程聰慧，劉思夢，李彥增，楊 冉，屈凌波，，曾華金，**

（1.鄭州大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450001；2.河南世紀(jì)香食用菌開發(fā)有限公司，河南 許昌 461000；3.中原食品實(shí)驗(yàn)室，河南 漯河 462001）

阿魏菇（Pleurotus tuoliensis） 是真菌門（Enmycophyta） 擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes） 傘菌目（Agaricales） 側(cè)耳科（Pleurotaceae） 側(cè)耳屬（Pleurotus）的一種名貴食用菌，因其全身色澤潔白，形狀近似靈芝，故稱白靈菇[1-2]。白靈菇肉質(zhì)細(xì)膩，味道鮮美，營養(yǎng)豐富。據(jù)研究測定表明，白靈菇子實(shí)體中蛋白質(zhì)含量為16.8%，含有16 種氨基酸（其中含7 種人體必需氨基酸），多種維生素和無機(jī)鹽[3]。此外，白靈菇中還含有豐富的多糖、礦物質(zhì)元素、麥角甾醇、芳香族化合物等多種對人體有益的活性成分，是一種純天然的保健品，具有增強(qiáng)人體免疫力、調(diào)節(jié)平衡、降壓降脂、抗衰老等作用[4-7]。

目前，對白靈菇的成分研究主要集中在子實(shí)體的營養(yǎng)成分方面，而對其揮發(fā)性成分的研究報(bào)道較少。李曉燕等[8]采用水蒸氣蒸餾法提取白靈菇子實(shí)體中的風(fēng)味成分，并利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS） 對風(fēng)味成分進(jìn)行分析，在總離子流色譜圖中得到75 個(gè)峰，鑒定出35 種化合物。隨后，蘭蓉等[9]采用超臨界CO2萃取結(jié)合正交試驗(yàn)提取白靈菇子實(shí)體中的揮發(fā)性風(fēng)味成分，通過GC-MS 分析共鑒定出16 種成分。比較上述2 種提取方法，超臨界CO2萃取法所得白靈菇子實(shí)體風(fēng)味成分中，極性組分、大分子量的成分相對較多，而水蒸氣蒸餾法提取的風(fēng)味成分中主要是一些極性小、分子量小的成分。由此可見，不同提取方法所得到的白靈菇子實(shí)體風(fēng)味成分存在較大差異，有待進(jìn)一步研究。

為了更加全面地了解白靈菇中的揮發(fā)性成分，此次試驗(yàn)分別采用水蒸氣蒸餾法和頂空進(jìn)樣法提取白靈菇子實(shí)體中的揮發(fā)性成分，通過GC-MS 對2 種不同提取方法所獲得的白靈菇揮發(fā)性成分進(jìn)行定性分析與比較，為白靈菇子實(shí)體揮發(fā)性成分的研究和開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白靈菇子實(shí)體，由河南世紀(jì)香食用菌開發(fā)有限公司提供。經(jīng)鑒定為真菌門傘菌目側(cè)耳科側(cè)耳屬的阿魏菇Pleurotus tuoliensis。乙醚為分析純，購于煙臺市雙雙化工有限公司。

1.2 主要儀器

TRACE1300-TSQ8000EVO 型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，賽默飛世爾科技（中國） 有限公司；KQ-500B 型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；ME204E 型萬分之一電子分析天平，梅特勒-托利多儀器上海有限公司。

1.3 白靈菇子實(shí)體揮發(fā)油的提取

1.3.1 水蒸氣蒸餾法

精密稱取白靈菇粉末20 g，置于圓底燒瓶中，加入240 mL 的去離子水，充分浸泡4 h 后，用揮發(fā)油蒸餾裝置蒸餾6 h。將餾出液收集，加入適量的乙醚萃取3 次，合并萃取液，將萃取液在溫度為30 ℃條件下濃縮至2 mL，作為GC-MS 供試樣品。

1.3.2 頂空進(jìn)樣法

精密稱取白靈菇粉末2 g，置于頂空進(jìn)樣瓶中密封，然后放入頂空進(jìn)樣器，按照后續(xù)頂空進(jìn)樣條件進(jìn)樣分析。

1.4 GC-MS 分析條件

水蒸氣蒸餾法供試樣品的色譜條件如下。色譜柱：HP-FAAP 石英毛細(xì)管柱（30 m × 250 μm × 0.25 μm）。程序升溫：初始溫度為60 ℃；以10 ℃·min-1升溫至110 ℃，隨后以15 ℃·min-1升溫至140 ℃；又以10 ℃·min-1升溫至180 ℃，保持3 min；再以10 ℃·min-1升溫至250 ℃，保持5 min；最后以速度為10 ℃·min-1升溫至290 ℃，保持2 min。載氣為氦氣（He），流速為1.0 mL·min-1。進(jìn)樣量為1 μL。分流比為20 ∶1。溶劑延遲3 min。

頂空進(jìn)樣法色譜條件如下。色譜柱：HP-FAAP石英毛細(xì)管柱（30 m × 250 μm × 0.25 μm）。程序升溫：初始溫度為40 ℃，保持2 min；以3 ℃·min-1升至90 ℃，保持5 min；再以10 ℃·min-1升至260 ℃，保持1 min。載氣氦氣（He），流速為1.0 mL·min-1。進(jìn)樣量為1 μL。分流比為20∶1。頂空進(jìn)樣器：柱溫箱溫度120 ℃，孵化溫度130 ℃，傳輸線溫度140 ℃。

質(zhì)譜條件：電子轟擊（EI） 離子源，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃，傳輸線溫度為250 ℃，四極桿溫度為150 ℃，質(zhì)量掃描范圍質(zhì)荷比（m/z）為35～550，檢索庫為NIST14.L 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫。

2 結(jié)果與分析

2.1 水蒸氣蒸餾法提取結(jié)合GC-MS 分析結(jié)果

采用水蒸氣蒸餾法對白靈菇子實(shí)體中的揮發(fā)性成分進(jìn)行提取，經(jīng)GC-MS 分析及NIST14.L 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索鑒定，鑒定出的45 個(gè)主要成分見表1，得到的總離子流圖見圖1。

圖1 水蒸氣蒸餾法提取的白靈菇子實(shí)體揮發(fā)性成分總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatogram of volatile components in fruit body of Pleurotus nebrodensis extracted by steam distillation

表1 GC-MS 分析水蒸氣蒸餾法提取的白靈菇子實(shí)體揮發(fā)性的主要成分Tab.1 GC-MS analysis of main volatile components in fruit body of Pleurotus nebrodensis extracted by steam distillation

由表1 和圖1 可知，采用水蒸氣蒸餾法提取的白靈菇子實(shí)體揮發(fā)性成分共分離得到209 個(gè)組分，經(jīng)NIST14.L 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，共鑒定出了45 個(gè)主要成分。主要成分中包括31 個(gè)烷烴類化合物，3 個(gè)酚類化合物，2 個(gè)醇類化合物，2 個(gè)酮類化合物，2 個(gè)酯類化合物，1 個(gè)硅烷類化合物，1個(gè)醛類化合物，1 個(gè)稠環(huán)芳香烴類化合物，1 個(gè)咪唑類化合物和1 個(gè)烯烴類化合物。以烷烴類、酚類、醇類為主，其峰面積之和占總色譜峰面積的58.49%；含量較高的組分為丁基羥基甲苯（占比為11.12%）、2，2’-亞甲基雙[6-（1，1-二甲基乙基）-4-甲基苯酚]（占比為7.24%）、1，54-二溴五十四烷（占比為3.71%）、2，4-二叔丁基苯酚（占比為2.73%） 和2，6，10，15-四甲基十七烷（占比為2.70%）。

2.2 頂空進(jìn)樣法提取結(jié)合GC-MS 分析結(jié)果

采用頂空進(jìn)樣法對白靈菇子實(shí)體中的揮發(fā)性成分進(jìn)行提取，經(jīng)GC-MS 分析及NIST14.L 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索鑒定，得到的總離子流圖見圖2，鑒定出的35 個(gè)主要成分見表2。

圖2 頂空進(jìn)樣法提取的白靈菇子實(shí)體揮發(fā)性成分總離子流圖Fig.2 Total ion current chromatogram of volatile components in fruit body of Pleurotus nebrodensis extracted byheadspace injection

表2 GC-MS 分析頂空進(jìn)樣法提取的白靈菇子實(shí)體揮發(fā)性的主要成分Tab.2 GC-MS analysis of main volatile components in fruit body of Pleurotus nebrodensis extracted by headspace injection

由圖2 和表2 可知，采用頂空進(jìn)樣法提取白靈菇子實(shí)體的揮發(fā)性成分共分離得到193 個(gè)組分，經(jīng)NIST14.L 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，共鑒定出了35 個(gè)主要成分。主要成分包括6 個(gè)醛類化合物，5 個(gè)酮類化合物，5 個(gè)有機(jī)酸類化合物，4 個(gè)胺類化合物，4 個(gè)烷烴類化合物，3 個(gè)吡嗪類化合物，2 個(gè)雜環(huán)類化合物，2 個(gè)烯烴類化合物，1 個(gè)酯類化合物，1 個(gè)酚類化合物和1 個(gè)淀粉衍生物。這些成分主要以醛類、酮類、胺類為主，其峰面積之和占總色譜峰面積的96.43%；含量較高的組分為蝶呤-6-羧酸（占比為29.86%）、3-甲基丁醛（占比為19.37%）、2-甲基丁醛（占比為13.52%）、2-甲基丙醛（占比為13.19%） 和肌酸（占比為5.02%）。

3 討論

目前，植物揮發(fā)油提取最常用的方法是水蒸氣蒸餾法，該方法具有簡單、易操作等特點(diǎn)，能將具有揮發(fā)性、在熱水中結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、難溶或不溶于水的活性成分進(jìn)行有效提取，此種提取方法廣泛應(yīng)用于食物和中藥材中揮發(fā)性成分的分離與鑒定[10-11]。然而，植物揮發(fā)油成分中往往同時(shí)存在一些化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的組分，當(dāng)這些成分遇到高溫時(shí)結(jié)構(gòu)往往會發(fā)生變化，采用水蒸氣蒸餾法提取時(shí)，通常不能真實(shí)有效地反映樣品本身的揮發(fā)性成分，特別是在分析和鑒定食用菌的風(fēng)味成分時(shí)，會造成結(jié)果不準(zhǔn)確。

頂空進(jìn)樣法是將試驗(yàn)樣品的揮發(fā)性成分直接導(dǎo)入氣相色譜儀中進(jìn)行分離和檢測的一種方法。與水蒸氣蒸餾法相比，頂空進(jìn)樣法可避免一些揮發(fā)性成分因加熱而產(chǎn)生分解、被氧化等問題，可專一性地直接收集樣品中易揮發(fā)的成分，是一種彌補(bǔ)水蒸氣蒸餾法的有效提取方法[12]。為了能更真實(shí)全面地反映試驗(yàn)樣品中的揮發(fā)性成分，往往會同時(shí)采用水蒸氣蒸餾法和頂空進(jìn)樣法對試驗(yàn)樣品進(jìn)行GC-MS 分析，從而得到更為全面的揮發(fā)性成分[12-13]。采用2 種方法提取白靈菇子實(shí)體中的揮發(fā)性成分，結(jié)果2 種方法所得到的揮發(fā)性成分的種類和含量差異較大。水蒸氣蒸餾法主要以烷烴類、酚類和醇類為主，而頂空進(jìn)樣法主要以醛類、酮類和胺類為主，且2 種方法沒有發(fā)現(xiàn)共有成分的存在，表明由于樣品處理方法上的差異，各種方法在揮發(fā)性成分的提取方面各有側(cè)重，有效結(jié)合2 種提取方法，能夠獲得更加全面、具體的白靈菇子實(shí)體揮發(fā)性成分的信息。

4 結(jié)論

采用水蒸氣蒸餾法結(jié)合頂空進(jìn)樣法，利用GCMS 分析技術(shù)對白靈菇子實(shí)體中揮發(fā)性成分進(jìn)行分離與鑒定。結(jié)果表明，2 種方法分別側(cè)重于白靈菇子實(shí)體中不同沸點(diǎn)和不同狀態(tài)下的揮發(fā)性成分，能夠更加全面地反映白靈菇子實(shí)體中揮發(fā)性成分的信息。為進(jìn)一步明確白靈菇子實(shí)體中揮發(fā)性成分提供了科學(xué)依據(jù)，同時(shí)也為開發(fā)和利用白靈菇子實(shí)體中的風(fēng)味成分奠定了科學(xué)依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。