC 組比較，MK2-/-AAC組小鼠心肌厚度及HW/BW 均明顯降低（P＜0.05）。見表2。

表2 四組小鼠心肌厚度及HW/BW 水平比較（±s，n=10）Tab.2 Comparison of myocardial thickness and HW/BW level of mice among four groups （±s，n=10）

表2 四組小鼠心肌厚度及HW/BW 水平比較（±s，n=10）Tab.2 Comparison of myocardial thickness and HW/BW level of mice among four groups （±s，n=10）

Note：Compared with MK2+/+ group， 1）P＜0.05； compared with MK2+/+AAC group， 2）P＜0.05.

HW/BW/（mg·g-1）11.38±1.17 13.77±2.241）11.50±1.31 12.04±1.752）Groups MK2+/+MK2+/+AAC MK2-/-MK2-/-AAC Myocardial thickness/mm 1.04±0.29 1.94±0.341）1.08±0.31 1.37±0.302）

2.5 四組小鼠心臟HE 染色、Masson 染色比較MK2+/+組及MK2-/-組心肌細(xì)胞排列規(guī)則、大小正常，未見明顯膠原堆積；MK2+/+AAC 組心肌細(xì)胞體積增大、排列混亂，可見大量膠原呈藍(lán)色，CVF 水平明顯高 于MK2+/+組（P＜0.05）；與MK2+/+AAC 組 比 較，MK2-/-AAC 組心肌細(xì)胞體積縮小、排列較規(guī)則，膠原堆積減少且CVF 水平明顯降低（P＜0.05）。見圖3、圖4。

圖3 四組小鼠心臟HE染色比較Fig.3 Comparison of hearts HE staining among four groups of mice

圖4 四組小鼠心臟Masson染色及CVF比較Fig.4 Comparison of Masson staining and CVF of hearts among four groups of mice

2.6 四組小鼠血清中心室重塑標(biāo)志物比較 與MK2+/+組比較，MK2+/+AAC 組小鼠血清BNP、AngⅡ、ALD 水平均明顯升高（P＜0.05），MK2-/-組小鼠血清BNP、AngⅡ、ALD水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與MK2+/+AAC 組比較，MK2-/-AAC 組小鼠血清BNP、AngⅡ、ALD水平均明顯降低（P＜0.05）。見表3。

表3 四組小鼠血清BNP、AngⅡ、ALD水平比較（±s，n=10，pg/ml）Tab.3 Comparison of serum BNP， AngⅡ and ALD levels among four groups of mice （±s，n=10，pg/ml）

表3 四組小鼠血清BNP、AngⅡ、ALD水平比較（±s，n=10，pg/ml）Tab.3 Comparison of serum BNP， AngⅡ and ALD levels among four groups of mice （±s，n=10，pg/ml）

Note：Compared with MK2+/+ group， 1）P＜0.05； compared with MK2+/+AAC group， 2）P＜0.05.

ALD 257.61±34.58 328.67±53.451）260.15±36.51 291.22±46.582）Groups MK2+/+MK2+/+AAC MK2-/-MK2-/-AAC BNP 64.12±9.93 277.64±55.691）59.69±8.58 136.36±21.242）AngⅡ209.58±35.83 653.12±75.591）215.42±41.75 401.85±55.472）

2.7 四組小鼠心臟中心室重塑標(biāo)志物mRNA 表達(dá)水平比較 與MK2+/+組比較，MK2+/+AAC 組小鼠心肌中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05），MK2-/-組小鼠心肌中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA mRNA 表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與MK2+/+AAC 組比較，MK2-/-AAC 組小鼠心肌中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA mRNA 表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.05）。見表4。

表4 四組小鼠心臟中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA mRNA 表達(dá)水平比較（±s，n=10）Tab.4 Comparison of Col-Ⅰ， Col-Ⅲ， α-SMA mRNA expression levels in heart among four groups of mice （±s，n=10）

表4 四組小鼠心臟中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA mRNA 表達(dá)水平比較（±s，n=10）Tab.4 Comparison of Col-Ⅰ， Col-Ⅲ， α-SMA mRNA expression levels in heart among four groups of mice （±s，n=10）

Note：Compared with MK2+/+ group， 1）P＜0.05； compared with MK2+/+AAC group， 2）P＜0.05.

α-SMA 1.00±0.19 1.93±0.321）1.03±0.24 1.37±0.322）Groups MK2+/+MK2+/+AAC MK2-/-MK2-/-AAC Col-Ⅰ1.00±0.21 2.15±0.351）1.05±0.22 1.51±0.322）Col-Ⅲ1.00±0.26 2.27±0.411）0.97±0.18 1.61±0.352）

2.8 四組小鼠心臟中MK2 下游炎癥、氧化應(yīng)激及凋亡標(biāo)志物比較 如圖5、表5 所示，與MK2+/+組比較，MK2+/+AAC 組小鼠心肌中NF-κB、Cleaved cas-pase-3 表達(dá)水平及TNF-α、IL-6、ROS 含量均明顯增加，T-AOC 含量明顯降低（P＜0.05），MK2-/-組小鼠心肌中NF-κB、Cleaved caspase-3 表達(dá)水平及TNF-α、IL-6、ROS、T-AOC 含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與MK2+/+AAC組比較，MK2-/-AAC組小鼠心肌中NF-κB、Cleaved caspase-3 表 達(dá) 水 平 及TNF-α、IL-6、ROS 含量均明顯降低，T-AOC 含量明顯增加（P＜0.05）。

表5 四組小鼠心臟中TNF-α、IL-6、ROS、T-AOC 含量比較（±s，n=10）Tab.5 Comparison of TNF-α，IL-6，ROS，T-AOC contents in heart among four groups of mice （±s，n=10）

表5 四組小鼠心臟中TNF-α、IL-6、ROS、T-AOC 含量比較（±s，n=10）Tab.5 Comparison of TNF-α，IL-6，ROS，T-AOC contents in heart among four groups of mice （±s，n=10）

Note：Compared with MK2+/+ group， 1）P＜0.05； compared with MK2+/+AAC group， 2）P＜0.05.

T-AOC/（U·mg-1）24.59±6.52 15.31±2.771）25.11±7.09 20.44±4.262）Groups MK2+/+MK2+/+AAC MK2-/-MK2-/-AAC TNF-α/（ng·mg-1）1.51±0.25 4.09±0.721）1.44±0.27 2.62±0.462）IL-6/（pg·mg-1）93.41±14.29 207.68±42.141）96.15±15.14 146.55±29.392）ROS/（U·mg-1）0.84±0.15 2.72±0.521）0.89±0.17 1.51±0.342）

圖5 四組小鼠心臟中NF-κB、Cleaved caspase-3 表達(dá)水平比較Fig.5 Comparison of NF-κB， Cleaved caspase-3 expression levels in heart among four groups of mice

3 討論

高血壓引起的心力衰竭及心臟猝死嚴(yán)重危害生命安全，長(zhǎng)期血壓升高引起的左心室重塑是造成高血壓患者心力衰竭的核心環(huán)節(jié)，左心室重塑的組織學(xué)特征包括心肌細(xì)胞肥大、膠原異常堆積，目前在左心室重塑過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用的分子尚不清楚。有研究報(bào)道，TGF-β1 刺激p38MAPK 通路激活在膠原異常堆積中發(fā)揮關(guān)鍵作用，p38MAPK 通路也成為近年研究心力衰竭及左心室重塑發(fā)病機(jī)制的重要靶點(diǎn)［3，7-8］。MK2 是p38MAPK 下游的重要底物之一，MK2 識(shí)別并結(jié)合p38MPAK 后形成復(fù)合物，復(fù)合物轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)并參與下游信號(hào)級(jí)聯(lián)放大調(diào)控［9-10］。由此可見，MK2 是p38MAPK 發(fā)揮生物學(xué)作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)。也有研究在心肌肌球蛋白結(jié)合蛋白C過表達(dá)誘導(dǎo)心肌纖維化的模型小鼠中證實(shí)MK2 高表達(dá)與心肌纖維化及膠原異常堆積有關(guān)［6］。因此本研究以MK2 為切入點(diǎn)，研究高血壓誘發(fā)左心室重塑的分子機(jī)制，旨在為深入認(rèn)識(shí)高血壓發(fā)病過程中左心室重塑的發(fā)病機(jī)制及防治的分子靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

AAC 是研究高血壓及左心室重塑常用的造模方法［11-13］。本研究通過AAC誘導(dǎo)野生型小鼠發(fā)生高血壓及左心室重塑，經(jīng)對(duì)血壓、心功能及心肌厚度、心臟重量的測(cè)定可知：SBP、LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs、心肌厚度、HW/BW 等多項(xiàng)指標(biāo)水平均明顯升高，表明AAC 后小鼠出現(xiàn)血壓升高、心室肥厚表現(xiàn)，符合高血壓及左心室重塑特征，也與既往關(guān)于AAC 造模后動(dòng)物表型研究的結(jié)果一致［11-13］。AAC 造模后，左心室心肌組織中MK2表達(dá)水平明顯升高，與MENG 等［6］報(bào)道的心肌纖維化模型小鼠心肌中MK2表達(dá)增加的結(jié)果一致，提示MK2高表達(dá)可能與高血壓引起的左心室肥厚有關(guān)。進(jìn)一步通過敲除MK2的方式進(jìn)行驗(yàn)證，與接受AAC的野生型小鼠比較，接受AAC的MK2敲除小鼠SBP水平仍顯著升高，但LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs、心肌厚度、HW/BW 幾項(xiàng)指標(biāo)的水平均明顯降低，表明MK2不直接參與血壓水平的調(diào)控，但參與血壓升高后左心室肥厚的調(diào)控。

在高血壓發(fā)病過程中，左心室肥厚是壓力負(fù)荷增高引起心肌細(xì)胞肥大、膠原異常堆積等左心室重塑組織學(xué)特征的大體表現(xiàn)，為獲得MK2 參與高血壓引起左心室重塑的直接證據(jù)，本研究進(jìn)行了組織染色及左心室重塑標(biāo)志物檢測(cè)。HE 染色和Masson 染色結(jié)果表明，野生型小鼠AAC 造模后出現(xiàn)心肌細(xì)胞肥大、膠原面積增加表現(xiàn)；敲除MK2 后進(jìn)行AAC 造模，心肌細(xì)胞肥大、膠原面積增加均得到改善。在左心室發(fā)生重塑的過程中，相應(yīng)標(biāo)志物會(huì)發(fā)生改變，BNP、AngⅡ、ALD 是廣泛使用的血清標(biāo)志物，反映左心室重塑的程度［14］；Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA是廣泛使用的標(biāo)志基因，前兩者直接對(duì)膠原堆積進(jìn)行量化，后者反映分泌膠原的成纖維細(xì)胞數(shù)目［15］。上述標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果與組織染色結(jié)果吻合，即在野生型小鼠進(jìn)行AAC 造模后，幾項(xiàng)標(biāo)志物的含量或表達(dá)量均明顯增加，敲除MK2可使AAC造模后幾項(xiàng)標(biāo)志物的含量或表達(dá)量均明顯降低。以上組織染色、標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果首先證實(shí)AAC 造模后高血壓小鼠出現(xiàn)了左心室重塑，而后通過MK2敲除實(shí)驗(yàn)證實(shí)MK2參與高血壓小鼠左心室重塑過程。

MK2是p38MAPK下游的重要底物，在p38MAPK通路促進(jìn)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡中均有關(guān)鍵作用［16-17］。在心力衰竭造成左心室重塑過程中，NF-κB 介導(dǎo)促炎因子TNF-α、IL-6 的釋放顯著激活炎癥反應(yīng)，進(jìn)而刺激心肌細(xì)胞肥大、成纖維細(xì)胞增殖，并分泌大量膠原［18-19］。在糖尿病心肌病、心肌梗死等造成左心室重塑的過程中，氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的激活一方面直接促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖并分泌大量膠原，另一方面引起心肌細(xì)胞損傷，進(jìn)而啟動(dòng)膠原修復(fù)，兩方面均會(huì)造成膠原異常堆積；ROS 具有強(qiáng)氧化性，直接介導(dǎo)氧化應(yīng)激，同時(shí)造成抗氧化物消耗及T-AOC 降低，Cleaved caspase-3 是凋亡標(biāo)志基因，直接執(zhí)行凋亡過程［20-21］。為進(jìn)一步驗(yàn)證MK2 在高血壓小鼠左心室重塑中的作用，本研究對(duì)MK2 下游的生物學(xué)效應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示：野生型小鼠AAC 造模后，炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)及細(xì)胞凋亡均明顯激活，敲除MK2使AAC造模后的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的激活程度受到抑制，與AAC造模及MK2敲除后左心室重塑的變化一致。由此進(jìn)一步明確MK2 參與高血壓小鼠左心室重塑的過程。

本研究結(jié)果表明，AAC 建立的高血壓小鼠模型發(fā)生左心室重塑，且MK2 表達(dá)增加；敲除MK2 后進(jìn)行AAC 造模，小鼠仍出現(xiàn)高血壓，但左心室重塑明顯改善，且炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡均明顯減輕。基于此總結(jié)如下：MK2 基因高表達(dá)與高血壓小鼠左心室重塑有關(guān)，激活MK2 下游炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡是相關(guān)的分子機(jī)制。未來MK2 有望成為研究高血壓發(fā)病過程中左心室重塑發(fā)病機(jī)制及防治手段的分子靶點(diǎn)。