玄一凡，張藝川，魏凌俊，王茂林

(大連海洋大學(xué)，遼寧省北方魚(yú)類(lèi)應(yīng)用生物學(xué)與增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023)

虹鱒是一種適應(yīng)性較廣的冷水性魚(yú)，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大和集約化水平的不斷提高，虹鱒疾病頻發(fā)。目前，用化學(xué)藥劑或抗生素藥物治療虹鱒病害存在成本較高、魚(yú)體質(zhì)減弱、污染養(yǎng)殖水體和周?chē)h(huán)境等缺點(diǎn)。針對(duì)該問(wèn)題，虹鱒免疫技術(shù)的研究日漸成熟，各種復(fù)雜的免疫技術(shù)被逐漸運(yùn)用到虹鱒養(yǎng)殖過(guò)程中。在現(xiàn)有技術(shù)中，復(fù)方草藥免疫方案是目前應(yīng)用較為廣泛的一種方法，通過(guò)不同草藥的組合發(fā)揮綜合作用，提高虹鱒的整體免疫力，降低虹鱒免疫系統(tǒng)的失調(diào)率。復(fù)方中草藥不僅在提高虹鱒免疫力方面取得了重要成果，而且在防控虹鱒疾病應(yīng)用上效果顯著。中草藥具有促生長(zhǎng)、無(wú)藥物殘留、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、來(lái)源廣泛等優(yōu)勢(shì)，被稱(chēng)為“天然抗生素”，作為添加劑應(yīng)用到飼料產(chǎn)業(yè)上具有廣闊的前景。本試驗(yàn)將白芷、枸杞、金銀花、廣藿香、葛根、五味子6種中草藥制成復(fù)方中草藥加到飼料中，探究其對(duì)虹鱒幼魚(yú)生長(zhǎng)和免疫酶活性的影響。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)用飼料

試驗(yàn)分為T(mén)1( 對(duì)照)、 T2(1% )、 T3(2% )、T4(3%)4組，其中T1組喂基礎(chǔ)飼料，基礎(chǔ)飼料主要成分見(jiàn)表1。白芷、枸杞、金銀花、廣藿香、葛根、五味子6種中草藥經(jīng)超微粉碎后等比例混合成復(fù)方中草藥粉。將復(fù)方中草藥粉分別按1%、2%、3%的比例(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)添加于基礎(chǔ)飼料作為T(mén)2、T3、T4組飼料。

表1 基礎(chǔ)飼料主要成分%

2.試驗(yàn)用魚(yú)

試驗(yàn)選用體長(zhǎng)、體重相近、平均個(gè)體重(10.830±0.140)克的健康虹鱒幼魚(yú)144 尾，暫養(yǎng)7天以適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境，養(yǎng)殖期間投喂基礎(chǔ)飼料。

3.試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)開(kāi)始前停止喂食24 小時(shí)，將144 尾試驗(yàn)用魚(yú)隨機(jī)分為4 組，T1(對(duì)照)組魚(yú)總重量為(129.869±1.271)克，T2(1%)組魚(yú)總重量為(128.836±2.154)克，T3(2%)組魚(yú)總重量為(130.620±2.140)克，T4(3%)組魚(yú)總重量為(130.493±1.670)克；每組3 個(gè)平行，每個(gè)平行12 尾。將12 個(gè)養(yǎng)殖小網(wǎng)箱放在養(yǎng)殖水槽中，用氣泵24 小時(shí)充氣增氧，并增設(shè)水泵模擬流水環(huán)境，水溫12～15℃，溶氧＞6 毫克/升，pH 6.9。養(yǎng)殖周期為30 天，每天8:00 和17:00 投喂飼料，每天投喂飼料至表觀飽食。每天19:30清理剩余飼料及糞便，同時(shí)換水，換水量約為1/2。

4.樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，停食24 小時(shí)，每組隨機(jī)選取3 尾，取肝臟組織置于離心管中(在低溫下操作)，標(biāo)記后于-80℃冰箱中保存。

5.生長(zhǎng)指標(biāo)及酶活指標(biāo)測(cè)定

取樣前稱(chēng)重，用于計(jì)算終末均重、特定生長(zhǎng)率；免疫酶的測(cè)定包括過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)，上述指標(biāo)試劑盒均采購(gòu)于南京建成生物工程研究所有限公司，按說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行測(cè)定。

二、結(jié)果與分析

1.復(fù)方中草藥對(duì)虹鱒生長(zhǎng)指標(biāo)的影響(表2)

表2 飼料中添加復(fù)方中草藥對(duì)虹鱒幼魚(yú)各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

由表2可知，各組虹鱒幼魚(yú)的存活率無(wú)顯著性差異(P≥0.05)，但飼料中添加復(fù)方中草藥對(duì)虹鱒幼魚(yú)其他生長(zhǎng)指標(biāo)影響較為顯著(P＜0.05)。T2、T3 和T4 試驗(yàn)組除飼料系數(shù)外，其他各項(xiàng)指標(biāo)均高于T1組(對(duì)照組)；其中T3組魚(yú)的終末均重、特定生長(zhǎng)率顯著高于其他組，而飼料系數(shù)顯著低于其他組(P＜0.05)；T3和T4組魚(yú)在攝食率上無(wú)顯著性差異。

2.復(fù)方中草藥對(duì)虹鱒幼魚(yú)免疫指標(biāo)的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，T4組魚(yú)肝臟組織中的CAT活性顯著高于T1(對(duì)照)、T2 組(P＜0.05)，T3 組與T4 組間無(wú)顯著性差異。T2、T3 組魚(yú)肝臟組織中的SOD 活性顯著高于T1(對(duì)照)組(P＜0.05)，T2、T3、T4 組間無(wú)顯著性差異。T3 組魚(yú)肝臟組織中的T-AOC 水平最高，但各試驗(yàn)組間T-AOC 水平無(wú)顯著性差異。

三、討論

1.復(fù)方中草藥對(duì)虹鱒幼魚(yú)生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)表明由白芷、枸杞、金銀花、廣藿香、葛根、五味子制成的復(fù)方中草藥對(duì)虹鱒幼魚(yú)的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。有研究表明，植物多糖主要通過(guò)促進(jìn)與生長(zhǎng)相關(guān)激素的合成與分泌來(lái)促進(jìn)脂類(lèi)與糖的代謝，提高機(jī)體氨基酸與蛋白質(zhì)合成，以達(dá)到促生長(zhǎng)的作用，枸杞多糖可以提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。陶云開(kāi)(2022)等研究發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖可提高羅非魚(yú)的消化酶活性，改善其腸道組織形態(tài)，從而影響羅非魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育，且以添加劑量為1.5 克/千克的效果最佳。李慶敏(2022)等研究表明，顆粒型全混合日糧中添加5%枸杞渣對(duì)育肥灘羊生長(zhǎng)性能具有積極作用。王曼(2020)等發(fā)現(xiàn)用20%的發(fā)酵金銀花飼料代替基礎(chǔ)飼料，可以有效提高肥育豬的生長(zhǎng)性能。劉志勇(2017)等研究表明文昌雞日糧中添加3%的五味子可以顯著提高生長(zhǎng)性能及肉質(zhì)。以上研究與本試驗(yàn)所得結(jié)果相似，本試驗(yàn)所添加的復(fù)方中草藥有效促進(jìn)了虹鱒幼魚(yú)的生長(zhǎng)，且2%的添加量組效果最好；3%的添加量組效果有所降低，可能是復(fù)方中草藥添加量略多，對(duì)虹鱒幼魚(yú)的消化系統(tǒng)造成了一定的影響，繼而攝食量有所降低造成的。

2.復(fù)方中草藥對(duì)虹鱒幼魚(yú)非特異性免疫的影響

通過(guò)測(cè)定虹鱒幼魚(yú)的肝組織抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)復(fù)方中草藥具有改善虹鱒幼魚(yú)抗氧化能力的作用。T-SOD、T-AOC和CAT為重要的非特異性免疫指標(biāo)。CAT 是將過(guò)氧化氫分解為水和氧的關(guān)鍵酶之一，是機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的重要組成部分，過(guò)氧化氫酶活性大小體現(xiàn)了機(jī)體抗氧化能力的強(qiáng)弱。本試驗(yàn)隨著復(fù)方中草藥添加量的增多，其有效提高了肝臟組織CAT 的活性，添加量為3%時(shí)較為顯著，而其他組提升不顯著。SOD是一種內(nèi)源性抗氧化金屬酶，可以通過(guò)清除超氧陰離子自由基的毒性來(lái)保護(hù)細(xì)胞或組織免受傷害，在抗氧化、延緩機(jī)體衰老、改善機(jī)體免疫力等方面起著至關(guān)重要的作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明飼料中添加復(fù)方中草藥可以有效增強(qiáng)虹鱒幼魚(yú)肝臟中SOD的活性，說(shuō)明復(fù)方中草藥能夠有效提高虹鱒幼魚(yú)的抗氧化能力。TAOC是機(jī)體內(nèi)抗氧化能力的總體體現(xiàn)，表示各抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成的總體抗氧化水平。已有研究表明投喂含有復(fù)方中草藥的飼料可有效提高水產(chǎn)動(dòng)物的非特異性免疫能力。胡斌(2019)等發(fā)現(xiàn)飼料中添加5 克/千克由黃芩、黃柏、大黃、大青葉制成的復(fù)方中草藥，能提高養(yǎng)殖動(dòng)物血漿SOD活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。王紅濤(2021)等研究表明飼料中添加蒲公英提取物，能有效提高鯉魚(yú)血清中的SOD、T-AOC、CAT活性。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添加2%的復(fù)方中草藥可以提升虹鱒肝臟組織中的T-AOC水平，添加量為1%和3%時(shí)效果并不顯著。

四、小結(jié)

飼料中添加由白芷、枸杞、金銀花、廣藿香、葛根、五味子制成的復(fù)方中草藥能提高虹鱒幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能，其中以2%的添加量效果最佳。非特異性免疫力也有所提升，CAT 活性的提升以T4 組效果最顯著，T2 和T3 組的SOD 活性顯著升高，T3組的T-AOC活性顯著高于對(duì)照組。綜上，復(fù)方中草藥可顯著提高虹鱒幼魚(yú)生長(zhǎng)性能，提高魚(yú)體非特異性免疫能力，但過(guò)量的復(fù)方中草藥也會(huì)對(duì)魚(yú)體造成不利影響，飼料中適宜添加比例為2%。