錢義容，王 弋，全振炫，鄭雪文，李偉才，董 晨

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶果樹生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 湛江 524091；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)熱帶作物學(xué)院，云南 普洱 665099）

【研究意義】鋁激活蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Alactivated malate transporter，ALMT）是植物中重要的一類膜蛋白，在植物有機(jī)酸的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)中起著重要作用，如參與蘋果酸積累和轉(zhuǎn)運(yùn)、重金屬脅迫、礦質(zhì)營養(yǎng)、滲透勢和pH值調(diào)節(jié)、果實(shí)品質(zhì)形成、氣孔運(yùn)動(dòng)、種子發(fā)育等過程［1-4］。【前人研究進(jìn)展】在植物的生長過程中，酸性土壤中的鋁離子（Al3+）會(huì)對植物根部造成毒害，ALMT 作為陰離子通道能夠釋放蘋果酸鹽有機(jī)陰離子并以此為螯合劑，與Al3+形成穩(wěn)定無毒的復(fù)合物，從而降低其毒性［5］。最早Sasaki 等［6］在耐鋁小麥（ET8）根尖中分離得到鋁誘導(dǎo)表達(dá)的一個(gè)ALMT1基因（TaALMT1），是植物中克隆獲得的第一個(gè)鋁激活蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)基因。ALMT 蛋白大多定位于細(xì)胞質(zhì)膜、液泡膜等細(xì)胞器上，N 端和C 端均位于膜的外側(cè)，其N 端通常包含5～7 個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，參與Al3+結(jié)合的蘋果酸運(yùn)輸，C 端有一個(gè)跨膜輸水區(qū)來維持運(yùn)輸功能所必需［7-8］?；贏LMT 的重要性，擬南芥AtALMT1和小麥TaALMT1基因的鑒定引起人們對該家族的研究興趣，目前，已知在擬南芥基因組中有14 個(gè)ALMTs 蛋白，其相關(guān)功能基因的表達(dá)也有一些報(bào)道［9］。AtALMT1參與AL3+的耐受，主要在擬南芥根中表達(dá)，其表達(dá)水平受過氧化氫、pH 值、植物激素的影響［10］；AtALMT4主要在葉肉和保衛(wèi)細(xì)胞中表達(dá)［11］；AtALMT6主要在保衛(wèi)細(xì)胞中表達(dá)，其表達(dá)水平受蘋果酸、液泡pH 值和胞質(zhì)鈣離子的影響［11-12］。據(jù)報(bào)道，多種植物ALMT家族基因的生物學(xué)功能也相應(yīng)被鑒定，如橡膠樹（Heveabrasiliensis）中鑒定出17 個(gè)ALMTs基因［13］；普通煙草（Nicotianatabacum）中鑒定出30 個(gè)ALMTs基因，該基因受AL3+的誘導(dǎo)影響，大多數(shù)在莖中表達(dá)較高而在根部表達(dá)相對較低［14］；蘋果（Malusdomestica）基因組中鑒定出25 個(gè)ALMTs 成員，其中MaALMT1影響果實(shí)酸度、主要在果實(shí)中表達(dá)［15］；大豆中鑒定出34 個(gè)ALMTs基因，GmALMT5在低磷環(huán)境下顯著表達(dá)［8］；中國白梨中鑒定出27 個(gè)ALMTs基因，其中Pbr020270.1 作為候選基因可能在梨果實(shí)蘋果酸的積累中發(fā)揮重要作用［16］。綜上，ALMT基因家族成員在不同植物中均起著重要作用。荔枝（Litchichinensis）是無患子科荔枝屬常綠喬木，產(chǎn)于亞熱帶地區(qū)，喜高溫高濕氣候，在歷史上有“百果之王”等美稱。但荔枝產(chǎn)業(yè)中仍存在一些問題，如大小年、缺乏特早熟優(yōu)質(zhì)荔枝、早熟荔枝偏酸等?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】ALMT 蛋白與植物生長發(fā)育和逆境響應(yīng)有密切關(guān)系，荔枝果實(shí)酸度的研究目前集中在生理水平，分子水平的研究較少，ALMT 參與果實(shí)酸度調(diào)節(jié)，但在荔枝中ALMT基因家族的全基因組鑒定尚未見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究基于全基因組水平對荔枝ALMT基因家族成員進(jìn)行鑒定與分析，為ALMT基因家族在荔枝果實(shí)有機(jī)酸生物學(xué)功能研究方面提供初步依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為‘妃子笑’荔枝，種植于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所荔枝種植園（21°10′02″N、110°16′34″E，海拔21.32 m），試驗(yàn)基地地勢平坦、水源充足、灌溉條件優(yōu)良，土壤為紅壤、肥力中等，土肥水管理一致。采集‘妃子笑’不同組織樣品，取秋梢新抽發(fā)的嫩梢葉片，老熟梢的成熟老葉，盛花期的雄花、雌花和根（新生長的須根），果實(shí)成熟期的果皮、果柄，用液氮速凍后于-80 ℃保存，用于后續(xù)RNA 提取。

1.2 荔枝LcALMT 家族成員鑒定及其蛋白理化性質(zhì)、亞細(xì)胞定位分析

荔枝品種‘妃子笑’（LitchichinensisSonn.cv.Feizixiao）的基因組來源于荔枝基因組數(shù)據(jù)庫（http://www.sapindaceae.com/），META SEARCH工具搜索Al-activated malate transporter（鋁激活蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白），搜索注釋為Al-activated malate transporter 的基因，進(jìn)一步通過NCBI Conserved Domains Search（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd）驗(yàn)證搜索到的蛋白序列是否含有保守ALMT 結(jié)構(gòu)域，得到含有完整保守結(jié)構(gòu)域的蛋白，并將其命名為LcALMT，最終從荔枝全基因組中確定有16個(gè)LcALMTs。運(yùn) 用ExPASy（https:web.expasy.org/protparam/）預(yù)測家族成員對應(yīng)蛋白質(zhì)的長度（aa）、分子量（kD）、等電點(diǎn)（pI）、不穩(wěn)定系數(shù)和親水指數(shù)，運(yùn)用在線網(wǎng)站（https:wolfpsort.hgc.jp/）進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測。

1.3 荔枝LcALMTs 系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系與蛋白結(jié)構(gòu)分析

為進(jìn)一步了解LcALMTs 蛋白，利用公開發(fā)表模式植物擬南芥（14 個(gè)）和水稻（8 個(gè)）中的ALMTs 蛋白序列，擬南芥AtALMTs 蛋白序列從擬南芥官網(wǎng)TAIR（https://www.arabidopsis.org）下載獲得，水稻OsALMTs 蛋白序列從網(wǎng)站Rice Genome Annotation Project（http://eice.plantbiology.msu.edu/）獲得。16 個(gè)荔枝ALMTs 蛋白序列，使用MEGA 11 軟件采用鄰接法（Neighbor-Joining，NJ），保持其他參數(shù)不變，設(shè)置Bootstrap 值為1 000，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

利用GORIV（https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=/NPSA/npsa_gor4.html）預(yù)測蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)，然后利用在線工具SWISSMODEL（https://swissmodel.expasy.org/）預(yù)測蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)。

1.4 荔枝LcALMTs 的基因結(jié)構(gòu)與保守基序分析

從荔枝基因數(shù)據(jù)庫中獲取ALMT家族成員的基因序列和對應(yīng)的CDS序列，運(yùn)用GSDS（http:gsds.cbi.pku.edu.cn/）在線軟件進(jìn)行荔枝ALMTs成員編碼區(qū)、內(nèi)含子和非編碼區(qū)的結(jié)構(gòu)分析。

使用MEME（http:meme-suite.org/tools/meme）在線軟件設(shè)置基數(shù)為12，其余為默認(rèn)參數(shù)下預(yù)測分析荔枝ALMT 家族成員編碼蛋白的保守基序。

1.5 荔枝LcALMTs 啟動(dòng)子上順式作用元件分析

利用在線網(wǎng)站Plantcare（http:bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）對LcALMTs5'端上游2 000 bp 的序列進(jìn)行順式作用元件分析。

1.6 荔枝LcALMTs 的染色體定位

根據(jù)荔枝全基因組注釋信息得到染色體基因位置信息，借助TBtools 軟件實(shí)現(xiàn)可視化。

1.7 荔枝LcALMTs 的組織表達(dá)

從荔枝基因組數(shù)據(jù)庫獲取LcALMTs基因在不同組織中的表達(dá)量（http://www.sapindaceae.com/），通過TBtools 繪制熱圖。

1.8 部分LcALMTs 的實(shí)時(shí)熒光定量PCR

使用植物RNA 提取試劑盒（華越洋生物科技有限公司），提取妃子笑不同組織（根、嫩葉、老葉、雄花、雌花、果皮、果柄）RNA。取1 μL 檢測RNA 質(zhì)量和濃度，樣品符合要求后利用M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（TaKaRa）反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。利用在線軟件Primer 3.0 設(shè)計(jì)熒光定量引物，以LcActin為內(nèi)參（表1），通過Blast 分析引物的特異性，并交由廣州艾基生物技術(shù)有限公司合成引物序列。

表1 RT-PCR 引物序列Table 1 Primer sequences for RT-PCR used in this study

使用SYBR Premix Ex TaqTM（TaKaRa）試劑盒制備反應(yīng)體系，其中cDNA 1 μL（相當(dāng)于25 ng 總RNA），2 μL 基因特異性引物，10 μL 2×SYBR Premix ExTaq，用去RNA 酶的ddH2O 補(bǔ)足20 μL。使用Roche 480 Ⅱ定量PCR 系統(tǒng)（瑞士）進(jìn)行RT-PCR，反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性2 min，94 ℃ 15 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共40 個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品3 次重復(fù)。采用2-ΔΔct法計(jì)算目標(biāo)基因相對表達(dá)量，以根為對照。

2 結(jié)果與分析

2.1 荔枝LcALMT 家族成員基本信息及蛋白理化性質(zhì)、亞細(xì)胞定位分析

本研究共鑒定出16個(gè)荔枝LcALMTs（LcALMT1～LcALMT16），其基本信息如表2。理化性質(zhì)分析發(fā)現(xiàn)，LcALMTs 蛋白編碼的氨基酸數(shù)目在118～803 aa，分子量大小在12.60～89.54 kD，等電點(diǎn)在5.16～9.07 之間，其中堿性蛋白（pI＞7）10 個(gè)、酸性蛋白（pI＜7）6 個(gè)，不穩(wěn)定系數(shù)介于25.57～45.17，且LcALMT1、LcALMT13、LcALMT14、LcALMT16屬于不穩(wěn)定蛋白（不穩(wěn)定系數(shù)＞40）。亞細(xì)胞定位預(yù)測顯示，該家族成員蛋白均定位于質(zhì)膜上。

表2 荔枝LcALMTs 基本信息及其蛋白理化性質(zhì)、亞細(xì)胞定位分析Table 2 Basic information of LcALMTs in litchi and analysis of its protein physicochemical properties and subcellular localization

2.2 荔枝LcALMTs 系統(tǒng)進(jìn)化樹及蛋白結(jié)構(gòu)分析

使用MEGA 11 生成荔枝LcALMTs 系統(tǒng)進(jìn)化樹圖，由圖1 可知，該家族成員可分為5 個(gè)亞族。第Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ亞族均包含2 個(gè)LcALMT 成員，第Ⅳ亞族包含3 個(gè)LcALMT 成員，第Ⅲ亞族包含7個(gè)LcALMT 成員。荔枝LcALMTs 成員在5 個(gè)亞族中分布不均勻，主要在第Ⅲ亞族。從進(jìn)化樹來看，荔枝ALMT 家族成員與擬南芥的ALMT 家族成員親緣關(guān)系更近。

圖1 荔枝、擬南芥和水稻ALMTs 系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.1 Phylogenetic tree of ALMT proteins in Litchi chinesis,Arabidopsis thaliana and Oryza sativa L.

對荔枝LcALMTs 蛋白二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，該家族蛋白二級結(jié)構(gòu)包含α-螺旋、延伸鏈、無規(guī)則卷曲和β 轉(zhuǎn)角（表3）。其中α-螺旋占比最高、均大于50%，延伸鏈占比為9.69%～19.50%，無規(guī)則卷曲占比為18.64%～57.32%，β 轉(zhuǎn)角占比為1.94%～7.73%。蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)（圖2）預(yù)測顯示，位于同一亞族的LcALMTs 蛋白結(jié)構(gòu)相似，如亞族I 中的LcALMT3 和LcALMT5，亞族Ⅲ中的LcALMT12、LcALMT13 和LcALMT16 均具有相似結(jié)構(gòu)。

圖2 LcALMTs 蛋白三級結(jié)構(gòu)Fig.2 Tertiary structure of LcALMT proteins

表3 LcALMTs 蛋白二級結(jié)構(gòu)Table 3 Secondary structure of LcALMT proteins

2.3 荔枝LcALMTs 基因結(jié)構(gòu)及保守基序分析

運(yùn)用GSDS 軟件對荔枝ALMT家族成員編碼區(qū)、內(nèi)含子和非編碼區(qū)進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，由圖3 可知，荔枝LcALMTs外顯子數(shù)目在3～10 個(gè)，其中LcALMT12外顯子數(shù)目最多（10 個(gè)）；LcALMT1、LcALMT3、LcALMT4、LcALMT5、LcALMT6、LcALMT8和LcALMT15均含有6 個(gè)外顯子，LcALMT7、LcALMT10、LcALMT11、LcALMT14基因均不含有非編碼區(qū)。

圖3 荔枝 LcALMTs 基因結(jié)構(gòu)Fig.3 Gene structure of LcALMTs in litchi

利用MEME 在線網(wǎng)站分析保守基序，基序數(shù)量上限設(shè)置為12，其他參數(shù)不變，結(jié)果（圖4A）顯示，有13 個(gè)LcALMTs 蛋白均含有motif 1；除LcALMT11 外，其他蛋白均含有motif 4；LcALMT11 和LcALMT14 僅含有2 個(gè)保守基序，分別為motif 11、motif 5 和motif 6、motif 4。由NCBI 網(wǎng)站分析得知荔枝ALMT 家族含有ALMT和ALMT superfamily 兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，由圖4B 可知，15 個(gè)LcALMTs 蛋白均只含有1 個(gè)結(jié)構(gòu)域，而LcALMT12 包含上述2 個(gè)結(jié)構(gòu)域，其中ALMT superfamily 結(jié)構(gòu)域位于N 端、ALMT 結(jié)構(gòu)域位于C 端。由SMART（http://smart.embl.de/）網(wǎng)站分析可知，motif 1～motif 7 均屬于ALMT 結(jié)構(gòu)域，motif 8～motif 12 未知。

圖4 荔枝LcALMTs 蛋白保守結(jié)構(gòu)域Fig.4 Conservative domains of LcALMT proteins in Litchi

2.4 荔枝LcALMTs 的染色體定位分析

染色體定位分析結(jié)果（圖5）表明，LcALMT基因家族只定位在荔枝15 條染色體中的6 條染色體上，其中LcALMT1和LcALMT2定位在Chr3 上，LcALMT3、LcALMT4和LcALMT5定位在Chr10 上，LcALMT6、LcALMT15和LcALMT16分別定位在Chr12、Chr14 和Chr15 上，Chr13 上LcALMT 蛋白分布最多且緊密。

圖5 荔枝LcALMTs 基因染色體定位Fig.5 Chromosomal localization of LcALMT genes in Litchi

2.5 荔枝LcALMTs 啟動(dòng)子上順式作用元件分析

利用Plantcare 在線網(wǎng)站對LcALMTs基因5′端上游2 000 bp 的序列預(yù)測順式作用元件，除去一般性調(diào)控轉(zhuǎn)錄元件（如TATA-box、CAATbox）等未知功能元件外，共發(fā)現(xiàn)536 個(gè)順式作用元件，其中光響應(yīng)元件最多、共有219 個(gè)（占40.86%），荔枝LcALMTs基因均至少含有5 個(gè)光響應(yīng)元件，如TCT-motiff、G-box、Box4 和AT1-motif 等（圖6）。其次是激素響應(yīng)元件、共有216 個(gè)（占40.30%），主要包括脫落酸響應(yīng)元件（ABRE）、水楊酸響應(yīng)元件（TCA-element）、茉莉酸甲酯響應(yīng)元件、赤霉素響應(yīng)元件和生長素響應(yīng)元件。其中LcALMT7含有的茉莉酸甲酯響應(yīng)元件最多、有94 個(gè)。整個(gè)LcALMT家族成員中，LcALMT4不含脫落酸響應(yīng)元件。生長發(fā)育元件有30 個(gè)（5.60%），主要包括胚乳表達(dá)元件、玉米醇溶蛋白代謝調(diào)節(jié)相關(guān)元件、柵欄葉肉細(xì)胞分化元件、種子特異性調(diào)控元件和參與細(xì)胞周期調(diào)控元件。非生物脅迫元件有44 個(gè)（8.21%），主要包括防御應(yīng)激響應(yīng)元件TC-rich repeats、無氧誘導(dǎo)相關(guān)元件ARE、低溫響應(yīng)元件LTR 和誘導(dǎo)子激活元件。其他元件有27 個(gè)（5.04%），包括光響應(yīng)MYB 結(jié)合位點(diǎn)、干旱脅迫誘導(dǎo)MYB 結(jié)合位點(diǎn)、蛋白結(jié)合位點(diǎn)、ATBP-1 結(jié)合位點(diǎn)和MYBHv1 結(jié)合位點(diǎn)。以上結(jié)果表明，荔枝LcALMTs成員可能具有差異化的生物學(xué)功能，參與荔枝的光響應(yīng)、激素響應(yīng)、生長發(fā)育與脅迫響應(yīng)等相關(guān)過程。

圖6 荔枝LcALMTs 啟動(dòng)子上順式作用元件分析Fig.6 Analysis of cis-regulatory elements on LcALMTs promoter in Litchi

2.6 荔枝LcALMTs 的組織表達(dá)

從荔枝基因組數(shù)據(jù)庫中LcALMT家族成員在不同組織中的表達(dá)量（圖7）來看，LcALMT5和LcALMT15在不同組織中都有表達(dá)且表達(dá)量均較高，其中LcALMT5在雄花中的表達(dá)量最高，LcALMT15在假種皮中的表達(dá)量最高、是果皮中的16.9 倍。LcALMT10和LcALMT14在荔枝的各組織中均未檢測出表達(dá)。LcALMT3只在雄蕊中有表達(dá)，且表達(dá)量極低。LcALMT4在種子中的表達(dá)量最高、是葉中表達(dá)量的13.6 倍，在不育雄蕊中未檢測出表達(dá)。挑取LcALMT家族成員中表達(dá)量較高的3 個(gè)基因LcALMT4、LcALMT5和LcALMT15進(jìn)行熒光定量驗(yàn)證，分析妃子笑不同組織（根、嫩葉、老葉、雄花、雌花、果皮、果柄）中LcALMTs的表達(dá)情況，以根的表達(dá)量為1、各基因在各部位下的表達(dá)量與其比較進(jìn)行定量，結(jié)果（圖8）顯示，LcALMT4、LcALMT5和LcALMT15在不同組織中均有表達(dá)，但存在表達(dá)量的差異。LcALMT4、LcALMT5和LcALMT15均在雄花中表達(dá)最高、其次為雌花。LcALMT5的表達(dá)水平與轉(zhuǎn)錄組結(jié)果較為一致。

圖7 荔枝LcALMTs 基因表達(dá)模式分析Fig.7 Expression patterns analysis of LcALMT genes in Litchi

圖8 荔枝LcALMT4/5/15 相對表達(dá)水平Fig.8 Relative expression levels of LcALMT4/5/15 in Litchi

3 討論

本研究對荔枝ALMT基因的全基因組進(jìn)行鑒定與表達(dá)分析，對其部分功能進(jìn)行預(yù)測，可為研究荔枝生物學(xué)功能奠定一定基礎(chǔ)。ALMT 廣泛存在于植物中，參與植物的生理過程，其功能也相應(yīng)被探索，如植物耐鋁性［17-19］、礦質(zhì)營養(yǎng)［20-21］、果實(shí)酸度［22-23］、氣孔運(yùn)動(dòng)［24-27］、參與種子發(fā)育［28-29］等。第1 個(gè)植物基因TaALMT1［6］被發(fā)現(xiàn)后，越來越多的ALMT 家族成員在不同植物中也相應(yīng)被研究，但在荔枝中未見到ALMT基因家族的報(bào)道。本研究從荔枝基因庫得到ALMT 數(shù)據(jù)，對其ALMT 家族成員進(jìn)行鑒定，并系統(tǒng)分析該家族成員的蛋白理化性質(zhì)、系統(tǒng)發(fā)育、基因結(jié)構(gòu)、染色體定位、保守基序、順式作用元件、蛋白結(jié)構(gòu)和表達(dá)模式等。

從荔枝基因組中鑒定出16個(gè)LcALMTs基因，數(shù)量與草莓相同、多于擬南芥（14 個(gè)）［9］、少于蘋果ALMT 家族成員［14］。荔枝ALMT 家族成員均定位于質(zhì)膜上，與蘋果中MdALMT13 在煙草亞細(xì)胞定位結(jié)果［15］一致，均定位于質(zhì)膜上。荔枝ALMT家族成員外顯子數(shù)目在3～10 個(gè)，蘋果中ALMT家族成員外顯子數(shù)量為4～12 個(gè)［15］，則兩者之間外顯子數(shù)量差距較大，這可能是荔枝在進(jìn)化過程中發(fā)生了外顯子的缺失。染色體只定位在荔枝15 條染色體中的6 條染色體上，Chr13 上LcALMTs分布最多且緊密，與蘿卜ALMT家族成員定位在9 條染色體上有差異［18］，具體原因還需進(jìn)一步探究。荔枝ALMT基因家族成員含有多種順式作用元件，均包含光響應(yīng)元件，激素響應(yīng)元件生長發(fā)育元件，且光響應(yīng)元件數(shù)量最多，暗示LcALMTs基因的表達(dá)可能受光照、激素調(diào)節(jié)和生長發(fā)育條件的影響且受光照影響最大，這與前人在其他物種中的研究結(jié)果一致。LcALMT7基因含茉莉酸響應(yīng)元件最多、達(dá)94 個(gè)，表明該基因的表達(dá)量可能主要受茉莉酸的調(diào)控，故不同基因成員之間表達(dá)量不同主要與光照、激素調(diào)控，與生長發(fā)育條件有著巨大關(guān)系。該家族成員蛋白結(jié)構(gòu)中α-螺旋占比最高，位于同一亞族的ALMT蛋白一般結(jié)構(gòu)相似。系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，荔枝ALMTs 蛋白可以分為5 個(gè)亞族，這與蘿卜ALMT家族分類［30］一致。荔枝ALMT家族成員在不同組織中的表達(dá)量不同，LcALMT4主要在種子中表達(dá)，與MdALMT13主要在根中高度表達(dá)結(jié)果［31］一致。采用qRT-PCR 對LcALMT4、LcALMT5、LcALMT15在荔枝不同組織中的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，結(jié)果表明LcALMT4、LcALMT5、LcALMT15在各組織中均有表達(dá)，且在雄花中高度表達(dá)，推測LcALMT4、LcALMT5、LcALMT15可能參與雄花的調(diào)控，在雄花發(fā)育中起作用。綜上，不同物種之間的基因在進(jìn)化過程中多數(shù)存在相同或相似功能，表達(dá)量之間的差異不同，與生長環(huán)境和激素調(diào)節(jié)相關(guān)聯(lián)。

4 結(jié)論

利用生物信息學(xué)方法從荔枝基因組中鑒定出16 個(gè)ALMTs成員，這些成員蛋白均定位于質(zhì)膜上，染色體定位在荔枝15 條染色體中的6 條染色體上，且在Chr13 上LcALMTs分布最多且緊密。荔枝ALMT基因家族成員啟動(dòng)子含有多種順式作用元件，光響應(yīng)元件含量最多；蛋白結(jié)構(gòu)中，α-螺旋占比最高；五個(gè)亞族中，位于同一亞族的ALMTs 蛋白一般結(jié)構(gòu)相似。其相對表達(dá)量來看LcALMT4、LcALMT5和LcALMT15在不同組織中均有表達(dá)，且均在雄花中表達(dá)最高，其次為雌花。